Guías de la OMS y métodos de ensayo para la

evaluación de la calidad microbiológica del agua.

Buenos Aires, Argentina
22-26 de septiembre, 2008

Dr.C. María Isabel González González

Investigador Titular/ Profesor Auxiliar
Laboratorio de Microbiología de Aguas
INHEM, Cuba
Email: isa@inhem.sld.cu, mariaisa@infomed.sld.cu

"Nada en el mundo de las cosas vivientes es

permanentemente constante."
constante."

Hans Zinnser,
Zinnser, 1953

1
•Las consecuencias de las infecciones causadas por los
microorganismos patógenos han afectado seriamente a
la humanidad por ej. la peste, el cólera, la influenza.

•En el 2001, una revisión científica identificó 1 415

especies de organismos infecciosos patógenos para el
hombre que incluían:

•217 viruses y priones

•538 bacterias y rickettsias
•307 hongos
•66 protozoos
•287 helmintos

• La emergencia de una enfermedad infecciosa es un complejo

proceso que involucra factores sociales, biológicos y ecológicos
(se han identificado 13 factores claves para esta emergencia:

1. Adaptación microbiana y mutación.

2. Vulnerabilidad humana.
3. Tiempo y clima.
4. Cambios en el ecosistema.
5. Desarrollo económico y uso de la tierra.
6. Comportamiento humano y demográfico.
7. Tecnología e industria.
8. Viajes internacionales y comercio.
9. Deterioro de las medidas de salud pública.
10.Pobreza y desigualdad social.
11.Guerras y hambrunas.
12. Pérdida de voluntad política.
13. Intento de daño.

2
• A pesar de la inherente complejidad de los sistemas biológico y
social involucrados en la emergencia, algunos estudios revelan
lo siguiente:

Virus , priones, bacterias y protozoos están más asociados a la

emergencia de enfermedades.

Patógenos zoonóticos comprenden el 75% de las enfermedades
emergentes.

Patógenos que están sujetos a una frecuencia relativa de
mutaciones o eventos asociados al genoma (por ej. RNA virus y
virus con segmentos de genoma).

Patógenos que infectan múltiples hospederos o que infectan
especies que pueden ser portadoras de agentes estrechamente
relacionados, proveen una oportunidad para la recombinación
(por ej. síndrome respiratorio agudo en gatos).

Agentes transmitidos por más de una ruta o contacto indirecto
(ej. agua, alimentos, contaminación ambiental, vectores).

Ejemplos de enfermedades emergentes y reemergentes.

1973: Rotavirus (diarrea infantil)
1975: Astrovirus (diarrea)
1976: Crytosporidium parvum (diarrea aguda y crónica)
1977: Legionella pneumophila (legionelosis)
1977: virus de Ebola (fiebre hemorrágica con un 80% d e letalidad)
1977: Campylobacter jejuni (diarrea)
1982: virus HTLV-2 (virus causante de la tricoleucemia)
1983: Helicobacter pylori (úlcera péptica, cáncer gástrico)
1983: Escherichia coli O157:H7
1983: Virus de la Inmunodeficiencia Humana (VIH): SIDA
1988 y 1989: Virus de la hepatitis E y hepatitis C
1991: Virus de Guanarito (fiebre hemorrágica venezolana)
1992: Vibrio cholerae O139
1994: virus Sabiá (fiebre hemorrágica de Brasil)
1995: virus del Herpes Humano tipo 8
1997: enterovirus 71 (encefalitis epidémica)
1999: virus de la Influenza A (influenza

3
 Factores en la emergencia de enfermedades infecciosas.

•Cambios ecológicos: agricultura, represas, cambios en ecosistemas

acuáticos, deforestación, reforestación, inundaciones, sequías, cambios
climáticos.

Ej. Schistosomiasis (represas), fiebre del Valle, hantavirosis pulmonar

•Comportamiento humano: eventos sociales, crecimiento y migración

de la población, guerras, hacinamiento, conflictos civiles, conducta
sexual.

Ej. Introducción y diseminación de VIH, brotes de dengue

•Viajes y comercio internacional: viajes aéreos, transportación de

personas y mercancías.

Ej. Malaria, diseminación de vectores, roedores transmisores de

hantavirus, cólera, diseminación de Vibrio cholerae O139.

Factores en la emergencia de enfermedades infecciosas (Cont…)

•Desarrollo tecnológico e industrial: globalización de suministros de

alimentos, transporte de tejidos y órganos, amplio uso de antibióticos,
drogas inmunosupresoras.

Ej. Síndrome urémico hemolítico causado por Escherichia coli O157:H7 ,

hepatitis asociada a transfusiones, enfermedades oportunistas en
pacientes inmunodeprimidos.

•Cambios y adaptaciones microbianas: evolución microbiana como

respuesta de selección en el ambiente.

Ej. Resistencia antimicrobiana, células viables pero no cultivables.

•Crisis en las medidas de salud pública: programas de prevención

reducidas o críticas, saneamiento y medidas inadecuadas en el control
de vectores.

Ej. Reemergencia de tuberculosis en E. U. , cólera en campamentos de

refugiados en África, reemergencia de difteria en Rusia.

4
 Base ambiental de la transmisión de agentes
infecciosos según Feachem et al. (1983)
Propiedades relacionadas
a la supervivencia ambiental

Concentración LATENCIA Dosis

de patógenos ⇒ PERSISTENCIA ⇒ Infectiva
excretados MULTIPLICACIÓN

⇒ IMPORTANTES PARA CONOCER EL MODO DE TRANSMISIÓN DE

UN MICROORGANISMO PATÓGENO Y ESTABLECER EL CONTROL
AMBIENTAL

LATENCIA:
El tiempo entre la excreción del patógeno y el
tiempo en que infecta a un nuevo hospedero.

DOSIS INFECTIVA:
Dosis mínima requerida de un organismo para
causar la enfermedad.

SUPERVIVENCIA:
Conservación de la viabilidad del organismo
bajo condiciones adversas.

5
 PERSISTENCIA:
Capacidad de un patógeno de sobrevivir en el
medio por un período de tiempo.

VIABILIDAD:
Propiedad que posee una parte de una
población bacteriana capaz de multiplicarse
cuando existan óptimas condiciones para su
crecimiento.

MULTIPLICACIÓN:
Posibilidad de crecimiento microbiano bajo
determinadas condiciones.

Las enfermedades emergentes trasmitidas por el

agua están estrechamente asociadas con su calidad
microbiológica.

