J. Biol. Indon. Vol 6, No.

1 (2009)
ISSN 0854-4425

JURNAL
BIOLOGI
INDONESIA
Akreditasi: No 816/D/08/2009
Vol. 6, No. 1, Desember 2009

Uji Potensi Tumbuhan Akumulator Merkuri untuk Fitoremediasi Lingkungan 1

Tercemar Akibat Kegiatan Penambangan Emas Tanpa Izin (PETI) di Kampung Leuwi
Bolang, Desa Bantar Karet, Kecamatan Nanggung, Bogor
Titi Juhaeti, N. Hidayati, F. Syarif & S. Hidayat

Occurrence of Idiosepius (Mollusca: Cephalopoda) in Indonesian waters 13

Janek von Byern & Ristiyanti M. Marwoto

Parameter Populasi Kerang Lumpur Tropis Anodontia edentula Di Ekosistem 25

Mangrove
Yuliana Natan

Bioakumulasi Kadmium Pada Kerang Hijau (Perna viridis) Dengan Aplikasi Perunut 39
Radioaktif
Yusni Ikhwan Siregar

Pengaruh Suhu dan Salinitas Terhadap Respon Fisiologi Larva Tiram Mutiara 51
Pinctada maxima (Jameson)
Tjahjo Winanto, Dedi Soedharma, Ridwan Affandi, & Harpasis S. Sanusi

Pengaruh Kedalaman Terhadap Proses Pelapisan Inti Bulat Pada Kerang Air Tawar 71
(Anodonta woodiana)
Boedi Rachman, Tjahjo Winanto, Maskur, &Yade Sukmajaya

Analisis Vegetasi Hutan Pamah di Pulau Batanta, Raja Ampat, Papua 79

Edi Mirmanto

BOGOR, INDONESIA
 J. Biol. Indon. Vol 6, No. 1 (2009)

Jurnal Biologi Indonesia diterbitkan oleh Perhimpunan Biologi Indonesia.

Jurnal ini memuat hasil penelitian ataupun kajian yang berkaitan dengan masalah biologi
yang diterbitkan secara berkala dua kali setahun (Juni dan Desember).

Editor Pengelola

Dr. Ibnu Maryanto

Dr. I Made Sudiana
Dr. Anggoro Hadi Prasetyo
Dr. Izu Andry Fijridiyanto

Dewan Editor Ilmiah

Dr. Abinawanto, F MIPA UI

Dr. Achmad Farajalah, FMIPA IPB
Dr. Ambariyanto, F. Perikanan dan Kelautan UNDIP
Dr. Aswin Usup F. Pertanian Universitas Palangkaraya
Dr. Didik Widiyatmoko, PK Tumbuhan, Kebun Raya Cibodas-LIPI
Dr. Dwi Nugroho Wibowo, F. Biologi UNSOED
Dr. Parikesit, F. MIPA UNPAD
Prof. Dr. Mohd.Tajuddin Abdullah, Universiti Malaysia Sarawak Malaysia
Assoc. Prof. Monica Suleiman, Universiti Malaysia Sabah, Malaysia
Dr. Srihadi Agung priyono, F. Kedokteran Hewan IPB
Y. Surjadi MSc, Pusat Penelitian ICABIOGRAD
Drs. Suharjono, Pusat Penelitian Biologi-LIPI
Dr. Tri Widianto, Pusat Penelitian Limnologi-LIPI
Dr. Witjaksono Pusat Penelitian Biologi-LIPI

Alamat Redaksi
Sekretariat
Oscar efendi SSi MSi
d/a Pusat Penelitian Biologi - LIPI
Jl. Ir. H. Juanda No. 18, Bogor 16002 , Telp. (021) 8765056
Fax. (021) 8765068
Email : jbi@bogor.net
Website : http://biologi.or.id
Jurnal ini telah diakreditasi ulang dengan nilai A berdasarkan SK Kepala LIPI 816/
D/2009 tanggal 28 Agustus 2009.
J. Biol. Indon. Vol 6, No.1 (2009)

DAFTAR ISI

Uji Potensi Tumbuhan Akumulator Merkuri untuk Fitoremediasi Lingkungan Tercemar 1

Akibat Kegiatan Penambangan Emas Tanpa Izin (PETI) di Kampung Leuwi Bolang,
Desa Bantar Karet, Kecamatan Nanggung, Bogor
Titi Juhaeti, N. Hidayati, F. Syarif & S. Hidayat

Occurrence of Idiosepius (Mollusca: Cephalopoda) in Indonesian waters 13

Janek von Byern & Ristiyanti M. Marwoto

Parameter Populasi Kerang Lumpur Tropis Anodontia edentula Di Ekosistem Mangrove 25

Yuliana Natan

Bioakumulasi Kadmium Pada Kerang Hijau (Perna viridis) Dengan Aplikasi Perunut 39
Radioaktif
Yusni Ikhwan Siregar

