Dr.

Luis Zapata
Unidad de Histología Normal
HBLT
 Histología del griego (histo= tejido y logos=
estudio),
 Es la ciencia que estudia la estructura microscópica
de las células, tejidos y órganos, su desarrollo y
sus funciones.
 Establece la relación entre forma y función.
 El desarrollo de la histología está ligado a la
aparición del microscopio
El origen del microscopio es incierto. Varias
naciones se atribuyen su invención.
 Una breve reseña de hechos nos permite
entender que la invención del microscopio
proviene de diversos personajes que
coincidentemente tuvieron la misma visión
en los siglos XVI y XVII en diferentes
países.
 El primer microscopio compuesto fue
inventado, por casualidad en experimentos
con lentes.
 Los holandeses Hans y Zacharias Janssen
(padre e hijo) inventaron en 1590 el
microscopio compuesto (2 lentes).
 Leonardo Da Vinci se refirió a la necesidad

del uso de lentes para facilitar la visión y

posterior estudio de imágenes pequeñas.
 A Cristian Huygens (holandés) se le atribuye también
la invención del microscopio compuesto
 Galileo (italiano) y Cornelius Drebbel, por encargo de
éste fabricaron un microscopio compuesto.
 También se atribuye a Antonie van Leeuwenhoek
(holandés),  la invención y en especial el
perfeccionamiento del microscopio usando lentes
pequeñas, potentes, de calidad, y su artefacto era de
menor tamaño.
 Trabajando conjuntamente con Cristian Huygens se
les atribuye la descripción por primera vez de
bacterias, protozoos, espermatozoides y glóbulos
rojos mediante el uso de microscopios.
 Marcello Malpighi usó del término "sáculos" para
identificar a las células y llamó "tubos" a los vasos
sanguíneos. Observó riñones y descubrió los
glomérulos, exploró el bazo y describió los
corpúsculos que llevan su nombre.
 Jan Swammerdam describió glóbulos rojos y
Crisóstomo Martínez, estructuras óseas
 Robert Hooke logró plasmar en su obra
"Micrographia" una pormenorizada descripción de la
estructura microscópica de tallos y hojas
introduciendo por primera vez, el término "cellula"
identificando cada una de las celdas iguales (al estilo
de un panal de abeja) que había logrado observar en
sus trabajos con corcho.
 Caspar Wolff describió a sus "glóbulos" como
la "fuerza esencial"
 Bichat, reconocido como el Padre de la

Histología, postuló la importancia de lo

funcional más que de lo morfológico,
definiéndolo como: "una parte homogénea de
los territorios orgánicos que muestra una
estructura común e idénticas propiedades".
 Su obra, "Anatomía General" se convertiría en

un punto de inflexión en esta historia.

 Nicol desarrolló la microscopía con luz polarizada.
 Schleiden y Schwann proponen la teoría de la célula
y declaran que la célula nucleada es la unidad
estructural y funcional en plantas y animales.
 Virchow completa la teoría celular con su frase “omni
cellula et cellula”
 J. Quekett publica un tratado práctico sobre el uso
del microscopio.
 Abbé analiza los efectos de la difracción en la
formación de la imagen en el microscopio y diseñó el
condensador que permite mejorar la iluminación.
 Retzius describe gran número de tejidos
animales con un detalle que no ha sido superado
por ningún otro microscopista de luz.
 Cajal y otros histólogos entre ellos Retzius
desarrollan nuevos métodos de tinción y
proponen los fundamentos de la anatomía
microscópica.
 Zeiss fabrica una serie de lentes, diseño de Abbé
que permiten al microscopista resolver
estructuras en los límites teóricos de la luz
visible.
 Köhler y Siedentopf desarrollan el
microscopio de fluorescencia.
 Lebedeff diseña y construye el primer

microscopio de interferencia.
 Zernike inventa el microscopio de contraste
de fases.
 Ernst Ruska y Max Knoll, físicos alemanes,
construyen el primer microscopio electrónico.
 JANSSEN 1590