Ejemplos de infecciones entéricas:

Cryptosporidium parvum y
Giardia lamblia Rotavirus
Foto: HDA Lindquist, USEPA Foto: FP Williams, USEPA

6
 Vías de transmisión de algunos microorganismos patógenos
en aguas.

Por ingestión de agua.

Ruta de
infección Gastrointestinal

Bacteria Viruses Protozoos y helmintos

Campylobacter jejuni Adenovirus Crystoporidium parvum
Escherichia coli Enterovirus Entamoeba hystolitica
Salmonella sp. Astrovirus Giardia intestinalis
Shigella sp. Rotavirus Cyclospora cayetanensis
Vibrio cholerae Norovirus Toxoplasma gondii
Yersinia enterocolitica Sapovirus Isospora belli
Aeromonas sp. Virus de Hepatitis A Dracunculus medinensis
Helicobacter pylori Virus de Hepatitis E Fasciola sp.

Vías de transmisión de algunos microorganismos patógenos

en aguas.

Por inhalación y aspiración de bioaerosoles

Ruta de
infección Respiratoria

Bacteria Viruses Algunos otros agentes en

Legionella pneumophila Enterovirus situaciones de alta exposición
Mycobacterium sp. Diversas infecciones
(no tuberculoso) virales

7
 Vías de transmisión de algunos microorganismos patógenos
en aguas.

Por contacto
Ruta de Piel, membranas de las mucosas, heridas, ojos
infección

Bacteria Viruses Protozoos y helmintos

Burkholderia pseudomallei Acanthamoeba sp.
Mycobacterium sp. (no Adenovirus Schistosoma mansonii
tuberculoso) Enterovirus Naegleria fowleri
Aeromonas sp.
Pseudomonas aeruginosa
Leptospira sp.

Cianobacterias tóxicas de importancia actual en aguas de consumo.

consumo.
Especies tóxicas Órgano primario Tipo de cianotoxinas

Microcystis , Anabaena , Planktothrik Microcystinas

Hígado
Nostoc, Hapalosiphon, Anabaenopsis
Nodularia Hígado Nodularina

Anabaena, Planktothrik, Aphanizomenon Sistema nervioso Anatoxina-

Anatoxina-a
Anabaena Sistema nervioso Anatoxina--a (S)
Anatoxina
Lyngbya, Schizothrix, Planktothrik Piel Aplysiatoxina
Cylindrospermopsis, Aphanizomenon, Hígado Cylindrospermopsina
Umezakia, Raphidiosis curvata
Lyngbya Piel, tracto intestinal Lyngbyatoxina-
Lyngbyatoxina-a
Anabaena, Aphanizomenon, Lyngbya, Sistema nervioso Saxotoxinas
Cylindrospermopsis

Fuente: Cyanosite

8
 Calidad del agua:

La calidad del agua se define con relación su uso o

actividad en que se emplee (por ej. aguas de consumo,
aguas recreativas, aguas residuales y grises para la
agricultura o acuicultura, aguas envasadas, aguas
mineromedicinales para hidrología médica, aguas para
hemodiálisis).

Para evaluar los cambios que las diferentes aplicaciones del agua
pueden originar en su calidad, se emplean parámetros físicos,
químicos y biológicos, también llamados indicadores de calidad de
agua.

Criterio de calidad de agua:

Es la relación cuantificable de exposición-efecto basada en

evidencias científicas entre el nivel de algún indicador de calidad de
agua y los riesgos potenciales para la salud asociados con su uso.

Guía de calidad del agua:

Es una densidad máxima sugerida del indicador en el agua que está

asociada con riesgos inaceptables para la salud.

Norma:

Obtenida de los criterios y las guías nacionales e internacionales y

es de obligatorio cumplimiento.

9
 Valores Guías en agua potable para verificar la calidad microbiológica

Organismos guíaa
Valor guí
•Toda
Toda agua de consumo
Escherichia coli o bacterias No debe detectarse en
coliformes termotolerantes ninguna muestra de 100ml
•Agua
Agua tratada que entra al sistema de distribución
Escherichia coli o bacterias No debe detectarse en
coliformes termotolerantes ninguna muestra de 100ml
•Agua
Agua tratada en el sistema de distribución
Escherichia coli o bacterias No debe ser detectado en
coliformes termotolerantes ninguna muestra de 100ml

Valor guía recomendado para la evaluación de la

calidad del agua en situaciones de emergencias y desastres.

Escherichia coli por 100 mL de agua = 0

Muy difícil en estas situaciones por lo que se aplica esta

clasificación según el grado de afectación a la salud. Por ejemplo:

0 Escherichia coli/100ml, valor aceptable

1-10 Escherichia coli/100ml, valor tolerable
10-100 Escherichia coli/100ml, requiere tratamiento
>100 Escherichia coli/100ml, inadecuado para el consumo sin
tratamiento apropiado.

10
 Límites permisibles para aguas de
hemodiálisis

¿Que son los indicadores microbiológicos?

Microorganismos cuyas densidades o concentraciones en el

agua pueden ser cuantitativamente relacionadas con el riesgo
a la salud que implica ésta.

Un indicador microbiológico de la calidad del agua es

generalmente (no necesariamente bacteria) el que ha entrado
al agua al mismo tiempo que las heces, pero es más fácil de
medir que el amplio rango de microorganismos de riesgo para
la salud.

11
 Término Indicador

Debe ser empleado para la evaluación de la eficacia de

los procesos del tratamiento.

Ej. indicador de un proceso, indicador de la

desinfección, turbiedad como un indicador de la
filtración.

Término Índice

Debe ser usado con la finalidad que en sus orígenes

jugaron los indicadores, como medida de la
contaminación fecal.

Ej. índice de la contaminación fecal, conductividad en

aguas subterráneas como un índice de deterioro.

Características que debe tener un indicador:

• Estar ausente en aguas no contaminadas y presentes cuando la fue

fuente
nte de
microorganismos patógenos está presente.
•No
No deben multiplicarse en el ambiente.
•Estar
Estar presentes en mayor número que los microorganismos patógeno
patógenos.
s.
•Responder
Responder a las condiciones del ambiente natural y a los procesos
procesos de tratamiento
de manera similar que los microorganismos patógenos.
•Fáciles
Fáciles de aislar, identificar y enumerar por métodos convencionales.
convencionales.
•Incrementar
Incrementar su número al aumentar el grado de contaminación en el
el medio.
•Aplicables
Aplicables a cualquier tipo de agua.
•Mayor
Mayor y más predecible el tiempo de supervivencia que los patógenos.
patógenos.

