Professional Documents
Culture Documents
. . 47
. . 47
1
. . 51
. . 52
. . 52
. . 52
. . 54
. . 58
. . 59
. . 60
. . 62
. . 66
. . 68
. . 68
... 69
. . . 71
. . . 71
... 72
... 74
. . 76
. . . 77
. . 79
80
80
81
83
NOŢIUNI INTRODUCTIVE
DE
CHIMIE ANALITICĂ
portanţilor.
Pe măsură ce precizia a crescut şi au fost stabilite proporţiile normale, a deveni
clar că rezultatele de laborator pot fi folosite în scopul precizării diagnosticului.
Majoritatea acestor teste se execută pe probe de sânge şi urină şi includ deter
minarea cantitativă a unor componente organice şi anorganice (glucoza, proteine
lipide, acid uric, CI , Na*, Ca 2 ', Petc).
Analizele clinice nu se limitează numai la aceste determinări generale, deoa
rece cu ajutorul lor se pot evalua şi boli metabolice specifice. De exemplu, la unul O
10.000 de nou-născuţi este absentă enzima fenilalanilhidroxilaza. Acest fapt conduce
la un metabolism secundar care, dacă nu este corectat în stadiul timpuriu al vieţii,
determină o dezvoltare insuficientă a creierului şi înapoieri mintale severe. Unul d.n
rezultatele metabolismului viciat este fenilpiruvatul prezent în urină. Aşadar, detecta
rea fenilpiruvatului în urină constituie un test clinic important, efectuat în mod curen
la nou-născuţi, prin tratarea unei probe de urină cu FeCI3.
Analiza produselor de origine animală
Alimentele, indiferent de originea lor (animală sau vegetală), din punct de vede
re biochimic sunt constituite din substanţe anorganice (apa şi sărurile minerale) şi din
substanţe organice (glucide, lipide, protide, vitamine etc).
Pentru a prezenta garanţia unei valori alimentare corespunzătoare, este nece
sar ca alimentele să fie supuse unui control sanitar veterinar care şă urmărească
aprecierea integrităţii, salubrităţii şi stării de prospeţime.
Aceste caracteristici ale alimentelor se stabilesc prin analize chimice calitative şi
cantitative.
în urma acestor analize se determină componente naturale existente în alimen
te (glucoza, cazeina, vitamina C etc), precum şi substanţe toxice naturale (alcaloizi
glicoizi etc.) şi substanţe toxice depoluare (pesticide, detergenţi, ioni metalici: Hg2*,
Pb2*, hidrocarburi aromatice policiclice).
Analiza farmaceutică. In industria farmaceutică, calitatea medicamentelor tre
buie să fie controlată atent şi cu multă exactitate. Uşoare modificări în compoziţia sau
în puritatea medicamentului pot afecta valoarea terapeutică. Pentru stabilirea propor
ţiei de administrare a unui medicament este necesar să se determine produşii meta
bolici rezultaţi şi toxicitatea lor.
Analiza mediului înconjurător. Apa, aerul, solul pot suferi modificări de natură
fizică, chimică sau biologică. Analiza acestora precizează măsura în care aceste
transformări au fost provocate de oameni, cum şi în ce condiţii aplicarea ştiinţei şi
tehnologiei poate controla şi ameliora calitatea mediului înconjurător.
Dezvoltarea metodelor analitice de separare, identificare şi dozare a furnizat
informaţii preţioase privind prezenţa în aer, apă şi sol a unor particule poluante ca:
var, praf de ciment, oxizi de fier, fluoruri, negru de fum, solvenţi, detergenţi, alcooli
etc.
io
1. CLASIFICAREA METODELOR ANALITICE
1.1. ERORI
12
2. REACŢII Şl REACTIVI ANALITICI
Se spune despre un reactiv analitic că este cu atât mai sensibil cu cât permite
identificarea sau determinarea unor cantităţi cât mai mici din componentul de ana
lizat. O noţiune importantă pentru aprecierea sensibilităţii unui reactiv este limita de
recunoaştere (de decelare, de percepere) sau de sensibilitate a acestuia.
Limita de recunoaştere a fost definită de Feigl drept cea mai mică cantitate
dintr-un component care poate fi pusă în evidenţă în mod sigur printr-o reacţie ana
litică. Limita de recunoaştere a unui reactiv analitic este de ordinul milionimilor de
gram şi de aceea se exprimă In ţig (1 ng = 1CT6 g). Limita de recunoaştere a unui
reactiv este corelată cu limita de diluţie a reactivului.
Urnita de diluţie reprezintă concentraţia minimă a reactivului pentru care deter
minarea componentului de analizat este sigură.
Pentru determinarea limite) de diluţie se efectuează o serie de reacţii în care se
diluează progresiv reactivul analitic menţinând constantă concentraţia componentului
de analizat. In acest mod se stabileşte concentraţia minimă a reactivului pentru care
determinarea este sigură.
I4
3. REVERSIBILITATEA REACŢIILOR ANALITICE
3 . 1 . LEGEA ECHILIBRULUI C H I M I C
(LEGEA ACŢIUNII M A S E L O R )
Viteza reacţiei directe (v,) şi viteza reacţiei inverse (v2) se exprimă prin relaţiile:
v,=k,[A]v[Bh
v a =k a [C] n »[D] n -
unde, k, şi kg reprezintă constantele de viteză, n„ nb, nc, nd, ordinele de reacţie
(pentru reacţii simple ordinele de reacţie sunt egale cu coeficienţii stoechiometrici) şi
[A], [B], [C], [D] concentraţiile molare.
în momentul atingerii stării de echilibru viteza reacţiei directe devine egală cu
viteza reacţiei inverse (v, = v 2 ) şi respectiv:
CHIMIE ANAI I1ICA
m
k,[A]"- \BP =k,[C]"|D|" (1)
Pentru această n
Din relaţia (1) se obţine:
(2)
k2 [A) n '"[B] n '
Raportul constantelor de viteză reprezintă o constantă care se notează cu K şi La adăugarea m
cNmic se va deplasa
se numeşte constantă de echilibru.
aacţie (C şi D) aste 1
înlocuirea în relaţia (2) a raportului k,/k2 cu K conduce la expresia constantei de
De exemplu, o m
echilibru: m unei soluţii de htcrae
[C]"< [D]"« aofcjţii care conţine oi
K= Reacţia iodutu ai
[A]"- [B]^
l„ + 2 K 0 H ==a
Pentru reacţiile chimice simple ordinele de reacţie sunt egale cu coeficienţii
-
stoechiometrici şi astfel pentru constanta de echilibru se obţine următoarea expresie:
Prin adăugare*
mediul de reacţie ur
, .1 - [A]" [B]0 eantraţiei ionilor MC
Cantităţi suplimentar* i
Expresia obţinută este reprezentarea matematică a legii echilibrului chimic
•rinând recolorarea —
enunţată de Guldberg şi Waage: la echilibru, raportul dintre produsul concen
traţiilor produşi/or de reacţie şi produsul concentraţiilor reactanţilor, la exponenţi egali
cu coeficienţii stoechiometrici, este o constantă. 3.2.2. INFLL:
Sensul în czr~
3.2. D E P L A S A R E A E C H I L I B R U L U I C H I M I C determinat de lege*
«totem aflat în ec -
ne temperaturi i
Starea de echilibru chimic este rezultatul a două procese care se desfăşoară cu
De exemplu
viteze egale dar in sensuri opuse, această proprietate reflectând caracterul dinamic
al stării de echilibru.
Deplasarea echilibrului chimic se produce atunci când se exercită o acţiune 2 NO,
asupra sistemului, acţiune care influenţează în mod inegal viteza reacţiei directe şi
viteza reacţiei inverse. Putem concluziona deci că modificarea egalităţii vitezelor de roşu-brun
reacţie este responsabilă de trecerea sistemului într-o nouă stare de echilibru, când Scăderea te—c
vitezele celor două reacţii vor fi din nou egale, dar diferite de cele iniţiale. •crtMbrului cfwrac r
în urma acţiunii unor factori externi (concentraţie, temperatură, presiune) echili temporaturii cono^c*
brul chimic se poate deplasa spre formarea unei cantităţi suplimentare de produşi de I reacţiei eno-ir-
reacţie sau spre formarea reactanţilor.
Efectul schimbărilor de concentraţie, temperatură şi presiune asupra echilibrului
chimic este cuprins în principiul foarte general enunţat în 1884 de către Le 3.2.3. INF
Châtelier: un sistem chimic aflat fn echilibru sub acţiunea unei forţe exterioare va
suferi acea deplasare care va tinde să micşoreze efectul acţiunii exterioare. Presiunea
ţ» (cel puţin) este tel
volum.
3.2.1. INFLUENŢA CONCENTRAŢIEI tn cazul acestor I
chimic In senaU fcrte
Pentru a explica influenţa concentraţiei asupra echilibrului chimic se consideră determina deptasa/eai
următoarea reacţie: mare.
Astfel, reacţia tei
A + B C+D
cu modificare de VOM<
16
REVERSIBILITATEA REACŢIILOR ANALITICE
17
CHIMIE ANALITICA
N2 + 3 H 2 2NH3
4 volume 2 volume
La creşterea presiunii echilibrul se va deplasa în sensul formării amoniacului, în
timp ce scăderea presiunii deplasează echilibrul chimic în sensul descompunerii
amoniacului (formării azotului şi hidrogenului).
3.3. ECHILIBRE C H I M I C E Î N S I S T E M E E T E R O G E N E
X SISTEM ETEROGEN
In mod concret, reacţiile chimice care au loc în sistem eterogen sunt reacţiile
care decurg cu formare de precipitate, reacţiile de descompunere a carbonaţilor,
hidraţilor, amoniacaţilor:
NH«CI M ^ S N H a w + HCIj,
18
REVERSIBILITATEA REACŢHLOR ANALITICE
[CaOlfCO,]
[CaCOjJ
Concentraţiile componentelor solide fiind constante pentru o temperatură dată,
pot f) înglobate în constanta de ecbWbru obţinându-se:
K-fC02}
Această relaţie demonstrează faptul că echilibrul chimic este definit de concen
traţia gazului sau de presiunea sa.