Pengaruh Suhu dan Salinitas Terhadap Respon Fisiologi Larva Tiram Mutiara Pinctada 51
maxima (Jameson)
Tjahjo Winanto, Dedi Soedharma, Ridwan Affandi, & Harpasis S. Sanusi

Pengaruh Kedalaman Terhadap Proses Pelapisan Inti Bulat Pada Kerang Air Tawar 71
(Anodonta woodiana)
Boedi Rachman, Tjahjo Winanto, Maskur, &Yade Sukmajaya

Analisis Vegetasi Hutan Pamah di Pulau Batanta, Raja Ampat, Papua 79

Edi Mirmanto

Toksisitas Isolat-Isolat Bacillus thuringiensis yang Mengandung Gen cry 1A Terhadap 97

Hama Penggerek Batang Jagung, Ostrinia furnacalis Guenee
Bahagiawati, Habib Rizjaani, Agustina K. Sibuea

Pengaruh Inokulasi Bakteri Terhadap Pertumbuhan Awal Jarak Pagar (Jatropha curcas 107
L.)
Sri Widawati & Maman Rahmansyah

Karakteristik Tipe Pakan Kelelawar Pemakan Buah dan Nektar di Daerah Perkotaan: 119
Studi Kasus di Kebun Raya Bogor
Sri Soegiharto & Agus P. Kartono

Identifikasi Papasan (Coccinia grandis (L.) Voigt) Di Tiga Populasi di Yogyakarta 131
Ridesti Rindyastuti & Budi Setiadi Daryono

Biodegradasi Phenantrene oleh Mikroba Laut M5 (Alcanivorax Borkumensis) yang 143

Diisolasi dari Teluk Jakarta
Dyah Supriyati
 Jurnal Biologi Indonesia 6 (1): 97-105 (2009)

Toksisitas Isolat Bacillus thuringiensis yang Mengandung Gen cry 1A

Terhadap Hama Penggerek Batang Jagung, Ostrinia furnacalis Guenee

Bahagiawati1, Habib Rizjaani1, Agustina K. Sibuea2

1
Balai Besar Penelitian Bioteknologi dan Sumberdaya Genetik Pertanian,
2
Balai Besar Karantina Ikan Soekarno-Hatta.
Email: bahagiawati@indo.net.id

ABSTRACT

Cry genes isolated from Bacillus thuringiensis produce crystal proteins that exhibit a high
insecticidal activity against several plant pests. The objectives of this experiment were to
detect the presence of cry1A sequences from several local Bacillus thuringiensis isolates
multiplied by Lep1A-Lep1B and Lep2A-Lep2B primers using PCR technique and to determine
their toxicity against Ostrinia furnacalis, maize stemborer. From 59 tested isolates, 6 of them
gave PCR products, two DNA bands, first was 490 bp, the expected size of Lep1A-Lep1B
primers, and second was 986 bp, the expected size of Lep2A-Lep2B primers. These isolates
were Jtg 2151, 243, Cib 551, Lam 752, Lam 762 and C 522. All of tested isolates showed
potentially high toxicity against maize stemborer.

Key words: B. thuringiensis, cry1A, Ostrinia furnacalis, PCR.

Kata kunci: B. thuringiensis, cry1A, Ostrinia furnacalis, PCR.

tahun 1976/1977 mencapai 100 juta dollar

PENDAHULUAN
Amerika (Oka & Bahagiawati 1983).
Usaha pengendalian serangan hama
Salah satu kendala dalam bidang
telah dilakukan dengan berbagai cara, di
pertanian yang dihadapi para petani
antaranya dengan menggunakan
jagung di Indonesia adalah serangan
insektisida kimia. Penggunaan bahan
serangga hama Ostrinia furnacalis
tersebut memberikan dampak negatif
(Guenée) (Pyralidae) (Kalshoven 1981).
terhadap kelestarian alam, yaitu matinya
Kerusakan yang diakibatkan hama
organisme non-target, timbulnya hama
tersebut sangat bervariasi, yaitu dari
resisten, serta penumpukan residu pada
kerusakan tanaman dan penurunan
hasil panen dan di dalam tanah (Oka &
kualitas hingga kuantitas panen (Oka
Soehardjan 1997). Oleh karena itu,
& Bahagiawati 1984). Jika diuangkan
diperlukan cara lain selain hanya dengan
kerugian yang disebabkan oleh serangan
pestisida; cara tersebut antara lain dengan
hama di Amerika Serikat mencapai 7,7
mempergunakan biopestisida. Biopesti-
milyar dolar Amerika (Bent & Yu 1999).
sida yang paling popular dan digunakan
Di Indonesia kerugian yang disebabkan
secara komersil sejak tahun 1950-an
oleh serangan hama wereng padi pada
adalah Bacillus thuringiensis (Bahagia-

