AUTOMATIZACIÓN EN QUÍMICA ANALÍTICA

1. Introducción.
2. Definiciones y conceptos
3. Objetivos de la automatización en Química Analítica
4. Automatización de las distintas etapas del proceso
analítico
5. Analizadores automáticos. Clasificación
6. Analizadores continuos. Análisis por inyección en flujo.
7. Sensores químicos

Bibliografía

9 M. Valcárcel, M. D. Luque de Castro. “Automatic Methods of Analysis”.

Elsevier. Amsterdam. 1988.

9 M. Valcárcel, M. S. Cárdenas. “ Automatización y Miniaturización en

Química Analítica”. Springer-Verlag Ibérica. Barcelona. 2000.

9 P.B. Stockwell. “Automatic Chemical Analysis”. Taylor & Francis. Londres

1996.

9 M. Valcárcel, M. D. Luque de Castro. “Análisis por inyección en Flujo”.

Monte de Piedad y Caja de Ahorros de Córdoba. 1984

1
 INTRODUCCIÓN

La AUTOMATIZACIÓN, sustitución parcial o total de la participación humana

en el proceso de medida química, es una TENDENCIA, hoy consolidada, en
Química Analítica.

TENDENCIAS DE LA QUÍMICA ANALÍTICA

AUTOMATIZACIÓN

MINIATURIZACIÓN SIMPLIFICACIÓN

Ejemplo: recorte de prensa EL PAÍS, miércoles 17 de noviembre de 2004

“ES EXTRAÑO EXPLORAR UN MUNDO QUE VES SÓLO COMO UN PUNTITO
EN EL CIELO”

OBJETIVOS

¾ Conocer la terminología utilizada en el ámbito general de la automatización

¾ Ser capaz de evaluar críticamente las ventajas e inconvenientes derivados

de la sustitución de la participación humana en los procesos analíticos.

¾ Conocer las posibilidades de automatización de las diferentes etapas del

proceso de medida química.

¾ Conocer las distintas configuraciones de los analizadores, comerciales o no,

diseñadas para tratar de llevar a cabo el proceso analítico de forma totalmente
automática: analizadores discontinuos, analizadores continuos y sensores.

2
 DEFINICIONES Y CONCEPTOS (1)

Mecanización
Producción de movimiento en lugar del operador humano
“Empleo de mecanismos para reemplazar, mejorar o extender el esfuerzo humano”

Toma de
OPERADOR HUMANO decisiones
IN
ZO OS TE
ER ID LI
FU NT GE
NC
ES SE IA
MECANIZACIÓN INSTRUMENTACIÓN

SISTEMAS AUTOMÁTICOS

AUTOMATIZACIÓN
Sistema de retroalimentación
“feed back”

DEFINICIONES Y CONCEPTOS (3)

PROCESO

ANALIZADOR

INSTRUMENTO

APARATO

DISPOSITIVO

TÉCNICA

3
 DEFINICIONES Y CONCEPTOS

Instrumentación
Producción y suministro de información t empleo del instrumento:
“Sistema utilizado para observar, medir o comunicar una propiedad que reemplaza o mejora la
intervención humana”
Automatización
“Empleo combinado de dispositivos, aparatos e instrumentos para sustituir mejorar o ampliar el
esfuerzo, los sentidos y la inteligencia humanos en el desarrollo de un proceso”

Toma de
OPERADOR HUMANO decisiones
IN
Z O OS TE
ER ID LI
FU NT GE
NC
ES SE IA
MECANIZACIÓN INSTRUMENTACIÓN

SISTEMAS AUTOMÁTICOS

AUTOMATIZACIÓN
Sistema de retroalimentación
“feed back”

DEFINICIONES Y CONCEPTOS (4)