Kl «•> + ~2 °* w ± i K l O s W
Aceste procese care au loc cu viteză foarte mică conduc în timp la modificarea
concentraţiei reactivilor şi la apariţia unor produşi secundari nedoriţi. Modificările de
concentraţie suferite de reactivi precum şi produşii secundari rezultaţi determină apa
riţia unor erori sistematice pentru analizele efectuate.
3.5. APLICAŢII A L E C O N C E P T U L U I DE E C H I L I B R U
Pentru a înţelege diferitele tipuri de reacţii care prezintă interes pentru chimia
analitică este necesar să se ia în considerare teoria echilibrului chimic, această teorie
permiţând determinarea condiţiilor favorabile de desfăşurare a unei reacţii chimice.
In cele ce urmează sunt prezentate pe scurt constantele de echilibru corespun
zătoare diferitelor tipuri de reacţii utilizate in chimia analitică calitativă şi cantitativă.
19
CHIMIE ANALITICA
Când sunt dizolvate în apă, substanţele chimice se pot prezenta sub formă
disociată (ionizată) sau nedisociată (neionizată). în funcţie de gradul de disociere în
soluţii apoase substanţele pot fi clasificate în eiectroliţi puternici, electroliţi slabi şi
neelectroliţi. * :
Electroliţi! puternici în soluţii apoase se prezintă complet ionizaţi, echilibrul
chimic fiind complet deplasat spre dreapta. Electroliţii puternici sunt acizii tari, bazele
tari şi sărurile provenite de la acizi tari şi baze tari.
H,0
NaCI w Na* (aq) + Cr w
NaOH - ^ 2 - Na* ( a q ) + H O - , ^
K
- = K K
° L =
[CH3COOH] *K>**-K0M jflTţ \
20
REVERSIBILITATEA REACŢIILOR ANALITICE
temperatura de 22°C.
în apa pură, concentraţia ionilor de hidroniu este egală cu concentraţia ionilor
de hidroxil.
^ 3 O 4 ] = ^ O - ] = V l 0 - M = 1 0 ' 7 mol/l
Caracterul acid sau bazic al unei soluţii este dat de concentraţia în ioni de
hidroniu şi se exprimă în numere de tipul 10"p. întrucât această exprimare este
greoaie, s-a introdus noţiunea de pH.
pH-ul unei soluţii se exprimă prin logaritmul zecimal cu semn schimbat al
concentraţiei ionilor de hidrogen: pH = -/ogţrV*J.
Neelectroliţii în soluţii apoase nu disociază, echilibrul chimic fiind complet
deplasat spre stânga. Deoarece concentraţia în componenta disociată tinde către
zero, se poate considera că şi pentru constanta de echilibru valoarea este zero. în
categoria neelectroliţilor putem include solvenţi organici ca totuen, benzen, cloroform
etc.
Jred.lMoxJ"'
[ox,Nred2r
Reacţiile de oxido-reducere prezintă, în geneial, valori mari pentru K ^ , dar au
viteze de reacţie reduse. Vitezele de reacţie pot fi însă mărite în mod semnificativ
prin utilizarea catalizatorilor.
21
CHIMIE ANALITICA
Ag* + NH3=*[Ag{NH3)r
* [Ag'][NH7]
K [ A 9( N H 3) ? 1 >
" ~[Ag(NH 3 )][NH 3 ]
Aceste constante se numesc constante de formare sau de stabilitate.
în mod frecvent, reacţiile de complexare sunt scrise în mod invers, ca şi cum ar
fi reacţii de disociere:
K ._M(NH3j = : L
' [Ag(NH3)]- Ks
Constanta K, se numeşte constantă de instabilitate şi este reciproca constantei
de stabilitate, K„.
Constantele de instabilitate constituie un criteriu cantitativ de apreciere a stabi
lităţii ionilor complecşi. O combinaţie complexă este cu atât mai stabilă cu cât are
tendinţa de disociere mai scăzută şi deci o constantă de instabilitate mai mică.
Am B„ w «ssss m A"*^ + n 8 % ^
[AmB„]
22
REVERSIBILITATEA REACŢIILOR ANALITICE
Deoarece concentraţia fazei solide, AJB„, este constantă, aceasta poate fi tre
cută în membrul stâng şi expresia constantei de echilibru poate fi scrisă astfel:
23
4. METODE CHIMICE DE ANALIZĂ
4 . 1 . ANALIZA C H I M I C Ă CALITATIVĂ
(II şi IV), plumb (II), arsen (III şi V), stibiu (III şi V) şi bismut. Reactivul de grupă TI
constituie hidrogenul sulfurat fn mediu puternic acid (pH * 5).
- grupa a V-a este grupa cationilor ce formează sulfuri şi cloruri greu solubile.
Din această grupă fac parte cationii de cupru (I), argint, mercur (I) şi plumb (II), iar
reactivul de grupă pentru aceşti cationi este acidul clorhidric.
Cationii: Na*. K*. NH* formează cloruri, sulfuri şi carbonaţi solubili. în această
grupă este inclus şi cationul Mg2* care formează hidroxid şi carbonat de solubilitate
medie.
25
CHIMIE ANALITICĂ
2
Reacţii de identificare pentru ionul Mg *
/. Soluţiile de hidroxizi alcaliniformează cu ionul de magneziu un precipitat alb
gelatinos, solubil în acizi.
2
Mg * + 2NaOH -»Mg(OH)24- + 2Na*
2. Fosfatul disodic formează cu ionul de magneziu, în soluţii care conţin
amoniac şi ciorură de amoniu, un precipitat cristalin de culoare albă.
2
Mg * + Na 2 HP0 4 + NH 3 -* MgNH 4 P0 4 i + 2Na*
Clorura de amoniu împiedică formarea precipitatului de hidroxid de amoniu.
Cationii: Ca2*, Sr2', Ba2* formează carbonaţi, sulfaţi, cromaţi şi oxalaţi greu
solubili.
A. Reacţii comune
1. Carbonatul de amoniu precipită ionii Ca2*, Sr2* şi Ba2* din soluţii apoase
formând carbonat» corespunzători conform ecuaţiei:
Me2* + (NH 4 ) 2 C0 3 -* M e C 0 3 ! + 2NH 4
Precipitatele rezultate sunt albe, amorfe (CaC0 3 ) sau cristaline (BaC0 3 şi
SrC0 3 ), solubile în acid acetic diluat.
2. Sulfatul de amoniu şi acidul sulfuric diluat formează cu cationii grupei a ll-a
sulfaţi insolubili sub formă de precipitate albe cristaline.
Me2* + (NH 4 ) 2 S0 4 -> M e S 0 4 i + 2NH*
Precipitatul de CaS0 4 este solubil în sulfat de amoniu.
3. Oxalatul de amoniu formează cu cationii Ca2*, Ba2* şi Sr2* oxalaţii corespun-
zători care se prezintă sub formă de precipitate albe:
Me2* + (NH 4 ) 2 C 2 0 4 MeC 2 0 4 4> + 2NH*
B. Reacţii specifice
Coloraţia flăcării
Sărurile volatile de calciu colorează flacăra Incoloră a unui bec de gaz în roşu-
cărămiziu, cele de stronţiu în roşu carmin, iar cele de bariu în verde.
Sărurile solubile de bariu sunt foarte toxice pentru organismul animal, ionul Ba2*
acumulându-se în oase, muşchi, măduvă, plămâni şi rinichi. Acest ion poate pătrun
de în organism pe cale exogenă (otrava pentru şobolani conţine BaCOa) determinând
intoxicaţii grave care se manifestă prin: tahicardie ventriculară, paralizia muşchilor
scheletici, diaree, fibrilaţii ventriculare şi paralizie respiratorie.
Cationii: Co2*, Ni2*, Mn2*, Fe2*, Fe3*, Cr3*, Al3*, Zn2* formează cu sulfura de
amoniu în mediu alcalin (pH * 9) sulfuri Insolubile sau hidroxizi insolubili (AI(OH)3,
26
METOPE CHIMICE PE ANALIZĂ
Cr(OH),).
Cationii din grupa sudurii de amoniu formează sulfuri, hidroxizi, carbonaţi, sulfiţi
şi fosfaţi greu solubili.
A Reacţii comune
t. Sulfura de amoniu în mediu de amoniac şi ciorură de amoniu, precipită: NiS
(negru), CoS (negru), FeS (negru), Fe2S3 (negru), MnS (roz). ZnS (alb). Cr(OH)3 (ver-
de-cenuşiu) şi AI(OH)3 (albijelatinos).
Reacţiile generale care au loc sunt:
Me8* + (NHJ2S -» MeSi + 2NH 4
Me 3 *+3HO~ -»Me(OH) 3 4-
Hidroxizii de Zn2*, Cr3* şi Al3* au caracter amfoter deoarece reacţionează atât cu
acizi, cât şi cu baze.
Ionul Mrf* prin topire oxidantă cu azotat de potasiu şi carbonat de sodiu (la
1000°C) formează un compus colorat în verde.
Ionul Zr?' precipitat sub formă de Zn(OH)2 şi transformat apoi în azotat de zinc,
la 1000°C în prezenţă de Co(NO,)2 formează un compus de culoare verde numit
"verde Rinmann". Reacţia se efectuează pe hârtie de flitru:
Zn2" + 2NH 3 + 2H 2 0 Zn(OH)2 + 2NH;
C0(NO 3 ) 2
Zn(N0 3 ) 2 CoZn0 2 (zincat de cobalt)
1000°C
Ionul Cr* cu apa oxigenată în mediu alcalin formează o coloraţie galbenă dator
ată ionului CrO2":
Co(N0 3 ) 2
AI(NOa)2 »» Co(AI0 2 ) 2 (aluminat de cobalt)
1000°C
Prezenţa aluminiului în dietă într-o concentraţie mai mare decât cea normală
poate induce stări de hipocalcemie (favorizează excreţia calciului), malabsorbţia fos-
28
METODE CHIMICE PE ANALIZA
Cationii: Hg2*, Pb2*, Br\ Cu2*, Cd2*. As (III, V), Sb (III, V). Sn (II, IV), cu
hidrogenul sulfurat la pH * 0,5 formează săruri greu solubile în mediu acid. Pentru
realizarea pH-ului optim de precipitare proba de analizat se acidulează cu acid clor-
hidric 0.3N.
