‫مقرر ميكروبيولوجيا المياه والصرف الصحى‬

‫]‬
‫[الدروس العملية]‬

‫‪Dr.Taha Abdel-Fattah khodair‬‬

‫[‪1431‬‬

‫مقدمــة‬
‫نظراً ألن الماء يعتبر عامالً هاما في حياه اإلنسان لذلك يجب حمايته والمحافظــة عليه‬
‫من التلوث‪ .‬ومن مظاهر تلوث مصادر المياه وجود تيفود وبائي أو ظهور سمك ميت‬
‫علي شواطي البحيرة ‪ ،‬ويحدث هذا التلوث نتيجة إللقاء المخلفات في المياه مما يسبب‬
‫تغيرات جوهرية وضارة في أنواع وأعداد ونشاط الميكروبات الموجود بالوسط المائي‬
‫‪.‬‬
‫ولكي نتمكن من مراقبة االستخدام السليم للمياه يجب ان تكون لدينا طرق ووسائل‬
‫للكشف علي التلوث وقياسه‪.‬‬
‫التحليل القياسي للمياه‬
‫للكشف عن صالحية المياه للشرب البد من إجراء مجموعة من التحاليل المعملية حتي‬
‫يمكن الحكم علي مدي صالحية هذه المياه للشرب وهذه التحاليل تتمثل في‪.‬‬
‫اوالً ‪ :‬الفحص البكتريولوجي ‪-:‬‬
‫والهدف األساسي من هذه التحاليل هو معرفة ما إذا كانت مصادر المياه تحتوي علي‬
‫ميكروبات برازيــة ( وليست بالضرورة أن تكون مرضيــة ) حيث يؤخذ وجود هذه‬
‫الميكروبات البرازيــة كدليل علي تلوث المياه بالمخلفات اآلدميــه أو الحيوانية وبصفة‬
‫عامة فإن الميكروبات التي يبحث عنها هي بكتريا القولون و هي المجموعة التي تشمل‬
‫كل الميكروبات الهوائية واالختيارية والتي تتميز بأنها عصويات قصيرة مستقيمة‬
‫سالبة جرام – غير متحركة – تخمر سكر الالكتوز مع أنتاج غاز‪.‬‬

