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Qual diferença entre fenol e trizol para isolamento de RNA, DNA e proteínas

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Published by Eme Cê
Por que o uso do fenol ou do Trizol para isolar RNA DNA e proteinas.Uns dizem que trizol isola DNA e fenol isola DNA(ou o contrário?)...não é bem assim
Por que o uso do fenol ou do Trizol para isolar RNA DNA e proteinas.Uns dizem que trizol isola DNA e fenol isola DNA(ou o contrário?)...não é bem assim

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 UFT
CAMPUS GURUPIFUNDAMENTOS DE GENÉTICA VOLTADOS À BIOTECNOLOGIA
PROFESSOR RAIMUNDO WAGNERASSUNTO: QUAL A DIFERENÇA DE PROPRIEDADES ENTRE FENOL E TRIZOL USADOS NASTÉCNICAS DE ISOLAMENTO DE DNA, RNA E PROTEÍNAS.ALUNA: MAUREN SILVEIRA
 
PROPRIEDADES DE SOLUÇÕESCLOROFÓRMIO (ÁLCOOL ISOAMÍLICO) (E/OUFENOL)
y
 
Os ácidos nucléicos devem ser separados das proteínas. Desnaturam as proteínastornando-as insolúveis à fase aquosa.
y
 
A utilização de solução fenol/clorofórmio seguida de clorofórmio /álcool isoamílico éusada para remover qualquer traço de fenol remanescente. Nesse processo asproteínas desnaturadas ficam na interface das fases fenólica e aquosa. 
TRIZOL
y
 
Mantém intacto o RNA, enquanto degrada os outros componentes celulares. Analisando os 4 métodos que utilizam trizol e fenol: Isolamento de RNA pelo trizol,isolamento de DNA pelo trizol, isolamento de proteína pelo trizol e isolamento de DNAde eucariotos, ficará mais clara a diferença e propriedades destes dois compostos: 
ISOLAMENTO DE RNA PELO MÉTODO TRIZOL
Reagente para isolamento de RNA de células e tecidos.É composto por uma solução mono fásica de fenol e guanidina isotiocianato.Foi desenvolvido por Chomezynski e Sacchi.Durante a homogeneização da amostra ou lise, o reagente Trizol mantém a integridade doRNA durante a ruptura celular e dissolvimento dos componentes celulares.
A adição de clorofórmio seguido de centrifugação separa a solução em duas fases: aquosa eorgânica. O RNA permanece exclusivamente na fase aquosa.
y
 
Após a transferência da fase aquosa, o RNA é recuperado por precipitação comálcool isopropílico.
y
 
Depois de removida a fase aquosa, o DNA e proteínas na amostra podem serrecuperados por precipitação seqüencial.
 
y
 
A precipitação com álcool etanol resulta DNA a partir da interfase, e umaprecipitação adicional com álcool isopropílico resulta proteínas a partir da faseorgânica.
Co-purificação do DNA pode ser útil na normalização de RNAs produzidos de amostra paraamostra.Essa técnica é bem executada com pequenas quantidades de tecido (50 - 100 mg) e células(5x10
6
), e abundantes quantidades de tecido (> 1 g) e célula (> 10
7
), de humanos, animais,plantas ou origem bacteriana.Todo processo pode ser completado em uma hora.
O RNA total isolado por Trizol é livre de contaminação protéica e DNA.Isto pode ser útil para ser usado em análise por Northem blot,hibridização Dot blot, seleção poli (A), translação in vitro, teste deproteção de RNAse e clone molecular.
Para uso no PCR, o tratamento do isolado de RNA com amplificação gradual de DNAse I érecomendado quando os dois primers posicionam-se dentro de um só exon.
O reagente Trizol facilita o isolamento de uma variedade de espécies de RNA de grande oupequeno tamanho molecular.
Por exemplo, o RNA isolado de fígado de rato, eletroforesadono gel de agarose, e corado com brometo de etídeo, mostra discreta banda de alto pesomolecular de RNA entre 7 Kb e 15 Kb no tamanho, (composto de RNAm e RNAhn) duas bandaspredominantes de RNA ribossomal de aproximadamente 5 Kb (28 S) e de aproximadamente 2Kb (18 S), e RNA de baixo peso molecular entre 0,1 e 0,3 Kb (RNAt, 5 S). O isolado de RNAtinha na A
260
/A
280
razão de > 1.8 quando diluído em TE.
Reagentes para a técnica:
ClorofórmioÁlcool IsopropílicoÁgua livre de RNAse ou solução SDS 0,5% ( Para preparar água livre de RNAse, extrair água emgarrafas de vidro livre de RNAse. Adicionar DEPC 0,01% (v/v). Deixar parado durante a noite eautoclavar. A solução de SDS pode ser preparada usando DEPC tratado e água autoclavada).

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