Dată fiind toxicitatea hidrogenului sulfurat se recomandă, în practica de labora
tor, folosirea unor înlocuitori, cum ar fi tioacetamida, care în soluţie apoasă gene
rează hidrogen sulfurat conform reacţiei:
^ S
CH3- C + 2H*0 »• H2S + NH 3 + CH3COOH
> NH 2
A Reacţii comune
1. Hidrogenul sulfurat la pH * 0,5 precipită HgS (negru), PbS (negru), Bi2S3
(brun), CuS (negru), CdS (galben), AsaS3 (galben), A s A (galben), Sr^S;, (roşu),
SbaS5 (roşu), SnS (brun), SnS2 (galben murdar)
Reacţiile generale care au loc sunt:
Me2* + H 2 S->MeS + 2H*
B. Reacţii caracteristica
Ionul Hg2* cu iodura de potasiu formează un precipitat roşu-portocaliu de Hgl2
solubil în exces de reactiv cu formarea unui complex incolor.
Hg 2 *+2KI-^Hgl 2 4-+2K*
29
CHIMIE ANALITICA
Ionul arsenit (As III) eşte de 5-10 ori mai toxic decât ionul arseniat (As V). Aceşti
compuşi se găsesc în insecticide, erbictde, exfoliante, pesticide, precum şi în unii
produşi de poluare din industria metalurgică.
in intoxicaţiile cu compuşi ai arseniutui apar deshidratări, dermatite, alergii ale
pielii, diaree hemoragică, hematurie, precum şi stări de hipotermie sau de febră.
Pentru câine doza letală (orală) de arsenit de sodiu este 50-100 mg iar de
trioxid de arsen de 100-1500 ng.
30
METODE CHIMICE DE ANALIZA
Ionii Sb (III, V) reacţionează cu metale (Fe, Zn, Al) formând stibiu metalic care
se prezintă în mediu de reacţie sub formă de fulgi de culoare neagră:
SSb3* + 3Fe -+ 2Sb 4- + 3Fe2*
Sn**+2Zn->Sn + 2Zn2*
Cationii kg,*, Pb*. Hgf.* formează doruri, sulfuri, ioduri, cromaţi etc. greu solu
bile In apă şi azotaţi, acetaţi, cloraţi, percloraţi solubili. Dintre clorurile grupei, cea mai
solubilă este PbCl2, de aceea catranul Pb2* este menţionat şi la grupa hidrogenului
sulfurat. Ionul Hg*.* este de forma Hg*- Hg* şi are caracteristice reacţiile de dismu-
taţie:
A. Reacţii comune
1. Acidul dom/dric (0,3-1 N), formează cu cationii grupei precipitate albe de
AgCI, PbCljŞiHgjCI...
Precipitatele de AgCl şi PbCI2 sunt parţial solubile în acid ctorhidric concentrat,
formându-se următorii complecşi:
AgClj + 3 H C I 5 = 2 : HsfAgCUJ
P b C y +2HCI5Z-2: H2fJPbC'4J
Precipitatul alb de Hg2CI2 reacţionează cu amoniacul formând clorura amino-
mercurică de culoare albă şi mercur metalic negru:
Hg2CI2 + 2NH 3 -> NH2HgCI i +Hg 4- +NH 4 CI
2. Iod ura de potasiu, soluţie diluată, precipită Agi (gălbui), Pbl2 (galben intens)
şi Hcfcl2 (verde).
31
CHIMIE ANALITICA
Hg 2 l 2 4 +2KI -* Hg 4- +K 2 [Hgl 4 ]
3. Cromatul de potasiu formează cu cei trei cationi precipitate diferit colorate:
AftjCrO* (roşu-brun), PbCr0 4 (galben) şi Hg2CrO„ (roşu-aprins):
2Ag*+K 2 Cr0 4 -* Ag 2 Cr0 4 4+2K*
Pb2* + H 2 S - t . P b S l + 2 H *
B. Reacţii caracteristice
Ionul Ag*, transformat in AgCI cu ajutorul unei soluţii de acid clorhidric, cu săruri
de Mn2* in mediu de hiciroxid de sodiu, formează un precipitat negru de argint metalic
şi dioxid de mangan:
AgCI + Mn2* +4HO" -> Ag 4 +Mn0 2 H 2 0 + H 2 0 + Cr
Reacţia este cunoscută în chimia analitică sub numele de "reacţia Tananaev" şi
se execută pe hârtie de filtru (metoda picăturii).
Ionul Pb2* în prezenţa unei soluţii de acid sulfuric formează un precipitat alb de
PbS0 4 insolubil în alcool:
Pb2* + H 2 S 0 4 ->PbS0 4 4 + 2 H *
Compuşii anorganici şi organici ai plumbului se pot găsi dispersaţi în aer (în
zonele poluate) precum şi în chituri şi vopsele.
în cazul intoxicaţiilor cu plumb s-a evidenţiat acumularea ionului în rinichi, ficat,
ţesut osos, sânge şi lapte. Intoxicaţiile Cu plumb determină apariţia anorexiei, saliva-
ţie intermitentă, vomismente, stări de letargie şi tulburări neuropsihice.
Boala provocată de intoxicaţia cronică cu plumb se numeşte saturnism.
Ionul Hg2* din Hg2CI2 formează cu amoniacul un precipitat negru de mercur
metalic şi cloroamidură mercurică:
Hg 2 CI 2 + 2NH 3 -* NH2HgCI 4 +Hg 4 +NH4CI
Mercurul constituie unui dintre cele mai toxice elemente pentru animale şi om.
Poate pătrunde în organism prin intermediul apei şi hranei contaminate cu compuşi
organici sau anorganici ai mercurului, absorbţia intestinală a compuşilor anorganici ai
mercurului fiind de câteva procente iar cea a compuşilor organici fiind de 100%. Cele
mai frecvente intoxicaţii cu mercur sunt datorate consumului de cereale tratate cu
fungicide. Acţiunea toxică a mercurului se explică prin afinitatea sa pentru grupările
-NH 2 , -COOH, -OH din proteine, ca şi pentru radicalul - P 0 3 H 2 din membranele
celulare.
Intoxicaţiile cu compuşi anorganici şi organici ai mercurului determină anorexie,
32
• , METODE CHIMICE DE ANALIZA
Ag 2 C0 3 4- + 2HN0 3 -+ C 0 2 + H 2 0 + 2AgN0 3
3. Clorura de bariu precipită, din soluţiile de carbonaţi, un precipitat alb de
carbonat de bariu, solubil în acizi diluaţi (nu se utilizează acidul sulfuric):
COŞ" + BaCI2 -> BaCOa i +2CI"
33
CHIMIE ANALITICA
Acidul sulfuric diluat, adăugat la sarea solidă ce conţine ionul acetat, produce
degajarea acidului acetic cu mirosul caracteristic de oţet:
2CH3COO- + H 2 S 0 4 -+ 2CH3COOH t +Na 2 S0 4
Reacţia nu este specifică deoarece ionul I" poate fi oxidat la iod şi de către alte
substanţe cu caracter oxidant.
34
METODE CHIMICE DE ANALIZA
2
2. Apa de clor şi apa de brom oxidează ionul S la sulf, care imprimă soluţiei
un aspect lăptos:
2
S +CI 2 ->2CI + S 4
3 Acefalul de plumb (sau altă sare solubilă de plumb) formează cu ionul S* un
precipitat negru de sulfura de plumb:
2
S ' + Pb(CH3COO)2 -* PbS i + 2CH3COO
/. Clorura de bariu formează cu ionul sulfat un precipitat alb cristalin, greu solu
bil în acizi minerali:
SO2* +BaCI 2 -* BaS0 4 4 +2CI*
2. Acefalul de plumb (sau azotatul de plumb) formează cu tonul sulfat un
precipitat alb cristalin, solubil în acid sulfuric concentrat:
SOf +Pb(CH3COO)2 -+PbS0 4 +2CH COO-
4 3
AgCi;+2NH3-*(Ag(NH3)2]CI
35
1 CHIMIE ANALITICA
2. Apa de efor oxidează ionul Br' la brom elementar care colorează soluţia
apoasă în galben-brun:
2BT+CI, • Br 2 +2CI
2. Apa de clor oxidează ionul I" la iod elementar, care colorează soluţia apoasă
în brun-închis. Dacă se adaugă un dizolvant organic (sulfura de carbon sau tetraclo-
rură de carbon) se extrage iodul, colorând stratul de solvent organic în violet:
21-+CL l,+2KCI
Dintre anionii prezentaţi ionii azotit (nitrit) şi azotat (nitrat) sunt deosebit de
toxici, aceşti ioni putând fi preluaţi de către animale din apă şi din furaje, în special
cele verzi, inclusiv în formă însilozată.
Limita concentraţiei azotaţilor în hrană, considerată sigură pentru animale, este
0,5 mg%, concentraţii mai mari în azotaţi având un efect toxic. Azotaţii au efect can
cerigen, la animalele de experienţă producând neoplasm al stomacului, pielii, creie
rului, măduvei spinării. Azotaţii (nitraţii) din hrană au acţiune inhibitoare asupra fun
cţiei tiroidiene prin diminuarea preluării iodului de către glandă. Dozele zilnice de
aproximativ 150 mg azotat de potasiu au produs avort la taurine. Din acest motiv
numărul de avorturi la taurine este mult mai mare în zonele depresionare după con
sumul de plante din flora spontană, bogate în azotaţi.
4.2. ANALIZA C H I M I C Ă C A N T I T A T I V Ă
36
METODE CHIMICE DE ANALIZA
rea totală a componentului de analizat, conform reacţiei care stă la baza determinării.
Această operaţie poartă numele de titrare iar soluţia de reactiv de concentraţie exact
cunoscută (soluţie etalon primar sau secundar) se numeşte titrant (reactiv de titrare).
Punctul de echivalentă este momentul titrării fn care reactivul de titrare şi com
ponentul de analizat au reacţionat In cantităţi echivalente.
Pentru stabilirea punctului de echivalenţă se utilizează o anumită proprietate a
sistemului de analizat, care In acest moment al titrării sau foarte aproape de el suferă
o schimbare bruscă, ce poate fi sesizată vizual sau cu ajutorul unui aparat (instru
mental).