‫ثانياً‪ :‬الفحص أو التحليل الكيمائي ‪-:‬‬

‫وفي هذا النوع من التحليالت يتم قياس العناصر واالينونات التي يدل وجودها بتركيز‬
‫عالي علي تلوث المياه مما يؤدي لإلضرار بصحة اإلنسان والحيوان والنبات‪.‬‬
 ‫حيث يتم قياس ‪-:‬‬
‫‪ -1‬تقدير األمالح الكلية الذائبـة بطريقة التوصيل الكهربى ‪E.C‬‬
‫‪ -2‬تقدير رقم الحموضة ‪.‬‬
‫‪ -3‬تقدير انيونات الكربونات و البيكربونات و الكلوريدات‪.‬‬
‫‪ -4‬تقدير الكبريتات‪.‬‬
‫‪ -5‬تقدير المادة العضوية والنيتروجين‪.‬‬
‫باالضافة إلي قياس بعض العناصر الضارة عند وجودها بتركيز عالي في عينة المياه‬
‫مثل عنصر البورون – الموليبيدنم – الرصاص ‪ ..‬الخ‬
‫من خالل مجموعة التحليالت السابقة يمكن الوقوف علي مدي صالحية المياه للشرب‬
‫وذلك من خالل الجداول القياسية الخاصة بنسب هذه العناصر في المياه‪.‬‬
‫اوأل‪ :‬الفحص البكتريولوجي للمياه‪.‬‬
‫الطرق المتبعـة لتقدير اعداد البكتريا في الماء ال يعطي اإل جزء من العدد الفعلي‬
‫للكائنات ألن معظم الميكروبات ال تنمو علي البيئة المستخدمــة واليهمنا العدد الكلي‬
‫بدرجة كبيرة مثل ما يهمنا بوجه خاص تواجد مجموعة بكتريا القولون التي قد تصل‬
‫إلي المياه عن طريق التلوث بمياه المجاري ولذلك فإنة الختبار صالحية عينه المياه‬
‫الغراض الشرب واالستخدام المنزلي ولالستخدام في المصانع يجري عليها اآلتي‪.:‬‬
‫العد الكلي للميكروبات في عينة المياه‪ ...........‬اختبار تلوث العينة بمياه المجاري‬
‫* طريقة اخذ العينات للتحليل‬
‫الشروط الواجب أخذها في االعتبار عند أخذ عينة مياه للتحليل‪.‬‬
‫‪ -1‬يجب أن تمثل العينة مصدر المياه المطلوب فحصه‪.‬‬
‫‪ -2‬يجب أخذ االحتياطات الالزمــة لعدم تلوث العينة أثناء أخذها‪.‬‬
‫‪ - 3‬عند أخذ العينة من ماء الحنفية يالحظ تعقيم فوهـة الحنفية باستخدام اللهب مع ترك‬
‫الحنفية مفتوحـة قبل اخذ العينة لمدة ‪ 5‬دقائق‪.‬‬
‫‪ -4‬عند اخذ العينة من ترعة أو نهر أو أي مصدر مياه أخر فإنه يجب أن تؤخذ من‬
‫تحت سطح الماء وذلك بفتح غطاء الزجاجة المعقمــة تحت سطح الماء‪.‬‬
‫‪ - 5‬إذا كانت من مياه الطلمبات تترك الطلمبــة تعمل فترة من الزمن تكفي للتخلص‬
‫من المياه المخزنــة بالمواسير وذلك قبل أخذا العينة‪.‬‬
‫‪ -6‬إذا كانت من مياه معاملة بالكلور يوضع في زجاجة جمع العينات ‪ 0.02‬جم‬
‫مسحوق ثيو سلفات الصوديوم لكل لتر ‪ ،‬حيث تتحد هذه المادة مع الكلور المتبقي‬
‫بالمياه فتوقف تأثيره‪.‬‬
‫‪ - 7‬يجب أن تجري األختبارات البكتريولوجية مباشرة بعد أخذ العينة وإذا وجد أن‬
‫الزمن سوف يزيد عن ‪ 3‬ساعات تحفظ العينات في ثالجــة من ‪ 5‬إلي ‪ 10‬درجة مئوية‬
‫لمنع حدوث أي تغير بالعينــة‪.‬‬
