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INTRODUCCIÓN
Este género además incluye más de cien especies, las que se han agrupado
según su patogenicidad y también con fines didácticos.
Complejo tuberculosis:
M. tuberculosis
M. bovis (incluída cepa BCG)
M. africanum
M. microti
M. canetti
Complejo leprae:
M. leprae-murinum
M. leprae
Micobacterias no tuberculosas:
Oportunistas:
M. avium
M. intracellulare
M. kansasii
M. scrofulaceum
Otras
Saprófitas:
M. gordonae
M. terrae
M. triviale
Otras
MUESTRAS
Una buena muestra es aquella que proviene del sitio de la lesión, en cantidad
suficiente, recolectada en un envase adecuado y conservada correctamente.
Es responsabilidad del personal de enfermería o del personal del laboratorio,
dependiendo de la organización del servicio, dar las indicaciones al paciente para la
recolección de todas aquellas muestras de obtención espontánea. Estas indicaciones se
refieren al momento en que debe tomarse la muestra, cómo debe obtenerse, qué volumen es
el adecuado, en qué envase debe depositarse y cómo debe rotularse.
LOCALIZACIÓN PULMONAR:
- Expectoración espontánea: considerada la muestra ideal por su buen
rendimiento. En nuestro medio se recomienda tomar dos muestras para diagnóstico: una
inmediata en el momento de la consulta y la otra matinal al día siguiente, solicitándose un
mínimo de 2 ml por muestra. La toma de muestra debe realizarse en un espacio ventilado,
en forma individual, para evitar contaminación con los aerosoles que se producen en el
momento de toser.
LOCALIZACIÓN RENAL:
- Orina: obtención en forma espontánea. En este caso se recomienda
procesar 6 muestras matinales recolectadas en días sucesivos, después de un aseo genital
prolijo, de segundo chorro y en un volumen no inferior a 50 ml.
Las muestras de origen renal deben ser procesadas antes de las 12 horas para
evitar la contaminación por flora asociada y cambio de pH. Su conservación es a 4ºC hasta
su procesamiento.
LOCALIZACIÓN GENITAL:
- Biopsia de endometrio, trompa, epidídimo u otro tejido: debe ser incluida
en agua destilada o suero fisiológico estéril, en el mínimo volumen necesario para
mantenerla hidratada. No debe usarse formalina.
LOCALIZACIÓN PLEURAL:
- Líquido pleural: puede usarse un anticoagulante (por ejemplo EDTA)
cantidad de muestra recomendada 20 ml ó más.
LOCALIZACIÓN MENÍNGEA:
- Líquido cefalorraquídeo: mantener las condiciones de asepsia de la toma
de muestra, procesarla ante de las 12 horas por su escaso contenido bacilar y mantenerla a
4ºC si es necesario.
LOCALIZACIÓN GANGLIONAR:
- Biopsia de ganglio: debe ser incluida en agua destilada o suero
fisiológico estéril, en el mínimo volumen necesario para mantenerla hidratada. No debe
usarse formalina.
LOCALIZACIÓN OSTEOARTICULAR:
- Tejido óseo: debe ser incluido en agua destilada o suero fisiológico
estéril, en el mínimo volumen necesario para mantenerlo hidratado. No debe usarse
formalina.
LOCALIZACIÓN INTESTINAL:
- El laboratorio no hace rutinariamente investigación de tuberculosis en
deposiciones, la baciloscopía no es confiable, ya que la presencia de BAAR puede deberse
a M. tuberculosis de procedencia pulmonar (por deglución de la expectoración) o a
micobacterias no tuberculosas por la presencia de éstas en los alimentos. Además el
cultivo se contamina en una alta proporción debido a la existencia de gran cantidad de flora
asociada.
TRANSPORTE DE LA MUESTRA:
RECEPCIÓN DE MUESTRAS:
En la recepción de muestras debe verificarse que la identificación del
paciente sea coincidente entre el formulario de petición de examen y la rotulación del
envase de la muestra.
REACTIVOS:
- Fucsina básica 10 g
- Alcohol de 95º 100 ml
- Fenol acuoso* 55 ml
- Agua destilada 1000 ml
- Azul de metileno 1g
- Alcohol 90º 20 ml
- Acido acético glacial 50 ml
- Agua destilada 1000 ml
- Se deja escurrir el ácido clorhídrico por las paredes del matraz que contiene
alcohol; con una pipeta se agita suavemente.
- Eter 10 ml
- Alcohol de 95º 20 ml
Portaobjetos
Lápiz marcador indeleble
Aplicadores de madera o cualquier otro elemento desechable
Mechero Bunsen
Papel absorbente
Desinfectante
Gradillas
Frascos gotarios para colorantes
Microscopio
- Colocar una o dos gotas, libre de arena, con una pipeta sobre un
portaobjetos delimitado, dejar secar a 37ºC o a temperatura ambiente hasta el día siguiente.