NINIVE s. XVIII / s. XIX GALILEO

MICROSCOPIOS COMPUESTOS 1610
MICROSCOPIOS SIMPLES

HOOKE 1678 FRANCES

LEEWENHOEK DARWIN
1632 1686 DOLOND 1840
1840
 MICROSCOPIO TELESCOPIO

MICROSCOPIO DE BOLSILLO

1908 1916
s XX

MICROSCOPIO DE MICROFOTOGRAFIA
MICROSCOPIO BINOCULAR
MICROSCOPIO ELECTRONICO
Método de la Histología
• La histología, al igual que otras ciencias morfológicas,
pertenece a la categoría de las ciencias básicas

• Al formular la concepción científica del mundo sobre la

regularidad de la estructura y la actividad vital del
organismo en estado normal que se puede alterar en estado
patológico.

• El principal método de estudio histológico es el

microscópico y su objeto de estudio son los preparados de
tejidos fijados y coloreados (técnica histológica).

• La histología desde su surgimiento hasta nuestros días

está relacionada con el desarrollo de las técnicas ópticas y
los métodos para la microscopia.

• Los logros en las investigaciones microscópicas hicieron

posible el bagaje de nuevas informaciones y
generalizaciones teóricas.
 Serie de pasos que han de darse para obtener un preparado observable con
el microscopio óptico

Toma de muestra
Inmediato (in vivo)
Fijación
Métodos de examen
Deshidratación

Mediato (post mortem) Preparación para la inclusión

Inclusión

Modelado del bloque –

catalogación

Sección con el micrótomo

extendido de los cortes – pegado

Coloraciones: de rutina o

especiales
El muestreo debe realizarse antes de:

Autólisis y/o Putrefacción

Los tejidos y órganos se han de extraer considerando las siguientes

prioridades:

Las glándulas exocrinas y endocrinas lo más rápidamente posible.

El páncreas y el riñón deben extraerse no más de 10 a 15 min.

Otros órganos tales como intestino delgado y/o grueso, estómago,

hígado, se deben extraer no más allá de los 30 min.

Los músculos esqueléticos, huesos, piel, encéfalo, médula, ganglios

nerviosos no deben extraerse más allá de 60 min.
 24 horas
No deben ser mayores de 1 cm de espesor; deben ser tomados
en ángulos rectos a la superficie de los órganos.

A veces pueden cortarse trozos de órganos de mayor tamaño, 2 o

3 cm y luego de algunas horas en fijador en que las piezas están
más fáciles de manejar, se realizan cortes más pequeños de los
mismos.

La cantidad de líquido fijador en microscopia óptica debe ser

aproximadamente 10 a 20 veces el volumen de la muestra.
Es una operación destinada a provocar la “ MUERTE” de las células, conservándolas,
cuanto sea posible en el estado en que están durante la vida.

Una buena fijación debe:

1. Actuar con rapidez, matando y fijando a las células antes de que aparezcan
los fenómenos agónicos o post-mortem (autólisis, desintegración, etc.)

2. Poseer alto poder de penetración para asegurar la fijación correcta hasta en

las capas profundas de la pieza a fijar

3. Conservar, en lo posible, los detalles estructurales que presentaban in vivo

4. Permitir o favorecer el empleo de los procedimientos necesarios para su

observación ulterior (ejecución de cortes, coloración, etc.)

5. Impedir la desaparición de los elementos solubles durante la fijación o

después de ella

6. No provocar o impedir la producción de estructuras artificiales

7. No retraer excesivamente los tejidos ni volverlos friables o quebradizos

Coagulando las proteínas sin combinarse con ellas
(alcohol, ácido pícrico, yodo, calor)

Formando combinaciones químicas con las sustancias

orgánicas (ácido crómico y sus sales)

Reduciéndose en contacto con las mismas y

originando en su seno un precipitado sumamente fino
(ácido ósmico, bicloruro de mercurio, cloruro de oro)

La mayor parte de los fijadores actúan como

oxidantes, favoreciendo así la coloración ulterior de
los tejidos
 SIMPLES Formol al 10%
Alcohol etílico absoluto o de 96%
Alcohol metílico
Químicos Ácido ósmico al 1 ó 2%
Bicromato de potasio al 3-5%

