Definición y Terminología

 
    Las isoenzimas son distintas formas moleculares de una misma enzima que presentan o
muestran especificidad por el mismo sustrato.
    Las distintas formas moleculares de alcohol deshidrogenasa (ADH) se diferencian en la
carga eléctrica neta, en el peso molecular o en ambas simultáneamente, pero todas ellas
deshidrogenan el alcohol (sustrato) convirtiéndolo en aldehído. La principal característica
de las isoenzimas es que deben tener la misma especificidad de sustrato.

    La técnica que habitualmente se emplea para estudiar las isoenzimas es la electroforesis,
que permite separar las moléculas por su diferente carga, tamaño o ambas bajo la acción de
un campo eléctrico. Las alteraciones en la carga eléctrica neta se producen por sustitución
de un aminoácido por otro de distinta polaridad, por ejemplo, cambio de un aminoácido
ácido por otro básico o neutro.
    Algunos autores opinan que solamente deben considerarse como isoenzimas aquellas
formas moleculares que están presentes en el mismo órgano o tejido, que tienen un origen
genético similar y actividades catalíticas muy similares. Las peroxidasas, las esterasas y las
fosfatasas presentan distintas formas moleculares en el mismo órgano o tejido, pero tienen
una amplia especificidad de sustrato, de manera que pueden transformar diferentes
compuestos. Además, pueden tener diferentes orígenes y, por tanto, no se las considera
como verdaderas isoenzimas.
    La estructura cuaternaria activa de las isoenzimas puede ser fundamentalmente de tres
tipos:
    1.- Monómeros: isoenzimas que poseen una sola cadena polipeptídica como estructura
cuaternaria activa.
    2.- Dímeros: isoenzimas cuya estructura cuaternaria activa consiste en la unión de dos
polipéptidos.
    3.- Tetrámeros: la estructura cuaternaria activa de estas isoenzimas consta de cuatro
polipéptidos.
    Las isoenzimas diméricas y tetraméricas pueden estar formadas por subunidades o
polipéptidos iguales o diferentes.
    1.- Homodímeros: isoenzima formada por dos polipéptidos idénticos.
    2.- Homotetrámero: isoenzima constituida por cuatro cadenas polipeptídicas iguales.
    3.- Homopolímeros: isoenzimas formadas por múltiples cadenas polipeptídicas
idénticas.
    4.- Heterodímero: isoenzima constituida por dos polipéptidos diferentes.
    5.- Heterotetrámero: tetrámero constituido por la unión de cuatro polipéptidos
diferentes, pudiendo ser los cuatro distintos abdg, ser tres diferentes aabd, o tener dos
tipos distintos aabb.
    No se han descrito, hasta el momento, isoenzimas cuya estructura cuaternaria activa
conste de tres cadenas polipeptídicas (trímeros).
    Un término que se emplea con bastante frecuencia es el de Patrón Isoenzimático o
Zimograma, conjunto de bandas pertenecientes al mismo sistema enzimático que se
observan en el mismo individuo.      Deseo destacar que he utilizado la palabra banda en
vez de la de isoenzima para indicar que una banda que se observa en un gel, después de
llevar a cabo una electroforesis, puede ser una sola isoenzima o la superposición de varias
isoenzimas diferentes con igual migración electroforética.
    Otro término usado con mucha frecuencia es el de Alozimas o Alelozimas, empleado
para referirse a las distintas formas moleculares de una misma enzima producidas por
distintos alelos del mismo locus.   Naturalmente, el vocablo isoenzima es más amplio, ya
que se incluye tanto a las diferentes formas moleculares de una misma enzima producidas
por alelos de mismo locus, como a las producidas por alelos de distintos loci.
Localización Subcelular 
 
    Distintas isoenzimas muestran diferente localización subcelular, de forma que unas se
encuentran en el citoplasma, otras en las mitocondrias, algunas en cloroplastos, otras en los
glioxisomas, en peroxisomas, etc.
En los vegetales existen isoenzimas de Málico deshidrogenasa (MDH) que se encuentran en
el citoplasma (citosólicas) e isoenzimas de MDH localizadas en la mitocondria. Las formas
citosólicas y las mitocondriales están codificadas por genes nucleares. Una manera sencilla
de averiguar la localización citosólica o mitocondrial de las isoenzimas de MDH en
vegetales es comparar los patrones isoenzimáticos (zimogramas) de polen y de hoja. En
polen no se observan las isoenzimas mitocondriales pero si las citosólicas, mientras que en
hoja se observan ambas.
 
Es conveniente indicar que para las isoenzimas con estructura cuaternaria dimérica o
tetramérica nunca se observan heterodímeros o heterotetrámeros entre las subunidades
polipeptídicas de distinta localización subcelular. Por ejemplo, no se producen
heterodímeros entra las cadenas polipeptídicas de localización citosólica y mitocondrial.
Por consiguiente, además de hacer mención al tejido u órgano en el que se detectan las
isoenzimas, también es necesario tener en cuenta su localización subcelular.
En general, los trabajos publicados con isoenzimas suelen emplear dicho término de la
forma más amplia posible, incluyendo los casos más dudosos como peroxidasas, esterasas y
fosfatasas.
Variabilidad
 
    Con las isoenzimas es posible al menos estudiar tres tipos de variabilidad genética:
    1.- Variabilidad tisular: distintos tejidos u órganos de un mismo individuo muestran
diferentes formas moleculares o distintas cantidades relativas de las mismas isoenzimas.
    2.- Variabilidad ontogénica: un mismo tejido u órgano en distintos momentos del
desarrollo muestra diferentes formar moleculares o distintas cantidades relativas de las
mismas isoenzimas.
    3.- Variabilidad poblacional: distintos individuos en el mismo tejido u órgano y en el
mismo estado de desarrollo presentan diferentes isoenzimas.
Naturalmente, cuando se desea estudiar un tipo de variabilidad es necesario fijar las otras
dos fuentes de variación.   
Variabilidad Tisular
 