TÉCNICA

PROCESO DE MEDIDA QUÍMICA

MEDIDA Y TOMA Y
OPERACIONES MAYOR NIVEL
TRANSDUCCIÓN TRATAMIENTO
PREVIAS DE
DE LA SEÑAL DE DATOS
CONCRECIÓN

MÉTODO

PROCEDIMIENTO

4
 OBJETIVOS DE LA AUTOMATIZACIÓN
EN QUÍMICA ANALÍTICA

OBJETIVOS
VENTAJAS INCONVENIENTES

INFORMACIÓN
9 Producción de más y mejor información
9 Rentabilizar al máximo los datos analíticos generados 9 Menor control de Químico sobre
el proceso
CALIDAD
9 Mejorar las propiedades analíticas: 9 Sobrevaloración de las
precisión, exactitud, sensibilidad, selectividad. posibilidades de automatización
PRODUCTIVIDAD
9 Aumentar la frecuencia de muestreo 9 Restricciones legales
9 Reducir el consumo de muestra y reactivo.
CAMPO de APLICACIÓN
9 Pérdida de flexibilidad de
herramientas y procesos
9 Hacer factible una técnica o método

FACTOR HUMANO
9 Reducción de errores y costes debido al factor humano
9 Mayor seguridad
9 Estímulo personal

AUTOMATIZACIÓN DE LAS DISTINTAS ETAPAS

DEL PROCESO ANALÍTICO

El PROCESO DE MEDIDA QUÍMICA (PMQ)

Operaciones previas
TRATAMIENTO MEDIDA y
MUESTREO de MUESTRA TRANSDUCCIÓN ADQUISICIÓN
de la y TRATAMIENTO
REACCIÓN SEÑAL ANALÍTICA de DATOS
ANALÍTICA

OPERACIONES PREVIAS

ALTERNATIVAS

ROBOTS NUEVOS TIPOS DE ENERGÍA

SENSORES (ultrasonidos, microondas, láser)

TÉCNICAS CONTINUAS ANALIZADORES DE

DE SEPARACIÓN PROCESOS
INTRODUCCIÓN DIRECTA
DE MUESTRAS MÓDULOS DE TRATAMIENTO
MUESTRA

5
 MUESTREADORES AUTOMÁTICOS

Reactivo

Jeringa
de
reactivo
BRAZO 1
MECÁNICO 2
Jeringa de
muestra Jeringa 3

4
Desecho Disolución
de lavado

Desecho

1. Aspiración de un volumen de muestra.

MUESTRA 2. Introducción de la muestra en la copa del
analizador.
DISOLUCIÓN de LAVADO
3. Aspiración de la disolución de lavado.
4. Descarga al desecho.

AUTOMATIZACIÓN de las DOS ÚLTIMAS ETAPAS

Salida A/D

Registrador

Toma y tratamiento
de datos

Micropocesador Lectura
Ordenador Registro
Envío a unidad central

Toma y tratamiento
de datos

Lectura
Ordenador Registro
Envío a unidad central

Control de parámetros
instrumentales

6
 AUTOMATIZACIÓN de las DOS ÚLTIMAS ETAPAS

S
FUENTE MONOCROMADOR S DETECTOR AMPLIFICADOR

A/D A/D A/D A/D D/A

INTERFASE INTERFASE
ACTIVA PASIVA

IMPRESORA
ORDENADOR
TRATAMIENTO DE DATOS

SISTEMAS DE GESTIÓN DE LA INFORMACIÓN EN EL LABORATORIO:

LIMS (Laboratory Information Management Systems)

Sistema informático integrado que combina la adquisición de datos, su

análisis,la generación de informes y funciones de gestión del laboratorio

INTERNET
Analizador 1 Instrumento 2
Base de
teléfono datos
científico
técnicos

RED

Ordenador
adquisición datos

Base de
Analizador 2 datos
Base de
Instrumento 1 Organización
datos
“Cliente”

7
 ANALIZADORES AUTOMÁTICOS: CLASIFICACIÓN

Según GRADO DE AUTOMÁTICOS

AUTOMATIZACIÓN SEMIAUTOMÁTICOS

Según DISCONTINUOS
TRANSPORTE DE
CONTINUOS
MUESTRA/REACTIVOS
TIPOS ROBOTIZADOS
DE
ANALIZADORES
Según Líquidos
MUESTRA DE Sólidos
Gases