COMPUESTOS
Líquido de Fleming, mezcla cromo-osmio-acética.
Líquido de Zenker, mezcla bicromato-sublimado-
acética.
Líquido de Helly, mezcla Zenker-formol.
Líquido de Bouin, mezcla picro-formos-acética.
Liquido de Duboscq-Brasil, o Bouin alcohólico

FÍSICOS Desecación, Calor seco, Calor húmedo, Frío y

Congelación y desecación
Deshidratación
Los tejidos contienen grandes cantidades de agua, tanto intracelular como
extracelular, que debe ser eliminada y reemplazada por parafina

Lavado en agua o alcohol

Una lámina en un caja de deshidratación

La deshidratación se hace en forma progresiva con sucesivos baños de

alcohol, cada vez menos hidratados 70° – 80° – 90° – 96° – 100°

Tiempos de permanencia en cada líquido:

Alcohol 70: las piezas pueden permanecer varios días.
Alcohol 96: 2 baños en un lapso de 24 h.
Alcohol 100: 3 baños de una hora c/u.
Aclaración
Impregnación por un disolvente de la parafina

Las piezas perfectamente deshidratadas se sumergen en el disolvente

(xilol o toluol)

Penetración de la Parafina

Se sumergen las piezas en parafina (56-58º de punto de fusión),

mantenida líquida en la estufa a no más de 62ºC.

Después de 1 a 2 horas se renueva la parafina

 DESHIDRATACIÓN E INCLUSIÓN EN PARAFINA

Deshidratación, aclaramiento y
penetración de parafina
actualmente se realizan en
centros de procesamiento de
tejidos

Inclusión Definitiva o Formación del Bloque

En moldes de papel, de metal ad-hoc

(barras de Leuckart) o cassette ranurados
se vierte la parafina fundida, del mismo
punto de fusión de la que ha servido para
la penetración.

Se colocan las piezas orientándolas y

luego se pone el molde en heladera
 CORTES
El objeto de la inclusión que hemos descripto anteriormente es hacer posible la
reducción del tejido a cortes lo suficientemente delgados como para permitir el
paso de la luz para examinarlo al microscopio.

Los cortes más corrientes son los de 4-6 micrones.

Micrótomo de deslizamiento

Micrótomo Tipo Minot

Micrótomo de Congelación

y el Crióstato o Criótomo
Micrótomo tipo Minot

Los cortes de parafina se extienden en agua tibia contenida en un cristalizador.

Se introducen portaobjetos, cubiertos con una capa de adhesivo de Mayer y, con la

ayuda de una aguja histológica, se colocan los cortes sobre el portaobjetos y a
continuación se lo levanta
Tinción

Montaje
Tinción o Coloración de los Cortes

Corte Deshidratado y Montado en un Portaobjeto

Desparafinar los cortes con xilol

Rehidratar con alcoholes de gradación

decreciente (100%, 50%....agua)

Coloración

Aclarar el exceso de colorante con agua

Deshidratar

Montar (Resina + Cubreobjetos)

Coloración
Proceso mediante el cual un cuerpo es teñido por una sustancia
colorante, sin perder el color cuando es lavado con el disolvente

Colorante
Sustancias que pueden conferir color a otros cuerpos

Clasificación

COLORANTES NATURALES:

Animales (carmín)

Vegetales (hematoxilina, orceína, azafrán)

COLORANTES ARTIFICIALES O SINTÉTICOS (COLORES DE ANILINA)

Ácidos, Básicos, Neutros e Indiferentes

COLORANTES BÁSICOS

Sales cuya base es coloreada y el ácido es incoloro (azul de metileno

o clorhidrato de azul de metileno).

Reaccionan con los GRUPOS ANIÓNICOS de los componentes

texturales, que son los grupos:

Fosfatos de Ácidos nucleicos (ADN y RNA)

Sulfatos se los glucosaminoglucanos

Grupo Carboxilo de las proteínas.

La reacción de estos grupos varía según el pH.