97
Bahagiawati, Rizjaani, & Sibuea
wati 2002), selanjutnya disebut dengan
Bt. Bakteri ini dapat diisolasi dari
berbagai bahan, seperti dari tanah,
permukaan daun, bubuk biji-bijian, dan
berbagai bangkai serangga (Carozzi et
al. 1991; Smith et al. 1991). Bt
merupakan bakteri yang menghasilkan
protein kristal dalam inclusion body saat
bersporulasi. Protein kristal yang bersifat
insektisida itu disebut δ-endotoksin. Gen
pengkode protein kristal tersebut dikenal
sebagai gen cry, kependekan dari kata
crystal. Salah satu gen cry ialah gen
cry1A yang mengode protein yang
bersifat insektisida terhadap serangga
hama Lepidoptera dengan bobot molekul
130-140 kilodalton (kDa) (Hofte &
Whiteley 1989).
Meskipun telah banyak ada produk
komersial yang sudah dipakai secara luas,
dan telah diidentifikasi berbagai jenis
protein Cry, namun penelitian dalam
usaha mengisolasi dan menidentifikasi
strain-strain B. thuringiensis masih terus
dilakukan, karena sejumlah besar
serangga hama belum dapat dikendalikan
dengan menggunakan toksin yang telah
ada. Selain itu, strain-strain baru juga
diperlukan untuk menyediakan alternatif
bila muncul resistensi serangga hama
terhadap strain Bt tertentu (Bahagiawati,
2001). Beberapa metode mutakhir untuk
mendeteksi gen cry telah dikembangkan,
antara lain analisis Southern blot,
penggunaan antibodi monoklonal, dan
analisis elektroforesis hasil polymerase
chain reaction (PCR) dengan menggu-
nakan primer spesifik (Carozzi et al.
1991; Santoso et al. 2000). Analisis PCR
dengan primer spesifik merupakan pilihan
terbaik karena hasilnya dapat menen-
98
tukan secara cepat keberadaan sekuen
gen cry, cukup sensitif, relatif cepat, dan
mudah digunakan dalam kegiatan rutin
(Carozzi et al. 1991).
Penelitian ini dilakukan untuk
mengidentifikasi 59 isolat Bt lokal koleksi
Balai Besar Penelitian dan Pengem-
bangan Bioteknologi dan Sumberdaya
Genetik Pertanian apakah mengandung
gen cry 1A dan untuk mengetahui tingkat
toksisitas isolat-isolat B. thuringiensis
yang tersebut terhadap Ostrinia
furnacalis (Pyralidae).
BAHAN DAN CARA KERJA
Sejumlah 59 isolat Bt berasal dari
koleksi Balai Besar Penelitian
Bioteknologi dan Sumberdaya Genetik
Pertanian, Bogor digunakan sebagai
bahan dalam penelitian ini. Sebagai
kontrol positif dipakai isolat yang
mengandung bahan aktif B. thuringiensis
subsp. kurstaki HD-7 berasal dari produk
komersial dengan nama dagang Dipel.
Sebagai kontrol negatif dipakai akuades.
Dua set primer digunakan dalam
penelitian ini yaitu Lep1A (5’
CCGGTGCTGGATTTGTGTTA 3’) dan
Lep1B (5’ AATCCCGTATTGTACC
AGCG 3’) serta Lep2A (5’CCGAGA
AAGTCAAACATGCG) dan Lep 2B
(Lep2B (5’TACATGCCCTTTCAG
GTTCC) (Carozzi et al. 1991).
Deteksi gen cry 1A
Deteksi gen cry1A dimulai dengan
isolasi DNA plasmid dari masing-masing
isolat dan dilakukan berdasarkan metode
lisis alkali Birnboim dan Doly (Ausubel
et al. 1992) yang dimodifikasi seperti
 Toksisitas Isolat Bacillus thuringiensis yang Mengandung Gen cry
tercantum dalam Bahagiawati et al.
(2002). Setelah itu dilaksanakan analisis
dengan PCR seperti tercantum pada
Bahagiawati et al. (2003).
Uji toksisitas.
Pengujian toksisitas dilaksanakan
dengan memakai serangga O. furnacalis
yang diperbanyak pada makanan buatan.
Pembuatan makanan buatan, dan cara
memperbanyak serangganya dapat
dilihat pada Bahagiawati et al. (2003).
Uji toksisitas isolat B. thuringinesis
terhadap larva O. furnacalis mengikuti
Bahagiawati et al. (2003) dengan
modifikasi sebagai berikut. Sebanyak 1
ml suspensi B. thuringiensis dari ma-
sing-masing perlakuan diencerkan
dengan 9 ml air suling steril, lalu 1 ml
suspensi bakteri yang telah diencerkan
tersebut dicampurkan ke dalam 9 ml
makanan buatan. Makanan buatan yang
telah dicampur suspensi bakteri tersebut
dimasukkan ke dalam cawan petri
berukuran 50 mm x 9 mm. Setiap cawan
petri berisi 2500 μl makanan buatan yang
terbagi lagi menjadi 5 bagian, masing-
masing 500 μl. Pembagian menjadi 5
bagian ini hanya untuk memudahkan
pengamatan. Setelah makanan buatan
tersebut membeku, permukaan makanan
dilukai dengan tusuk gigi steril untuk
memudahkan larva memakan dan hidup
dalam makanan buatan tersebut. Sepuluh
ekor larva instar I dimasukkan ke dalam
setiap cawan petri, masing-masing bagian
makanan diinokulasi 2 ekor larva.
Penghitungkan persentase kamatian larva
dilakukan pada hari ke-6 setelah inokulasi
berdasarkan Abbot (1925). Selain itu,
diamati juga berat dan panjang tubuh
larva yang hidup pada hari yang sama.
Setiap cawan mewakili satu ulangan, dan
masing-masing perlakuan diulang
sebanyak 3 kali.
Penelitian disusun dalam Rancangan
Acak Lengkap (RAL) dengan 3 ulangan
dan data diolah dengan menggunakan
program komputer statistical product
and service solutions (SPSS) base 10.0
for windows. Ada tidaknya perbedaan
antara data persentase kematian, berat,
dan panjang tubuh larva dari setiap
perlakuan diuji dengan uji statistika
Kruskal-Wallis. Jika terdapat perbedaan
antara rerata perlakuan yang diuji, analisis
dilanjutkan dengan uji jarak ganda
Duncan untuk membandingkan semua
pasangan rataan perlakuan. Rerata
persentase kematian, berat tubuh dan
panjang tubuh larva yang hidup kemudian
dianalisis dengan analisis regresi linier.
HASIL
Penyaringan isolat-isolat mengan-
dung gen cry1A dengan PCR
Dari 59 isolat B. thuringiensis lokal
yang disaring, hanya 6 isolat yang
memperlihatkan reaksi positif dimana
menunjukkan dua pita DNA, yang satu
berukuran kira-kira 490 pb yaitu produk
dari Lep1A-Lep1B dan yang kedua
berukuran 986 pb yang merupakan
produk Lep2A-Lep2B (Gambar 1). Pada
penelitian ini isolat kontrol positf (Dipel)
juga memperlihatkan keberadaan kedua
pita DNA tersebut, sedangkan kontrol
negatif tidak memperlihatkan adanya pita
DNA.
99
Bahagiawati, Rizjaani, & Sibuea