într-o dozare volumetrică punctul de echivalenţă se determină cu o anumită
eroare, deoarece schimbarea produsă In sistemul de analizat nu coincide exact cu
momentul de echivalenţă. Momentul la care se percepe modificarea (schimbarea cu
lorii, apariţia sau dispariţia unui precipitat, modificarea fluorescentei) se numeşte
punct final al titrării, deoarece în acel moment se stopează titrarea.
Precizia unei dozări volumetrice este cu atât mai mare cu cât punctul final al
titrării este mai apropiat de punctul de echivalenţă.
37
CHIMIE ANALITICA
4.2.1.2.1. Alcalimetria
fH'J= - H - - 1 0
1 J
1
= 10
2
; pH = F
2
100
[ H * ] = - ™ - IO"1 = 1 0 - " ; pH = 4
1 J
1000
4
|HO] = — ! — 1 0 - ' = 1 0 - ; hi = 1 0 - 1 0 şi pH = 10
C
' 1000
10-'=10-2; +
[HO ] = ^ ^ ] = 10-,J şi pH = 12
Aceste date se pot înscrie într-un grafic, unde pe ordonată se trec valorile pH-
ului, iar pe abscisă volumele de reactiv (de bază) utilizate (figura 2).
Curbele de titrare sunt curbe logaritmice ce prezintă o variaţie lentă a pH i <'ui la
începutul şi sfârşitul titrării şi un salt de pH la echivalenţă. Punctul de inflexiune
38
METODE CHIMICE OE ANALIZA
PH14
0
ACID NEUTRALIZAT 100% BAZĂ EXCES VB0H(ml)
PH 14
o VB0H(ml)
39
CHIMIE ANALITICA
5
IU
0
V
BOH< M L )
4.2.1.2.2. Acidimetria
40
METODE CHIMICE DE ANALIZA
V H A(ml)
Şi în cazul acestui tip de titrare concentraţia minimă admisă pentru bază este
10"3 mol/l.
b) Dozarea volumetrică a unei baze slabe cu o soluţie de acid tare
Pentru a ilustra mai bine acest caz se presupune că baza s «â, NH..OH, este
titrată cu acidul tare, HCI:
NH4OH + HCI --5=5: NH4CI + HO
Acest tip de titrare este guvernat de următoarele procese:
- disocierea bazei slabe (pH-ul iniţial este dependent de constanta de bazici-
tate a bazei)
- la adăugarea soluţiei de acid, până la punctul de echivalenţă, se formează
sistemul tampon NH4OH - NH4CI
- la punctul de echivalenţă se formează o sare provenită de la o bază slabă şi
un acid tare imprimând soluţiei un caracter acid;
- după punctul de echivalenţă reactivul va imprima soluţiei un caracter acid.
Din acest motiv, panta curbei de titrare este mult mai mică iar punctul final al
titrării se află pe partea acidă a scalei (figura 6). Panta curbei de titrare scade pe
măsură ce scade tăria bazei, punctul final al titrării deplasându-se pe partea acidă a
scalei de pH (figura 6).
Deoarece precizia determinărilor este dependentă de tăria bazei slabe, prin
această metodă nu se dozează baze cu Kb < 10 *.
41
CHIMIE ANALITICA
ECHI
i ... , i
Vmm'riI)
Figura 6 - Curbele de titrare ale unor baze slabe cu constante de bazicitate
Kb, < K 6 , < K b , c u 0 soluţie de acid tare
42
METODE CHIMICE PE ANALIZA
PH u
OL 1 • ' 1
V«Mctiv(ml)
Figura 7 - Curba de titrare a unui acid bibazic şi a unei baze biacide
cu o soluţie de bază tare, respectiv de acid tare
. H A - = - = = H * + A2- K. » K l l A ! " l
' M
Titrarea unei baze poliacide cu o soluţie de acid tare decurge similar cu titrarea
unui acid polibazic cu o soluţie de bază tare, principala diferenţă constând in schim
barea pH-ului pe direcţie inversă (de la mediu alcalin la mediu acid) (figura 7). Pentru
constantele de bazicitate, corespunzătoare treptelor de disociere ale bazei poliacide,
se pun aceleaşi condiţii ca şi în cazul titrării acizilor polibazici.
în figura 7 este redată curba de titrare a unei baze diacide, B(OH)2 cu o soluţie
de acid tare de concentraţie cunoscută.
43
:
UIIIIIIIIIIIIMMIIIIIMHHIiill "I """'I "!!!'!'
| M1 < 11 "1 1
IS... ::i
•Pilii
mm „i,., q|j; P i r
-0,8 — N — N — N f C H , ) , + H * — » 'O.S - ^ ^ - N — N — N * ( C H S ) ,
H
iii forma bazică forma acidă
(galben-orange) (roşu)
Tabelul 1
Indicatori de culoare acido-bazici
44
METODE CHIMICE DE ANALIZA
Pentru dozarea acizilor slabi cu Ka < 10 8 şi a bazelor slabe cu Kb < 10"8 pre
cum şi a substanţelor cu caracter acid sau bazic insolubile în apă este necesar ca cel
mai utilizat solvent, apa, să fie substituit cu solvenţi de natură organică.
în tabelul 2 sunt prezentate principalele substanţe cu caracter acid şi bazic care
se dozează în soluţii neapoase.
Tabelul 2
Compuşi cu caracter acid şi bazic
care se dozează în solvenţi neapoşi
ACIZI BAZE
Acizi carboxilici alifatici Amine.alifatice
Acizi carboxilici aromatici Amine aromatice
Fenoli Alcolaţi
Imide Poliamine
Tiouree Alcaloizi
Sulfonamide Antihistamine
Acizi sulfonici Xantogenaţi
Tiofenoli Baze Schiff
Barbituraţi Hidrazide
Tioamide
45
CHIMIE ANALITICA
Tabelul 3
Solvenţi neapoşi utilizaţi In volumetria bazata pe reacţii de neutralizare
46
METODE CHIMICE DE ANALIZĂ
[oxj'-ţred,]" 1
p
*** H i ] K r
Tendinţa de a accepta electroni sau de a ceda electroni este diferită de la un
sistem la altul. O măsură a puterii oxidante sau reducătoare a unui sistem este dată
de valoarea potenţialului de oxido-reducere standard, determinat în raport cu poten
ţialul de oxido-reducere standard al electrodului normal de hidrogen.
Electrodul normal de hidrogen are potenţialul de oxido-reducere egal cu O.OOV
(eHj=0,00V).
Potenţialele redox standard pot avea valori pozitive sau negative.
Pentru un cuplu redox:
Cu cât potenţialul de oxidare este mai mare, cu atât caracterul oxidant al cuplu
lui este mai mare iar caracterul reducător este mai slab. Cu cât diferenţa dintre carac
terul oxidant şi reducător al cuplurilor participante la reacţie este mai mare, cu atât
viteza de reacţie va fi mai mare iar reacţia chimică va fi mai completă.
Potenţialele standard ale unor sisteme redox care prezintă importanţă pentru
volumetrie sunt prezentate în tabelul 4.
Reacţiile chimice utilizate în volumetria bazată pe reacţii redox trebuie să fie
rapide, totale, stoechiometrice şi să existe o modalitate sigură de deteminare a pun
ctului de echivalenţă.
47
CHIMIE ANALITICA
Tabelul 4
Potenţialele standard ale unor sisteme redox
Ecuaţia reacţiei
+1.2
MnO" + 4H* + 3e" = = £ : MnO, + 2H.0
4 2 2
Cl, + 2e" 2cr 1.36
2
2
Cr 0 "+ 14H* + 6e" ==== 2 0 ^ * + 7H,0
2
+1,33
Br + 2e" = i 2Br"
2 +1.09
I »2e-ag=S2r +0,536
2
Cd * + 2e"2
Cd -0,41
48
METODE CHIMICE DE ANALIZA
Tabelul 5
Principalele dozări manganometrice
CN" CNO
2
s o ~ s o '
HS" s o r
49
CHIMIE ANALITICA
I 2 W M C ^ U + 2Na 2 S 2 0 3 -»2Nal + Na 2 S 4 O e
Utilizarea soluţiei de l2 implică câteva dezavantaje: la pH mai mare de 8, iodul
prezintă p disproporţie uşoară în favoarea I" şi IO;; iodul este volatil, astfel că pier
derile datorate evaporării sunt apreciabile. Soluţia de iod nu este o soluţie standard
dar se standardizează cu uşurinţă cu ajutorul unei soluţii de tiosulfat de sodiu stan
dardizată la rândul său cu o soluţie standard primar de bicromat de potasiu. în iodo-
metrie se utilizează ca indicator amidonul deoarece cu iodul formează o coloraţie
albastră. -
Soluţia de iod în iodură de potasiu este utilizată pentru dozarea unor ioni (tabe
lul 6) şi a unor substanţe compuse (glucoza, acid uric, acid ascorbic, aldehide).
Tabelul 6 •
Dozări iodometrice (titrarea directă)
După bromurare, bromul rămas în exces este redus la Br prin adăugare de Kl:
Br2+2P -+2Br + l 2
Iodul rezultat este titrat cu o soluţie standardizată de tiosulfat de sodiu.
Bromul este utilizat pentru determinarea grupărilor funcţionale organice (amine,
fenoli, compuşi organici nesaturaţi). ,
2,6 diclorfenollndofenolulm mediu slab acid (pH 6,9) are un caracter oxidant,
reactivul fiind utilizat pentru dozarea unor compuşi organici cu caracter reducător
(acidul ascorbic).
Utilizarea soluţiei de 2,6 diclorfenolindofenol prezintă avantajul că reactivul
funcţionează şi ca indicator; forma oxidată este de culoare albastră iar forma redusă
este incoloră:
50
METODE CHIMICE DE ANALIZA
O OH
CI CI
OH OH
51
CHIMIE ANALITICA
Determinarea punctului final al titrării se poate face vizual (cu ajutorul indica
torilor) sau instrumental.