Son colorantes nucleares

Ejemplos:

Verde de Metileno, Azul de Metileno, Pironina G, Azul de toluidina y

la Hematoxilina
Los tejidos que reaccione con un colorante básico (o con
Hematoxilina) se dice que es BASÓFILO y que presenta BASOFILIA.
Estos componentes son:

La Heterocromatina y los Nucléolos del Núcleo por los

grupos Fosfato ionizados.

Ergatoplasma (parte del citoplasma) por grupos Fosfato

ionizados.

Matriz del Cartílago por grupos Sulfato ionizados.

COLORANTES ÁCIDOS

Sales cuya base es incolora y su ácido es coloreado (eosina o

eosinato de sodio)

Se unen primariamente a los componentes texturales por medio

de enlaces electrostáticos de manera similar pero opuesta a la de los
colorantes básicos

Las anilinas ácidas reaccionan con grupos catiónicos, como los

GRUPOS AMINO IONIZADOS de las proteínas

Son colorantes citoplasmáticos

Los componentes texturales que se tiñen de colorantes ácidos se dice

que son ACIDÓFILOS y que presentan ACIDOFILIA.

Son acidofilos:

La mayor parte del citoplasma no especializado.

Filamentos Citoplasmáticos.

Fibras extracelulares
 Hematoxilina – Eosina
La hematoxilina es un colorante catiónico mientras que la eosina es un colorante
aniónico perteneciente a los xantenos.

Se teñirán los núcleos de azul, citoplasmas en rosa, músculo en tonos rojizos a

rosados fucsia, glóbulos rojos en naranja o rojo y la fibrina en rosa intenso

Técnica
1º-Desparafinado.
Estufa durante 30 min. a 60º.
Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min.
2º- Hidratación.
Alcohol absoluto-5min.
Alcohol 96º-5min. Micrografía de Piel (5X) H&E
Alcohol 70º-5min.
3º- Lavar en H2O destilada.
4º- Hematoxilina-5min.
5º- Lavar en H2O-2min.
6º-Eosina alcoholica-1min.
7º-Deshidratar.
Alcohol de 70º
Alcohol de 96º.
Alcohol absoluto.
Xilol. Micrografía de Intestino Delgado(5X) H&E
8º- Montaje.
NEUTROS

AZUL DE METILENO

METACROMÁTICO

AZUL DE TOLUIDINA

Azul de Metileno Azul de Toluidina

CONVENCIONALES:
H-E
TRICRÓMICOS: Van Gieson, Masson,
Gallego.
TÉCNICAS DE PLATA
GIEMSA: Extensiones de sangre, citologías
PAPANICOLAU: Citologías

HISTOQUÍMICOS:
Sudán III Lípidos
Carmín de Best, PAS Glucógeno
Azul de Prusia Hierro
Von Kossa Calcio
Orceína Fibras elásticas

INMUNOHISTOQUÍMICOS
 Van Gieson

Elástica de Van Gieson

Es una técnica para la coloración de

fibras colágenas y elásticas.

El colágeno parece que capta un

colorante ácido.

Tiñe el colágeno de rojo, núcleos y

fibras elásticas de negro y citoplasma de
amarillo.

Pared de la tráquea, Van Gieson.

Van Gieson
Azan (Azocamin + Aniline blue)

Color Rojo

Núcleos celulares

Color Rosa

Citoplasma celular
(color rojo-naranja: fibras musculares y hematíes)

Color Azul

Mucinógeno
Fibras de colágeno

Región distal del glande. Coloración: Azan. Escala

de reproducción: 200x
Sales de Plata
color negro-marrón oscuro:

Fibras de reticulina,

Dendritas

Axones neuronales
Micrografía de un corte transversal de
Prolongaciones gliales músculo liso teñido con sales de plata para
la demostración de fibras reticulares.

Micrografía de Lengua (Mastocitos). Impregnación

argéntica.

Micrografía de Mesenterio. Impregnación argéntica.

GOMORI (Sales de Plata)
Sustancias específicas mediante reacciones químicas

Sudán III Lípidos

Carmín de Best, PAS Glucógeno
Azul de Prusia Hierro
Von Kossa Calcio
Orceína Fibras elásticas
SUDAN ROJO PARA TEÑIR LIPIDOS SIMPLES

1º.- Cortes obtenidos por congelación

(La inclusión en parafina disuelve las
grasas).

