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Biologia - Apostila ANVISA - Módulo 04

Biologia - Apostila ANVISA - Módulo 04

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 Descrição dos Meios deCultura Empregadosnos ExamesMicrobiológicos
Módulo IV
 
 
ÍNDICE1. Introdução........................................................................................................................1
Procedimentos gerais...........................................................................................................1
2. Meios de cultura para transporte e conservação...............................................................2
Cary Blair...........................................................................................................................2Salina Tamponada...............................................................................................................2Meio Stuart........................................................................................................................3Ágar nutriente....................................................................................................................4
3. Meios para crescimento e isolamento................................................................................6
Ágar Chocolate....................................................................................................................6Ágar Thayer-Martin Chocolate...............................................................................................7Ágar Salmonella-Shigella (ss)................................................................................................7Caldo Selenito.....................................................................................................................8Caldo Tetrationato...............................................................................................................9Caldo Tioglicolato com indicador..........................................................................................10Caldo Tioglicolato sem indicador..........................................................................................11Ágar Mac Conkey..............................................................................................................12Ágar Sangue.....................................................................................................................13Ágar CLED – cystine lactose electrolyte deficient....................................................................14Caldo BHI brain heart infusion..........................................................................................15Löwenstein Jensen.............................................................................................................16Meio bifásico: Löwenstein e Middlebrook...............................................................................18Ágar Mycosel....................................................................................................................19Ágar Sabouraud................................................................................................................20
4. Meios comerciais para provas de identificação................................................................22
Base de nitrogênio para leveduras – Yeast Nitrogen Base........................................................22Ágar Citrato Simmons........................................................................................................23Ágar Bílis-Esculina.............................................................................................................24Ágar Sangue - CAMP..........................................................................................................25Caldo base de Moeller........................................................................................................26Ágar Dnase......................................................................................................................28Ágar Esculina....................................................................................................................30Ágar Fenilalanina...............................................................................................................31CTA Cystine Tryticase Agar..............................................................................................32Caldo Triptona e SIM.........................................................................................................33Meio Caldo Triptona...........................................................................................................34Caldo Malonato.................................................................................................................35Caldo Nitrato....................................................................................................................36Meio base para oxidação e fermentação - OF.........................................................................38Ágar TSI – triplo açúcar ferro..............................................................................................40Ágar base uréia (christensen)..............................................................................................41
5. Fórmulas e produtos para provas de identificação..........................................................43
Para prova de catalase.......................................................................................................43Para prova de coagulase.....................................................................................................43Para prova de gelatinase....................................................................................................45Para prova de lecitinase.....................................................................................................46Para prova de oxidase........................................................................................................47Para fermentação de carboidratos........................................................................................48Para a prova de hidrólise....................................................................................................49Para crescimento a 42 e 44°c..............................................................................................50Para teste de motilidade.....................................................................................................51Para prova de tolerância ao NaCl 6,5%.................................................................................55
6. Discos para identificação.................................................................................................57
Bacitracina.......................................................................................................................57Novobiocina......................................................................................................................57Optoquina........................................................................................................................58
7. Meios para teste de sensibilidade aos antimicrobianos...................................................60
HTM – haemophilus test médium.........................................................................................60Ágar Mueller Hinton...........................................................................................................61Ágar Mueller Hinton Sangue................................................................................................62
8. Referências bibliográficas...............................................................................................64
 
 Mod IV -
1
 
1. INTRODUÇÃO
PROCEDIMENTOS GERAIS
P
REPARAÇÃO E DISTRIBUIÇÃO DE MEIOS DE CULTURA
 
 
Os meios comerciais devem ser hidratados em pequena quantidade de água até que todo o meiofique úmido e só depois deve-se acrescentar o restante da água.
 
Os meios preparados não comerciais, devem ser pesados separadamente em papel manteiga oupapel alumínio e adicionados em um único frasco (normalmente em béquer), hidratar em pequenaquantidade de água até que todo o meio fique úmido e só depois deve-se acrescentar o restanteda água.
 
Sempre que for necessário levar o meio para fundir, usar vidro Pyrex, aquecer sobre a tela deamianto ou similar e tripé, no bico de Bunsen.
 
Usar sempre luvas térmicas apropriadas para laboratório para manipular vidrarias quentes;
 
Sempre que for usado o termo
"esterilizar em autoclave" 
, o tempo de esterilização é de 15minutos e a temperatura de 121ºC.
 
Sempre que for usado o termo
"esterilizar por filtração",
usar o filtro com porosidade de 0,22micra, recomendado para partículas bacterianas.
 
Quando distribuir o meio antes de autoclavar, os tubos não precisam estar esterilizados;
 
Quando distribuir o meio após a autoclavação, os tubos, frascos, placas, pipetas e vidrarias oumateriais auxiliares obrigatoriamente devem ser estéreis.
 
Os meios devem ser autoclavados com as tampas semi-abertas, para que a esterilização seja porigual em todo o conteúdo dos tubos - tampas fechadas não permitem a entrada do vapor.
C
ONTROLE DE QUALIDADE DE ESTERILIDADE E CRESCIMENTO
 
 
Para todos os meios confeccionados, colocar no mínimo 10% do lote preparado na estufa 35 ±1°C por 24 horas para o controle de esterilizade.
 
Não deve haver mudança de cor nem crescimento de qualquer colônia.
 
Para o controle de crescimento, sempre que possível usar cepas ATCC
, que são cepas dereferências de origem e padrão definido de provas para a sua caracterização.
 
Se não for possível o uso de cepas ATCC
, usar cepas 100% positivas para os controles dequalidade de crescimento realizados.
ECOMENDAÇÕES GERAIS
 
 
Evitar usar meios vencidos (liofilizados e prontos para uso); se usar, certificar-se com o controlede crescimento de que realmente está funcionando.
 
Não usar meios prontos para uso em tubos ou placas que estejam ressecados.
 
Observar com atenção para as instruções de alguns inóculos que são específicos para algunsmeios de cultura.
 
Recomenda-se o uso de tubos com tampa de rosca, pois evitam o ressecamento rápido do meio(tamanho dos tubos utilizados geralmente são de 11 por 100 mm).
 
As placas de Petri são de 50, 90 ou 150 mm de diâmetro.
 
Todos os meios confeccionados devem ser devidamente identificados com o nome, data defabricação, data de validade e tipo de armazenamento.
 
Todos os meios de placa devem ser embalados em filme plástico PVC transparente para evitar oressecamento.
 
Evitar o uso de sacos plásticos para embalar as placas, pois a água de condensação formadafacilita a proliferação de fungos; para meios de cultura em tubos, colocar em sacos plásticos,procurando tirar o excesso de ar.

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