12
 Características que debe tener un indicador:

Actualmente se adicionan los siguientes:

•Las
Las pruebas para su determinación deben ser baratas para el procesamiento
procesamiento de
numerosas muestras.
•No
No deben ser microorganismos patógenos (reducir el riesgo a la salud
salud de los
analistas).
Los resultados negativos del indicador empleado en una muestra de
de agua no
garantizan que la ausencia de microorganismos patógenos.
La detección de un microorganismo patógeno no está normalmente asociado
asociado a un
indicador ni tampoco indica la ausencia o presencia de otros patógenos.
patógenos.

Ejemplos de varios métodos relacionados con el análisis de

microorganismos.

Grupos de microorganismos

Métodos
Viruses Bacteria Protozoos
parásitos
Concentración Adsorción-elución Filtración por Filtración por
membrana por cartuchos/
Separación
inmunomagnética

Detección/ Cultivo de Crecimiento Tinción

células/efecto selectivo en agar, inmunológica/conteo
Enumeración citopático, conteo conteo de de quistes
de unidades unidades fluorescentes
formadoras de formadoras de
placa colonias

13
Métodos para la identificación y cuantificación de
indicadores y patógenos bacterianos en aguas.
MÉTODOS CONVENCIONALES

* CUALITATIVO Ausencia/ Presencia { Hisopo de Moore

{ Cultivo directo a) Volumen/volumen
b) Diluciones
c) Concentración
* CUANTITATIVO Tubos Múltiples: NMP { a) Diluciones decimales
b) Concentración por
Filtro de membrana
Tierra de diatomeas
Filtro de membrana: UFC { Concentración

FILTRACIÓN POR MEMBRANA (FM)

Diluciones
Peptona
10-1 10-2
salina

20 ml
100 10 ml 1 ml 1 ml 1 ml
ml

100 10 ml 1 ml 0,1 ml 0,01

ml ml

14
 Comparación de dos métodos de ensayo más utilizados en la
vigilancia de la calidad microbiológica del agua.

Técnica de tubos múltiples Técnica de Filtración por membrana

Más lenta, requiere 48 horas para observar la
positividad
Más laborioso
Requiere más medio de cultivo.
Requiere más cristalería
Más sensible
Los resultados son obtenidos indirectamente por
aproximación estadística (baja precisión)
No se puede adaptar a trabajo de campo
Más rápida, resultados cuantitativos o presuntivos
alrededor de 8 horas.
Menos laborioso
Requiere menos medio de cultivo
Requiere menos cristalería
Menos sensible
Los resultados son obtenidos directamente por
conteo de colonias (alta precisión)
Capaz de ser adaptado en el campo

Aplicable a todo tipo de agua No es aplicable a aguas turbias

Los recursos están disponibles en la mayoría de los El costo de los recursos es alto en algunos países
países
Podría ser mejor el recobrado de microorganismos
dañados o estresados en algunas circunstancias

Conteo total
de bacterias heterótrofas.

Bacterias que requieren el carbono orgánico para su
crecimiento. Incluyen la flora autóctona y la alóctona
presente.

Se utiliza fundamentalmente la efectividad del proceso de

tratamiento de agua.

Es una medida del número de organismos con posible

importancia sanitaria por ej. en aguas de hemodiálisis

Podría ser una medida de la interferencia posible a la

técnica de coliformes fecales con medios de cultivo con
lactosa.

15
 Biofilm o biopelicula

Colonias de bacterias asentadas sobre las superficies de los

circuitos hidráulicos, protegidas por un ecosistema de
precipitados minerales y una matriz polisacárida mucosa
extracelular, que se reproducen y generan en lugares de
estancamiento. Su presencia se asocia a fuerte
contaminación bacteriana >1000 UFC/ml. Es fuente activa
de endotoxinas y otros derivados bacterianos
biológicamente activos. Es resistente a la mayoría de los
desinfectantes.

Biofilm o biopelicula

16
 Biofilm o biopelicula

Son comunidades bacterianas englobadas en una matriz de

exopolisacáridos producida por las bacterias y adheridas a
una superficie viva o inerte.

En la naturaleza constituyen un modo de crecimiento

protegido que permite la supervivencia de las bacterias en
un medio hostil.

Las estructuras que forman estas microcolonias contienen

canales por los que circulan los nutrientes, y en las distintas
partes del biofilm las células expresan diferentes genes,
como si fueran un tejido organizado.

17
 Conteo de bacterias heterótrofas
Verificar efectividad de los procedimientos de
limpieza y desinfección.

 Determinar el origen de la contaminación

durante el proceso de diálisis.

Verificar condiciones óptimas de almacenamiento

y transporte del agua utilizada para alimentar el
sistema de diálisis.

Grupo Coliforme

El término coliforme fue usado por primera vez en los

años 1980 y descrito como bacilos curvos aislado de heces
humanas.

Pertenecen taxonómicamente a la familia

Enterobacteriaceae y comprende algunos géneros y
especies.

De los coliformes normalmente presentes en el intestino

de los animales de sangre caliente, las bacterias de la
especie E.coli son la mas numerosas y las que raramente
crecen en el ambiente.

18
 Distribución del grupo coliforme en
heces de humanos y animales.
Tipo de muestra Porcentaje de coliformes totales

E.coli Klebsiella sp. Enterobacter/

Citrobacter
Heces humanas 94.1 (A) 1.5 (A) 1.7 (A)

96.8 (B)

Heces animales 94.0 (A) 2.0 (A) 4.0 (A)

92.6 (B) 7.4 (B)

(A) Dufour (1977)

(B) Allen y Edberg (1995)

Representación gráfica del grupo coliforme

Coliformes totales

Coliformes fecales
(actualmente termotolerantes)

Escherichia coli
(≈95% de los coliformes en las heces)

19
 Coliformes totales (CT)

No son un grupo taxonómico

Bacterias Gram Negativas
No esporulados
Anaerobios facultativos
Fermentadores de la lactosa con producción de ácido y
gas a 36±1º C en 24-48h
Hábitat: Tracto gastrointestinal de animales de sangre
caliente (son bacterias entéricas,) además son comunes en
otros ambientes como en suelos, vegetales, etc.
Ej.: Escherichia coli, Enterobacter spp., Citrobacter spp.,
Klebsiella spp.