Según Comerciales
DISEÑO
No Comerciales

ANALIZADORES AUTOMÁTICOS
Muestra Reactivo Mezcla Tiempo Detector

Manualmente

Analizador discontinuo
(tipo cinta)

Analizador continuo

Muestras

balanza

Robot
reactivos
Analizador robotizado

Detector/
ordenador

8
ANALIZADOR DISCONTÍNUO SECUENCIAL
Reactivos en rotor Pipetas para
central muestra y
(No requieren reactivos
manipulación.
Esta automatizado
incluso el cierre y
apertura)

Cubetas de
reacción Brazo de
transporte

Muestras
(en rotor o
en cinta)

ANALIZADOR DISCONTINUO

Bandeja de reactivos

Cubeta

9
 ANALIZADORES ROBOTIZADOS

www.strobotics.com

www.mwg-biotech.com

COMPONENTES DE UN ANALIZADOR FIA

Tubos (teflón o PVC; φ = 0.5-0.8 mm)

Conectores

Bomba Peristáltica
Coil de reacción

INYECCIÓN
CARGA

Loop o bucle de
inyección

Válvula de inyección de dos posiciones (6 vías)

10
 COMPONENTES DE UN ANALIZADOR FIA (2)
CELDAS DE FLUJO
Voltametría/amperometría
celda de capa fina
espectrofotometría

A, R

W
R

fluorimetría

Bioanalytical Systems, Inc.

www.bioanalytical.com

ANALIZADORES DE INYECCIÓN EN FLUJO

(FIA; Flow Injection Analysis)

Muestra

Portador

Bomba Detector
Válvula (con celda de flujo)

Registrador / ordenador

T tr
Respuesta

ta ∆t

tiempo

11
 PRINCIPIOS DEL FIA
El FIA se basa en una combinación de tres principios:

1. Inyección de la muestra

2. Dispersión controlada de la zona

de muestra inyectada

3. Control reproducible del tiempo

transcurrido desde la inyección hasta la detección

Fenómenos de transporte que contribuyen a la dispersión:

1. Convección, para adaptarse

a las condiciones de flujo laminar
Flujo laminar
2. Difusión

Difusión axial Difusión radial

COEFICIENTE DE DISPERSIÓN, D

Coeficiente de dispersión:
D = C° / Cmax

La señal obtenida en un sistema FIA es el resultado de dos

procesos que se producen simultáneamente: FIA:
1. Proceso físico: Dispersión MÉTODO CINÉTICO
2. Proceso químico: reacción analítica DE TIEMPO FIJO
Ninguno de los dos procesos alcanza el equilibrio

12
 Parámetros instrumentales que afectan a D

1. Volumen de muestra inyectada, S(µL). Al aumentar S disminuye D

2. Dimensiones de los tubos entre

la válvula de inyección y la celda de flujo:
Diámetro interno (φ=0.5 mm) y longitud,L (cm)
Al aumentar L aumenta D

3. Caudal, Q (mL/min). Al aumentar Q disminuye D

Debe tenerse en cuenta el efecto de D sobre:

1. La sensibilidad
2. La velocidad de muestreo f(anchura de pico) S= 60 µL
Q=1.5 mL/min

CLASIFICACIÓN DE SISTEMAS FIA SEGÚN D

Dispersión limitada D = 1-2 (FIA como transporte)

Sistemas con Dispersión media D =2-10 (FIA con conversión)
Dispersión alta D > 10 (se necesita dilución)
Dispersión reducida D<1 (con preconcentración)

FIA con DISPERSIÓN LIMITADA (D = 1-2)

bomba M
Para mantener dispersión limitada
D residuos debe limitarse la distancia entre
portador inyector y detector

1 Zn 213,9 nm D Se utiliza dispersión limitada:

a
5 min. b 1. Medidas con electrodos selectivos
1 (pH). Medidas de conductividad
1,3
0.5 10 s
2. Inyección automática de muestra
2
en instrumentos de absorción atómica,
ICP.
S S
0

Modo normal de aspiración

Sistema FIA

13
 FIA CON DISPERSIÓN MEDIA (D = 2-10)

Se utilizan cuando el analito debe

reaccionar con diferentes reactivos
Para formar un producto detectable
(FIA con conversión)

Se obtienen los típicos Fiagramas

Con concentraciones en el máximo
que corresponderían al 50% - 10%
de las introducidas originalmente en
El sistema

Para obtener dispersión media se debe insertar un “coil” de reacción.

