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PREPARATORIA FEDERAL LAZARO
CARDENAS
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PROFA. IBQ.ARCELIA TERRIQUEZ

LAB. CESAR CANDELA 



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Espectrofotometria
Un espectrómetro es un instrumento óptico utilizado para medir las propiedades de la luz sobre
una porción específica del espectro electromagnético. Un espectrómetro es utilizado en la
espectroscopia para medir longitudes de onda e intensidades. El espectrómetro es un término
que se aplica a los instrumentos que operan sobre una amplia gama de longitudes de onda,
desde los rayos gamma y los rayos X en el extremo de infrarrojosÀ

El funcionamiento de un espectrofotómetro consiste básicamente en iluminar la muestra con

luz blanca y calcular la cantidad de luz que refleja dicha muestra en una serie de intervalos de
longitudes de onda. Lo más usual es que los datos se recojan en 31 intérvalos de longitudes de
onda (los cortes van de 400 nm, 410 nm, 420 nm« 700 nm). Esto se consigue haciendo pasar
la luz a través de un dispositivo monocromático que fracciona la luz en distintos intérvalos de
longitudes de onda. El instrumento se calibra con una muestra o loseta blanca cuya reflectancia
en cada segmento de longitudes de onda se conoce en comparación con una superficie de
reflexión difusa perfecta.

La reflectancia de una muestra se expresa

como una fracción entre 0 y 1, o como un
porcentaje entre 0 y 100. Es importante darse
cuenta de que los valores de reflectancia
obtenidos son valores relativos y, para
muestras no fluorescentes, son
independientes de la calidad y cantidad de la
luz usada para iluminar la muestra. Así,
aunque los factores de reflectancia se midan
usando una fuente de luz concreta, es
perfectamente correcto calcular los valores
colorimétricos para cualquier iluminante
conocido.

absorcion y emision de energia radiante

1)La gran difusion de esta tecnica es consecuencia de los factores siguiente:Ejemplo: el amplio
intervalo de longitud de ondas o diferencias de energia radiante y sus diferentes modos de
interaccion con la materia
La m
mm se refiere a los métodos, cuantitativos, de análisis químico que
 
 

 m  m  m 
 
 . Se conocen como métodos
espectrofotométricos y, según sea la radiación utilizada, como espectrofotometría de absorción
visible (colorimetría), ultravioleta, infrarroja.

Aplicaciones de la espectrofotometría visible y ultravioleta.

La espectrofotometría es de gran utilidad en el análisis de espacies químicas sobre todo para

el químico analítico.
En bioquímica se utiliza por ejemplo para:
1. Identificar compuestos por su espectro de absorción.
2. Conocer la concentración de un compuesto en una disolución.
3. Determinar la glucosa en sangre en un laboratorio de análisis químico.
4. Seguir el curso de reacciones químicas y enzimáticas.

ÎEl espectrofotómetro es de gran utilidad en análisis cuantitativo de proteínas, en la

determinación de ácidos nucleicos incluyendo ADN / ARN, enzimas

Se ha llegado a la conclusión de que la espectrofotometría es un método analítico indirecto

porque se basa en la medición de la absorbancia o transmitancia de las radiaciones; es de gran
utilidad en la actualidad para la identificación de un analito en una muestra problema.

La espectrofotometría es el método más usado, debido a que es sencillo, específico y sensible.-

Todas lassustancias pueden absorber energía radiante, aun el vidrio que parece ser
completamente transparente absorbe radiación de longitudes de ondas que no pertenecen al
espectro visible; el agua absorbe fuertemente en la región del infrarrojo.La absorción de las
radiaciones ultravioletas, visibles e infrarrojas depende de la estructura de las moléculas, y es
característica para cada sustancia química.Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la
energía es absorbida; la energía radiante no puede producir ningún efecto sin ser absorbida.El
color de las sustancias se debe a que éstas absorben ciertas longitudes de onda de la luz blanca
que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda no
absorbidas.La espectrofotometría ultravioleta-visible usa haces de radiación del espectro
electromagnético, en el rango UV de 80 a 400 nm, principalmente de 200 a 400 nm y en el de
la luz visible de 400 a 800 nm , por lo que es de gran utilidad para caracterizar los materiales
en la región ultravioleta y visible del espectro.Al campo de luz uv de 200 a 400 nm se le
conoce también como rango de uv cercano , la espectrofotometría visible solamente usa el
rango del campo electromagnético de la luz visible , de 400 a 800 nmAdemás, no está de
menos mencionar el hecho de que la absorción y trasmitancia de luz depende tanto de la
cantidad de la concentración y de la distancia recorrida.