Coliformes termotolerantes o fecales (CF)

No son un grupo taxonómico (Subgrupo de lo CT)

Bacterias Gram Negativas
No esporulados
Anaerobios facultativos
Fermentadores de la lactosa con producción de ácido y gas
a 36±1º C en 24-48h y a 44.5 ±0.2 º C en 24 h
Hábitat: bacterias entéricas propias de las heces (E. coli,...)

20
 Escherichia coli

Especie bien definida taxonómicamente

Bacterias Gram Negativas
No esporulados
Anaerobios facultativos
Fermentadores de la lactosa con producción de ácido y gas
a 36±1º C en 24-48h y a 44.5 ±0.2 º C en 24 h
Característica de heces de animales homeotermos

Coliformes y enterococos-Tubos múltiples de fermentación

Indicador Bacteriano Medio de Cultivo Reacción Positiva

Coliformes totales Caldo Lactosado o Producción de gas

(Incubar 35°C ± 0.5°C) Caldo Lauril Sulfato y ácido
(Presuntiva)

Caldo Bilis verde Producción de gas

Brillante y ácido
(Confirmativa)
Coliformes Caldo EC Producción de gas
termotolerantes (Confirmativa) y ácido
(Incubar 44.5°C ± 0.2°C)

Enterococos Caldo Dextrosa Crecimiento

(Incubar 35°C ± 0.5°C) azida (Presuntiva) (Turbidez)
Medio de Pfizer
(Confirmativa) Crecimiento
(Turbidez)

21
 Coliformes y enterococos-Filtración por membrana

Indicador Bacteriano Medio de Cultivo Volumen inoculado

(mL)

Coliformes totales Agar Endo LES o 100,10,1

(Incubar 35°C ± 0.5°C) Medio m-Endo

Coliformes m-FC 100,10,1

termotolerantes
(Incubar 44.5°C ±
0.2°C)
Enterococos m-Enterococos 100,10,1
(Incubar 35°C ± 0.5°C) (Slanetz –Bartley)
24- 48 h

 m-Enterococos

 m-FC

 m-Endo LES

22
 Ejemplos de género y especies del Grupo Coliforme
dentro de la familia Enterobacteriaceae

Género Especie
Escherichia Escherichia coli

Kebsiella Klebsiella pneumoniae

Klebsiella oxytoca
Enterobacter Enterobacter cloacae
Enterobacter aerogenes
Citrobacter Citrobacter diversus
Citrobacter freundii

Estreptococos fecales y Enterococos

No forman un grupo taxonómico bien definido
Incluyen especies de los géneros Enterococcus y Streptococcus
Ej.: E. faecalis, E. faecium, E. durans, E. hiriae, E. avium,
E.gallinarum, E. cecorum y Streptococcus bovis, S. equinus,
S.intestinalis, S. alactolyticus, S. hyointestinalis y S.acidominimus
Los Enterococos según el criterio de Sherman´s
 Crecimiento a 35-45º C en 48h en medios estandarizados
 Capacidad de crecer a 10 y 45 ºC, a pH 9,6, en presencia de 6,5%
NaCl y de resistir a 60º C durante 30 min
 Crecimiento a pH 9.6

23
 Métodos para detección de microorganismos patógenos.

Están aún en etapa de desarrollo.

La baja concentración de patógenos en el agua dificultan la
sensibilidad de los métodos de detección.

Sólo una pequeña parte del gran número de patógenos presentes
son detectados.

El análisis de las muestras de aguas para patógenos requiere de
un laboratorio especializado con personal altamente calificado y
entrenado y apropiadas medidas de bioseguridad.

Aunque algunos patógenos pueden ser examinados rápidamente,
la mayoría de los métodos de muestreo y detección necesitan varios
días para verificar el resultado.

Métodos para el análisis de microorganismos patógenos.

1. Métodos de filtración.
Adsorción/ elución de virus
Ultrafiltración
2. Métodos inmunológicos
Separación inmunomagnética (IMS)
3. Floculación.
Adsorción de virus con hidróxido de aluminio.
Floculación de quistes de Cryptosporidium con carbonato de calcio.
4. Centrifugación
Flujo continuo de centrifugado
Separación/aislamiento por densidad de gradiente
5. Citometría de flujo.
6. Técnicas de preenriquecimiento y enriquecimiento.
7. Otra técnicas (hidroextracción, extracción por solventes).

24
 Técnicas de cultivo de patógenos (más convencionales).

1. Cultivo de bacterias.

Técnica del Número Más Probable (NMP) en medio líquido.

Prueba de Presencia/Ausencia en medio líquido.

Placa vertida.

Filtración por membrana.

Enriquecimiento en medio líquido +confirmación o aislamiento
en medio sólido.

2. Cultivo en células hospederas.

Cultivo de fagos.

Cultivo de virus (ej. Enterovirus)

Cultivo de protozoos sobre medios artificiales (ej. Entamoeba
hystolitica y Giardia lamblia).

Patógenos bacterianos más frecuentes determinados en aguas.

Género Salmonella

•Microorganismos pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae

que tienen las siguientes características:

•Bacilos Gram Negativos, catalasa y oxidasa negativo.

•Anaerobios facultativos, usualmente fermentan la glucosa con

producción de gas y de sulfuro de hidrógeno.

•Citrato es utilizado como única fuente de carbono.

•Decarboxilan la lisina y la ornitina.

•La mayoría de los diferentes serotipos (más de 2 000) están

presentes en animales domésticos y salvajes y pueden ser
reservorios de la salmonelosis humana

25
 Flujograma de la técnica de Salmonella sp.

Muestra de agua

Siembra directa Hisopo de Moore Filtración por membrana

Agua peptonada bufferada (APB)

18-24h/35-37 °C

Caldo Rappaport Vassiliadis (RV) radio inóculo: 1/100

Caldo Tetrationato Muller Kauffmann radio inóculo: 10/100

24h/42 °C

Agar Verde Brillante

Agar Salmonella Shigella
Agar XLD

18-24h/37 °C

Agar Kligler

18-24h/37 °C
Cultivos con imagen presuntiva
Pruebas bioquímicas y serológicas

Patógenos bacterianos más frecuentes determinados en aguas.

Género Vibrio.

•Microorganismos pertenecientes a la familia Vibrionaceae que

tienen las siguientes características:
•Bacilos Gram negativos, no esporulados, rectos o curvos de
0.5-0.8 µm de ancho y 1.5-3.0 µm de largo.
•Aerobios y anaerobios facultativos.
•Móviles por flagelos monotricos o lofotricos.
•La mayoría de las especies son oxidasa y catalasa positiva y
fermentan la glucosa con producción de ácido (sin gas).
•Generalmente halofílicos y su hábitat natural en ambientes
marinos y estuarinos.