2º.- Introducir los cortes en la mezcla a

partes iguales de Sudan III y Rojo
Escarlata (filtrado). 24 horas.

3º.- Lavar en agua destilada.

Sudan Rojo . Arteria muscular

4º.- Teñir los nucleos con Hematoxilina

de Groat--2 minutos.

5º.- Lavar y secar con papel de filtro.

6º.- Montar en Plasdona.

PAS o del ácido peryódico de Schiff

Se basa en la rotura de los enlaces -C-C- presentes en los

carbohidratos por la acción del ácido peryódico, potente agente
oxidante, liberándose grupos aldehído que al combinarse con el
reactivo de Schiff dan un compuesto de color rojo púrpura intenso.

Cabeza del Epidídimo de Conejo. PAS 400X Cuerpo Epidídimo de Conejo. PAS 400X

color rosa-magenta: carbohidratos, mucoproteínas, proteoglicanos

PAS (Glucógeno)
Azul de Prusia (Hierro)
Von Kossa (Calcio)
Orceína (Fibras elásticas)
Estudia la composición química de la célula y permite detectar la
localización topográfica de algunos principios inmediatos,
enzimas, metales pesados y otras sustancias.

Se considera como un nexo de unión entre la morfología y la

bioquímica
En una reacción bioquímica hay tres pasos fundamentales:

Fijación:

Preservar las estructuras y reactividad funcional celulares

Existen diversos fijadores: metanol, etanol, acetona, glutaraldehído,

formaldehído, etc.

Incubación

Consecuencia se liberar unos productos que bien por si mismos, o al

combinarse con otra sustancia presente, dan lugar a un precipitado
visible en el lugar de la reacción.

Contraste

Para resaltar en lo posible el producto de reacción y permitir

una óptima visualización del núcleo y del
citoplasma.
Las reacciones deben tener 3 características: sensibilidad, especificidad y
reproductibilidad
Detección de antígenos (biomoléculas) en células/tejidos mediante
anticuerpos marcados “in situ”.
INMUNOFLURECESCIA

Fluoresceína

Vimentina
INMUNOFLURECESCIA

Rodamina

GFAP
INMUNOENZIMATICAS Islotes de Langerhans (Páncreas)

Insulina Glucágon

Corteza Cerebral

Isomastotatina VIP
FOSFATASA ALCALINA

FOSFATASA ACIDA

ESTERASAS
INMUNO ORO (ORO COLOIDAL)

NEUROHIPOFISIS
Es la distancia mínima que debe separar a dos objetos para que sean
percibidos como dos objetos diferentes al ser observados con el
microscopio

Parafina / 7 μm Resina Epon / 1 μm

PAS-Hematoxilina Azul de toluidina
férrica
Selección de la muestra

Fijación de la muestra

Inclusión de la muestra

Corte de la muestra

Contraste [“tinción”] de los cortes

[Montaje de los cortes]

Examen de los cortes con el M.E.

La fijación hace que precipiten las proteínas tisulares

Finalidad

Preservar los tejidos de forma similar a su estado “in vivo”

Aumentar la dureza de la muestra para facilitar su posterior

corte

FIJADORES USADOS

Solución tamponada de glutaraldehído 2,5-5%

Solución tamponada de tetróxido de osmio 1-2%

Finalidad
Endurecer la muestra homogéneamente para obtener cortes ultrafinos

Método de inclusión en resina

Lavar el fijador en exceso de la muestra con una solución tampón

Contrastar “en bloque” (con acetato de uranilo, p. ej.)

Deshidratarla muestra con alcoholes de gradación creciente

Pasar la muestra por un disolvente (óxido de propileno...)

Introducir la muestra en una mezcla 1:1 de resina y disolvente a

temperatura ambiente para que la muestra se embeba de resina

Introducir la muestra en resina pura [en una cápsula de gelatina o plástico]

a 60oC para que polimerice y forme un bloque de resina que contenga la

muestra
Citrato de plomo

Acetato de uranilo
Interpretación de Cortes Histológicos
El microscopio óptico tiene un limite resolución de cerca de 200 nm (0.2 µm ).