    Existen muchas isoenzimas que presentan una elevada especificidad tisular, de
manera que distintos tejidos u órganos muestran diferentes formas moleculares o distintas
cantidades relativas de las mismas isoenzimas. Por tal motivo, algunas isoenzimas
solamente se sintetizan en un determinado tejido u órgano, siendo específicas de ese tejido.
En otros casos, la misma isoenzima se produce en dos tejidos diferentes pero en cantidades
relativas muy distintas.
    Un buen ejemplo de especificidad tisular son las Peroxidasas de semilla de trigo
hexaploide. Cuando se estudian las peroxidasas de diferentes partes de la semilla seca de
trigo, como son el embrión junto con el escutelo (E+S), el endospermo (Ed) y las cubiertas
(C), se observa que el endospermo y las cubiertas presentan las mismas formas
moleculares, sin embargo, el embrión junto con el escutelo (E+S) tiene tres isoenzimas
diferentes a las de las cubiertas (C) y el Endospermo (Ed). La semilla completa (con todas
sus partes) muestra la suma de las isoenzimas de las diferentes partes, aunque las
isoenzimas del E+S aparecen más tenues, ya que el E+S representa una pequeña parte de la
semilla.
 

    Las isoenzimas de Láctico deshidrogenasa (LDH) son uno de los ejemplos típicos
de variabilidad tisular en especies animales. Por ejemplo, en ratón es posible observar cinco
isoenzimas diferentes en órganos tales como riñón, corazón, hígado y músculo esquelético.
Dichas isoenzimas se denominan LDH1, LDH2, LDH3, LDH4 y LDH5 de mayor a menor
migración electroforética. Sin embargo, las cantidades relativas de estas cinco formas
moleculares son distintas en cada órgano o tejido. La más abundante en hígado es LDH5,
mientras que en riñón existe mayor cantidad de LDH1.
 
  Variabilidad Ontogénica
 
    Un mismo tejido u órgano en distintos momentos del desarrollo puede presentar
diferentes isoenzimas o distintas cantidades relativas de las mismas isoenzimas.
    De nuevo, las isoenzimas de Láctico deshidrogenasa (LDH) son un ejemplo de
variabilidad durante el desarrollo en especies animales. En riñón de ratón es posible
observar cinco isoenzimas de LDH que de mayor a menor migración electroforética se
denominan LDH1, LDH2, LDH3, LDH4 y LDH5. Sin embargo, 5 días antes del
nacimiento la isoenzima más abundante en riñón es LDH5, mientras que en el individuo
adulto las isoenzimas más abundantes son LDH1 y LDH2. En este caso se trata de
diferencias en las cantidades relativas de las mismas isoenzimas.
 
    También existen ejemplos en los que un mismo tejido muestra diferentes isoenzimas
en distintos momentos del desarrollo. Por ejemplo, las Peroxidasas de coleoptilo en las
primeras horas de germinación de la semilla de trigo cambian de forma dramática.
    Tanto la Variabilidad Tisular como la Variabilidad Ontogénica son consecuencia de
una regulación diferencial, de manera que en todos los organismos diferentes tejidos tienen
diferentes baterías de genes expresándose y, en un mismo tejido en distintos momentos del
desarrollo se expresan diferentes grupos de genes.
    Es frecuente hablar de sistemas enzimáticos Constitutivos y de sistemas
enzimáticos Variables. Los Constitutivos son aquellos que se expresan de manera
constante a lo largo del desarrollo y en todos los tejidos, mientras que sistemas Variables
son aquellos cuya expresión cambia a lo largo del desarrollo y de un tejido a otro.   
Variabilidad Poblacional
 
    Distintos individuos en el mismo tejido u órgano y en el mismo estado de desarrollo
presentan diferentes isoenzimas. Por tanto, los diferentes individuos que componen las
poblaciones de distintas especies vegetales o animales pueden presentar distintas formas
moleculares de la misma enzima. Como es lógico, cuando se trata de estudiar la
variabilidad poblacional, es necesario fijar las otras fuentes posibles de variabilidad, de
manera que los análisis deben realizarse en el mismo órgano y en el mismo estado de
desarrollo en todos los individuos de la población estudiada.
 
    Naturalmente, los estudios de variabilidad poblacional están estrechamente ligados al
conocimiento del control genético de las isoenzimas. Es decir, se necesita averiguar el
número de loci que controlan o codifican para las isoenzimas analizadas y las relaciones de
dominancia o codominancia existentes entre los alelos de los loci implicados.
Control Genético de Isoenzimas 
    Conocer el control genético de las isoenzimas consiste en averiguar el número de
loci que codifican para el sistema enzimático analizado, el número de alelos de cada locus y
las relaciones de dominancia o codominancia que existen entre los diferentes alelos que dan
lugar a las isoenzimas estudiadas. Igualmente, para descubrir el control genético de las
isoenzimas analizadas es importante conocer su estructura cuaternaria, es decir, el número
de cadenas polipeptídicas del enzima activo. Como ya hemos indicado anteriormente
existen fundamentalmente tres posibles tipos de estructuras cuaternarias activas: monómero
(un polipéptido), dímero (dos polipéptidos) y tetrámero (cuatro polipéptidos)
    Naturalmente, la forma más correcta de averiguar la estructura cuaternaria activa de
un enzima es llevar a cabo experimentos bioquímicos de disociación y reasociación de
subunidades "in vitro". Sin embargo, también es posible deducir el comportamiento
monomérico, dimérico o tetramérico de las isoenzimas mediante análisis genético clásico.
Por tanto, siguiendo la misma metodología de Mendel se puede averiguar la estructura
cuaternaria de una isoenzima, y además su control genético. Además del método utilizado
por Mendel, también es posible emplear otras opciones para averiguar la estructura
cuaternaria y el control genético de las isoenzimas, por ejemplo, estudiar los patrones
isoenzimáticos de los diferentes individuos de una población, analizar los zimogramas de
los diferentes tejidos de un mismo individuo y también estudiar los patrones isoenzimáticos
de individuos con diferentes constituciones cromosómicas.
Resumen del método utilizado por Mendel (cruzamientos en los que segrega un locus).
 