Uji toksisitas isolat terhadap O. nunjukkan beda antara perlakuan.

furnacalis
Data uji toksisitas terhadap larva O.
furnacalis pada hari ke-6 setelah
infestasi pada seluruh perlakuan dapat
dilihat pada Tabel 1. Hasil uji Kriskal-
Wallis terhadap semua parameter me-
Analisis data persentase kematian,
panjang dan berat tubuh larva yang masih
hidup diuji dengan jarak ganda Duncan
untuk membandingkan semua pasangan
perlakuan dan menunjukkan seluruh
isolat memiliki toksisitas yang tidak

Gambar 1. Produk PCR dari beberapa isolat Bt lokal Jtg2151(1), Cib243(2), Cib551(3),
Lam752(4), Kontrol positip, dipel (+), kontrol negatif akuades (-), Lam762(5) dan
C522(6).

Tabel 1. Toksisitas beberapa isolat Bt lokal yang mengandung gen cry1A terhadap hama O.
furnacalis

Kode isolat Uji Duncan*

Rerata Rerata berat Rerata panjang
kematian tubuh larva tubuh larva
(%) yang hidup yang hidup
(mg) (mm)
Kontrol negatif (akuades) 0,00a 5,90b (30) 13,49b (30)
Kontrol positif (Dipel) 83,33b 0,133a (5) 2,91a (5)
Jtg 2151 96,30b a
0,23 (2) 1,07a (2)
Cib 243 96,67b a
0,03 (1) 0,77a (1)
Cib 551 83,33b 0,77a (5) 2,613a (5)
Lam 752 96,67b a
0,003 (1) 1,03a (1)
Lam 762 96,67b a
0,20 (1) 0,94a (1)
C 522 86,67b a
0,04 (4) 0,78a (4)
Keterangan: Angka-angka yang diikuti oleh huruf yang sama dalam setiap kolom tidak berbeda
nyata dengan uji jarak ganda Duncan pada taraf kepercayaan α = 0,05, Angka dalam kurung
adalah jumlah total serangga yang hidup per perlakuan