Este limite se debe a la longitud de onda de la luz (0.4-0.7 µm )

Las células observadas bajo el microscopio óptico pueden estar vivas o fijadas y
teñidas

Sistema Mecánico

Sistema Óptico

Ópticas:
◦ Condensador (8): Concetra los rayos de luz sobre la
preparación.

◦ Objetivos (3): Aumentan el tamaño de la muestra y proyectan

la imagen al ocular. Se encuentran montados en el revólver.

◦ Ocular (1): Aumenta la imagen y la proyecta sobre la retina

del observador.
◦ Diafragma (6): Regula la cantidad de luz que llega al
condensador.
◦ Fuente de luz (7): Puede ser un foco o un espejo que refleje
la luz hacia el condensador.

 Mecánicas:
◦ Base: Pieza rígida encargada de otorgar estabilidad a todo el
conjunto.

◦ Brazo: Pieza que une al sistema óptico con la base.

◦ Platina (9): Plataforma horizontal con un agujero central que

permite el paso de la luz. Los portaobjetos con las
preparaciones se colocan sobre ella y se fijan con un par de
pinzas. Un sistema de tornillos permite desplazar la platina y
la muestra hacia adelante, atrás, izquierda y derecha.

◦ Revólver (2): Sistema sobre el que se encuentran los

objetivos, al girar permite seleccionar cualquiera de los
objetivos disponibles.

◦ Tornillos macrométrico y micrométrico (4 y 5): Tornillos que

permiten enfocar la muestra, desplazando la platina haria
arriba o abajo.

◦ Tubo: Cámara oscura unida al brazo.

Utiliza un haz de electrones para producir la imagen.

Permite conocer la ultraestructura de las células y de la matriz

extracelular
Filamento Calentado

Lente Magnética

Espécimen

Lente Objetivo

Lente Proyector

Imagen sobre Pantalla

Fluorescente
El haz de electrones no atraviesa la muestra, sino que choca contra su
superficie. Permite una gran magnificación de las imágenes.

Filamento Calentado

Lente

Rayo Deflector

Pantalla
Lente Visora

Detector
 MANEJO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO
1. Colocar
1. Colocar el
el objetivo
objetivo de
de menor
menor aumento
aumento en
en posición
posición de
de empleo
empleo yy bajar
bajar la
la platina
platina
completamente.
completamente. Si el microscopio se recogió correctamente en el uso anterior, ya
Si el microscopio se recogió correctamente en el uso anterior, ya
debería
debería estar
estar en
en esas
esas condiciones.
condiciones.

2. Colocar
2. Colocar la
la preparación
preparación sobre
sobre la
la platina
platina sujetándola
sujetándola con
con las
las pinzas
pinzas metálicas.
metálicas.

3. Comenzar
3. Comenzar la
la observación
observación con
con el
el objetivo
objetivo de
de 4x
4x (ya
(ya está
está en
en posición)
posición) o
o colocar
colocar el
el de
de
10 aumentos (10x) si la preparación es de bacterias.
10 aumentos (10x) si la preparación es de bacterias.

4. 
4.  Para
Para realizar
realizar el
el enfoque:
enfoque:
a. Acercar
a. Acercar alal máximo
máximo lala lente
lente del
del objetivo
objetivo a
a la
la preparación,
preparación, empleando
empleando elel tornillo
tornillo
macrométrico.
macrométrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular,
Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular,
ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose
dañar alguno de ellos o ambos.
b. Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo
de la preparación con el macrométrico y, cuando se observe algo nítida la
muestra,
muestra, girar
girar el
el micrométrico
micrométrico hasta
hasta obtener
obtener un
un enfoque
enfoque fino.
fino.