    Obtención de la primera generación filial (F1 con genotipo Aa) entre dos líneas puras
homocigóticas (P1 con genotipo AA y P2 con genotipo aa). Autofecundación o cruzamiento
de dos individuos de la F1 para conseguir la segunda generación filial (F2).
    Observando la apariencia externa (fenotipo) de los individuos de la F1 (Aa) es posible
deducir las relaciones de dominancia o codominancia de los alelos (A y a) que controlan el
carácter estudiado. Si el fenotipo (patrón isoenzimático) de la F1 es uniforme e igual al de
uno de los parentales (P1 o P2) se trata de un caso de dominancia, si el alelo A domina sobre
a (A>a) la F1 tiene el mismo aspecto que el parental P1. Los siete caracteres estudiados por
Mendel en guisante mostraban dominancia completa (Primera Ley de Mendel o Principio
de la Uniformidad).
    Si en los individuos de la F1 se expresan al mismo tiempo los dos alelos A y a, se dice
que existe codominancia (A=a) y su fenotipo (patrón isoenzimático) es diferente al de los
dos parentales (P1 y P2).
    En la segunda generación filial (F2) se observan individuos de tres genotipos distintos en
las siguientes proporciones: 1/4 AA, 1/2 Aa y 1/4 aa. Cuando existe dominancia completa
(A>a) en la F2 se observan dos fenotipos diferentes con las siguientes proporciones: 3/4 A y
1/4 a. En este caso no es posible distinguir a los homocigotos dominantes (AA) de los
heterocigotos (Aa) ya que ambos muestran la misma apariencia externa (Segunda Ley de
Mendel o Principio de la Segregación).
    Sin embargo, si entre los alelos A y a existe una relación de codominancia (A=a), en la
F2 encontraremos tres fenotipos distintos (patrones isoenzimáticos) con las siguientes
proporciones: 1/4 AA, 1/2 Aa y 1/4 aa. En este último caso, a cada genotipo le corresponde
una apariencia externa distinta. Los resultados obtenidos en la F2 nos permiten deducir en
ambos casos (dominancia completa A>a o codominancia A=a) que el carácter estudiado
(sistema enzimático) está controlado por un solo locus con dos alelos (A y a).
Hipótesis utilizada para el análisis de los patrones isoenzimáticos.
 
En todos los casos, de control genético que vamos a estudiar supondremos:
    1º) Que el análisis se lleva a cabo en un tejido diploide (con dos juegos de cromosomas).
    2º) Que todos los loci estudiados se encuentran en autosomas.
    3º) Que como consecuencia de lo dicho anteriormente, todos los genes se encuentran en
dos dosis.
    4º) Que los dos alelos de un mismo locus son igualmente activos, de manera que en un
individuo heterocigoto (Aa) en el que existe una dosis de alelo A que produce cadena
polipeptídica a y otra dosis de alelo a que codifica cadena b, hay igual cantidad de ambas
cadenas polipeptídicas (1/2 a : 1/2 b)
    5º) Que los díferentes monómeros, dímeros o tetrámeros (según el caso) son igualmente
activos y muestran la misma especificidad de sustrato.
    6º) Que en el caso de los dímeros y tetrámeros, las cadenas polipeptídicas se asocian al
azar para formar dímeros activos o tetrámeros activos, según el caso. 
    Para comprender mejor como es posible deducir la estructura cuaternaria y el
control genético de las isoenzimas empleando la metodología de Mendel, voy a presentar
los diferentes casos de estructura cuaternaria, comenzando por la situación más sencilla de
control genético, un locus con dos alelos, y estructura cuaternaria monomérica.
1.- Un locus con dos alelos con dominancia completa (A>a) y estructura cuaternaria
monomérica.
  
    Supondremos que el alelo activo A lleva información para el polipéptido a y que el alelo
a es un nulo. Un alelo nulo puede ser un alelo amorfo que llevaría información para un
polipéptido no funcional, o podría tratase de una deleción o pérdida del gen o alelo que
codifica para el polipéptido correspondiente. Un alelo nulo también podría ser un gen que
llevara información para un polipéptido que no es posible detectar mediante la tinción "in
vitro" que se lleva a cabo para teñir el enzima, pero que si tiene función fisiológica "in
vivo". En definitiva, un alelo nulo es aquel que no es posible detectarlo mediante el sistema
de tinción utilizado "in vitro". En esta situación los individuos homocigotos AA (P1)
producen cadena polipeptídica a y presentan una sola isoenzima (monómero a) los
homocigotos aa (P2) carecen de polipéptido activo y no presentan ninguna isoenzima, y los
heterocigotos Aa (F1) también sintetizan el monómero a y tienen, por tanto, una isoenzima
idéntica a la de los homocigotos AA. Los heterocigotos Aa (F1) tienen el mismo patrón
isoenzimático que los homocigotos dominantes AA. El cruzamiento de dos heterocigotos
(Aa x Aa) produce una F2 con dos clases individuos, los que tienen una sola isoenzima
(monómera) y los que carecen de isoenzima en proporciones 3/4 y 1/4, respectivamente.
Esta segregación de la F2 coincide con la esperada para un locus con dos alelos y
dominancia completa.