26
Modelo hipotético de transmisión de Vibrio cholerae en la naturaleza.
Características
Características físicas
físicas
y químicas
químicas del
del agua
agua

•temperatura
•temperatura
•luz solar
solar Características
Característicasbiológicas
biológicas
•tensión
•tensión de
de OO22 disuelto
disuelto
•pH •afloramiento
•afloramientode
dealgas
algas
•lluvia •afloramiento
•afloramientode
defitoplancton
fitoplancton
•salinidad
•salinidad yy otros
otros
•nutrientes
•nutrientes químicos
químicos

Afloramiento
Afloramientodedezooplancton
zooplancton
(¿entra
(¿entraen
enlos
losno
nocultivables
cultivables?)?)

V. cholerae viable
V.cholerae viablepero
perono
nocultivable
cultivableen
enlala
columna
columnade deagua
aguaadherido
adheridoaapartículas.
partículas.
(¿relación
(¿relaciónde desimbiosis
simbiosisoocomensal?)
comensal?)

Retorno
Retorno de
de V. cholerae al
V. cholerae al
agua
agua por
por vía
vía fecal.
fecal.

Transmisión
Transmisiónde choleraealalhombre
deV.V.cholerae hombrepor
por
ingestión
ingestiónde
deagua
aguaconconcopépodos
copépodos
colonizados
colonizadosuuotros
otrosvectores.
vectores.

La fisiología y ecología de Vibrio cholerae en aguas

está estrechamente ligada a tres factores principales:

(1)la relación de temperatura y salinidad,
(2) adherencia a superficies
(3) colonización de la macrobiota con quitina.

27
 Flujograma de la técnica de Vibrio cholerae.
Muestra de agua

Siembra directa Hisopo de Moore Filtración por membrana

Agua peptonada alcalina (APA)

6-8 h y 18-24h/35-37 °C

Agar TCBS
Agar MacConkey

18-24h/37 °C

Agar Kligler

18-24h/37 °C
Cultivos con imagen presuntiva
Pruebas bioqu² as y serológicas

Flujograma para el aislamiento de Vibrio cholerae en plantas acuáticas.

Plantas acuáticas

Pesar 10gr de la muestra (porción apropiada) y

Homogeneizar con 90ml de solución salina estéril

Enriquecimiento de 10ml en 5ml de APA (3X)

Incubar por 6-4 horas

Estriar sobre agar TCBS y agar TTGA

Incubar por 18-24 horas a 37ºC

Picar colonias sospechosas y subcultivar sobre placas de AG

Identificación preliminar por la prueba de oxidasa

Pruebas bioquímicas y serológicas para Vibrio cholerae

28
Patógenos bacterianos más frecuentes determinados en aguas.

Género Aeromonas (Familia Aeromonadaceae)

•Bacterias en forma de bacilos Gram negativos, no esporulados, de

0.4-1.0 µm de ancho y 1.0-4.4 µm de largo.
•Aerobios - anaerobios facultativos.
•Móviles por flagelos monotricos o lofotricos.
•La mayoría de las especies son oxidasa y catalasa positiva y
fermentan la glucosa con producción de ácido.
•Tienen requerimientos nutricionales simples.
•Su hábitat natural es en ambiente dulceacuícola.

Infecciones asociadas al género Aeromonas

•Causa infecciones en animales de sangre fría y caliente.

•En humanos son agentes causales de infecciones intestinales

(diarrea, la más frecuente manifestación clínica) y
extraintestinales (infecciones en heridas).

•En peces y algunos animales de sangre fría, pueden causar

infecciones severas tales como la furunculosis.

29
 Taxonomía.
•Género: Aeromonas (Stanier 1943)
•Familia: Aeromonadaceae (Colwell et al. 1986)
•Orden: Aeromonadales (Martin-Carnahan y Joseph, 2005)
•Especies:
•Aeromonas allosaccharophila (Martinez-Murcia et al. 1992, sp. nov.)
•Aeromonas caviae (ex Eddy 1962, Popoff 1984, sp. nov.) A. punctata subsp.
caviae (Scherago, 1936)
•Aeromonas culicicola (Pidiyar et al. 2002, sp. nov.) Aeromonas veronii
biovar sobria (Hickman-Brenner et al. 1988).
•Aeromonas encheleia (Esteve et al. 1995).
•Aeromonas enteropelogenes (Schubert et al. 1991 sp. nov.) Aeromonas trota
(Carnahan et al. 1992).
•Aeromonas eucrenophila (Schubert y Hegazi 1988, sp. nov.)
•Aeromonas hydrophila (Chester 1901, Stanier 1943)
•Aeromonas hydrophila subsp. anaerogenes (Schubert 1964)
•Aeromonas hydrophila subsp. dhakensis (Huys et al. 2002)A
•Aeromonas hydrophila subsp. hydrophila (Chester, 1901)
•Aeromonas hydrophila subsp. proteolytica (Merkel et al. 1964)
•Aeromonas hydrophila subsp. ranae (Huys et al. 2003 subsp. nov.)
•Aeromonas ichthiosmia (Schubert et al. 1991, subsp. nov.)
•Aeromonas jandaei (Carnahan et al. 1992, sp. nov.)
•Aeromonas media (Allen et al. 1983, sp. nov.)
•Aeromonas molluscorum (Minana-Galbis et al. 200, sp. nov.)
•Aeromonas popoffii (Huys et al. 1997, sp. nov.)

Flujograma de la técnica de Aeromonas sp.

Muestra de agua
Hisopo de Moore Filtración por membrana

Agua peptonada alcalina

6-8h,18-24h/35-37°C
Agar BBGS según Nishikawa o agar ADA
Agar MacConkey
18-24h/37°C
Agar Kligler
18-24h/37°C
Cultivos con imagen presuntiva

Pruebas bioquímicas

30
Patógenos bacterianos más frecuentes determinados en aguas.

Género Plesiomonas

•Bacterias en forma de bacilos Gram negativos, no esporulados, de

0.8-1.0 µm de ancho y 2.0-3.04 µm de largo.
•Aerobios y anaerobios facultativos.
•Móviles por flagelo polar.
•La mayoría de las especies son oxidasa y catalasa positiva y
fermentan la glucosa con producción de ácido (sin gas)
•Tienen requerimientos nutricionales simples.
•Su hábitat natural es en ambiente dulceacuícola.

Taxonomía.