5. Pasar
5. Pasar al
al siguiente
siguiente objetivo.
objetivo. La
La imagen
imagen debería
debería estar
estar ya
ya casi
casi enfocada
enfocada y y suele
suele ser
ser
suficiente con mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar
de objetivo se perdió por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el
objetivo anterior y repetir la operación desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a
muy poca distancia de la preparación y por ello es fácil que ocurran dos tipos de
percances:
percances: incrustarlo
incrustarlo en
en la
la preparación
preparación si
si se
se descuidan
descuidan las
las precauciones
precauciones anteriores
anteriores yy
mancharlo
mancharlo con
con aceite
aceite de
de inmersión
inmersión si
si se
se observa
observa una
una preparación
preparación que
que ya
ya se
se enfocó
enfocó con
con
el
el objetivo
objetivo de
de inmersión.
inmersión.
Empleo
Empleo del
del objetivo
objetivo de
de inmersión:
inmersión:

a. Bajar
a. Bajar totalmente
totalmente la la platina.
platina.
b. Subir
b. Subir totalmente
totalmente el el condensador
condensador para para verver claramente
claramente el el círculo
círculo dede luz
luz que
que nos
nos
indica la zona que se va a visualizar y donde habrá que
indica la zona que se va a visualizar y donde habrá que echar el aceite. echar el aceite.
c. Girar
c. Girar el
el revólver
revólver hacia
hacia el el objetivo
objetivo de
de inmersión
inmersión dejándolo
dejándolo a a medio
medio camino
camino
entre éste y el de
entre éste y el de x40. x40.
d. Colocar
d. Colocar unauna gota
gota mínima
mínima de de aceite
aceite dede inmersión
inmersión sobre
sobre elel círculo
círculo dede luz.
luz.
e. Terminar
e. Terminar de de girar
girar suavemente
suavemente el el revólver
revólver hasta
hasta lala posición
posición deldel objetivo
objetivo de de
inmersión.
inmersión.
f.  Mirando
f.  Mirando directamente
directamente al al objetivo,
objetivo, subir
subir lala platina
platina lentamente
lentamente hastahasta que
que la la
lente toca la gota de aceite. En ese momento se nota como
lente toca la gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera si la gota ascendiera
y
y se
se adosara
adosara a a la
la lente.
lente.
g. Enfocar
g. Enfocar cuidadosamente
cuidadosamente con con el
el micrométrico.
micrométrico. La La distancia
distancia de de trabajo
trabajo entre
entre elel
objetivo de inmersión y la preparación es mínima, aun menor
objetivo de inmersión y la preparación es mínima, aun menor que con el de 40x que con el de 40x
por
por lo
lo que
que elel riesgo
riesgo de de accidente
accidente eses muy
muy grande.
grande.
h. Una
h. Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre
vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la la preparación,
preparación, ya ya no
no sese
puede
puede volver
volver a a usar
usar elel objetivo
objetivo 40x
40x sobre
sobre esaesa zona,
zona, pues
pues se
se mancharía
mancharía de de aceite.
aceite.
Por
Por tanto,
tanto, si
si desea
desea enfocar
enfocar otro otro campo,
campo, hay hay que
que bajar
bajar lala platina
platina y y repetir
repetir la
la
operación desde el
operación desde el paso 3. paso 3.
i.  Una
i.  Una vez
vez finalizada
finalizada la la observación
observación de de lala preparación
preparación se se baja
baja lala platina
platina y y se
se
coloca
coloca el objetivo de menor aumento girando el revólver. En este momento ya
el objetivo de menor aumento girando el revólver. En este momento ya se
se
puede
puede retirar
retirar lala preparación
preparación de de la
la platina.
platina. Nunca
Nunca se se debe
debe retirar
retirar con
con el
el objetivo
objetivo
de
de inmersión
inmersión en en posición
posición de de observación.
observación.
j. Limpiar
j. Limpiar el objetivo de inmersión con
el objetivo de inmersión con cuidado
cuidado empleando
empleando un un papel
papel especial
especial
para
para óptica. Comprobar también que el objetivo 40x está perfectamente limpio
óptica. Comprobar también que el objetivo 40x está perfectamente limpio
 MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES

6-
6- No
No forzar
forzar nunca
nunca los
los tornillos
tornillos giratorios
giratorios del
del microscopio
microscopio (macrométrico,
(macrométrico,
micrométrico, platina, revólver y condensador).
micrométrico, platina, revólver y condensador).