100
 Toksisitas Isolat Bacillus thuringiensis yang Mengandung Gen cry

berbeda nyata dengan kontrol positif Pada kontrol positif (Dipel),

Dipel, namun berbeda nyata dengan kematian serangga mencapai 83,3%, dari
kontrol negatif akuades. 30 larva yang diinokulasikan hanya 5 larva
Pada pegujian toksisitas ini tidak yang dapat bertahan hidup pada hari ke-
seekorpun dari larva instar I mati pada 6 setelah inokulasi. Larva-larva yang
perlakuan kontrol negatif, yaitu makanan masih hidup ini terlihat lemah, dengan
buatan yang tidak mengandung suspensi berat tubuh yang relatif kecil yaitu 0,13
Bt. Keseluruh larva yang diinokulasikan mg dan panjang tubuh hanya 2,9 mm.
yaitu berjumlah 30 larva tetap hidup pada Larva-larva yang masih hidup pada
waktu dilakukan pengamatan. Berat makanan yang mengandung isolat uji baik
tubuh larva-larva tersebut mencapai rata- berat tubuh dan panjang tubuh tidak
rata 5,9 mg dan panjang tubuh 13,5 mm. berbeda nyata dengan larva pada kontrol
Di samping itu juga terlihat aktivitas positif dimana berkisar antara 0,04-0,7
makan dari larva-larva itu dimana mg untuk berat tubuh dan 0,7 mm-2,6 mm
ditandai dengan banyak terdapat kotoran untuk panjang tubuh.
serangga disekitar makanan. Oleh sebab Analisis regresi linier (Gambar 3)
itu larva-larva tersebut mempunyai bobot menunjukkan adanya hubungan erat
badan dan panjang tubuh yang sangat antara persentase kematian dan berat
berat dan panjang dibandingkan dengan tubuh larva (R2 = 0,97), demikian juga
larva-larva yang tetap bertahan hidup dengan panjang tubuh larva (R2 = 0,98).
pada makanan buatan yang mengandung Kedua analisis di atas menunjukkan
Bt. hubungan yang terbalik; semakin besar
A B
16
7 y = -0.1311x + 13.409
14
R2 = 0.9848
panjang tubuh (m m )

6
12
y = -0.0609x + 5.7726
5
b erat tu b u h (mg )

2
R = 0.9726 10
4
8
3 6
2
C 1
4
2
0 0
-1 0 20 40 60 80 100 120 0 20 40 60 80 100 120
kematian (%) kematian (%)

16
14
panjang tubuh (mm)

12
10
8
y = 2.1137x + 1.0133
6
R2 = 0.9753
4
2
0
0 1 2 3 4 5 6 7
berat tubuh (mg)

Gambar 3. Regresi linier antara: A. persentase kematian dan berat tubuh, B. persentase
kematian dan panjang tubuh, C. berat tubuh dan panjang tubuh larva