Plesiomonas shigelloides corrig. (Bader 1954) Habs y Schubert 1962

Anteriormente perteneciente a la familia Vibrionaceae, propuesta

actualmente dentro de la familia Enterobacteriaceae como un
miembro del género Proteus o como un género solo con una única
especie (Plesiomonas shigelloides).

Conocida también como:

Pseudomonas shigelloides
Aeromonas shigelloides
Fergusonia shigelloides

31
Algunas pruebas de diferenciación de los géneros Vibrio, Aeromonas y
Plesiomonas.
GRUPOS

PRUEBAS 1 2 3 4 5 6 7 8
Oxidasa + + - + + - + +
Nitrato + + - + - - + +
Arginina dihidrolasa - + + - - - + +
Lisina decarboxilasa + - d - - - d +
Ornitina decarboxilasa d - - - - - - +
µg
O/129 150µ disco S S S S S NT R& d
Crecimiento en:
d d d - - - + +
0% de NaCl
3% de NaCl + + + + + NT + +
6% de NaCl d d d d + NT - -

Simbolos: + todas las cepas son positivas,- todas las cepas son negativas, d diferentes características de cepa a cepa, S sensible, R resistente, NT no probada.
Grupo 1: V. cholerae, V. mimicus, V. parahaemolyticus, V. alginolyticus, V. harveyi, V. campbellii, V. fischeri y V. marinus.
Grupo 2: V. fluvialis, V. furnissii, V. anguillarum, V. diazotrophicus, V. splendidus biovar 1, V. tubiashii, V. costicola, V. nereis, V. damsela, V. proteolyticus, V.
orientalis y V. aestuarianus.
Grupo 3: V. metschnikovii.
Grupo 4: V. hollisae, V. natriegens, V. splendidus biovar II, V. nigripulchritudo y V. logei.
Grupo 5: V. ordalii.
Grupo 6: V. gazogenes.
Grupo 7: A. hydrophila, A. caviae, A. sobria y A. salmonicida.
Grupo 8: P. shigelloides.
& algunas cepas de A. salmonicida son sensibles.
Nota: Todas las cepas de Aeromonas fermentan la glucosa.
Fuente: Lee JV, DonovanTJ. Vibrio, Aeromonas and Plesiomonas. En: Isolation and Identification of Microorganisms of Medical
and Veterinary Importance. United Kingdom: Society for Applied Bacteriology, 1985:13-33.

Género Legionella

•Bacterias en forma de bacilos.

•Su hábitat natural es en ambiente dulceacuícola.
•Se multiplica entre 20-45°C y se destruye a 70 °C.
•Comprende 40 especies, siendo Legionella pneumophila la
mas común asociada a enfermedad.
•Posee una característica biológica importante que es la de
crecer intracelularmente en protozoos y en macrófagos
humanos.

32
Características de la enfermedad de los Legionarios y la fiebre de
Pontiac.

Enfermedad de los Legionarios Fiebre de Pontiac

Neumonía progresiva, algunas Similar a una influenza (no

veces fatal neumónica)

Período de incubación de 2-10 Período de incubación de

días aprox. 36 h

Factores de riesgo: fumadores, No se conocen factores de

cáncer, enfermedades renales, riesgo
diabetes mellitus

Mayor reservorio de Legionella sp.: AGUA

Medio de transmisión primario:

Inhalación de bioaerosoles (en forma de gotas que deben ser de una

medida entre 1-5µµm)

Fuentes conocidas para la transmisión de Legionella sp. por

bioaerosoles.

Medios de transmisión
Tipo de agua

Potable Duchas, grifos, equipos de terapia

respiratoria
No potable Condensadores de torres de evaporación
(incluidas las y enfriamiento, piscinas de recreación y
aguas de hidroterapia, saunas, spas
mineromedicinal Ornamentales de agua ornamentales,
es) humedificadores

33
 Ejemplos de pruebas bioquímicas y serológicas.

Caldo para la fermentación de azúcares Caldo de tolerancia a sales

(sacarosa, L-arabinosa y D-manosa; manitol e inositol)

Prueba de la cuerda Prueba serológica con antisuero

Método de concentración por hisopo de Moore

34
 Método de concentración por filtración por membrana

Medios de cultivo cromogénicos y fluorogénicos útiles para la

evaluación de la calidad microbiológica del agua en situaciones de
emergencias y desastres
Medio de cultivo (Compañía) Coliformes totales/ Estreptococos
Escherichia coli fecales/ enterococos
Caldo Colilert (IDEXX) X
Caldo Enterolert (IDEXX) X
Caldo READYCULT coliformes (Merck) X
Caldo READYCULT enterococos (Merck) X
Caldo LMX según Manafi y Ossmer X
(Merck)
Caldo Fluorocult Lauril Sulfato (Merck) X
Agar Chromocult coliformes (Merck) X
Agar Chromocult coliformes ES (Merck) X
Agar Chromocult enterococos (Merck) X

35
Métodos moleculares para la detección e identificación.

Biología molecular: disciplina bioquímica que estudia las moléculas

de ácidos nucleicos: ácido desoxirribonucleico (ADN) y ácido
ribonucleico (ARN)

Hibridación del ADN.

Endonucleasas de restricción.

Amplificación de ácidos nucleicos (ADN o ARN).
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR), la más empleada en la detección de
bacterias y sus productos (ej. Escherichia coli, Vibrio cholerae, Legionella
pneumophila) y protozoos.

Clonación molecular(fragmento de restricción insertado en un vector ej fago)

Secuenciación nucleotídica del ADN.

Fluorescencia por hibridización in situ (FISH) para detección de bacterias y
protozoos.

Fuente:www.udc.es Fuente:www.tododrogas.net Fuente:www.ciencia-hoy.retina.ar

Células viables y no cultivables de Vibrio cholerae

por microscopía de epifluorescencia.

36
Métodos novedosos para la detección e identificación.

Análisis por láser escáner con sustratos fluorogénicos.

(ej. Detección de coliformes y E. coli por ChemScan®, Chemunex®, Colifast®)

Biosensores.
(ej. poseen tres componentes primarios: ópticos, técnicas de inmunoensayo y
pruebas químicas para la detección de patógenos específicos).

Microchip de DNA.
(ej. para la detección de indicadores y patógenos con la detección de DNA por
GeneChip®).