En ocasiones se desarrollan sistemas multicanal, con varios puntos de confluencia
de distintas corrientes de reactivos entre el inyector y el detector

FIA CON DISPERSIÓN MEDIA - FIA MONOCANAL

Determinación espectrofotométrica de Cl-

Hg(SCN)2 + 2 Cl- HgCl2 + 2 SCN-

Hg(SCN)2 SCN- + Fe3+ Fe(SCN)2+

Fe3+ desecho

Volumen inyectado: 30 µL
Velocidad de muestreo:
120 muestras/hora

14
 FIA con CONVERSIÓN (FIA multicanal)
Ejemplo en el que se aprovechan efectos de discriminación cinética
2 MH+
SCN- + 5-Br-PADAP + Oxidante Producto coloreado
(metaestable)
ml/min M (50µl)

Portador acuoso 0,81 mezcla

reacción

5-Br-PADAP 0,80 30 cm residuos

D
Dicromato 0,23
60 cm
570 nm
B

Patrones No-fumadores
Señal del analito µmol/l
Fumadores
Respuesta del detecto

fumadores

10 mAbs

Señal de fondo
(background)

0,25 A 10 min
tiempo
Barrido

SISTEMAS FIA - GENERACIÓN DE HIDRUROS

Gas
Muestra (al atomizador)
Carrier
HX
Separador
NaBH4 gas/líquido

Gas de purga Líquido

(desecho)

BH4-
Generación de hidruros: As3+, Sb3+, Sn4+ AsH3 , SbH3 , SnH4

Atomización: AsH3 , SbH3 , SnH4 As, Sb, Sn

Reacciones laterales/interferencias:

Descomposición del reactivo(NaBH4) en medio ácido

BH4-
Me2+ (Ni, Cu, Co) Me0 (lento)
HX
Me0
AsH3, SbH3, SnH4 As, Sb, Sn + nH2

15
 FIA CON DISPERSIÓN ALTA

Da lugar a una gran dilución de la muestra inyectada

Para obtener D alto: inyectar un pequeño volumen de muestra y utilizar

Tubos de mezcla entre inyector y detector largos.

Se utiliza para procesar muestras muy concentradas, diluyéndolas en el sistema

hasta que la concentración del analito quede dentro del intervalo de respuesta
lineal del detector.

SISTEMAS DE ACONDICIONAMIENTO DE LA MUESTRA ON-LINE

Diálisis
Corriente
donora

Corriente
aceptora F

FIA CON DISPERSIÓN REDUCIDA

SISTEMAS CON PRECONCENTRACIÓN Y ACONDICIONAMIENTO DE LA MUESTRA ON-LINE

Intercambio iónico

Muestra Eluyente

Columna con
cambiador
iónico

16
 SISTEMA FIA CON EXTRACCIÓN LÍQUIDO-LÍQUIDO EN CONTINUO

La muestra (S) se inyecta en una

corriente de portador acuoso (Aq) que
se une en (a) con una corriente de fase
orgánica (Org). La mezcla de ambas se S desecho
produce en (b, segmentador). En un Aq a
separador (c) se descarta la fase F
acuosa y la fase orgánica se conduce a c
Org b
una celda de flujo (F).

desecho

La elección de los materiales de los distintos componentes y su orientación

son críticos. Debe tenerse en cuenta que la fase acuosa se adhiere al vidrio
y la orgánica se adhiere al teflón.

