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Son productos químicos que al ser estimulados con fotones con longitud de onda comprendida entre
determinados rangos (de excitación) emiten a su vez otro fotón de longitud de onda mayor (de emisión). El
prototipo es la fluoresceína que al ser estimulada con luz ultravioleta (no visible) emite luz de color verde
(visible) aunque existen muchos otros como ficoeritrina, rodamina, rojo de Texas etc.
Fluorescencias múltiples. Es posible combinar a la vez dos o tres colorantes fluorescentes siempre que
emitan en diferente longitud de onda y nuestro fluorímetro sea capaz de excitarlos a la vez y discriminar los
fotones emitidos por ellos. Los colorantes más utilizados son la citada fluoresceína con excitaci ón máxima a
495nm y emisión máxima a 520nm, y la ficoeritrina con excitación a 495 y emisión a 576nm lo que permite
utilizarlos simultáneamente con un laser de 488nm.
Un problema que presentan las dobles fluorescencias es el solapamiento de la emisión de los fluorocromos.
La longitud de onda de la emisión fotónica, como todo proceso cuántico, no es rigurosamente exacta sino
que sigue una distribución de gauss centrada sobre la longitud de emisión media, en otras palabras al
descomponer la luz verde emitida por la fluoresceína siempre tiene algo de luz roja y azul. Por tanto cuando
detectamos a la vez dos fluorescencias es muy posible que además de ser detectada la longitud de onda
emitida por un fluorocromo con una alta intensidad, también sea detectada en otra longitud de onda de otro
fluorocromo, aunque con menor intensidad. Este solapamiento se puede reducir en gran manera filtrando la
luz con lo que el rango de longitud de onda que puede pasar es muy estrecho, pero pese a ello siempre
existen fotones que se "cuelan" y que obligan a una corrección electrónica que hace que cuando se detectan
una fluorescencia tipo 1, se eleve el umbral para detectar la fluorescencia 2 y viceversa. Esta elevaci ón del
umbral permitirá, no obstante, dejar pasar a los fotones provenientes de las verdaderas dobles
fluorescencias.
Los reactivos 'antifading' son moléculas que aportan al fluorocromo aquellos electrones que ha perdido por
la emisión fluorescente. Se trata de moléculas donadoras de electrones que deben encontrarse para ser
efectivas en estrecha vecindad a las moléculas de fluorocromo.
UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS
TECNOLOGÍA MÉDICA
HISTOQUIMICA BASICA
DOCENTE: LIC. TM CHRISTIAN F.
RODRIGUEZ ZAMORA
ALUMNA: GABRIELA
ALVAREZ OVIEDO
III SEMESTRE
2010