Colifast ChemScan Biosensores Genechip

Fuente:www.acg.no Fuente: sid.gsi.co.jp Fuente:www.consumaseguridad.com Fuente:privatewww.essex.ac.uk

Algunos equipo portátiles para el monitoreo de la calidad del agua

muy útiles en situaciones de emergencia y desastres
Compañía País Determinaciones
BDH Lab Supplies Inglaterra Físico - Químicas (Aluminio, Amonio, Calcio, Hierro,
Manganeso, Nitrito, Nitrato, pH, etc.)

ELE Internacional Inglaterra Físico - Químicas (Aluminio, Amonio, Calcio, Hierro,

LTD Fosfato, Manganeso, Nitrito, Nitrato, pH, conductividad,
turbiedad, oxígeno disuelto, etc.)
Microbiológicas (coliformes totales y fecales)
Potopak Limited Inglaterra Físico - Químicas (Aluminio, Amonio, Calcio, Hierro,
Fosfato, Manganeso, Nitrito, Nitrato, pH, conductividad,
turbiedad, oxígeno disuelto, etc.)
Microbiológicas (coliformes totales y fecales)
Hach Company Inglaterra Físico - Químicas (Aluminio, Amonio, Calcio, Hierro,
Fosfato, Manganeso, Nitrito, Nitrato, pH, conductividad,
turbiedad, oxígeno disuelto, etc.)
Millipore Intertech Francia, Microbiológicas (coliformes totales y fecales)
Estados Unidos
DELAgua Inglaterra Microbiológicas (coliformes totales y fecales)

37
 Qué es una norma?
Es un documento establecido por consenso y aprobado
por un organismo reconocido que establece, para usos
comunes y repetidos, reglas, criterios o características
para las actividades o sus resultados, que procura la
obtención de un nivel óptimo de ordenamiento en un
contexto determinado.

Surge como resultado de la actividad de normalización

y es un documento que establece las condiciones
mínimas que debe reunir un producto o servicio para que
sirva al uso al que está destinado.

Fuente:www.crid.or.cr

Características de la norma:

Es un documento público, pueden ser referenciadas, consultadas y

utilizadas.
Su aplicación es voluntaria pero en la mayoría de los casos, las
autoridades pueden dictar leyes o reglamentos obligatorios que
exigen dichas normas.
Ayudan a mejorar la calidad, la seguridad y la competencia.
Una norma técnica o estándar es un especificación que reglamenta
los procesos y productos para garantizar la interoperabilidad.
Una norma de calidad es una regla o directriz para las actividades,
diseñada con el fin de conseguir el grado óptimo de orden en el
contexto de calidad.
Las normas están en constante revisión y este proceso se comienza
cada vez que existan observaciones sólidas a incorporar.

38
 Organismos internacionales que más frecuentemente
se emplean sus guías y normativas para la calidad del
agua y los métodos de ensayo

Siglas empleadas:

ISO: International Standardization Organization (Suiza)

APHA: American Public Health Association (Estados Unidos)
SCA: Standing Committee of Analyst of Environment Agency (Reino Unido)
EPA: Environment Protection Agency (USA)
WHO: World Health Organization (Suiza)
CEE: Comisión Económica Europea

Normas de métodos de ensayo asociados a la

evaluación de la calidad microbiológica del agua.
Microorganismos Norma

Bacterias coliformes, ISO 9308-1 (2000) Water quality-Detection and enumeration of

termotolerantes y Escherichia coli and coliform bacteria-Part 1: Membrane
Escherichia coli filtration method.
Bacterias coliformes, ISO 9308-2 (1990) Water quality-Detection and enumeration of
termotolerantes y coliforms organisms, thermotolerant coliforms organisms and
Escherichia coli presumptive Escherichia coli-Part 2: Multiple tube (most
probable number) method.
Enterococos fecales ISO 7899-2 (2000) Water quality-Detection and enumeration of
intestinal enterococci -Part 2: Membrane filtration method.
Enterococos fecales ISO 7899-1(1998) Water quality-Detection and enumeration of
intestinal enterococci in surface and waste water-Part 1:
Miniaturized method (Most Probable Number) by inoculation in
liquid medium.
Estreptococos fecales ISO 7899-1 (1984) Water quality-Detection and enumeration of
faecal streptococci-Part 1: Method by enrichment in liquid
medium.
Estreptococos fecales ISO 7899-2 (1984) Water quality-Detection and enumeration of
faecal streptococci-Part 2: Method by membrane filtration.

39
Normas de métodos de ensayo asociados a la evaluación
de la calidad microbiológica del agua (cont..)

Microorganismos Norma

Bacterias ISO 6461-2 (1986) Water quality-Detection and enumeration of

esporuladas the spores of sulfite-reducing anaerobes (clostridia)-Part 2:
reductoras de sulfito Method by membrane filtration method.
(Clostridios)
Bacterias ISO 6461-1 (1986) Water quality-Detection and enumeration of
esporuladas the spores of sulfite-reducing anaerobes (clostridia)-Part 1:
reductoras de sulfito Method by enrichment in liquid medium.
(Clostridios)
Pseudomonas ISO 8360-2 (1998) Water quality-Detection and enumeration of
aeruginosa Pseudomonas aeruginosa-Part 2: Membrane filtration method.
Pseudomonas ISO 8360-1 (1998) Water quality-Detection and enumeration of
aeruginosa Pseudomonas aeruginosa-Part 1: Method by enrichment in
liquid medium.

Normas de métodos de ensayo asociados a la evaluación

de la calidad microbiológica del agua (cont..)

Microorganismos Norma

Legionella sp. ISO 11731 (1998) Water quality-Detection and enumeration of

Legionella Legionella.
Legionella sp. ISO/DIS 11731-2 Water quality-Detection and enumeration of
Legionella-Part 2: Direct membrane filtration for waters with
low bacterial counts.

Salmonella sp. ISO 6340 (1995) Water quality-Detection and enumeration of

Salmonella.
Microorganismos ISO 6222 (1999) Water quality-Enumeration of culturable
cultivables microorganisms-Colony count by inoculation in a nutrient
agar culture medium.

40
Normas de métodos de ensayo asociados a la evaluación
de la calidad microbiológica del agua (cont..)

Microorganismos Norma

Fagos F-RNA ISO 10705-1 (1995) Water quality-Detection and enumeration

of bacteriophages- Part 1: Enumeration of F-specific RNA
bacteriophages.
Colifagos somáticos ISO 10705-2 (2000) Water quality-Detection and enumeration
of bacteriophages-Part 2: Enumeration of somatic coliphages.