En el segmentador la fase orgánica entra por un tubo de vidrio y se adhiere

a un tubo de teflón (1)

SISTEMA FIA CON EXTRACCIÓN LÍQUIDO-LÍQUIDO EN CONTINUO

SEGMENTADOR SEPARADOR con forma de T

fase orgánica mas densa
que la acuosa
org
Una fina tira de teflón (2)
sirve de guía para la fase
Org a través de la T de vidrio
aq
desecho

SEPARADOR DE MEMBRANA
Si la fase orgánica es menos densa que la acuosa
org
2
Membrana de teflón org
desecho
aq org
La membrana de teflón permite que sólo la fase Org
penetre a través de sus poros hidrofóbicos. La fase
Aq se descarta.

17
 SISTEMAS DE FLUJO DETENIDO (“STOPPED-FLOW”)
T

DETECTOR Los sistemas de flujo detenido se basan en

parar una porción del bolo de muestra en la
celda de flujo. Si la reacción de transformación
del analito no alcanza el equilibrio de camino
al detector, se puede obtener una porción
de la curva cinética a medida que el producto de
reacción (amarillo) se va acumulando en la celda
de flujo. Finalmente, se restaura el flujo y la
muestra se impulsa hacia el deshecho,
recuperándose la línea de base.

Cuando se inyecta la muestra, se pone en marcha

un reloj electrónico (T). En estos sistemas se
seleccionan tanto el tiempo que transcurre desde
la inyección de la muestra hasta que se detiene
el flujo (tiempo de retardo), como el tiempo de
parada.

SISTEMAS DE FLUJO DETENIDO (“STOPPED-FLOW”) (2)

El analito (rojo) se dispersa en la corriente

ANALYTE de reactivo (azul) en el camino al detector
mientras que el producto (amarillo) se
va formando. Por tanto es esencial que
el tiempo de retardo sea reproducible
en los diferentes ensayos.
BLANK
Se mide la pendiente del fiagrama durante el
tiempo de parada.

DELAY TIME
Tiempo de
retardo

FLOW

18
 SENSORES QUÍMICOS

Esquema general de un sensor químico

ELEMENTO DE
TRANSDUCTOR ELECTRÓNICA
RECONOCIMIENTO

Un sensor es un dispositivo que responde de forma directa, continua, rápida,

selectiva y reversible a los cambios de concentración de una especie química en
una muestra compleja, idealmente sin tratamiento previo de la misma.
Consta de un elemento de reconocimiento molecular (que produce una interacción
selectiva (específica) con el analito), en contacto físico con un transductor.

Elementos de reconocimiento molecular empleados en el desarrollo de sensores

Componentes de
reconocimiento molecular

Bióticos Abióticos

Bioafinidad Biocatalíticos

Cambiadores Ligandos Polímeros

Reactivos Nucleótidos Células líquidos neutros
Enzimas Molecularmente
inmunológicos ADN/ARN Tejidos
impresos
Membranas
sólidas

19
 analito

Proceso de reconocimiento selectivo

Transducción Energía

Piezoeléctricos
Electroquímicos Ópticos Térmicos
(de masa)

Amperométrico Potenciométrico Conductimétrico

Respuesta-Procesamiento de datos

Secuencia de procesos en la operación de un sensor químico.

Se resumen los distintos tipos de transductor que pueden ser utilizados

SENSORES POTENCIOMÉTRICOS DE GASES

Son celdas electroquímicas compuestas por:
1. Un electrodo de membrana sensible a un ión y un electrodo de referencia, en
contacto con un electrolito interno.
2. Una membrana polimérica permeable a gases, que separa el electrolito interno
de la disolución de prueba.

Electrodo de Electrodo
referencia selectivo

Electrolito 123,4 mV
interno

Membrana permeable
a gases
Disolución de
prueba

Analito Reacción en electrolito interno Electrodo selectivo

CO2 CO2 + 2 H2O HCO3- + H3O+ Electrodo vidrio (pH)

SO2 SO2 + 2 H2O HSO3- + H3O+ Electrodo vidrio (pH)

NO2 2NO2 + 3H2O NO2- + NO3- + 2H3O+ Electrodo vidrio (pH)
o electrodo de NO3-
H2 S H2S + 2H2O S2- + 2H3O+ Electrodo de Ag2S

