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creatinina en suero metodo colorimetrico

creatinina en suero metodo colorimetrico

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SOCIEDAD DE BIOQUÍMICOS DE SANTA FE. AVENIDA URQUIZA 2657-3000 SANTA FE.TE/FAX (0342) 455-2708.e-mail: sbstafe@ceride.gov.ar
CREATININA
MÉTODO COLORIMÉTRICO PARA LA DETERMINACIÓN DE CREATININA EN SUERO CONDESPROTEINIZACIÓN Y EN ORINA
SIGNIFICACIÓN CLÍNICA:
 La determinación de niveles séricos de creatinina,producto de degradación de la creatina, se utilizacomo índice de funcionalismo renal, dado que sueliminación se efectúa a través del riñón y casiexclusivamente por filtración.
 
FUNDAMENTOS
 
DEL METODO:
 
El método se basa en la reacción de Jaffé,aprovechándose también al ácido pícrico comodesproteinizante. Se mide fotocolorimétricamente a510 nm la absorbancia del cromógeno formado porla reacción entre la creatinina y el picrato alcalinoprevia desproteinización con ácido pícrico.
REACTIVOS PROVISTOS:
Estos reactivos son para
USO IN VITRO
y estanlistos para usar.
Acido Picrico: solución de ácido pícrico 0.040mol/l.
Hiróxido de sodio: solución de hidróxido de sodio1 mol/l.
 
Standard: solución acuosa de creatinina de 20mg/l.
PRESENTACION:
Este equipo se presenta para 120-200Determinaciones, conteniendo:
#
440 ml de Acido Pícrico.
#
100 ml de Hidróxido de sodio.
#
10 ml de Standard.
ESTABILIDAD:
Estos reactivos son estables a temperaturaambiente (< 25 ºC), y al abrigo de la luz , hasta lafecha de vencimiento indicada en la caja. Serecomienda no exponer los mismos a temperaturaselevadas (> a 35 ºC) durante tiempos prolongados.
MUESTRA:
 * SUERO: la determinación debe efectuarse sobresuero fresco, nunca sobre sangre total, debido almaterial Jaffé reactivo de los eritrocitos, la muestrade suero puede conservarse hasta 24 horas a 4 ºC.* ORINA: obtener en recipiente limpio orina de 24horas, guardandola en la heladera durante larecolección. Medir la diuresis, tomar una alícuota yefectuar una dilución 1/50 de la misma (1
+
49).Si se trabaja con una diuresis de 2 horas multiplicarel volumen de diuresis por 12 para calcular lacantidad de creatinina eliminada durante 24 horas.
TÉCNICA OPERATORIA:
1-Desproteinización:
(para suero)
 
En un tubo de centrífuga colocar 0.75 ml de suero y3.75 ml de Acido pícrico. Mezclar por inversión, dejarreposar durante 10 minutos y centrifugar comomínimo 5 minutos a 3000 rpm.
 2- Reaccion de color:
BlancoStandardDesprot.SueroOrina(dil.)Desprot. --- --- 3.0 ml ---Standard --- 0.50 ml --- ---H
2
O dest. 1.25 ml 0.75 ml --- 0.75 mlOrina dil. --- --- --- 0.50 mlAc.Pícrico 1.75 ml 1.75 ml --- 1.75 mlSol.NaOH 0.50 ml 0.50 ml 0.50 ml 0.50 ml
Mezclar por inversión y dejar los tubos a 25 ºC durante20 minutos. Leer en espectrofotómetro en las siguientescondiciones:- Long. de onda: 510 nm o filtro verde (500-540).- Cero de absorbancia: agua destilada.
 Microtécnica:
puede trabajarse si se desea con menorcantidad de muestra, desproteinizando 0.4 ml de suero con2 ml de sol. de ácido pícrico. Del sobrenadante se toman1.5 ml y se le adicionan 0.25 ml de sol. de hidróxido desodio. El blanco y el standard se procesan en formahabitual.
 CALCULO DE RESULTADOS :*En suero:
 creatinina mg/l = 20 mg/l . AmuestraAstandardcreatinina umol/l = 177 umol/l . AmuestraAstandard

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