Indicatorii de culoare redox sunt substanţe cu caracter oxidant sau reducător
(excepţie face amidonul) care pentru a fi utilizat tn volumetrie trebuie să-şi schimbe
culoarea brusc ta punctul de echivalenţă şi să sufere o schimbare reversibilă conform
reacţiei:
lnd ox + nH 3 ty + ne" s==5S H n I n d ^ + nH 2 0
culoar» I culoar* II
Proprietatea privind reversibilitatea este cel mai greu de atins deoarece forma
finală (redusă sau oxidată) suferă procese adiţionale Tn mediul de reacţie şi reacţia
de oxido-reducere devine ireversibilă. Indicatorii cei mai utilizaţi Tn volumetria bazată
pe reacţii redox sunt prezentaţi Tn tabelul 7.
Tabelul 7
Indicatori redox
Culoarea
Indicator
forma redusă forma oxidată
Albastru de metiten incolor albastru
Difenitbenzidina incolor violet (verde)
Acid dlfenHaminosulfonic Incolor violet (verde)
Complex feros-o-fenantrolină roşu albastru pal
Acid N-fenilantranilic incolor roz
52
METODE CHIMICE DE ANALIZA
acidul
ortoamonibenzoic
\ \ \
J 1 • 1 I
H3C — C = N — OH H2N — C H j — C H 2 — NH — C H 2 — CH 2 — NH 2
I
H3C—C = N —OH dietilentriamina
i*
dimetllglioxlma
53
CHIMIE ANALITICA
1
fJM(H20)„.,LRN + L"" = = = : lM(H,0),4L,r*" + HaO
în realitate, însă, reacţia are loc în patru trepte, pentru fiecare treaptă existând o
54
METODE CHIMICE PE ANALIZA
2
[zn *][NH3]
2
\2n(HHjif* + NH .«=r£ f2n(NH ) f*
3 i 2
[Zn(NH ) f ^ . o
'* [Zn(NH 3 )f*[NH 3 ]
[Zn(NH 3 ) 3 f*
i- 2,5x10*
+
Pn(NH )J* + N H * = * |Zn(NH,),f +
K
" [Zn(NH3)2r [NH3]
3 3
rZn(NH )3f • + N H
3 3 fZnfNrgj* * K .. ,ţ1x10«
" [Zn(NH 3 ) 3 rt|NH 3 ]
Pentru reacţia globală, constanta de stabilitate va fi:
K.=K^K,s K^.K.4=4^510«
Deci, un amestec de NH 3 şi Zn2* tn raport molar 4:1 va conduce la apariţia
ionului de zinc sub cinci forme: Zn 2 *, [Zn(NH3)]2*, [Zn(NH 3 ) 3 ] 2 *, [Zn(NH 3 ) 3 f* şi
(Zn(NH 3 ) 4 r*. i
Din acest motiv, dacă se urmăreşte modificarea concentraţiei ionului de zinc la
adăugarea de amoniac se observă o scădere gradată a concentraţiei ionului. Deoa
rece procesul nu prezintă o scădere bruscă a concentraţiei ionului Zn2*, punctul de
echivalenţă nu poate fi detectat cu precizie. Această reacţie prezintă şi dezavantajul
unei viteze de reacţie scăzute.
" Inexistenţa unui salt la echivalenţă precum şi vitezele de reacţie relativ scăzute
fac imposibilă utilizarea agenţilor de complexare monodentaţi ca reactivi de dozare în
volumetrie.
55
CHIMIE ANALITICA
Cel mai utilizat acid poliaminopolicarboxilic este sarea disodică a acidului etilen-
diaminatetraacetic notată prescurtat EDTA (complexon III, versen, versenat de sodiu
chelaton, trilon B). EOTA are următoarea structură:
pu M,CH2-CCONa
C H
*-N<CHa-COOH
*H _ M ^ O H 2 — C O O H
C H N<
' CH2-COONa
M 2 * + HjY2" + 2 H 2 0 = = MY2" + 2H 3 0*
M 4 * + H2Y2' + 2H 2 0 ss==5" MY + 2H 3 0*
M n * + H2Y2" + 2H 2 0 5 = = MY""4 + 2H a O*
[M"-].[H2Y2-]
56
METODE CHIMICE DE ANALIZA
CH 2
Ca
CH2-N<CH2-COO
CH2-COOH
H2N - CH 2 - CH 2 - NH 2 H2N - CH 2 CH 2 CH 2 - NH 2
etilendiamina 1,3-diaminopropan •
H2N - CH 2 - CH 2 - NH - C H 2 - C H 2 - NH - C H 2 - C H 2 - NHj
trietilentetraamina
^C^-CHj-NH,
N — CH2-CH2-NH2
^CH2-CH2-NH2
p,p',P"-triaminotrietilamină
57
CHIMIE ANALITICA
H,N - CH„ - CH a - NH - C H „ - C H , - NH - C H 8 - C H a - NH - C H 8 - C H „ - NH 2
tatraetilenpentaamină
Poiiaminele sunt agenţi de complexare foarte buni dar, nu sunt reactivi de titrare
universali, deoarece formează complecşi stabili numai cu acei ioni metalici care coor-
dinează amoniacul (Ni, Zn, Cu). Cele mai utilizate poliamine Tn volumetrie sunt trienul
şi tetrenul. *
Acest indicator este utilizat la pH mai mare decât 7, cele-mai multe determinări
complexonometrioe, cu acest indicator, se efectuează la pH 10. Pentru realizarea
58
' METODE CHIMICE DE ANALIZA ______
Reacţii de precipitare
Reacţiile analitice bazate pe procese de precipitare constituie o ramură de bază
a chimiei analitice. Un număr mare de separări, identificări şi dozări se bazează pe
reacţii cu formare de precipitate.
Reacţiile cu formare de precipitate sunt procese chimice de echilibru care de
curg în sistem eterogen, format din două faze: faza solidă (precipitatul) şi faza lichidă
(mediul lichid de reacţie). Precipitarea este completă în momentul în care între preci
pitatul format şi soluţia saturată se stabileşte un echilibru dinamic, când numărul ioni
lor care se depun pe suprafaţa precipitatului în unitatea de timp (la temperatură con
stantă) este egal cu numărul ionilor care trec în soluţie în aceeaşi unitate de timp.
Dacă notăm cu A_B„ sarea greu solubilă (precipitatul) formată în urma reacţiei
de precipitare, iar ionii săi cu A"*, B™", în soluţia saturată va exista echilibrul:
[AmB„]
Concentraţia fazei solide, AmB„, reprezintă o mărime constantă şi poate fi tre
cută în membrul stâng al relaţiei de mai sus obţinând:
K[ĂmBn] = P s = [ A " * ] m . ^ - ] n
59
CHIMIE ANALITICA
într-o fază greu solubilă. în funcţie de relaţia care există între produsul de solubilitate
şi concentraţiile-ionilor în soluţie, soluţiile pot fi:
a) soluH nesaturate: [A** ]m • [_B~ ]* < P8
X " M + A g r M - s = = AgX w
60
METODE CHIMICE DE ANALIZA
-LOFLM , —,
V
. A(H«>jlm,>
61
CHIMIE ANALITICA
49CX-1
Afli
P,-8,3 1 0 "
i
i
g AgBr
Ps-5,2 1 0
M
Afli P»-1,8 1 0
w
AgBr
AgCI
VA9N0>(ml>
-JOGLSOÎ]
VnKthi(ml)
62
METODE CHIMICE DE ANALIZĂ
Metoda Mohr
Această metodă se bazează pe formarea unui precipitat la punctul de echiva
lenţă fntre ionii indicatorului şi ion» de dozat, atunci când acesta atinge concentraţia
corespunzătoare a punctului de echivalenţă. Pentru utilizarea acestei metode este
necesar să aibă loc întâi precipitarea ionului de dozat cu reactivul de titrare şi apoi să
se formeze cel de-al doilea precipitat.
De exemplu, la titrarea ionului de clor cu azotat de argint se utilizează ca indi
cator cromatul de sodiu. Procesele care au loc în cazul acestei dozări sunt:
Pe parcursul titrării: Ag*+CI"-> AgCI,,, P s =1,8"IO" 10
La punctul final: 2Ag + + C r O f - > Ag 2 Cr0 4( „ Ps=t1-10_,z
roşu
Cromatul de sodiu, care acţionează ca indicator, este adăugat în proba care
conţine ionul de clor. Pentru a fi un indicator eficient, ionul cromat trebuie să reac
ţioneze cu ionul de argint atunci când în soluţie se atinge concentraţia ionului de
argint corespunzătoare punctului de echivalenţă. în concluzie, în cursul titrării se
formează un precipitat alb de ciorură de argint iar la punctul de echivalenţă se va
•forma un precipitat roşu de cromat de argint.
Deoarece ionul cromat imprimă soluţiei o culoare galbenă, virajul de la galben
la roşu este sesizat cu o eroare destul de mare. Pentru a evita eroarea de titrare care
apare datorită culorilor contrastante (galben-roşu) soluţia de cromat de potasiu
trebuie să aibă o concentraţie scăzută. Din cauza preciziei scăzute de determinare a
punctului de echivalenţă, metoda Mohr are o aplicabilitate restrânsă. Ea poate fi
utilizată pentru dozarea ionilor CI" şi Br", dar nu şi pentru dozarea ionilor I" şi
SCN".
Metoda Volhard
Această metodă este utilizată la dozarea ionului de argint cu o soluţie standard
de tiocianat şi foloseşte ca indicator o soluţie care conţine ionul Fe3*. Indicatorul este
adăugat în soluţia care conţine ionul de argint, pe parcursul titrării formându-se tiocia-
nura de argint:
Adăugarea unui mic exces de reactiv de titrare determină apariţia bruscă a unei
culori roşii datorate complexării ionului Fe3*:
Fe 3 * + SCN" = = = [Fe(SCN)F+
roşu
Această metodă se poate folosi şi la dozarea halogenurilor cu o soluţie stan
dardizată de azotat de argint, procedeul fiind bazat pe titrarea indirectă. Pentru a
realiza o astfel de dozare, în soluţia care conţine ionul X" se adaugă un volum exact
măsurat de soluţie standard de azotat de argint în exces. Ionii de argint nereacţionaţi
(aflaţi în exces) sunt titraţi cu o soluţie standard de SCN", utilizând ca indicator ionul
Fe3*.