‫*العد الكلي للبكتيريا بالماء كدليل علي صالحيته للشرب‬
‫تعتبر المقياس االمريكية أن الماء صالحا للشرب إذا أحتوي علي عدد كلي من البكتريا‬
‫أقل من ‪ 100‬ميكروب ملي مقدرة بطريقة االطباق علي بيئة االجار ‪ ،‬المحضن علي‬
‫درجة ‪ 37‬م لمدة ‪ 24‬ساعة ويختلف العدد الناتج بطبيعة الحال باختالف طريقة اخذ‬
‫العينة وطريقة التقدير ونوع البيئة ودرجة حرارة التحضين وبالنسبة للمياه المعدنية‬
‫فيجب أن ال يزيد عدد البكتريا الكلي عن ‪ 20‬ميكروب \مل وفي المواصفات األمريكية‬
‫‪ ،‬فان الماء الصالح للشرب ‪ ،‬يجب أن يحتوي علي أقل من ‪ 2‬بكتريا كوالي لكل ‪100‬‬
‫مل ماء ‪ ،‬فإذا زاد العدد عن ‪ 100‬كوالي لكل ‪ 100‬مل فإن الماء اليعتبر صالحا‬
‫للشرب‪.‬‬
‫‪ -‬األدوات والمواد المستخدمــة ‪-:‬‬
‫‪ -‬زجاجة عينة مياه معقمــة ‪.‬‬
‫‪ -‬بيئة آجار التربتون والجلوكوز ومستخلص الخميرة ‪.‬‬
‫‪ -‬اطباق بتري وماصات معقمــة ‪.‬‬
‫‪ -‬انابيب مياه مقطره معقمــة بكل انبوبة ‪ 9‬مل ماء ‪.‬‬
‫طريقة العمل ‪-:‬‬
‫‪ -1‬رج عينة المياه جيداً حوالي ‪ 25‬مره‬
‫‪ -2‬انقل بواسطـة ماصة معقــمــة مقدار‪1‬مل من عينة الماء إلي انبوبة بها ‪ 9‬مل ماء‬
‫معقم فيصبح التخفيف ‪1-10‬‬
‫‪ -3‬استمر في عمل سلسلة التخفيفات مع مالحظــة كتابة ارقام التخفيفات علي األنابيب‬
‫مع استعمال ماصـه‬
‫واحدة لكل تخفيف بشرط أن تكون معقمــة‪.‬‬
‫‪ -4‬ينقل من انابيب التخفيف ‪1‬مل إلي أطباق بتري مع ترقيم االطباق بما يتناسب مع‬
‫كل تخفيف حيث يتم عمل طبقين من كل تخفيف مع مالحظــة استخدام ماصات‬
‫معقمـــة لكل تخفيف علي حده أو استعمال ماصة واحدة معقمة على ان يكون النقل من‬
‫التخفيف االعلي إلي االقل‪.‬ـ‬
‫‪ -5‬يلي ذلك صب بيئة آجار التربتون والجلوكوز ومستخلص الخميرة علي االطباق‬
‫وذلك بعد إسالة البيئة و تبريدها الى‪° 55 – 50‬م ثم تحضن االطباق مقلوبة علي‬
‫‪°37‬م لمدة ‪ 48‬ساعة‪.‬‬
‫‪ - 6‬بعد انتهاء مدة التحضين يتم عد مجاميع الميكروبات علي األطباق وتسجيل النتائج‬
‫حيث تستبعد األطباق التي‬
‫بها أقل من ‪ 30‬أواكثر من ‪ 300‬مستعمرة‪.‬‬
‫‪ -7‬خذ المتوسط الحسابي من كل طبقين من تخفيف واحد ثم أضرب في مقلوب‬
‫التخفيف فينتج عدد البكتريا‬
‫في ‪ 1‬مل من العينة‪.‬‬
‫*‪.‬اعداد الميكروبات الكلية في ‪ 1‬مل عينة مياة (‪ =)C.F.U‬متوسط اعداد الميكروبات‬
‫في التخفيف ‪ χ‬مقلوب التخفيف‬
‫‪C.F.U = Colony Forming Unite‬‬
‫*العد الكلي للفطريات بالماء كدليل علي صالحيته للشرب‬
‫نفس الخطوات السابقة ولكن مع تغير البيئة تالغذائية المستخدمة الى بيئة مستخلص‬
‫المولت‬
‫*الكشف عن البكتريا المتجرثمة الالهوائية‬