101
Bahagiawati, Rizjaani, & Sibuea
persentase kematian larva maka semakin
kecil berat tubuh larva dan panjang tubuh
larva yang masih hidup. Lain halnya
regresi linier antara berat tubuh dan
panjang tubuh larva yang hidup dimana
menunjukkan hubungan yang erat (R2=
0,97) berbanding lurus, semakin berat
tubuh larva maka semakin panjang tubuh
larva yang masih hidup pada hari ke-6
setelah inokulasi.
PEMBAHASAN
Seperti yang telah dikemukakan,
adanya kekawatiran akan pengaruh
negatif tentang pemakaian agrokimia
telah meningkatkan perhatian masarakat
kepada bioinsektisida sebagai alternatif
teknologi untuk menurunkan populasi
hama. Salah satu bioinsektisida yang
banyak digunakan adalah bioinsektisida
yang berbahan aktif Bt. Produksi
bioinsektisida Bt ini telah dimulai sejak
tahun 1950-an dan sangat berkembang
pada tahun-tahun berikutnya, misalnya
pada tahun 1980 investasi industri
bioinsektisida ini mencapai $24 juta US
dolar dan menjadi $107 juta US dolar di
tahun 1989. Kenaikan investasi industri
Bt ini diperkirakan 11% per tahun,
dimana pada tahun 1999 mencapai $300
juta. Bioinsektisida Bt umumnya
dikomersilkan dalam bentuk spora
berbentuk tepung. Potensi toksisitasnya
berlipat dibandingkan dengan pestisida
misalnya 300 kali dibandingkan dengan
sintetik pyrethroid (Feitelson et al. 1992).
Pada awal tahun1995/1996 mulai
berkembang bentuk lain dari insektisida
Bt ini, yaitu diproduksi dengan sendirinya
oleh jaringan tanaman transgenik. Hal ini
102
dimungkinkan oleh berkembangnya
teknologi rekayasa genetika dimana gen
cry yang terdapat di dalam bakteri Bt
kemudian diintroduksi ke jaringan
tanaman sehingga tanaman tersebut
dapat memproduksi protein yang bersifat
mematikan serangga ini. Perkembangan
tanaman transgenik ini juga pesat yaitu
dimulai hanya meliputi 1,7 ha pada tahun
1996 yang hanya ditanam di 4 negara
berkembang menjadi 125 juta ha yang
tersebar di 25 negara pada tahun 2007
(James 2008).
Beberapa penelitian isolasi bakteri
Bt dengan memakai teknik PCR telah
dilakukan di Indonesia (Listanto et al
1997; Santoso et al. 2000) namun baru
pada tahap penentuan keberadaan gen
cry1A saja, belum pada tahap bioasai
toksisitasnya terhadap hama target.
Penelitian yang lebih lengkap yaitu
identifikasi gen cry1A yang diikuti oleh
bioasai mulai dilakukan pada tahun 2003
(Bahagiawati et al. 2003) dimana
dilakukan bioasai terhadap hama utama
jagung yaitu O. furnacalis, namun pada
penelitian ini identifikasi gen cry1A
dilakukan hanya memakai sepasang
primer yaitu Lep 1A-Lep1B. Pada waktu
Santoso et al. 2000 melaksanakan
penelitian identifikasi gen cry1A pada 33
isolat Bt lokal, mereka memakai 2 pasang
primer, masing-masing Lep1A-Lep1B
dan Lep2A- Lep2B. Proses PCR dari tiap
pasang primer ini dilakukan satu per satu
pada PCR running yang berbeda. Pada
penelitian kami sekarang ini PCR
dilakukan dengan mempergunakan 2 set
primer di atas sekaligus dalam satu kali
running. Hasil penelitian kami
memperlihatkan hasil yang lebih akurat
 Toksisitas Isolat Bacillus thuringiensis yang Mengandung Gen cry
dimana ditemukan hanya 2 pita DNA
spesifik untuk cry1A. Pada hasil
penelitian Santoso et al. (2000) ditemukan
banyak pita DNA yang tidak spesifik
untuk tiap set primer. Dengan demikian
penelitian kami ini lebih memberikan
kemajuan dari dahulu karena dapat
menghemat waktu dan biaya serta
hasilnya lebih akurat karena hanya pita
spesifik saja yang didapatkan dari hasil
visualisasi hasil PCR dengan gel
elektroforesis. Pasangan primer Lep1A-
Lep1B dan Lep2A dan Lep2B
mengamplifikasi segmen DNA gen
cry1A pada posisi nukleotida yang
berlainan, yaitu Lep1A-Lep1B pada
posisi 310-800 dan Lep2A-Lep2B pada
posisi 2158-3066. Suatu isolat Bt diduga
kuat mengandung gen cry1A apabila
kedua pasang primer menghasilkan
produk PCR sebesar 490 dan 908/986
(Carozzi et al. 1991).
Proses isolasi dan identifikasi bakteri
Bt masih terus berlanjut sampai kini.
Pada penelitian kami didapatkan 6 isolat
Bt lokal yang berpotensi membunuh
serangga O furnacalis. Toksisitas isolat-
isolat tersebut disebabkan oleh
keberadaan gen cry1A yang mengkode
protoksin yang spesifik bagi serangga
ordo Lepidoptera (Höfte & Whiteley
1989; Ceron et al. 1994). Larva yang
memakan toksin Bt, setelah beberapa
hari tampak kecil, gerakannya lambat,
dan aktifitas makan menurun. Larva yang
mati berwarna hitam/gelap dan tubuhnya
mudah hancur. Kematian larva terjadi
karena adanya aktivitas protein kristal
Cry1A pada usus bagian tengah larva.
Protein kristal yang dimakan larva larut
bersifat protoksi dan di dalam usus tengah
serangga berubah menjadi toksin.
Kemudian toksin tersebut akan berikatan
(binding) dengan reseptor spesifik pada
sel-sel epitel usus bagian tengah ini dan
membentuk pori-pori pada membran sel
yang menyebabkan tekanan osmosis
yang tinggi di dalam sel dan selanjutnya
menyebabkan sel-sel epitelium lisis/pecah
dan pada akhirnya kematian larva
(Schnepf et al. 1998).
Pada penelitian ini ditemukan 6 isolat
Bt lokal yang bersifat toksik terhadap O.
furnacalis. Empat isolat yaitu Jtg2151,
Cib 243, Lam752 dan Lam762
toksisitasnya melebihi toksisitas Dipel,
yaitu bioinsektisida Bt yang telah
dikomersilkan. Toksin Bt pada isolat yang
diuji ini tidak hanya menyebabkan
kematian larva, tetapi juga menurunkan
berat tubuh dan panjang tubuh larva yang
berhasil tetap hidup. Hal ini jelas
menunjukkan bahwa toksin Bt tersebut
sangat mengganggu metabolisme
serangga sehingga mengakibatkan fisik
serangga yang tidak sehat pula dan
berakhir dengan kematian.
KESIMPULAN
Dari 59 isolat yang diuji, 6 isolat
menunjukkan reaksi positif PCR dengan
menghasilkan dua pita DNA yang
berukuran masing-msing 490 kb dan 986
kb. Berdasarkan hasil uji toksisitas isolat
B. thuringiensis terhadap larva instar I
dapat disimpulkan bahwa semua isolat B.
thuringiensis yang diuji menunjukkan
toksisitas yang tinggi terhadap larva
instar I O. furnacalis.
103
Bahagiawati, Rizjaani, & Sibuea
DAFTAR PUSTAKA
Abbot, WS. 1925. A method of computing
the effectiveness of an insecticide.
J. Econ Ento.. 18: 265-267.
Ausubel, FM., R. Brent, RE. Kingston,
DD. Moore, JG. Seidman, J.A. Smith
& K. Struhl. 1992. Short protocols
in molecular biology: A
compendium of methods from
current protocols in molecular
biology. Second Ed. New York.
John Willey.
Bahagiawati. 2001. Managemen
resistensi serangga hama pada
pertanaman tanaman transgenik Bt.
Buletin Agrobio: 4 (1): 1-8.
Bahagiawati & Amirhusin. 2002.
Penggunaan Bacillus thuringiensis
sebagai bio- insektisida. Bul.
Agrobio 5(1): 21-28
Bahagiawati, D. Setyawan & Sutrisno.
2002. Metode PCR sederhana
untuk menapis isolat Bacillus
thuringiensis yang membawa gen
cry V. J. Mikro Indo.7(2): 35-38.
Bahagiawati, H. Rijzaani, & N. Riani
Simanjuntak. 2003. Deteksi gen cry
1A Bacillus thuringiensis dengan
teknik PCR dan toksisitas-nya
terhadap Ostrinia furnacalis
Guenee. J. Mikro. Indo. 8(1): 27-
30.
Bent, A F. & IC. Yu, 1999. Applications
of Molecular Biology to Plant
Disease and Insect Resistance.
Advances in Agronomy 66:251-
298.
Carozzi, NB., VC. Kramer, GW. Warren,
S. Evola & M.G. Koziei. 1991.
Prediction of insecticidal activity of
104
Bacillus thuringiensis strain by
Polymerase Chain Reaction product
profiles. Appl. Envi. Microbiol.
57(11): 3057-3061.
Ceron, J., L. Covarrubias, R. Quintero,
A. Ortiz, M. Ortiz, E. Aranda, L.
Lina & A. Bravo. 1994. PCR
analysis of the cry1 insecticidal
crystal family genes from Bacillus
thuringiensis. Appl. Envi..
Microbiol. 60: 353-356.
Feitelson, JS., J. Payne, & L. Kim. 1992.
Bacillus thuringiensis: insects and
Beyond. Bio/Technology 10: 271-
275
Höfte, H. & HR. Whiteley. 1989.
Insecticidal crystal protein of
Bacillus thuringiensis. Micro.
Rev. 53(2): 242-255.
James, C. 2008. Global Review of
Commercial Transgenic Crops:
2008. ISAAA Briefs. No. 39.
ISAAA, Ithaca, N.Y.
Kalshoven, LGE. 1981. Pest of crops
in Indonesia. Terjemahan dari De
plagen van de cultuurgewassen
in Indonesie, oleh Van der Laan,
P.A. PT Ichtiar Baru-Van Hove,
Jakarta.
Listanto, E., Sutrisno, S. Brotonegoro, B.
Santoso, B. Soegiarto & MS.
Sarjono. 1997. Deteksi isolat
Bacillus thuringiensis Indonesia
yang mengandung gen cry1A(a),
cry1A(b), cry 1A(c) dengan PCR.
Pros. Sem. Perhim. Biotek. Perta.
Indone. Surabaya 12-14 Maret
1997.
Oka, IN. & Bahagiawati AH. 1983.
Wereng coklat dan pengendaliannya
dalam prespektif. Masalah dan
 Toksisitas Isolat Bacillus thuringiensis yang Mengandung Gen cry