63
CHIMIE ANALITICA
H Ind = = _ H* + Ind"
cr or
+cr
A +
9 Ag*
64
METODE CHIMICE PE ANALIZĂ
Tabelul 8
Indicatori de adsorbţie utilizaţi în volumetria bazată
pe reacţii de precipitare
65
CHIMIE ANALITICA
66
METODE CHIMICE DE ANALIZĂ
67
5. METODE FIZICO-CHIMICE DE ANALIZĂ
5 . 1 . CLASIFICAREA M E T O D E L O R F I Z I C O - C H I M I C E
DE ANALIZĂ
Domenii spectrale
Lumina sau radiaţia electromagnetică prezintă un caracter dual: de undă şi de
particulă. Natura ondulatorie a luminii explică o serie de fenomene optice, cum sunt:
reflexia, difracţia, interferenţa şi difuzia lumini Natura corpusculară a luminii explică
procesele de emisie şi absorbţie a radiaţiei electromagnetice de către atomi şi mole
cule.
Lumina este reprezentată de particule (fotoni) de masă m care se deplasează
cu viteza c ( 3 - 1 0 m/s) şi posedă o undă asociată, de lungime de undă X şi frec
8
69
CHIMIE ANALITICA
mc
înlocuind produsul mc în relaţia lui Planck se obţine relaţia existentă între
energia unei particule (E) şi lungimea sa de undă l:
E-h.£
X.
Din expresia obţinută se poate observa relaţia de inversă proporţionalitate care
există între energie şi lungime de undă.
în funcţie de lungimea de undă, radiaţiile electromagnetice au fost împărţite în
domenii spectrale. în figura 11 sunt prezentate domeniile spectrale şi implicaţiile pe
care le prezintă la nivel molecular absorbţia unei radiaţii electromagnetice de către
materie.
r
— ~ " T
Tranziţii ale ;
electronilor .
de pe straturile •
interne j
Tranziţii ale
electronilor
de valenţă
Vibraţii
moleculare
Rotaţii
moleculare
70
METODE FIZICO-CHIMICE DE ANALIZA
o. *
ORBITALI DE ANTILEGÂTURÂ
Tt* ..
n ORBITALI DE NELEGĂTURÂ
n
ORBILTAU DE LEGÂTURÂ
O
71
CHIMIE ANALITICA
L )
PROBA
A = lgk
to^-e-c-d
;
• ... ' - -
0,1 %
Concentraţi*
73
CHIMIE ANALITICA
Absorbantă Absorbantă
(DO) (DO) B
74
METOOE FIZICO^HIMICE DE ANALIZA
Absorbanţi
Ama- X
Aparatură
Pentru determinarea absorbantei se utilizează aparate numite spectrofotometre.
Aceste aparate sunt capabile să producă radiaţii cu lungimi de undă definite şi carac
teristice şi să determine intensitatea radiaţiei absorbite. Schema generală a unui
spectrofotometru este redată în figura 17:
1
— )/ • 1
Sursă de Monocromator Cuvă Detector înregistrator
radiaţii
75
CHIMIE ANALITICA
76
METODE FIZICO-CHIMICE DE ANALIZĂ
Modulator
Flacăra
Monocromator Detector
Probă
Sursă de
radiaţii
Combustibil
77
CHIMIE ANALITICA
Detector
Proba
Combustibil
Sursa de căldură
Tabelul 9
Combustibili utilizaţi în spectroscopia de emisie atomică
TEMPERATURĂ
COMBUSTIBIL OXIDANT OBSERVAŢII
°C
Propan aer temperatura scăzută determină
1900°C excitarea unor atomi uşor exci-
Butan aer tabiii ca: Na, Li, K şi Ca
temperatură medie corespunză
toare majorităţii emisiilor;
Acetilenă aer 2300°C
se pot excita şi atomii de Mg, Mn
şiSr
oxid de temperatura ridicată determină
Acetilenă 3000°C excitarea elementelor retractile
azot
ca P
78
METODE FIZICO-CHIMICE DE ANALIZA
Emisia tn plasmă
Plasma este produsă prin cuplarea unui gaz ionizabil cu câmpul electric ai unei
surse de microunde; electronii cu viteză mare ionizează gazul producând plasma.
Faţă de flacără, temperatura în plasmă este mult mai ridicată şi excitarea atomilor
mai puternică, ceea ce determină creşterea sensibilităţii.
S'.-rsic** Proba
radiaţi !
79
CHIMIE ANALITICA
CELULE ELECTROCHIMICE
Celulele electrolitice
La aplicarea unei diferenţe de potenţial între doi electrozi imersaţi într-o soluţie,
soluţia va fi traversată de un curent electric care va genera reacţii chimice care nu au
loc în mod spontan. Proprietăţile electrice ale soluţiei determină relaţia dintre voltajul
aplicat şi cantitatea de curent ce traversează soluţia şi stau la baza metodelor con-
ductometrice şi polarimetrice. Schema unei celule electrolitice este redată în figura
21 A.
Celule galvanice
Celulele galvanice (pile electrice) generează energie electrică în urma unor
reacţii chimice care au loc în mod spontan. în aceste celule, natura chimică a elec
trozilor şi soluţiilor conduce la reacţii chimice care au loc la electrozi şi care gene
rează energie electrică fără a avea nevoie de un voltaj extern (figura 21 B). O formă
restrictivă a celulelor galvanice este utilizată în potenţiometrie, metodă în care între
electrozi nu este aplicat un voltaj exterior şi nu trece un curent electric, dar se dez
voltă un potenţial relativ în soluţie dependent de natura electrozilor şi soluţiei.
80
METODE FIZICO-CHIMICE DE ANALIZA
M
M* N*
captare de eliberare de
electroni electroni
A B
Figura 21 - Schema unei celule electrolitice (A) şi a unei celule galvanice (B)
în mod uzual, electrodul indicator este constituit dintr-un metal nobil (Pt, Ag) şi
are rolul de a capta electronii care participă la reacţie. Ca electrozi indicatori se pot
utiliza şi electrozi de cărbune sau electrozi membrană ion-selectiv, pentru cationi sau
anioni, iar în pH-metrie electrodul de sticlă sau de platină pretratat.
Electrozii de referinţă cei mai utilizaţi sunt electrodul de calomel şi electrodul
Ag-AgCI.
Electrodul de calomel este alcătuit dintr-un fir de platină care face contactul
electric cu un electrod care este alcătuit dintr-o pastă de mercur metalic, ciorură mer-
curică (calomel) şi ciorură de potasiu (figura 22). Tubul de sticlă în care se află firul
de platină şi pasta de calomel este umplut pe jumătate cu o soluţie saturată de
ciorură de potasiu şi are rolul de a întreţine contactul electric direct cu dopul poros.
Cele mai cunoscute aplicaţii ale potenţiometriei sunt determinarea pH-ului şi
stabilirea punctului de echivalenţă în volumetrie.
81
CHIMIE ANALITICA
Fir „platina
Marcur
Pasa
Soluţia saturată da
cloruri da potasiu
Cloruri da pot—• lu solidă
Dop poros
Electrod da Ag-AgCI
Sotuţte interni da
rafarlnţi do HCI 0,1*1
Mombrani de sticli
multe ori combinat cu electrodul de referinţă Tn acelaşi tub de sticlă (figura 23 B).
Electrodul de sticlă trebuie păstrat fn apă între utilizări pentru a menţine membrana
permanent hidratată.
82
METODE FIZICO-CHIMICE DE ANALIZĂ
3)
Figura 23 - B. Electrodul
combinat
Electrod de calomel
Dop poros
KClaoild
Electrod de Ag-AgCI
Soluţie de referinţa
de HCI 0,1M
Membrana de aticii
B
83
CHIMIE ANALITICA
RwtotMitfvartaMIi
AAAAAAAAAAAAAA
Electrozi
P"14
12
10
t
|
8 .1
•C
O
7
Figura 25 - Curba de titrare
potenţiometrică a unei soluţii de
6 acid acetic 0,1 M cu o soluţie de
NaOH 0,2M
84
METODE FIZICO-CHIMICE DE ANALIZA
Tabelul 10
Electrozi ion-selectiv
ss
CHIMIE ANALITICA
Electrodul Intern
de referinţa
Soluţia electroMtului
da referinţa
Membrana lon-selectlvi
tudine structurală cu ionii mobili din reţea pot avea acces din afara membranei Tn
interior şi vor conferi membranei o specificitate ridicată. La imersarea electrodului Tn
soluţia de analizat se stabileşte un echilibru Tntre ionii mobili din cristal şi ionii similari
din soluţie determinând crearea unui potenţial la suprafaţa membranei care poate fi
determinat printr-o metodă uzuală.
Cele mai simple membrane solide sunt cele destinate determinării ionilor
comuni cu ionii mobili din cristali şi sunt confecţionate dintr-un cristal alcătuit dintr-o
singură substanţă. în figura 27 este prezentată schema unui electrod ion-selectiv
specific pentru ionul de Ag* a cărui membrană este confecţionată din sulfura de
argint. Ionul mobil din reţea, ionul de argint, trece In soluţie iar ionii de argint din solu
ţie trec prin membrană, la stabilirea echilibrului la suprafaţa membranei generân-
du-se o diferenţă de potenţial.
în cazul in care membrana solidă este constituită din mai multe substanţe, ionul
de analizat poate să reacţioneze cu unul dintre ionii din membrană determinând
alterarea activităţii ionului mobil din membrane. Astfel, electrodul ion-selectiv cu
membrană de AgCI/Ag2S la imersarea Intr-o soluţie care conţine ionul CŢ determină
o reacţie a ionului Ag* cu ionul CI'. Această reacţie generează scăderea activităţii
ionului de argint şi implicit modificarea diferenţei de potenţial de la suprafaţa
membranei (figura 28).
Electrozii cu membrană lichidă sunt confecţionaţi dintr-un material ion-selectiv
dizolvat într-un solvent nemiscibH cu apa. Lichidul este inserat într-o membrană po
roasă, inertă, care se află în contact cu soluţia internă de referinţă a electrodului pe o
faţă şl cu soluţia care se testează pe partea opusă. Ionii din lichidul de referinţă se
vor repartiza între cete două lichide nemiscibile (faza apoasă şi faza organică) con
ferind electrodului un potenţial propriu. Prezenţa ionului de testat în probă afectează
activitatea ionilor din membrană determinând schimbarea diferenţei de potenţial la
suprafaţa membranei.