‫ويتم ذلك بتلقيح بيئة اجار الجلوكوز والتربيتون والحديدوز الصلبة بطريقة الوخز من‬
‫عينة المياة وتحضين تحت الظروف الالهوائية وبعد التحضين يظهر الميكروب‬
‫الالهوائى فى قاع االنبوبة ولون اسود اما اذا استخدم بيئة ال تحتوى على امالح الحديد‬
‫يظهر نمو فى قاع االنبوبة فقط‬
‫*الكشف عن مجموعة القولون ‪Coliform group‬‬
‫يهدف هذا التحليل الى الكشف عن وجود بكتريا القولون فى المياه حيث أن وجودها فى‬
‫أى مصدر مائى يدل على تلوث هذا المصدر بمياه الصرف الصحى ويتكون هذا‬
‫التحليل من ثالثه مراحل اساسيه وهى ‪:‬ـ‬
‫‪ )1‬االختبار االحتمالى ‪Presumptive test‬‬
‫‪ )2‬االختبار التأكيدى )التحقيقى) ‪Confirmatory test‬‬
‫‪ )3‬االختبار التكميلى ‪Completed test‬‬
‫ويتم فى المرحله اآلولى الكشف عن الميكروبات القادره على تخمير سكر الالكتوز مع‬
‫انتاج غاز وهذه احدى الصفات المميزه لبكتريا القولون ‪.‬‬
‫أما فى المرحله الثانيه يؤخذ عينه من االنابيب الموجبه (أى أعطت نمو وكونت غاز‬
‫فى بيئه مرن الالكتوز ‪ ،‬ويلقح هذه العينه فى بيئه انتقائيه ‪ Selective‬تفرق بين‬
‫ميكروبات القولون‬
‫اما فى المرحله االخيره (االختبار التكميلى) فتعزل الميكروبات التى اعطت تفاعالت‬
‫نموذجيه وتنمى فى مزارع نقيه والتى يجب أن تبين الشكل المورفولوجى والخواص‬
‫الفسيولوجيه المميزه لبكتريا القولون وفيما يلى الشرح التفصيلى لهذا التحليل ‪ .‬ويمكن‬
‫إجراء هذا االختبار على عينه من مياه من المنزل أو نهر أوبحيره أو أى مصدر مائى‬
‫يشبه فى تلونه بمياه الصرف الصحى ‪.‬‬
‫أ ) االختبار االحتمالى ‪Presumptive test‬‬
‫‪1‬ـ لقح ‪ 1‬مل من عينه الماء فى عدة أنابيب بكل منها ‪10‬مل بيئة ماكونكى السائلة‬
‫المحتوية على انبوبة درهام‬
‫‪2‬ـ حضن االنابيب على درجه ‪37º‬م ‪2/‬يوم‬
‫‪3‬ـ افحص بعد ‪ 24‬ساعه وبعد ‪ 48‬ساعه واكشف عن وجود غاز فى اى انبوبة بعد‬
‫‪ 24‬ساعه يعنى اختبارا احتماليا موجبا‬
 ‫أما تكون الغاز خالل فتره ال‪ 24‬ساعه التاليه ‪ ،‬فيعتبر إختبارا مشكوكا فيه أماعدم‬
‫تكون غاز بعد ‪ 48‬ساعه من التحضين ‪ ،‬يعنى اختبارا سالبا ‪ ،‬مما يدل على أن عينه‬
‫الماء التحتوى على بكتريا القولون‬
‫ب ) االختبار التأكيدى )التحقيقى) ‪Confirmatory test‬‬
‫يجرى هذا االختبار لكل العينات التى أعطت فى االختبار االحتمالى اختبارات موجبه‬
‫او مشكوكا فيها ‪.‬‬
‫‪ 1‬ـ من انبوبه ماكونكى الموجبه لالختبار االحتمالى ‪ ،‬خطط طبق بيئه أجار األيوسين‬
‫وأزرق الميثلين أوطبق أجار اندو بطريقه مناسبه لتكوين مستعمرات متباعدة تماما‪.‬‬
‫‪ 2‬ـ حضر على درجه‪37º‬م لمده يومين‬
‫إذا تكونت مستعمرات نموذجيه على سطح الطبق خالل فتره التحضير ‪ ،‬فإن االختبار‬