Fagos de ISO 10705-4 Water quality-Detection and enumeration of

Bacteroides fragilis bacteriophages- Part 4: Enumeration of bacteriophages
infecting Bacteroides fragilis.
Concentración de ISO/DIS 10705-3 Water quality-Detection and enumeration of
bacteriófagos bacteriophages- Part 3: Validation of methods for
concentration of bacteriophages from water.

Normas de métodos de ensayo asociados a la evaluación

de la calidad microbiológica del agua (cont..)

Microorganismos Norma

Enterovirus CEN/TC 230 CEN/TC230/WG3/TGç. Enterovirus (Nr.12), Working

Document, Draft Method, March 2000.
Evaluación de filtros ISO 7704 (1985) Water quality-Evaluation of membrane filters
de membrana used microbiological analyses.
Evaluación de ISO 9998 (1991) Water quality-Practice for evaluating and
conteo de colonias controlling microbiological colony count media used in water
in water quality tests.
Validación de ISO TR 13843 (2000) Water quality-Guidance on validation of
métodos de cultivo microbiological methods.
microbiológicos
Pruebas de ISO/CD 17994 Water quality-Criteria for the establishment of
equivalencia de equivalence between microbiological methods.
métodos de cultivo
microbiológicos

41
Medios de cultivo normalizados más utilizados para la determinación de
coliformes, coliformes termotolerantes y Escherichia coli (NMP).

Medios de cultivo ISO 9308- APHA SCA EPA NC

2
Caldo lactosado X X
Caldo MacConkey X
Caldo lactosado lauril X
triptosa
Medio de lactosa glutamato X
Medio EC X X X
Caldo lactosa bilis verde X X X X
brillante
Medio A1 X X
Medio de glutamato X
modificado con minerales
Caldo manitol lauril triptosa X
Agar MacConkey X
Agar nutriente X

Medios de cultivo normalizados más utilizados para la determinación de

coliformes, coliformes termotolerantes y Escherichia coli (FM).

Medios de cultivo ISO 9308-1 APHA SCA EPA

Agar TTC con Tergitol 7 o X
Teepol
Agar lactosa con Tergitol 7 o X
Teepol
Caldo Teepol con X
enriquecimiento de
membrana
Medio mFC con 1% de ácido X X
rosólico
Agar m-EndoLES X X
Agar lauril sulfato X
Agar mTEC X
Agar mEndo X
Agar MI X
Agar nutriente con MUG X
Agua de triptona X X X
Caldo de lauril sulfato para X
membrana
Agar nutriente X

42
Medios de cultivo normalizados más utilizados para la determinación de
estreptococos fecales (enterococos)(FM).

Medios de cultivo ISO 7899-2 APHA SCA EPA

Agar KF con 1% de TTC X
Agar Slanetz-Bartley con 1% X X
de TTC
Agar m-E X X
Agar m-Enterococcus X X
Agar Kanamicina esculina X
azida
Agar mEI X
Agar hierro esculina X X
Agar bilis esculina azida X
Agar de infusión de cerebro- X X
corazón
Caldo de infusión de cerebro- X X
corazón
Agar bilis esculina X X X

43
 Medios de cultivo normalizados más utilizados para la determinación de
Pseudomonas aeruginosa (NMP).
Medios de cultivo ISO APHA SCA EPA NC
8360-1
Caldo asparagina con X
etanol
Caldo asparagina X X X X
Caldo acetamida X X X
Caldo malaquita X
Agar King-P X X
Agar King-F X X
Agar leche con cetrimida X

Medios de cultivo normalizados más utilizados para

la determinación de Pseudomonas aeruginosa (FM).
Medios de cultivo ISO APHA SCA EPA
8360-2
Agar m-PA X X X
Agar leche X X X X
Agar Pseudomonas X
Agar leche con cetyltrimetilamonio X
bromuro

Medios de cultivo más recomendados para la determinación de

indicadores bacterianos con sustratos cromogénicos y fluorogénicos.

Medios de cultivo Coliformes/ Estreptococos/

Escherichia coli enterococos
Caldo Colilert (P/A) (EPA) X
Caldo READYCULT coliformes (Merck) X
Caldo READYCULT enterococos X
(Merck)
Caldo LMX según Manafi y Ossmer X
(Merck)
Agar nutriente con MUG (EPA) X
Agar MI (EPA) X
Agar Chromocult (Merck) (Oxoid) X
(ISO)
Agar mTEC (Difco) (EPA) X

44
Medios de cultivo más utilizados en la determinación de algunos patógenos
bacterianos aislados en aguas. Salmonella sp y Salmonella typhi.

Medios de cultivo ISO-6340 APHA SCA EPA

Agua de peptona bufferada X X X X
Caldo Rappaport Vassiliadis X X
Caldo selenito cistina X X X
Caldo tretationato X X
Agar verde brillante con rojo X X X X
fenol
Agar xilosa lisina desoxicolato X X
(XLD)
Agar bismuto sulfito X X X X
Agar Kligler X
Agar tres azúcares (TSI) X X X
Agar hierro lisina X X X
Agar urea X
Caldo urea X X X

Medios de cultivo más utilizados en la determinación de algunos patógenos

bacterianos aislados en aguas. Vibrio cholerae.

Medios de cultivo OPS APHA SCA

Agua de peptona X X X
Agar TCBS X X X
Agar MacConkey X
Agar nutriente X X
Agar triptona soya X X X
Agar Kligler X
Caldo de decarboxilación de X X
aminoácidos según Moeller

45
 Medios de cultivo más utilizados en la determinación de algunos patógenos
bacterianos aislados en aguas. Aeromonas sp.

Medios de cultivo APHA SCA EPA

Agua de peptona bufferada X X X
Agar ampicillin dextrina X X X
Medio de oxidación fermentación X
según Hugh & Leifson
Agar nutriente X X
Agar hierro lisina X
Medio de Kaper X
Agar tres azúcares X
Agar MacConkey X

¨Dicen que el agua será imprescindible

mucho más necesaria que el petróleo,
los imperios de siempre por lo tanto
nos robarán el agua a borbotones,
los regalos de boda serán grifos,
agua darán los lauros de poesía,
el Nóbel brindará una catarata
y en la bolsa cotizarán las lluvias,
los jubilados cobrarán goteras,
los millonarios dueños del diluvio
venderán lagrimas al por mayor,
un capital se medirá por litros,
cada empresa tendrá su remolino,
su laguna prohibida a los foráneos,
su museo de lodos prestigiosos,
sus postales de nieve y de rocíos,
y nosotros los pálidos sedientos
con la lengua reseca brindaremos
con el agua on the rocks”
Neruda

46
Gracias

47