86
METODE FIZICO-CHIMICE DE ANALIZA
Electrod
cr
87 .'
O M M E AIIMJ»T4CaA
Electrod
Soluţie de referinţa
• Ionului de analizat
; MEMBRANĂ :.•
SOLVENT • MEMBRANĂ
ION-SELECTIV ',
ION OE TESTAT
88
METODE FIZICO-CHIMICE DE ANALIZA
A K
—O
0-
— o
89
CHIMIE ANALITICA
5.1.2.3. BIOSENZORI
90
METODE FIZICO-CHIMICE DE ANALIZA
V reactiv (cm*)
3 V reactiv (CITI1)
Vreactiv (cm )
Figura 31 - Curbe de titrare conductometrică pentru reacţii
de neutralizare (a, b, c) şi reacţii de precipitare (d)
Componenţii biosenzorilor
Componenţii biologici care intră în structura biosenzorilor sunt prezentaţi în
tabelul 11. Aceşti componenţi conferă biosenzorilor specificitate şi fac posibilă
efectuarea unei analize fără o pretratare a probei.
Tabelul 11
Componenţii biosenzorilor
COMPONENT EXEMPLE
Enzime
Biocatalizatori Celule animale, vegetale, microbiene
Organite subcelulare
Anticorpi
Lectine
Bioreceptori Receptori membranari
Acizi nucleici
Molecule sintetice
91
CHIMIE ANALITICA
Tipuri de biosenzori -!
Biosenzorii electrochimici cei mai utilizaţi sunt cei cu enzime deoarece multe
reacţii enzimatice decurg cu formare sau consum de specii electroactive care pot fi
monitorizate ampermetric, potenţiometric sau conductometric.
Biosenzorii ampermetricidetermină curentul rezultat la aplicarea unei diferenţe
de potenţial între transductor şi electrodul de referinţă. Curentul este produs în urma
oxidării la anod sau a reducerii la catod a speciilor analizate. Cantitatea de curent
este dependenţă de concentraţia speciilor de la suprafaţa electrodului. Acest tip de
transducere este aplicat pentru dozarea substanţelor care au caracter reducător sau
oxidant.
De exemplu, biosenzorul utilizat la dozarea glucozei din sânge are ca funda
ment reacţia de oxidare a glucozei în prezenţa glucozoxidazei:
glucoza + Q2 -> acid gluconic + H 2 0 2
Cu ajutorul unui electrod (electrodul Clark) se determină scăderea curentului
datorată consumului de oxigen.
Biosenzorii potenţiometrici determină diferenţa de potenţial dintre electrodul
transductor şi electrodul de referinţă. Aceşti biosenzori utilizează electrozi ion-selectiv
şi electrozi sensibili la gaze.
92
METODE FIZICO-CHIMICE DE ANALIZĂ
5.1.3.1. CROMATOGRAFIA
93 .
CHIMIE ANALITICĂ
ELUENT ELUENT
2 A
NA
s -"^1 B
FAZA SI
O)
B
FAZA
Figura 32 - Mecanismul de separare Tn cromatografia de adsorbţie
ELUENT ELUENT
&3= B
94
METODE FIZICO-CHIMICE DE ANALIZA
95
CHIMIE ANALITICA
Tabelul 12
Tipuri ale gelului utilizate în cromatografia de excludere moleculară
96
METODE FIZICO-CHIMICE DE ANALIZA
Polimer
insolubil
97
CHIMIE ANALITICA
Rezervor
jjgntru încălzitor încălzitor încălzitor înregistrator
gaz p'.rtăto-
98
METODE FIZICO-CHIMICE DE ANALIZA
Principiul de separare este următorul: faza mobilă (gazul purtător) curge prin
sistem transportând proba, care a fost introdusă în blocul de injecţie. în coloană,
separarea componenţilor are loc datorită adsorbţiei sau repartiţiei diferenţiate a lor în
faza staţionară lichidă sau solidă. După separare, fiecare component este detectat
pe măsură ce părăseşte coloana.
Gazulpurtător(faza mobilă) este, în mod obişnuit, heliu sau azot (gaze inerte).
Blocul de injecţie este amplasat astfel încât proba să fie introdusă direct în
gazul de transport. In blocul de injecţie are loc evaporarea instantanee a probei,
astfel încât trecerea în coloană să se facă rapid.
Coloanele folosite în gaz-cromatografie sunt confecţionate în mod obişnuit din
ţevi de oţel inoxidabil sau cupru, cu un diametru de 1,5-8 mm şi lungimea de 1-4 m.
Coloanele sunt umplute cu un material solid (cromatografie solid-gaz) sau cu un solid
inert acoperit cu un strat lichid (cromatografie gaz-lichid).
Coloana este plasată într-un cuptor, astfel ca temperatura să fie reglată şi con
trolată (25-400°C). Pentru probe biologice sau pentru probe care reacţionează cu
oţelul inoxidabil sau cupru se folosesc, în mod frecvent tuburi de sticlă.
Coloanele pot fi umplute cu diferite substanţe care au rolul de a funcţiona ca
faze staţionare: adiponitril, asfalt, ceară de albine, carbowax, cauciuc siliconic, alege
rea acesteia fiind făcută în funcţie de natura amestecului care trebuie separat.
Cauciucul siliconic este utilizat ca fază staţionară în gaz-cromatografie pentru
analiza alcoolilor, compuşilor aromatici, compuşilor biliari, medicamentelor, alcaloi-
zilor, acizilor graşi, pesticidelor, vitaminelor.
Detectorii au rolul de a analiza gazul care părăseşte coloana cromatografică şi
de a transmite la înregistrator informaţia primită. Detectoarele pot fi: cu conductibi-
litate termică, cu ionizare în flacără şi cu captură de electroni.
Detectorul cu conductibilitate termică are ca fundament principiul: un obiect în
călzit pierde căldura cu o viteză determinată de compoziţia gazului înconjurător. Aşa
dar, viteza cu care se pierde căldura reprezintă o măsurare a compoziţiei gazului.
Dacă peste filamentul detectorului trece gazul purtător, în condiţii constante, atunci
pierderea de căldură este constantă. Schimbarea compoziţiei gazului din jurul fila
mentului determină modificarea temperaturii şi implicit modificarea rezistenţei fila
mentului. Această modificare de rezistenţă este evaluată şi pusă în evidenţă de înre
gistrator. '
Detectorul cu ionizare în flacără constă dintr-o flacără H2-aer amplasată într-un
câmp electrostatic. La trecerea gazului purtător, în regim constant, peste flacără cu
rentul electric rămâne constant. Când o substanţă organică părăseşte coloana, va fi
transportată de gazul purtător în flacără unde are loc combustia sa. în urma com
bustiei se produc ioni şi electroni care vor modifica curentul electric. Modificarea
curentului electric, determinată cu un set de electrozi, este proporţională cu concen
traţia probei.
Detectorul cu captură de electroni funcţionează pe baza absorbţiei de electroni
de către compuşii care au afinitate pentru electroni (de exemplu, halogenii). Acest
detector este constituit dintr-o sursă radioactivă care emite electroni, un catod care
respinge electronii şi un anod care colectează electronii. "
Absorbţia electronilor de către anod are loc în mod constant la trecerea gazului
purtător. Pe măsură ce un compus intră în detector, electronii vor fi absorbiţi având
loc o scădere a numărului de electroni care ajung la anod şi deci o scădere a curen
tului electric. în acest mod detectorul va prezenta un răspuns dependent de compo
ziţia gazului care părăseşte coloana cromatografică. Detectorii cu captură de elec-
99
CHIMIE ANALITICĂ
troni sunt utilizaţi la analiza pesticidelor, deoarece clorul, care intră tn constituţia lor,
prezintă afinitate pentru electroni.
înregistratorul, în conformitate cu informaţia primită de ia detector, va înregistra
răspunsul detectorului în funcţie de timp. Această înregistrare se numeşte cromato-
gramă şi se prezintă sub forma unei linii curbe cu maxime şi minime numite picuri.
, Analiza calitativă
Pentru efectuarea unei analize calitative se compară timpii de retenţie ai com
ponenţilor de analizat cu timpii de retenţie ai unor etaloane. în figura 37 este ilustrată
o cromatogramă pentru un amestec de alcooli necunoscuţi şi o cromatogramă pentru
o serie de alcooli cunoscuţi (etaloane). Prin comparare se pot identifica alcoolii
necunoscuţi din probe.
Alcooli
necunoscuţi
S 9
Injectare
_L!
0 n6 .12 '18
L i 24 30 36 min
>i
Etaloane A
A Alcool metilic
B Alcool etilic
C Alcool n-propilic
D Alcool n-butllic
E Alcool n-amilic
Injectare
l_
0 6 12 18 24 30 36 min
Analiza cantitativă se poate realiza prin mai multe metode, cea mai importantă
fiind triangulaţia, în cazul acestei metode, se calculează aria fiecărui pic prin asimi
larea picului cu un triunghi (figura 38).
Cunoscând suma ariilor, ZA, şi aria fiecărui pic se calculează compoziţia pro
centuală a fiecărui component după relaţia;
%C .2*. 100
A,
Metoda gaz-cromatografiei este caracterizată printr-o sensibilitate ridicată, per
miţând analiza calitativă şi cantitativă a amestecurilor care conţin substanţe în canti
tăţi de ordinul nanogramelor (10~°g).
IOO
METODE FIZICO-CHIMICE DE ANALIZĂ
T i m p de retenţii
5.1.3.2. ELECTROFOREZA
Prin suspendarea unei particule coloidale încărcate electric într-un mediu lichid,
particula va fi înconjurată de ioni de semn contrar din mediul cu care se află în con
tact (figura 39). în acest mod în jurul particulei se va crea un strat ionic imobil format
din ionii adsorbiţi la suprafaţă şi un strat mobil care devine din ce în ce mai mobil o
dată cu creşterea distanţei faţă de suprafaţa coloidului. Sarcina particulei coloidale,
dependentă de compoziţia sa chimică şi de pH-ul mediului lichid, este numită
potenţial electrochimie.