7-
7-  El
 El cambio
cambio de
de objetivo
objetivo se
se hace
hace girando
girando el
el revólver
revólver y
y dirigiendo
dirigiendo siempre
siempre la
la mirada
mirada a
a
la
la preparación
preparación para
para prevenir
prevenir el
el roce
roce de
de la
la lente
lente con
con la
la muestra.
muestra. No
No cambiar
cambiar nunca
nunca de
de
objetivo
objetivo agarrándolo
agarrándolo por
por el
el tubo
tubo del
del mismo
mismo ni ni hacerlo
hacerlo mientras
mientras se
se está
está observando
observando aa
través del ocular.
través del ocular.

8-
8- Mantener
Mantener seca
seca yy limpia
limpia la
la platina
platina del
del microscopio.
microscopio. Si
Si se
se derrama
derrama sobre
sobre ella
ella algún
algún
líquido,
líquido, secarlo
secarlo con
con un
un paño.
paño. SiSi se
se mancha
mancha de
de aceite,
aceite, limpiarla
limpiarla con
con un
un paño
paño
humedecido
humedecido enen xilol.
xilol.

9-
9- Es
Es conveniente
conveniente limpiar
limpiar yy revisar
revisar siempre
siempre los
los microscopios
microscopios al
al finalizar
finalizar la
la sesión
sesión
práctica
práctica y, al acabar el curso, encargar a un técnico un
y, al acabar el curso, encargar a un técnico un ajuste
ajuste y
y revisión general de
revisión general de
los
los mismos.
mismos.
 MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES

1. 
1.  Al
Al finalizar
finalizar el
el trabajo,
trabajo, hay
hay que
que dejar
dejar puesto
puesto el
el objetivo
objetivo de
de menor
menor aumento
aumento en
en
posición
posición de observación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina
de observación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina no
no
sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda.
sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda.

2. Cuando
2. Cuando no
no se
se está 
está  utilizando
utilizando el
el microscopio,
microscopio, hay
hay que
que mantenerlo
mantenerlo cubierto
cubierto con
con su
su
funda
funda para
para evitar
evitar que
que se
se ensucien
ensucien yy dañen
dañen las
las lentes.
lentes. Si
Si no
no se
se va
va a
a usar
usar de
de forma
forma
prolongada,
prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del
se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del
polvo.
polvo.

3.
3. Nunca
Nunca hay
hay que
que tocar
tocar las
las lentes
lentes con
con las
las manos.
manos. Si
Si se
se ensucian,
ensucian, limpiarlas
limpiarlas muy
muy
suavemente
suavemente con
con un
un papel
papel de
de filtro
filtro o,
o, mejor,
mejor, con
con un
un papel
papel de
de óptica.
óptica.

4.
4. No
No dejar
dejar el
el portaobjetos
portaobjetos puesto
puesto sobre
sobre la
la platina
platina si
si no
no se
se está 
está  utilizando
utilizando el
el
microscopio.
microscopio.

5-
5- Después
Después dede utilizar
utilizar el
el objetivo
objetivo dede inmersión,
inmersión, hay
hay que
que limpiar
limpiar el
el aceite
aceite que
que queda
queda
en
en el
el objetivo
objetivo con
con pañuelos
pañuelos especiales
especiales para
para óptica
óptica oo con
con papel
papel de
de filtro
filtro (menos
(menos
recomendable).
recomendable). En cualquier caso se pasará el papel por la lente en un solo sentido y
En cualquier caso se pasará el papel por la lente en un solo sentido y
con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo,
con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que hay que
limpiarlo
limpiarlo con
con una
una mezcla
mezcla dede alcohol-acetona
alcohol-acetona (7:3)
(7:3) o
o xilol.
xilol. No
No hay
hay que
que abusar
abusar dede este
este
tipo
tipo de
de limpieza,
limpieza, porque
porque sisi se
se aplican
aplican estos
estos disolventes
disolventes enen exceso
exceso se
se pueden
pueden dañar
dañar
las
las lentes
lentes y
y su
su sujeción.
sujeción.