    Aunque lo más habitual es que exista codominancia entre los alelos que codifican
para isoenzimas, sin embargo, hay ejemplos de dominancia completa, como son las
Peroxidasas, Fosfatasas alcalinas y Esterasas. Estas isoenzimas además tienen en muchas
especies vegetales estructura monomérica.
 2.- Un locus con dos alelos codominantes (A=a) y estructura monomérica.
  
    En este caso, ambos alelos (A y a) dan lugar a polipéptidos activos, el alelo A lleva
información para la cadena polipeptídica a y el alelo a para la b. Los individuos
homocigóticos AA (P1) presentan un solo monómero activo (a) y los homocigóticos aa (P2)
muestran otro monómero activo (b) con distinta migración electroforética. El cruzamiento
de ambos homocigotos produce una F1 heterocigótica (Aa) que tiene simultáneamente las
dos isoenzimas (monómeros a y b) observados por separado en los parentales. Por tanto, en
los individuos de la F1 se expresan simultáneamente los dos alelos, existiendo
codominancia.
 

    El cruzamiento de dos heterocigotos (Aa x Aa) produce una F2 con tres clases individuos,
1/4 AA con una sola isoenzima (monómero a), 1/2 Aa con dos isoenzimas (monómeros a y
b) y 1/4 aa con otra isoenzima de menor migración (monómero b). En este caso, los dos
homocigotos presentan apariencias externas diferentes a las de los heterocigotos. La
segregación obtenida en la F2 se corresponde con la de un locus con dos alelos
codominantes.
3.- Un locus con dos alelos codominantes (A=a) y estructura cuaternaria dimérica.
 
El alelo A lleva información para el polipéptido a y el alelo a para la cadena
polipeptídica b. Supondremos que dos cadenas polipeptídicas se asocian al azar para
formar dímeros activos. Los homocigotos AA (parental P1) tienen solamente cadena a y
forman dímeros aa, tienen una isoenzima de migración rápida. Los homocigotos aa
(parental P2) poseen sólo cadena b y producen dímeros bb, poseen una isoenzima de
migración lenta. Hemos supuesto que los dímeros aa y bb muestran diferente migración
electroforética. El cruzamiento de ambos parentales origina una F1 heterocigótica (Aa) que
tiene simultáneamente cadena a y cadena b, por tanto, la asociación al azar de ambos
polipéptidos producirá tres clases de dímeros: aa, ab y bb. Si suponemos que a y b se
producen en igual cantidad (a:b relación 1:1), el heterodímero (ab+ba) es el doble de
probable que los homodímeros aa o los bb. 
 

    Por consiguiente, los individuos de la F1 presentan tres isoenzimas (dímeros) diferentes,
dos de ellas tienen la misma migración que las que muestran los parentales por separado
(los homodímeros) y, la otra muestra una migración intermedia entre ambas,
correspondiendo al heterodímero. Las intensidades relativas de las tres isoenzimas
presentes en los heterocigotos son 1:2:1 de mayor a menor migración electroforética,
respectivamente. 
 
    Los alelos A y a se están expresando simultáneamente en los heterocigotos (Aa)
existiendo, por tanto, codominancia. Si comparamos los patrones isoenzimáticos de los
individuos de la F1 cuando la estructura cuaternaria es monomérica y dimérica, llegaremos
a la conclusión de que en el primer caso (monómeros), los heterocigotos (Aa) de la F1 no
muestran bandas nuevas de migración intermedia entre las de los parentales, mientras que
en el segundo (dímeros), se observa una banda nueva de migración intermedia entre las de
los parentales.
    El cruzamiento de dos heterocigotos (Aa x Aa) produce una F2 con tres clases
individuos, 1/4 AA con una sola isoenzima (dímero aa), 1/2 Aa con tres isoenzimas
(dímeros aa, aby bb) y 1/4 aa con otra isoenzima de menor migración (dímero bb). Los
homocigotos (AA y aa) tienen apariencias externas distintas a la de los heterocigotos (Aa).
La segregación observada en la F2 corresponde a la de un locus con dos alelos
codominantes.
 4.- Un locus con dos alelos codominantes (A=a) y estructura cuaternaria tetramérica.
 
     El alelo A lleva información para el polipéptido a y el alelo a para la cadena
polipeptídica b. Supondremos que cuatro cadenas polipeptídicas se asocian al azar para
formar tetrámeros activos. Los homocigotos AA (parental P1) tienen solamente cadena a y
forman tetrámeros aaa, tienen una isoenzima de migración rápida. Los homocigotos aa
(parental P2) poseen sólo cadena b y producen tetrámeros bbbb, poseen una isoenzima de
migración lenta. Hemos supuesto que los tetrámeros aaaa y bbbb muestran diferente
migración electroforética. 
 
    El cruzamiento de ambos parentales origina una F1 heterocigótica (Aa) que tiene
simultáneamente cadena a y cadena b, por tanto, la asociación al azar de ambos
polipéptidos producirá cinco clases de tetrámeros: aaaa, aaab , aabb, abbb y bbbb. Si
suponemos que a y b se producen en igual cantidad (a:b relación 1:1), los
heterotetrámeros aaab y abbb son cuatro veces más probables que los homotetrámeros
aaaa o los bbbb ya que existen cuatro posibles heterotetrámeros del tipo aaab
(aaab+aaba+abaa+baaa) y otros cuatro del tipo abbb (abbb+babb+bbab+bbba).
De igual forma, el heterotetrámero que posee dos cadenas a y dos b (aabb) es seis veces
más probable que los homotetrámeros ya que existen seis posibles heterotetrámeros con dos
cadenas de tipo a y dos de tipo b (aabb+abab+abba+baab+baba+bbaa). 
    Por consiguiente, los individuos de la F1 presentan cinco isoenzimas (tetrámeros)
diferentes, dos de ellas tienen la misma migración que las que muestran los parentales por
separado (los homotetrámeros) y, las otras tres muestran una migración intermedia entre
ambas, correspondiendo a los heterotetrámeros. Las intensidades relativas de las cinco
isoenzimas presentes en los heterocigotos son 1:4:6:4:1 de mayor a menor migración
electroforética, respectivamente. 
 