Identifikasi isolat Bacillus

Hasil penelitian Padi. Risalah
thuringiensis Indonesia yang
lokakarya penelitian padi,
mengandung gen cry1A mengguna-
Cibogo, Bogor, 22-24 Maret 1983.
kan teknik PCR. Jurnal Biotekno-
Oka IN. & Bahagiawati AH. 1984.
logi Pertanian 5(2): 53-60.
Pengendalian terpadu hama padi.
Schnepf, E., N. Crickmore, J. van Rie,
Padi-Buku III: 653-680.
D. Lereclus, J. Baum, J. Feitelson,
Oka, IN. & Soehardjan. 1997. Tantangan
D.R. Zeigler & D.H. Dean. 1998.
entomologi pada abad XXI.
Bacillus thuringiensis and its
Prosiding seminar nasional
insecticidal crystal proteins. Mol.
Tantangan entomologi pada
Biol. Rev. 63(3):775-806.
abad ke XXI. Perhimpunan
Smith, RA. & GA. Couche. 1991. The
Entomologi Indonesia Cabang
phylloplane as a source of Bacillus
Bogor.
thuringiensis variants. Appl.
Santoso, TJ., E. Listanto, Rodiyah, D.
Environ. Microbiol. 57: 311-315.
Damayanti & Sutrisno. 2000.

Memasukkan: April 2009

Diterima : September 2009

105
 J. Biol. Indon. Vol 6, No. 1 (2009)

PANDUAN PENULIS

Naskah dapat ditulis dalam bahasa Indonesia atau bahasa Inggris. Naskah disusun dengan urutan:
JUDUL (bahasa Indonesia dan Inggris), NAMA PENULIS (yang disertai dengan alamat Lembaga/
Instansi), ABSTRAK (bahasa Inggris, maksimal 250 kata), KATA KUNCI (maksimal 6 kata),
PENDAHULUAN, BAHAN DAN CARA KERJA, HASIL, PEMBAHASAN, UCAPAN
TERIMA KASIH (jika diperlukan) dan DAFTAR PUSTAKA.

