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CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA

CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA

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aminoacidos
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SEPARACIÓN DE AMINOÁCIDOS DEL HIDROLIZADO DE LA GELATINA POREL MÉTODO DE CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA
L. Bermúdez, K. Galindo, Y. Vargas, J. Ojeda, F. Triviño Facultad de Ciencias BásicasPrograma de QuímicaFecha de entrega: Septiembre 27 de 2010 
RESUMEN.
En el siguiente estudio se ejecuto laseparación de los aminoácidos: arginina,fenilalanina, glicina, metionina, tirosina,triptófano y aspartico, presentes en unhidrolizado de gelatina (Gelhada®) por medio del método de cromatografía decapa fina, usando como fase estacionariaSilica gel HF
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, y las fases viles: butanol, agua, acido acético glacial(4:1:1) y fenol, agua (3:1). Utilizandocomo agente revelador la Ninhidrina, yaque este presenta una reacción decoloración con los aminoácidos, con lacual se pudo determinar la presencia delos mismos en la muestra.
INTRODUCCIÓN.
La cromatografía de capa fina (TLC) esuno de los todos s ampliamenteutilizados para separar, identificar y, enalgunos casos hacer el seguimiento deuna reacción química. El principio de lacromatografía de capa fina es sencillo. Se produce una capa uniforme de absorbentelido adecuado (fase estacionaria)sostenida sobre una placa de aluminio ovidrio. Se coloca con un capilar en elorigen de la placa una mancha desolución de compuesto orgánico o mezclaen estudio, se deja que un solventeadecuado (eluyente o fase móvil)ascienda por la capa del absorbente por capilaridad. Dependiendo de la naturalezadel solido extendido sobre la capa, existendistintos tipos de TLC:
 De partición
, en la que el sólido es elsoporte inerte de la fase estacionarialiquida, que normalmente es de naturaleza polar. Con este fin suele utilizarse Silicagel hidratada, celulosa o tierra dediatomeas.
 De absorción
, en la que la capa extendidaes el sólido absorbente (alúmina, etc.).
Cromatografía capa finaPágina 1
 
 De intercambio iónico
, en la que seutiliza un cambiador de iones finamentedividido extendido sobre la capa (resinaso celulosa tratada).
 De exclusión
, donde se utiliza material poroso muy pulverizado que originafenómenos de exclusión según el tamañomolecular del analito (Sephadex® o geldextrano).
OSiOSiO OOOOH
Figura 1. Esqueleto de Silica gel 
Una cantidad conocida como factor deretención (R 
) es en forma general un poco más útil que la distancia recorrida por la muestra.
:
 f  
longitud recorrida por la muestra Rlongitud recorrida por el frente del solvente
Los valores de R 
son muy sensibles a latemperatura, y son propios de cadasustancia, pero dependiendo del sistemacromatografico (fase móvil y faseestacionaria). Los valores de R 
puedenser útiles al estimar lo que podría ser unamuestra desconocida e identificarla.
PROCEDIMIENTO.
Para la elaboracn del hidrolizado seagregaron 30g de gelatina a la cual se leadicionó ácido sulfúrico al 80% y se llevoa reflujo por 4 horas aproximadamente.Se preparo una serie de placas de vidriode 10 por 20 cm con Silica gel HF
254
. Conayuda de un piz cuidadosamente setraza la zona de aplicación. Se aplicansobre la placa (con ayuda de un tubocapilar) las soluciones patrón en una placa en las columnas 2, 3, 4, 5, 6, 7 y 8 ysolución problema (hidrolizado degelatina) en las columnas 1 y 9 de lamisma placa. Se secan las manchas.
Figura 2. Esquema de TLC
La placa se sumergió en una cubeta con lafase móvil (como indica la figura 2), se procedió a tapar la cubeta para que esta sesaturara con los vapores desprendidos por nuestro eluyente. Se dejo desarrollar hastala nea mite de recorrido de lalongitud), después se saco la placa y se
Cromatografía capa finaPágina 2
 
seco con ayuda de un secador. Paradespués rociarla con el revelado Ninhidrina con un espray, y así observar las manchas de cada aminoácido, despuésse midió la longitud recorrida para cadaaminoácido y la del frente del solvente.Para calcular sus respectivos valores de R 
en los dos sistemas cromatografico.
Fase móvil #1
20 mL CH
3
CH
2
CH
2
CH
2
-OH5 mL CH
3
COOH glacial5 mL H
2
O
Fase móvil #2
75 g Ph-OH (fenol)25 mL H
2
O
Fase estacionaria
Silica gel GF- 254
 Agente revelador 
3.5 g Ninhidrina95 mL CH
3
CH
2
CH
2
CH
2
-OH5 mL CH
3
COOH al 10%
Figura 2. Estructura de laNinhidrinaFigura 3. Montaje para el hidrolizado
ANALISIS Y RESULTADOS.
A continuación se expondrán losresultados obtenidos a manera de tabla para una mayor comprensión einterpretación de los mismos.
Tabla 1. R
obtenidos con lafase móvil 1: Agua, butanol yácido acético glacial (1:4:1)
 
N°AminoácidoDistanciarecorridaR
1
Arginina2.9 cm0.20
2
Aspartico7.3 cm0.51
3
Fenilalani8.0 cm0.5
Cromatografía capa finaPágina 3

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