    Los alelos A y a se están expresando simultáneamente en los heterocigotos (Aa)
existiendo, por tanto, codominancia. Si comparamos los patrones isoenzimáticos de los
individuos de la F1 cuando la estructura cuaternaria es monomérica, dimérica y tetramérica,
llegaremos a la conclusión de que en el primer caso (monómeros), los heterocigotos (Aa) de
la F1 no muestran bandas nuevas de migración intermedia entre las de los parentales, en el
segundo (dímeros), se observa una banda nueva de migración intermedia entre las de los
parentales, y en el tercer caso (los tetrámeros) los heterocigotos muestran tres bandas
nuevas de migración intermedia entre las de los parentales.
    El cruzamiento de dos heterocigotos (Aa x Aa) produce una F2 con tres clases
individuos, 1/4 AA con una sola isoenzima (tetrámero aaaa), 1/2 Aa con cinco isoenzimas
(tetrámeros aaaa, aaab , aabb, abbb y) y 1/4 aa con otra isoenzima de menor
migración (tetrámeros bbbb). Los homocigotos (AA y aa) tienen apariencias externas
distintas a la de los heterocigotos (Aa). La segregación observada en la F2 corresponde a la
de un locus con dos alelos codominantes.
    Hasta el momento, hemos considerado que las isoenzimas analizadas se ajustaban a
situaciones sencillas de control genético. En todos los casos, hemos supuesto la existencia
de un solo locus. A partir de ahora, vamos a complicar un poco nuestro estudio y vamos a
tener en cuenta que las isoenzimas analizadas pueden estar controladas por dos loci
independientes, es decir, por dos loci situados en cromosomas distintos o en el mismo
cromosoma pero muy lejos. En cualquier caso, supondremos que ambos loci (A,a y B,b) se
combinan de forma independiente según la Tercera Ley de Mendel.
Resumen del método utilizado por Mendel (cruzamientos en los que segregan dos
loci).
    Obtención de la primera generación filial (F1 con genotipo AaBb) entre dos líneas puras
homocigóticas (P1 con genotipo AABB y P2 con genotipo aabb). Autofecundación o
cruzamiento de dos individuos de la F1 para conseguir la segunda generación filial (F2).
    Observando la apariencia externa (fenotipo) de los individuos de la F1 (AaBb) es posible
deducir las relaciones de dominancia o codominancia de los alelos A y a y los alelos B y b
que controlan los caracteres estudiados. Si el fenotipo (patrón isoenzimático) de la F1 es
uniforme e igual al de uno de los parentales (P1 o P2) se trata de un caso de dominancia, si el
alelo A domina sobre a (A>a) y el B sobre el b (B>b) la F1 tiene el mismo aspecto que el
parental P1(Primera Ley de Mendel o Principio de la Uniformidad).
    Si en los individuos de la F1 se expresan al mismo tiempo los alelos A y a y los alelos B y
b, se dice que existe codominancia en ambos loci (A=a, B=b) y su fenotipo (patrón
isoenzimático) es diferente al de los dos parentales (P1 y P2).
    En la segunda generación filial (F2) se observan individuos de nueve genotipos distintos
en las siguientes proporciones: 1/16 AABB + 2/16 AABb + 1/16 Aabb + 2/16 AaBB + 4/16
AaBb + 2/16 Aabb + 1/16 aaBB + 2/16 aaBb + 1/16 aabb . Estas proporciones se obtienen
de la combinación independiente de lo que le sucede a cada locus por separado (1/4 AA +
1/2 Aa + 1/4 aa) X (1/4 BB + 1/2 Bb + 1/4 bb). Cuando existe dominancia completa en
ambos loci (A>a, B>b) en la F2 se observan cuatro fenotipos diferentes con las siguientes
proporciones: 9/16 AB, 3/16 Ab, 3/16 aB y 1/16 ab. En este caso no es posible distinguir a
los homocigotos dominantes de los heterocigotos en cada locus. Esta segregación fenotípica
también procede de la combinación independiente de lo que le sucede a cada locus por
separado, (3/4 A + 1/4 a)X (3/4 B + 1/4 b). (Tercera Ley de Mendel o Principio de la
Combinación Independiente).
    Sin embargo, si entre los alelos A y a existe una relación de codominancia (A=a), y entre
los alelos B y b también (B=b), en la F2 encontraremos nueve fenotipos distintos (patrones
isoenzimáticos), tantos como genotipos diferentes y con las mismas proporciones: 1/16
AABB + 2/16 AABb + 1/16 Aabb + 2/16 AaBB + 4/16 AaBb + 2/16 Aabb + 1/16 aaBB +
2/16 aaBb + 1/16 aabb . En este último caso, a cada genotipo le corresponde una apariencia
externa distinta.
5.- Dos loci independientes con dos alelos con dominancia completa en cada locus
(A>a) (B>b) y estructura cuaternaria monomérica.
 