20
 SENSORES POTENCIOMÉTRICOS DE GASES. Sensor de CO2

Membrana de vidrio
sensible a H+
CO2(aq) + H2O HCO3-(aq) + H+(aq) Electrolito interno
(NaHCO3/NaCl)
Membrana polimérica
CO2(g)
Microporosa (PTFE)
CO2(aq) Aire atrapado
Disolución de prueba
Función de respuesta del sensor de CO2
Equilibrio global:
CO2(aq) CO2(g) CO2(aq)
Dlon. de Poros Electrolito
prueba membrana interno CO2(aq) + H2O HCO3-(aq) + H+(aq)
Dlon. de Electrolito
CO2(aq) + H2O HCO3-(aq) + H+(aq) prueba, x interno, i

(aH+)i [HCO3-]i Keq

Keq = ; [HCO3-] i ≈ cte. ⇒ (aH+)i = [CO2]x
[CO2]x [HCO3-] i

Respuesta del sensor de CO2

Keq
E = C + 0.05916 log (aH+)i E = C + 0.05916 log [CO2]x
[HCO3-]i
E = L + 0.05916 log [CO2]x

BIOSENSORES POTENCIOMÉTRICOS. Sensor de Urea

Ureasa
(NH2)2CO 2 NH3 + CO2

Transductor Interferencias Tiempo de Rango de

(Electrodo selectivo) respuesta linealidad
Control pH
pH 1 min 5×10-5-10-3 M
(tampón dil.)

NH4+ K+ (Na+) 35 s 5×10-5-10-1 M

Capa de enzima
inmovilizada

Métodos de inmovilización Estabilidad

del enzima del sensor
Encapsulación en membranas
10 d.
de diálisis
Inclusión en gel de poliacrilamida 21 d.
Inclusión + enlace covalente
>30 d.
En ácido poliacrílico
Entrecruzamiento con albúmina
>60 d.
(glutaraldehido)

21
 SENSORES AMPEROMÉTRICOS.
Sensor de oxígeno de Clark

Proceso catódico:
-600 3.25 O2 + 2 H+ + 2 e- H2O2
Eap./ mV i./ µA
Proceso anódico:
Electrolito interno (KCl)
2 Ag(s) + 2 Cl-(aq) 2AgCl(s) + 2 e-

Ánodo de Ag/AgCl

Cátodo de Pt Características de respuesta

Membrana de
Corriente de difusión estacionaria:
Polímero (PTFE)
ε D δ= espesor de la membrana
i = nFA Co* ε= porosidad de la memb.
δ q q = factor de tortuosidad

Tiempo de respuesta:

δ2 test ≈ 20 – 50 s
test. = 2
(D/q)

SENSORES AMPEROMÉTRICOS ENZIMÁTICOS

1. Basados en el empleo de enzimas oxidasas
E
Señal (i/ µA)
SH2 + O2 S + H2O2
Eapl = cte
1. Medida del peróxido de hidrógeno generado

SH2 + E(FAD) E(FADH2) + S

transductor
E(FADH2) + O2 E(FAD) + H2O2

H2O2 O2 + 2 H+ + 2 e- Reacción electródica

2. Empleo de un mediador de transferencia electrónica (Med)

Enzima (el O2 se sustituye por un aceptor de electrones no fisiológico)
inmovilizada

Medred E ox SH2 SH2

E(FAD)
e-

E(FADH2)
Medox Ered S S

Sensor Enzima y mediador Disolución

inmovilizados

22
 SENSORES AMPEROMÉTRICOS ENZIMÁTICOS
2. Basados en el empleo de enzimas deshidrogenasas

E DIFICULTADES
SH2 + NAD+ S + NADH + H+
Cinética lenta Selectividad

Mecanismo Estabilidad
electrodo
NADH NAD+ + 2e- + H+ complejo
Reproducibilidad

EMPLEO DE MEDIADORES DE TRANSFERENCIA ELECTRÓNICA

Medred NAD+ SH2 SH2

Medox NADH S S

Electrodo Disolución

23