‫التأكيدى يعتبر موجبا‬
‫ج ) االختبار التكميلى‬
‫‪ 1‬ـ من بيئه أجار األيوسين وأزرق الميثيلين أو من بيئه أجار إندو ‪ ،‬اختبر مستعمرتين‬
‫يظهر من شكلهما أنهما من المحتمل جدا أن تكونا لميكروبات مجموعه بكتريا‬
‫القولون ‪ ،‬وانقل كل منهما على سطح أجار مائل ‪ ،‬وإلى أنبوبه بيئه مرق تخمر‬
‫الالكتوز ‪.‬‬
‫(بكتريا القولون ‪ ،‬على بيئة ‪ EMB‬وبيئة أجار إندو ‪ ،‬تعطى مستعمرات غامقه غالبا –‬
‫وليس دائما – وتكون سوداء ذات بريق معدنى فحضر على بيئة ‪ ، EBM‬حمراء ذات‬
‫بريق معدنى أخضر ذهبى على بيئه أجار إندو ‪.‬‬
‫‪2‬ـ حضن على درجه‪º 37‬م لمدة يومين ‪0‬‬
‫‪3‬ـ حضر شرائح من األجار المائل ‪ ،‬واصبغ بصبغة جرام وبصبغه الجراثيم تكون‬
‫الغاز فى مرق الالكتوز ووجود بكتريا عصويه سالبه لجرام غير متجرثمه بمزارع‬
‫األجار ‪ ،‬يعتبر اختبارا تكميليا مرضيا ‪ ،‬يدل على وجود أفراد مجموعة بكتيريا‬
‫القولون ‪ ،‬وعلى أن عينه الماء األصليه ملوثه ‪0‬‬
‫التفرقة بين أفراد مجموعه القولون‬
‫‪DIFFERENTIATION OF MEMBERS OF THE COLIFORM‬‬
‫‪GROUP‬‬
‫تشمل مجموعه القولون على ثالث تحت مجاميع ‪ Subgroups‬هـــى ‪:‬‬
‫‪.E.coli -1‬‬
‫‪E.freundii (Intermediate) -2‬‬
‫‪Enterobacter aerogenes -3‬‬
‫ونظرا ألن المصدر االساسى ل ‪ E.coli‬هو القولون (البراز) لذا فان وجود ‪E.coli‬‬
‫فى العينه فهو دليل على تلوثها من فضالت انسان أو حيوان ونظرا لتشابه افراد‬
‫مجموعه القولون فى الصفات الظاهريه فبالتالى البد من وجود طرق يمكن ان تتبع فى‬
 ‫التفرقه بين افراد هذه المجموعه ‪ .‬ومن هذه االختبارات اآلتى ‪:‬‬
‫‪ -1‬اختبار االندول ‪Indole production :‬‬
‫ويعتمد على قدرة بعض الميكروبات على تحليل الحامض االمينى تربتوفان‬
‫‪ Tryptophane‬وانتاج االندول ‪ .‬ويالحظ ان ‪ E.coli‬قادره على انتاج االندول‬
‫بعاتقي هللا ‪En. aerogenes‬‬
‫االدوات الالزمه ‪:‬‬
‫‪ -1‬مزرعه ‪ E.coli‬عمرها ‪ 24‬ساعه فى المرق المغذى ‪.‬‬
‫‪ -2‬مزرعه ‪ En. aerogenes‬عمرها ‪ 24‬ساعه فى المرق المغذى ‪.‬‬
‫‪ -3‬انابيب تحتوى على مرق التربتون ‪. Tryptone broth‬‬
‫‪ -4‬ورق حامض االاتقي اللهاليك ‪Genezda oxalic acid test paper‬‬
‫‪-5‬‬
‫طريقة العمــــــل ‪:‬‬
‫‪ – 1‬لقح انبوبه بيون التربتون بميكروب ‪ E. coli‬واخرى بميكروب ‪En.‬‬
‫‪aerogenes‬‬
‫‪ – 2‬ثبت فى كل انبوبه ورقه حامض ااتقي اللهاليك بواسطه السدادة القطنية بحيث‬
‫يكون جزءا منها معلقا داخل االنبوبه ‪.‬‬
‫‪ – 3‬حضن االنابيب على ‪37º‬م لمدة يومين ‪.‬‬
‫‪ - 4‬بعد انتهاء فترة الحضين اختبر لالندول وذلك بتلون ورقه حامض االاتقي اللهاليك‬
‫باللون االحمر‪.‬‬