FIJACIÓN DE LA MUESTRA:
2.- Muestras líquidas o sólidas: se coloca sobre el sedimento una o dos gotas
de alcohol - éter, se enciende éste y se deja evaporar completamente.
2.- Decoloración: decolorar con alcohol ácido alternando con lavados suaves
de agua fría (el agua tibia desprende los extendidos). Esta operación se repetir las veces que
sea necesario hasta que las partes menos espesas queden incoloras.
3.- Coloración de fondo: Se cubren los extendidos con azul de metileno por
30 segundos como mínimo. Se lava con agua corriente suavemente. Se limpia con algodón
impregnado en alcohol por debajo de la lámina. Se secan las preparaciones a temperatura
ambiente sobre un papel absorbente y limpio.
LECTURA:
BIOSEGURIDAD EN LA BACILOSCOPÍA:
Las medidas de bioseguridad en esta técnica son las que se deben tomar
cuando se realizan procedimientos técnicos con agentes infecciosos, es decir, debemos
comenzar con el adiestramiento específico del personal.
PROCEDIMIENTO:
REACTIVOS:
- NaOH 35 g
- Agua destilada c.s.p. 1000 ml
- NaOH 2g
- Agua destilada c.s.p. 100 ml
- Autoclavar y conservar estéril
- H2SO4 70 ml
- Agua destilada 930 ml
- Tornasol 10% 6 ml
Descontaminación y Neutralización:
- Luego se agrega gota a gota NaOH al 3.5% y para ajustar fino NaOH al
2% hasta el punto de viraje (rosa a lila) dejándola finalmente a pH 6.6 - 7.2.
Se recomienda:
Siembra e Incubación:
- Sembrar 0.3 a 0.5 ml en cada tubo de medio a utilizar por cada muestra.
La siembra se hace en general en 3 tubos de medio L. Jensen y en las muestras de orina y
en otras especiales se recomienda sembrar 6 tubos.
- Tapar los tubos con plástico de 0.4 mm de espesor, el que se ajusta con
elástico al borde del tubo.
- Si los tubos con medio tienen tapa rosca, en esta etapa dejarla
ligeramente suelta para permitir la evaporación. Luego ajustar la tapa. Incubar
nuevamente los cultivos en posición horizontal inclinada a 37º.
Informe semi-cuantitativo:
MEDIO DE CULTIVO
1.2.- Todo el material utilizado debe estar previamente estéril (matraces, tubos,
repartidores, etc.).
3.- Preparación
3.1.- Pesar todas las sales la asparragina, agregar la glicerina y el volumen de agua que
corresponde.
3.4.- Los huevos frescos se lavan uno a uno y se enjuagan con abundante agua fría
corriente; se estilan en un canastillo.
3.5.- Los huevos se homogenizan en una juguera, frasco o matraz con piedras de
cuarzo, descontando el volumen de espuma.
3.8.- Dejar en reposo en un lugar oscuro por una hora para su estabilización (pH) y
eliminación de burbujas internas.
4.- Coagulación:
4.1.- Los tubos se ponen en bandejas o gradillas horizontales inclinadas.
4.2.- Los coaguladores se encienden con anticipación, de manera que al poner las
bandejas se haya alcanzado una temperatura cercana a la de coagulación (80ºC)
4.4.- Al retirar los tubos del equipo, comprobar la firmeza del medio y dejarlos en
posición horizontal, protegidos de la luz, hasta que se enfríen.
6.- Conservación:
6.1.- A 4ºC.
7.- Duración:
Introducción:
Obtención de la muestra:
Conservación de la muestra:
Reactivos:
Curva de Calibración:
T
Tubos Blanco -2 -1 1 2 3 4 5 6 7
S
Sol.Stándar .0 .025 .050 .1 .2 .3 .4 .5 .6 .7ml
H
H2O destilada .7 .675 .650 .6 .5 .4 .3 .2 .1 .0ml
B
Buffer fosfato .0 .0 .0 .0 .0 .0 .0 .0 .0 .0ml
H
H2SO4 2/3N .4 .4 .4 .4 .4 .4 .4 .4 .4 .4ml
T
Tungstato 10% .2 .2 .2 .2 .2 .2 .2 .2 .2 .2ml
U
unidades .4 .8 .5 9.0 8.6 8.1 7.6 7.0 6.5ml
ADA/L
A = (ε y) (ε x2) - (ε x) (εx y)
N εx2 - (ε x)2
B = Nεyx - Nεyx
N ε x2 - (ε x)2
r = Nεyx - (ε x) (εx y)
[N ε x2 - (ε x)2] [N ε y2 - (ε y) 2]
Técnica:
- Tiempo cero
Adenosina -- 1.0 ml
Adenosina 1.0 ml --
Tungstato 10% 0.4 ml 0.4 ml
Referencias Bibliográficas:
6.- Cruz E., Pinto E., Serret H., Pertuzzé y Del Río G., Adenosindeaminasa (ADA) en
líquido pleural: valor para la identificación de la etiología tuberculosa. Enf. Resp.
Cir. Torac. 3:176, 1987.