    Supondremos que el alelo A lleva información para el polipéptido a mientras que el alelo
a es un nulo que no lleva información para cadena polipeptídica alguna. De igual forma,
aceptaremos que el alelo B lleva información para el polipéptido b mientras que el alelo b
es un alelo nulo que no codifica para cadena polipeptídica alguna. La migración del
polipéptido a es más rápida que la del polipéptido b, de forma que los homocigotos AAbb
muestran una isoenzima o monómero correspondiente al polipétido a. Sin embargo, los
homocigotos aaBB presentan una isoenzima de menor migración correspondiente al
monómero b. El cruzamiento de los homocigotos AAbb por aaBB da lugar a una F1
heterocigótica (AaBb) que presenta al mismo tiempo los monómeros a y b. Es decir, los
individuos de la F1 muestran al mismo tiempo los monómeros a y b observados por
separado en los parentales homocigóticos, tratándose, por lo tanto, de dominancia completa
en ambos loci (A>a y B>b). 
 

    El cruzamiento de dos diheterocigotos AaBb x AaBb origina una F2 formada por cuatro
clases de descendientes. Se observan individuos con dos isoenzimas o monómeros
(monómero a y monómero b) de igual aspecto que los individuos de la F1 (AaBb), dichos
individuos tienen al menos un alelo A y otro B, siendo, por tanto, su genotipo A-B-.
También, se obtienen en esta F2 individuos que poseen solamente el monómero a y que
tienen al menos un alelo A (genotipo A-bb) e individuos que solamente poseen una
isoenzima (el monómero b) teniendo al menos un alelo B (genotipo aaB-). Por ultimo, en
esta F2 se obtienen también individuos que no presentan ninguna isoenzima o monómero,
dichos individuos son homocigotos para los dos alelos nulos (aabb). Si tenemos en cuenta
que los loci A,a y B,b son independientes, es decir, que se encuentran en cromosomas
diferentes o en el mismo cromosoma pero muy alejados entre si, las proporciones con las
que se observan estos cuatro tipos de descendientes en la F2 es la siguiente: 9/16 A-B-, 3/16
A-bb, 3/16 aaB- y 1/16 aabb. Se cumple la segregación correspondiente a la 3ª ley de
Mendel o Principio de la Combinación Independiente 9 AB: 3 Ab : 3 aB : 1 ab.
   Es importante hacer notar que los patrones isoenzimáticos observados en este caso
son idénticos a los descritos para el caso de un locus con dos alelos codominantes (A=a) y
estructura cuaternaria monomérica. La única diferencia es que cuando se trata de dos loci
(A,a y B,b) con dominancia completa (A>a y B>b), en la F2 aparecen individuos que
carecen simultáneamente de las dos isoenzimas o monómeros a y b. Por consiguiente, para
decidir si se trata de un locus con dos alelos codominantes y estructura cuaternaria
monomérica o si se trata de dos loci con dominancia completa y estructura también
monomérica, es necesario observar en la F2 individuos que carezcan simultáneamente de
ambos monómeros, es decir, individuos sin isoenzimas. Cuando los loci analizados son
independientes, es relativamente fácil encontrar en la F2 individuos sin los dos monómeros,
ya que la proporción esperada es 1/16. Sin embargo, si ambos loci están situados sobre el
mismo cromosoma y muy cerca (están estrechamente ligados), la probabilidad de obtener
en la F2 individuos que carezcan de ambas isoenzimas o monómeros es muy baja. De
manera que para una distancia genética de 10 Morgan (Fracción de recombinación r=0,1) y
un total de 200 descendientes (N=200), solamente 1/4 p2 N carecerán de ambos
monómeros, es decir, ni si quiera se espera un individuo del tipo aabb, ya que 1/4 x (0,1)2
x 200 = 0,5. En tal situación (cuando no observamos individuos aabb), interpretaríamos que
las isoenzimas estudiadas son monómeros controlados por un solo locus con dos alelos
activos y codominantes.
 6.- Dos loci independientes con dos alelos codominantes cada locus (A=a y B=>b) y
estructura cuaternaria monomérica.
 
    En este caso, los alelos A y a dan lugar a polipéptidos activos, el alelo A lleva
información para la cadena polipeptídica a y el alelo a para la b. Los alelos B y b llevan
información para los polipéptidos activos d y g, respectivamente. Supondremos, para
facilitar la comprensión, que todos los monómeros presentan distinta migración, y que los
monómeros a y b muestran una mayor migración electroforética que los d y g. Los
homocigotos AABB tienen las isoenzimas o monómeros a y d, mientras que los
homocigotos aabb poseen los monómeros b y g. El cruzamiento de ambos homocigotos
(AABB x aabb) origina una F1 diheterocigótica que presenta simultáneamente las cuatro
isoenzimas o monómeros (a, b, d y g). Por tanto, en ambos loci los alelos son
codominantes (A=a y B=b), ya que en el heterocigoto se expresan simultáneamente ambos
alelos. Una de las características de la codominancia es que a cada genotipo le corresponde
un fenotipo o apariencia externa distinta, de manera que los homocigotos son distintos de
los heterocigotos. 
 

    El cruzamiento de dos diheterocigotos (AaBb x AaBb) da lugar a una F2 constituida por
nueve clases de individuos diferentes, tantas como genotipos distintos. Los nueve genotipos
diferentes de esta F2 se obtienen combinando de forma independiente lo que le sucede a
cada locus por separado, de manera, que en el locus A,a se observan tres clases de
individuos en las proporciones 1/4 AA + 1/2 Aa + 1/4 aa; en el locus B,b se obtienen
también tres clases de individuos en las proporciones 1/4 BB + 1/2 Bb + 1/4 bb. La
combinación independiente de ambos loci (1/4 AA + 1/2 Aa + 1/4 aa) X (1/4 BB + 1/2 Bb +
1/4 bb) da como resultado la siguiente segregación en la F2: 1/16 AABB + 2/16 AABb +
1/16 Aabb + 2/16 AaBB + 4/16 AaBb + 2/16 Aabb + 1/16 aaBB + 2/16 aaBb + 1/16 aabb.
En esta F2, como se puede observar, existen nueve fenotipos diferentes correspondientes a
los nueve genotipos anteriormente mencionados. Además, los individuos de la F2 muestran
dos, tres o cuatro monómeros. Los homocigotos para ambos loci presentan dos isoenzimas:
a y d (AABB), a y g (AAbb), b y d (aaBB) o b y g (aabb). Los diheterocigotos tienen
cuatro isoenzimas o monómeros, como los individuos de la F1: a, b, d y g. Los
homocigotos para un locus y heterocigotos para el otro locus presentan tres monómeros:
AABb (a, d y g), aaBb (b, d y g), AaBB (a, b y d) y Aabb (a, b y g).