‫‪ -2‬اختبار احمر الميثيل ‪Methyl red test‬‬

‫وهذا االختبار يعتمد على قدرة ‪ E. coli‬على تكوين كميه من الحامض فى البيئه أكثر‬
‫من تلك التى ينتجها ‪ En. aerogenes‬وبالتالى يمكن ل ‪ E. coli‬تغيير لون الدليل‬
‫الى االحمر‬
‫ينما يظل لونه االصفر مع ‪. En. aerogenes‬‬
‫األدوات والمواد الآلزمة ‪:‬‬
‫‪ -1‬مزرعه ‪ E. coli‬عمرها ‪ 24‬ساعة فى المرق المغذى ‪.‬‬
‫‪ -2‬مزرعه ‪ En. aerogenes‬عمرها ‪ 24‬ساعه فى المرق المغذى ‪.‬‬
‫‪ 3 -3‬انابيب بويون الجلوكوز ‪.‬‬
‫‪ -4‬دليل احمر الميثيل ‪. Methyl red‬‬
‫طريقه العمــــل ‪:‬‬
‫‪ – 1‬لقح انبوبه من بيون الجلوكوز بميكروب ‪ E. coli‬واالنبوبة االخرى بميكروب‬
‫‪ En. aerogenes‬واترك الثالثة للمقارنه (بدون نلقيح) ‪.‬‬
 ‫‪ – 2‬حضن على ‪37º‬م لمدة ‪5-2‬أيام ‪.‬‬
‫‪ – 3‬أضف خمس نقط من دليل احمر الميثيل الى كل انبوبة ثم امزج جيدا ‪.‬‬
‫يالحظ أنه اذا تكون لون احمر فهذا دليل ان االختبار موجبا بينما اللون االصفر يدل‬
‫على انه سالبا ‪.‬‬
‫‪ – 3‬اختبار فوجز – بروسكور (‪.V.P )Vogus- proskauer test‬‬
‫هذا االختبار على قدرة ميكروب ‪ En. aerogenes‬على تكوين مركب االسيتيل‬
‫ميثيل كاربينول (‪ )A.M.C‬فى عملية التحويل الغذائى فى حيث أن ‪ E. coli‬الينتج‬
‫هــذا المركب فى البيئه ‪.‬‬
‫وتعتمد طريقة الكشف عن وجود ال ‪ Acetyl methyl carbinol‬على ان هذا‬
‫المركب فى وجود البوتاسا او الصودا الكاوية فى ظروف تهويه جيدة (الهواء الجوى)‬
‫فانه يتأاتقي اللهد الى ثنائى االسيتيل ‪ Diacetyl‬الذى يعطى مع االلفا نافثول ‪Alpha‬‬
‫‪ Naphthol‬وكذا الحامض االمينى االرجينين ‪ Arginine‬الموجود بالببتون لونا‬
‫احمر ‪ ،‬وفى حالة عدم وجود االلفا نافثول فيمكن استخدام الكرباتين ‪ Creatine‬بكميه‬
‫صغيرة جدا‪ 0‬النتائج تقرأ بعد ‪ 4 – 2‬ساعات من المعامالت ‪.‬‬
‫األدوات والمواد الالزمه ‪:‬‬
‫‪ -1‬مزرعة ‪ E.coli‬عمرها ‪ 24‬ساعة فى المرق المغذى ‪.‬‬
‫‪ -2‬مزرعة ‪ En. Aerogenes‬عمرها ‪ 24‬ساعة فى المرق المغذى ‪.‬‬
‫‪ 3 -3‬انابيب مرق الجلوكوز والفوسفات والببتون ‪.‬‬
‫‪ -4‬محلول ‪ NAOH‬أو ‪. KOH 40%‬‬
‫‪ -5‬محلول االلفا نافثول أومسحوق الكرباتين ‪.‬‬
‫خطوات العمـــل ‪:‬‬
‫‪-1‬لقح انبوبة من جلوكوز الفوسفات والببتون من مزرعة ‪En. aerogenes‬‬
‫واالخرى من مزرعة ‪ E. coli‬والثالثة تترك للمقارنة ‪.‬‬
‫‪-2‬حضن على ‪º 37‬م لمدة ‪ 48‬ساعة ‪.‬‬
‫‪-3‬بعد فترة التحضين أضف مقدار ‪ 1‬مل من ‪ NAOH‬وبضع من االلفانافثول (أو‬
‫قليل من الكرياتين) ثم أمرج جيدا واترك االنابيب فترة من ‪ 4-2‬ساعات ثم دون‬
‫النتيجة ‪.‬‬
‫يالحظ تكون لون احمر على السطح فى حالة ما اذا كان االختبار موجبا ‪.‬‬
‫‪-4‬اختبار تمثيل السترات ‪Citrate utilization test (Koser,s test):‬‬
‫ويعتمد االختبار على قدرة ‪ En. Aerogenes‬وبعض ال ‪ Intermediates‬على‬
‫تمثيل السترات كمصدر وحيد للكربون فى بيئة مكونه من امالح معدنيه فى حين ان‬
‫‪ E.coli‬اليمكنه ذلك ‪.‬‬
‫االدوات والمواد الالزمة ‪:‬‬
‫‪ -1‬مزرعة من ‪ E.coli‬عمرها ‪ 24‬ساعة فى المرق المغذى ‪.‬‬
 ‫‪ -2‬مزرعة من ‪ En. Aerogenes‬عمرها ‪ 24‬ساعه فى المرق المغذى ‪.‬‬
‫‪ 3 -3‬انابيب تحتوى على بيئه سترات ‪.‬‬