Naskah diketik dengan spasi ganda pada kertas HVS A4 maksimum 15 halaman termasuk
gambar, foto, dan tabel disertai CD. Batas dari tepi kiri 3 cm, kanan, atas, dan bawah masing-
masing 2,5 cm dengan program pengolah kata Microsoft Word dan tipe huruf Times New Roman
berukuran 12 point. Setiap halaman diberi nomor halaman secara berurutan. Gambar dalam
bentuk grafik/diagram harus asli (bukan fotokopi) dan foto (dicetak di kertas licin atau di scan).
Gambar dan Tabel di tulis dan ditempatkan di halam terpisah di akhir naskah. Penulisan simbol α,
β, χ, dan lain-lain dimasukkan melalui fasilitas insert, tanpa mengubah jenis huruf. Kata dalam
bahasa asing dicetak miring. Naskah dikirimkan ke alamat Redaksi sebanyak 3 eksemplar (2 eksemplar
tanpa nama dan lembaga penulis).
Penggunaan nama suatu tumbuhan atau hewan dalam bahasa Indonesia/Daerah harus
diikuti nama ilmiahnya (cetak miring) beserta Authornya pada pengungkapan pertama kali.
Daftar pustaka ditulis secara abjad menggunakan sistem nama-tahun. Contoh penulisan
pustaka acuan sebagai berikut :

Jurnal :
Hara, T., JR. Zhang, & S. Ueda. 1983. Identification of plasmids linked with polyglutamate
production in B. subtilis. J. Gen. Apll. Microbiol. 29: 345-354.
Buku :
Chaplin, MF. & C. Bucke. 1990. Enzyme Technology. Cambridge University Press. Cambridge.
Bab dalam Buku :
Gerhart, P. & SW. Drew. 1994. Liquid culture. Dalam : Gerhart, P., R.G.E. Murray, W.A. Wood,
& N.R. Krieg (eds.). Methods for General and Molecular Bacteriology. ASM., Washington.
248-277.
Abstrak :
Suryajaya, D. 1982. Perkembangan tanaman polong-polongan utama di Indonesia. Abstrak
Pertemuan Ilmiah Mikrobiologi. Jakarta . 15 –18 Oktober 1982. 42.
Prosiding :
Mubarik, NR., A. Suwanto, & MT. Suhartono. 2000. Isolasi dan karakterisasi protease
ekstrasellular dari bakteri isolat termofilik ekstrim. Prosiding Seminar nasional Industri
Enzim dan Bioteknologi II. Jakarta, 15-16 Februari 2000. 151-158.
Skripsi, Tesis, Disertasi :
Kemala, S. 1987. Pola Pertanian, Industri Perdagangan Kelapa dan Kelapa Sawit di
Indonesia.[Disertasi]. Bogor : Institut Pertanian Bogor.
Informasi dari Internet :
Schulze, H. 1999. Detection and Identification of Lories and Pottos in The Wild; Information
for surveys/Estimated of population density. http//www.species.net/primates/loris/
lorCp.1.html.
J. Biol. Indon. Vol 6, No.1 (2009)

UCAPAN TERIMA KASIH

Jurnal Biologi Indonesia mengucapkan terima kasih dan penghargaan kepada

para pakar yang telah turut sebagai penelaah dalam Volume 6, No 1, Desember
2009:

Dr. Fredinan Yulianda Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan-IPB

Dr. Hari Sutrisno, Puslit Biologi-LIPI
Ir. Heryanto MSc, Puslit Biologi-LIPI
Ir. Majariana Krisanti MSi, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan-IPB
Dr. Niken Tunjung Murti Pratiwi, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan-IPB
Dr. Rugayah, Puslit Biologi-LIPI

Edisi ini dibiayai oleh DIPA Puslit Biologi-LIPI 2009

J. Biol. Indon. Vol 6, No. 1 (2009)

Toksisitas Isolat-Isolat Bacillus thuringiensis yang Mengandung Gen cry 1A Terhadap 97

Hama Penggerek Batang Jagung, Ostrinia furnacalis Guenee
Bahagiawati, Habib Rizjaani, Agustina K. Sibuea

Pengaruh Inokulasi Bakteri Terhadap Pertumbuhan Awal Jarak Pagar (Jatropha curcas 107
L.)
Sri Widawati & Maman Rahmansyah

Karakteristik Tipe Pakan Kelelawar Pemakan Buah dan Nektar di Daerah Perkotaan: 119
Studi Kasus di Kebun Raya Bogor
Sri Soegiharto & Agus P. Kartono

Identifikasi Papasan (Coccinia grandis (L.) Voigt) Di Tiga Populasi di Yogyakarta 131
Ridesti Rindyastuti & Budi Setiadi Daryono

Biodegradasi Phenantrene oleh Mikroba Laut M5 (Alcanivorax Borkumensis) yang 143

Diisolasi dari Teluk Jakarta
Dyah Supriyati