Potenţialul electrochimie al coloidului scade la creşterea concentraţiei sării din
soluţia tampon datorită efectului de neutralizare produs de ionii adsorbiţi. Sarcina
101
CHIMIE ANALITICA
Stratul mobil
POTENŢIAL POTENŢIAL
ELECTROCHIMIC 2ETA
netă rezultată este numită potenţial zeta şi este factorul determinant al mobilităţii
electroforetice.
La aplicarea unei diferenţe de potenţial particula coloidală se va deplasa spre
electrodul de semn contrar cu forţă F direct proporţională cu sarcina sa (e) şi cu
intensitatea curentului electric (E).
F = eE
Acestei forţe de deplasare i se opune o forţă de frecare internă (F') propor
ţională cu viteza particulei (v), vâscozitatea mediului (n.) şi raza particulei (r):
F=6jtr-r|-v
Egalând cele două forţe obţinem:
e-E = 6nr-r|-v
Din această relaţie se obţine expresia vitezei de migrare a particulei x în câmp
electric:
e-E
6nr-n.
Mobilitatea electroforetică reprezintă viteza de deplasare a particulei într-un
câmp electric de 1 volt/cm şi este direct proporţională cu viteza şi invers proporţio
nală cu intensitatea câmpului electric:
102
METODE FIZICO-CHIMICE DE ANALIZA
_ v __d_ cm2
M
~E~tE volts
Ionii de sarcină contrară care intră în constituţia stratului fix şi mobil tind să
antreneze particula în direcţie opusă sensului ei de migrare, determinând o micşorare
a mobilităţii electroforetice.
Potenţialul eiectrocinetic este potenţialul de sarcină contrară care se crează în
jurul particulei coloidale şi care tinde să-i frâneze mişcarea. Acest proces de frânare
va fi direct proporţional cu concentraţia ionilor din tampon şi implicit cu molaritatea
tamponului. Tăria ionică a tamponului (u) este jumătate din suma produsului dintre
molaritatea tamponului (e) şi sarcina ionilor din soluţie la pătrat (C):
Termenul ^ este necesar deoarece numai jumătate din ionii soluţiei tampon sunt de
sarcină opusă coloidului şi sunt capabili să modifice sarcina particulei.
De asemenea, unele medii utilizate ca suport de migrare (hârtia de filtru) se
încarcă negativ la pH-ul la care se face electroforeza. Din această cauză, lichidul
care îmbibă S u p o r t u l de migrare se încarcă pozitiv şi va migra spre electrodul nega
tiv. Acest fenomen de deplasare a lichidului în sens invers se numeşte electroendo-
osmoză şi tinde să micşoreze mobilitatea electroforetică a particulelor.
Un alt factor care afectează deplasarea în câmp electric a particulei coloidale
este căldura dezvoltată ca urmare a trecerii curentului electric. Acest factor determină
creşterea conductivităţii electrolitului din soluţie şi de asemenea creşterea curentului.
Această creştere a temperaturii produce evaporarea apei din soluţia tampon determi
nând creşterea concentraţiei acesteia, modificarea potenţialului zeta şi conductivităţii
tamponului. Din acest motiv se impune controlul temperaturii şi menţinerea constantă
fie a voltajului, fie a curentului.
Schema celui mai simplu tank (cuvă) de electroforeza este prezentată în figura
40.
Electrod
Cea mai utilizată tehnică electroforetică este tehnica zonală şi presupune apli
carea probei de analizat pe un suport solid şi inert şi separarea componentelor de
analizat sub forma unor benzi (zone).
103
CHIMIE ANALITICĂ
Hârtia de filtru constituie cel mai vechi şi utilizat suport de electroforeza cu toate
că prezintă o serie de inconveniente. Structura neregulată a hârtiei conduce la forma
rea unor benzi neregulate iar polaritatea pe care o prezintă celuloza produce un efect
de absorbţie responsabil de slaba conturare a zonelor. De asemenea, datorită tim
pului lung necesar separării (12-18 h) şi a cantităţii mari de tampon conţinut de hârtie,
apar procese de difuzie care determină lăţirea benzilor obţinute în urma procesului
de separare.
Comparativ cu alte medii utilizate ca suport în electroforeza, utilizarea hârtiei de
filtru necesită un volum mare de probă (10 y\) şi a unui voltaj ridicat (-6 kV). Această
tehnică este în mod particular utilizată la separarea moleculelor mici care prezintă
sarcini electrice apropiate (nucleotide).
Membranele de acetat de celuloză conţin un număr mai mic de grupări polare
comparativ cu celuloza, datorită acetilării grupărilor hidroxil, şi o structură mai regu
lată a porilor. Din acest motiv, efectul de absorbţie este mai scăzut, necesită un
volum mai mic de probă (1 -2 ni) şi separarea se face într-un timp mai scăzut (1 -2 h).
Membranele de acetat de celuloză nu elimină electroendoosmoza dar, datorită tran
sparenţei pe care o prezintă, permit utilizarea densitometrului la efectuarea analizei
cantitative. Aceste membrane prezintă dezavantajul unei fragilităţi foarte mari în stare
uscată şi necesită o manipulare foarte atentă.
Gelurile utilizate ca suport în electroforeza elimină dezavantajele pe care le pre
zintă hârtia de filtru şi acetatul de celuloză şi se caracterizează printr-o putere mult
mai mare de rezoluţie, delimitare mai netă a fracţiunilor şi o migrare mai rapidă.
Gelul de agar se prepară din agar purificat gelificat într-un electrolit tamponat
într-o concentraţie de I 0 g - l ' \ Acest gel are o utilizare mai restrânsă deoarece nu
înlătură fenomenul de electroendoosmoza datorită polarităţii crescute pe care o pre
zintă şi cauzează precipitarea unor substanţe cum sunt lipoproteidele.
Gelul de agaroză (5 - 8 g • I'"1) conţine un număr mai mic de grupări polare com
parativ cu gelul de agar şi de aceea elimină efectele de electroendoosmoza şi con
feră un efect de sită moleculară pentru molecule mari ca proteine şi acizi nucleici.
Gelul de amidon (150 g r 1 ) este un gel cu pori mici care expune proprietăţi de
sită moleculară mai mari decât gelul de agaroză. Acest gel este preparat prin hidro-
liza parţială a amidonului din cartofi, mărimea porilor fiind dependentă de mărimea
fragmentelor rezultate la hidroliză (de gradul de hidroliză). într-un astfel de mediu
moleculele mari vor fi stânjenite de structura porilor şi se vor deplasa cu viteză mult
mai mică, comparativ cu viteza de deplasare a moleculelor mai mici care au acelaşi
potenţial electrochimie. Acest efect de sită moleculară conduce la creşterea gradului
de rezoluţie. Gelul de amidon prezintă dezavantajul că este extrem de fragil iar
porozitatea este dependentă de gradul de hidroliză, reproductibilitatea porozităţii fiind
scăzută.
Poiiacrilamidă oferă mai multe avantaje comparativ cu gelul de amidon fiind un
mediu cu o înaltă rezoluţie electroforetică şi datorită naturii sale sintetice mărimea
porilor poate fi controlată cu uşurinţă. Gelul este rezultat prin polimerizarea a doi mo-
nomeri: acrilamida şi agentul de înreţelare N,N-metilen-bis-acrilamida (figura 41).
Proporţia celor doi monomeri şi nu concentraţia lor totală este factorul care determină
mărimea porilor precum şi elasticitatea şi transparenţa gelului. Mărimea porilor scade
la creşterea proporţiei bis-acrilamidei până la valoarea minimă de 5% care conferă
104
METODE FIZICO-CHIMICE DE ANALIZĂ
— CH,— C
CHH —jCHJ —C H — ! C H , — C H
I I
C =
O c*=oi c=o
I
I I I
N H I NH,
NH,
I I
CH, |
I I
u!
N H .
I
I
— CH5 CH
I I C H . — CH —
— C H
I " I
C = O c = o
I I
N H NH.
cea mai mică porozitate. Polimerizarea gelului poate fi grăbită.cu ajutorul persul-
fatului de amoniu care are rol de catalizator. Este necesar să se includă şi un iniţiator
al reacţiei de polimerizare, TEMED (tetrametilendiamina) fiind cel mai utilizat.
Electroforeza în gel de poiiacrilamidă (PAG) se execută în tuburi cilindrice de
sticlă sau în placă, la un curent scăzut pentru evitarea fenomenelor de încălzire.
Electroforeza în gel de poiiacrilamidă este utilizată în foarte multe domenii, ca
studiul proteinelor şi acizilor nucleici. Metoda electroforezei în gel de poiiacrilamidă
este utilizată şi pentru determinarea masei moleculare relative a proteinelor, prin
utilizarea detergentului dodecilsulfat de sodiu (SDS).
Fixarea componentelor separate pe suport, sub formă de benzi, se face prin
încălzire ia 100°C, pentru electroforeza pe hârtie, sau prin tratare cu acid triclorace-
tic. Vizualizarea benzilor (fracţiunilor separate) se realizează cu ajutorul unor colo
ranţi (comassie blue, amidoschwârtz, albastru de bromfenol). în urma procesului de
colorare se obţin nişte pete de culoare numite spoturi.
Analiza calitativă
Numărul spoturilor obţinute în urma separării electroforetice şi poziţia lor con
feră informaţii referitoare la numărul şi tipul componenţilor din proba de analizat. Ast
fel, la electroforeza pe hârtie a serului sanguin se obţin cinci spoturi corespunzătoare,
în ordinea scăderii mobilităţilor electroforetice, albumlnelor, a,-, a2-, p- şi y -globu-
linelor (figura 42).
Analiza cantitativă a electroforegramelor se bazează pe principiul legii
Lambert-Beer. Evaluarea poate fi realizată prin: metoda eluţiei şi metoda densito-
metrică.
105
CHIMIE ANALITICĂ
T globulirv» p a2 ai Albumln»
te
Procentul corespunzător arioi flecarul pic
19 11 9 S M
I06
BIBLIOGRAFIE SELECTIVĂ