    La segregación obtenida en la F2 corresponde a la esperada cuando los loci analizados

son independientes, es decir, cuando se encuentran situados en cromosomas distintos o en
el mismo cromosoma pero muy lejos. En el caso de que se comporten como estrechamente
ligados (están en el mismo cromosoma y muy juntos) las proporciones relativas de los
diferentes individuos son distintas a las obtenidas en independencia.
7.- Dos loci independientes con dos alelos codominantes cada locus (A=a y B=>b) y
estructura cuaternaria dimérica.
 
    Supondremos que los alelos codominantes A y a llevan información para los polipéptidos
a y b, mientras que los alelos codominantes B y b codifican para los polipéptidos d y g.
Igualmente, imaginaremos que los cuatro homodímeros posibles (aa, bb, dd y gg)
presentan distinta migración sobre los geles, los homodímeros aa y bb mayor migración
que los homodímeros dd y gg. También supondremos que ambos loci A,a y B,b codifican
para isoenzimas con la misma localización subcelular, por consiguiente, pueden aparecer
heterodímeros entre los polipéptidos codificados por alelos de distinto locus, es decir,
heterodímeros ad o ag o bd o bg. En tal situación, los homocigotos AABB muestran los
dímeros aa, ad y dd; y los homocigotos aabb tienen los dímeros bb, bg y gg. El
cruzamiento de ambos homocigotos (AABB x aabb) da lugar a una F1 diheterocigótica que
presenta nueve bandas distintas, las mismas que se observan en los parentales por separado
y tres nuevas de migración intermedia. Cada una de las bandas de la F1 corresponde a un
dímero diferente, excepto la banda central que se debe a la superposición de dos
heterodímeros con igual migración (ag+bd). 
 

    Debido a que existe codominancia entre los alelos de los loci A,a y B,b y a que se
producen heterodímeros entre las cadenas polipeptídicas codificadas por alelos de
diferentes loci, en los diheterocigotos se producen 10 dímeros distintos que de mayor a
menor migración originan nueve bandas aa, ab, bb, ad, (ag+bd), ag, dd, dg y gg. Las
intensidades relativas de estas nueve bandas se obtienen recordando que los heterodímeros
tienen doble probabilidad que los homodímeros y que la banda central es la superposición
de dos heterodímeros, por tanto, las intensidades relativas de las nueve bandas aa, ab, bb,
ad, (ag+bd), ag, dd, dg y gg son 1:2:1:2:4:2:1:2:1, respectivamente.
   El cruzamiento de dos diheterocigotos (AaBb x AaBb) origina una F2 constituida por
nueve tipos de descendientes. Los nueve genotipos diferentes de esta F2 se obtienen
combinando de forma independiente lo que le sucede a cada locus por separado, de manera,
que en el locus A,a se observan tres clases de individuos en las proporciones 1/4 AA + 1/2
Aa + 1/4 aa; en el locus B,b se obtienen también tres clases de individuos en las
proporciones 1/4 BB + 1/2 Bb + 1/4 bb. La combinación independiente de ambos loci (1/4
AA + 1/2 Aa + 1/4 aa) X (1/4 BB + 1/2 Bb + 1/4 bb) da como resultado la siguiente
segregación en la F2: 1/16 AABB + 2/16 AABb + 1/16 Aabb + 2/16 AaBB + 4/16 AaBb +
2/16 Aabb + 1/16 aaBB + 2/16 aaBb + 1/16 aabb. Los homocigotos para ambos loci
muestran tres dímeros AABB (aa, ad y dd), aabb (bb, bg y gg), AAbb (aa, ag y gg) y
aaBB (bb, bd y dd). Los diheterocigotos (AaBb) muestran el mismo patrón isoenzimático
que los individuos de la F1, nueve isoenzimas. Los homocigotos para un locus y
heterocigotos en el otro tienen seis dímeros con las intensidades relativas indicadas en cada
caso: 1aa:2ab:1bb:4ad:4bd:4dd en los individuos AaBB, 1aa:2ab:1bb:4ag:4bg:4gg
para los Aabb, 4aa:4ad:4ag:1dd:2dg:1gg en AABb y 4bb:4bd:4bg:1dd:2dg:1gg en
los individuos aaBb.
    La segregación obtenida en la F2 corresponde a la esperada en caso de independencia, es
decir, cuando los loci se encuentran situados en cromosomas distintos o en el mismo
cromosoma pero muy lejos. En el caso de ligamiento estrecho (ubicados en el mismo
cromosoma y muy juntos), las proporciones relativas de los diferentes individuos son
distintas a las obtenidas en independencia.
   En el supuesto de que los loci analizados codificaran para isoenzimas con diferente
localización subcelular, por ejemplo, el locus A,a para isoenzimas situadas en la
mitocondria y el locus B,b para isoenzimas ubicadas en el citoplasma, los patrones
isoenzimáticos serian más sencillos, ya que no se observarían heterodímeros entre los alelos
correspondientes a polipéptidos con diferente localización subcelular. Los homocigotos
para ambos loci solamente mostrarían dos homodímeros y los diheterocigotos (AaBb)
tendrían solamente seis dímeros o bandas distintas en vez de las nueve bandas y 10 dímeros
descritos en el caso anterior. Los homocigotos en un locus y heterocigotos en el otro
presentarían cuatro isoenzimas en vez de las seis observadas en el ejemplo anterior.
8.- Series alélicas y cruzamientos entre individuos heterocigotos para distintos alelos
de un mismo locus.
   Hasta el momento, hemos considerado que en cada uno de los loci analizados
existían solamente dos alternativas o alelos. Sin embargo, cuando se llevan a cabo análisis
isoenzimáticos en poblaciones es frecuente encontrar que en un locus existen más de dos
alelos o formas alternativas. Una serie alélica tiene lugar siempre que existen más de dos
alelos en un mismo locus, el ejemplo típico de serie alélica es el sistema ABO de grupos
sanguíneos en la especie humana.
   El número total de genotipos diferentes que se pueden encontrar en una población
para un locus en el que existen n alelos es:
 