‫طريقــة العمــــل ‪:‬‬

‫‪ -1‬لقح انبوبة من بيئه السترات من مزرعه ‪ E.coli‬وأخرى من مزرعه‬
‫‪ En.aerogenes‬وتترك الثالثه للمقارنه ‪.‬‬
‫‪ -2‬حضن على ‪37º‬م لمدة اربعه ايام ‪.‬‬
‫‪ -3‬بعد فترة التحضين شاهد النمو من عدمه فى االنابيب حيث ان وجود النمو يكون‬
‫دليال على ان االختبار موجبا ‪.‬‬

‫تقدير عدد ميكروبات القولون بطريقة ‪MPN‬‬

‫‪ -‬األدوات والمواد المستخدمــة ‪-:‬‬
‫‪ -‬زجاجة عينة المياه‪.‬‬
‫‪ -‬بيئة مكونكى السائلة فى انابيب ‪.‬‬
‫‪ -‬ماصات معقمــة ‪.‬‬
‫‪ -‬انابيب مياه مقطره معقمــة بكل انبوبة ‪ 9‬مل ماء ‪.‬‬
‫طريقة العمل ‪-:‬‬
‫‪ -1‬رج عينة المياه جيداً حوالي ‪ 25‬مره‬
‫‪ -2‬انقل بواسطـة ماصة معقــمــة مقدار‪1‬مل من عينة الماء إلي انبوبة بها ‪ 9‬مل ماء‬
‫معقم فيصبح التخفيف ‪1-10‬‬
‫‪ -3‬استمر في عمل سلسلة التخفيفات مع مالحظــة كتابة ارقام التخفيفات علي األنابيب‬
‫مع استعمال ماصـه‬
‫واحدة لكل تخفيف بشرط أن تكون معقمــة‪.‬‬
‫‪ -4‬ينقل من انابيب التخفيف ‪1‬مل إلي انابيب ماكونكى السائلة (‪ 3‬انابيب او ‪ 5‬انابيب)‬
‫مع ترقيم االنابيب بما يتناسب مع كل تخفيف‪.‬‬
‫‪ -5‬يلي ذلك تحضين النابيب علي ‪°37‬م لمدة ‪ 48‬ساعة‪.‬‬
‫‪ - 6‬بعد انتهاء مدة التحضين يتم عد االنابيب الموجبة (التى ظهر بها نمو) فى كل‬
‫تخفيف‪.‬‬
‫‪ - 7‬عندما يعطى احد التخفيفات نتيجة سالبة (الخمس او الثالث انابيب ليس بها نمو)‬
‫ناخذ نتائج الثالث تخفيفات السابقة لها وترقم ‪ P1:P2:P3‬ويتم الكشف عن هذة‬
‫االرقام فى الجداول المتخصصة لها‪.‬‬

‫*‪.‬اعداد الميكروبات الكلية في ‪ 1‬مل عينة مياة = رقم ‪ x MPN‬مقلوب التخفيف‬

‫االوسط ‪P2‬‬