La Ley de Beer declara que la cantidad de luz absorbida por un cuerpo depende de la
concentración en la solución.

Por ejemplo, en un vaso de vidrio tenemos agua con azúcar diluida y en otro tenemos un vaso
con la misma cantidad de agua pero con más azúcar diluida. El vaso es una celda fotoeléctrica,
y la solución de azúcar es la que se mide su concentración.

Según la ley de Beer, si hiciéramos que un rayo de luz atravesara el primer vaso, la cantidad de
luz que saldría del otro lado seria mayor que si repitiéramos esto en el segundo; ya que en el
segundo, las ondas electromagnéticas chocan contra un mayor número de átomos o/y
moléculas y son absorbidos por estos.




En la Ley de Lambert se dice que la cantidad de luz absorbida por un objeto depende de la
distancia recorrida por la luz.

Por ejemplo, retomando el ejemplo de los vasos, pero ahora, pensemos que ambos tiene la
misma cantidad de agua y la misma concentración de azúcar, pero, el segundo tiene un
diámetro mayor que el otro.

Según la ley de Lambert, si hiciéramos que un rayo de luz atravesara el primer vaso, la
cantidad de luz que saldría del otro lado seria mayor que si repitiéramos esto en el segundo; ya
que en el segundo, las ondas electromagnéticas chocan contra un mayor número de átomos o/y
moléculas y son absorbidos por estos; de la misma forma que se explicó en la ley de Beer.

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Una ley muy importante es la ley de Bouguer-Beer-Lambert (también conocida como ley
Lambert Bouguer y Beer) la cual es solo una combinación de las citadas anteriormente.



Al hacer pasar una cantidad de fotones o de radiaciones, por las leyes mencionadas
anteriormente, hay una pérdida que se expresa con la ecuación:

?
?

Donde ? , es la intensidad de luz que sale de la cubeta y que va a llegar a la celda fotoeléctrica
(llamada ); y ? que es la que intensidad con la que sale al
atravesar la celda () y la relación entre ambas () es la
transmitancia.

En el exponente, el signo negativo se debe a que la energía radiente decrece a medida que el
recorrido aumenta. Donde k es la capacidad de la muestra para la captación del haz del campo
electromagnético, d es la longitud de la cubeta de espectrofotometría que recorre la radiación, y
c es la concentración del soluto en la muestra ya ubicada en la cubeta.

La ecuación simplificada de la ley de Beer-Lambert

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Comprende a la  ecuación que relaciona la concentración (c), la absorbancia de la

muestra (A), el espesor recorrido por la radiación (d) y el factor de calibración (İ). El factor de
calibración relaciona la concentración y la absorbancia de los estándares.

La absorción (o absorbancia) es igual a |, la es el logaritmo del reciproco de la transmitancia:1

| ½
ñ 

lo que es igual a:

| ½


Las ecuaciones mencionados de las leyes son validas solo y solo sì:1

Œ La radiación incidente es monocromática.

Œ Las especies actúan independientemente unas de otras durante la absorción.
Œ La absorción ocurre en un volumen de sección trasversal uniforme

|#

Las aplicaciones principales son:

Œ Determinar la cantidad de concentración en una solución de algún compuesto utilizando

las fórmulas ya mencionadas.
Œ Para la determinación de estructuras moleculares.
Œ La identificación de unidades estructurales especificas ya que estas tienen distintos
tipos de absorbancia (grupos funcionales o isomerías).

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