; CR = Combinaciones con repetición
CR = n(n+1)/2

   El número total de genotipos homocigóticos distintos es n (tantos como alelos

diferentes), y el número de genotipos heterocigóticos es:
 
(n-1)/2 ; C = Combinaciones
C=n

 
   Si nos imaginamos un locus con cuatro alelos codominantes (A1,A2, A3 y A4),
tendremos un total de 10 genotipos distintos, de los cuales cuatro son homocigotos (A1A1,
A2A2, A3A3 y A4A4) y seis son heterocigotos (A1A2, A1A3, A1A4, A2A3, A2A4, y A3A4). El
número de fenotipos distintos es igual que el de genotipos ya que existe codominancia.

   Hasta ahora, para averiguar el control genético de las isoenzimas estudiadas,

siempre hemos supuesto que la F2 se obtenía mediante el cruzamiento de dos heterocigotos
idénticos (Aa x Aa). Sin embargo, cuando en el locus analizado existen más de dos alelos,
en muchos casos se pueden realizar cruzamientos entre individuos heterocigóticos para
distintos alelos. Por ejemplo, A1A2 x A1A3 o A1A2 x A3A4.
   Para comprender mejor lo que sucede en este tipo de cruzamientos, vamos a suponer
en todos los casos que se trata de un locus en el que existen cuatro alelos distintos y
codominantes (A1, A2, A3 y A4) que codifican para cuatro cadenas polipeptídicas con
diferente migración electroforética (a, b, d y g, respectivamente). Igualmente, para
comenzar supondremos que la estructura cuaternaria activa de nuestra enzima es
monomérica.
   En la descendencia de un cruzamiento entre individuos heterocigóticos para alelos
diferentes (A1A2 x A3A4) nos encontraremos cuatro clases de descendientes en igual
proporción. A este resultado se llega pensando que uno de los heterocigotos parentales
(A1A2) produce dos clases de gametos en igual proporción, 1/2 A1 + 1/2 A2; y el otro
heterocigoto origina también otros dos tipos de gametos en igual cantidad 1/2 A3 +1/2 A4. 
 

    Por tanto, la descendencia se obtiene combinando de forma independiente los gametos
producidos por cada parental (1/2 A1 + 1/2 A2) X (1/2 A3 +1/2 A4) = 1/4 A1A3 + 1/4 A1A4 +
1/4 A2A3 + 1/4 A2A4. Como se puede observar, a pesar de tratarse de la segregación de un
solo locus, aparecen cuatro clases de descendientes, y además todos son heterocigóticos con
dos bandas y con un patrón isoenzimático diferente al de sus padres.
   También es posible realizar cruzamientos entre heterocigotos que tienen un alelo
común (por ejemplo A1), siendo los otros diferentes (A1A2 X A1A3). La descendencia que se
obtiene también está formada por cuatro clases de individuos en igual proporción, (1/2 A1 +
1/2 A2) X (1/2 A1 +1/2 A3) = 1/4 A1A1 + 1/4 A1A3 + 1/4 A2A1 + 1/4 A2A3), aunque entre
ellos hay homocigotos.
 

   Si las isoenzimas que estamos analizando tienen estructura cuaternaria dimérica o

tetramérica, y seguimos suponiendo que están controladas por un solo locus con cuatro
alelos que codifican para cadenas polipeptídicas con distintas migraciones electroforéticas,
los resultados serian semejantes a los anteriores, cambiando simplemente el patrón
isoenzimático presentado por los descendientes.
En la descendencia de un cruzamiento entre individuos heterocigóticos para alelos
diferentes (A1A2 x A3A4) que codifican para cadenas polipeptídicas (a, b, d y g ) que dan
lugar a isoenzimas diméricas, nos encontraremos cuatro clases de descendientes en igual
proporción, (1/2 A1 + 1/2 A2) X (1/2 A3 +1/2 A4) = 1/4 A1A3 + 1/4 A1A4 + 1/4 A2A3 + 1/4
A2A4. Estos descendientes son todos heterocigóticos y muestran tres bandas (dos
homodímeros en los extremos y un heterodímero de migración intermedia entre ambos
homodímeros).
 
    En la descendencia de un cruzamiento entre individuos heterocigóticos para alelos
diferentes (A1A2 x A3A4) que codifican para cadenas polipeptídicas (a, b, d y g ) que dan
lugar a isoenzimas tetraméricas, nos encontraremos cuatro clases de descendientes en igual
proporción, (1/2 A1 + 1/2 A2) X (1/2 A3 +1/2 A4) = 1/4 A1A3 + 1/4 A1A4 + 1/4 A2A3 + 1/4
A2A4. Estos descendientes son todos heterocigóticos y muestran cinco bandas (dos
homotetrámeros en los extremos y tres heterotetrámeros de migración intermedia entre
ambos homotetrámeros).