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Espectrometria de Masas. Principios y Aplicaciones

Espectrometria de Masas. Principios y Aplicaciones

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Published by: Oscar Fernando Benavides Calderon on Nov 18, 2010
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 Espectrometría de Masas
4. ESPECTROMETRIA DE MASAS 
La espectrometría de masas (EM) es una técnica de análisis basada sobre la separación de acuerdo a susrazones masa/carga de las especies cargadas formadas a partir de la ionización de una muestra. Se trata deuna técnica extremadamente sensible, de gran versatilidad y cuyos campos de aplicación experimentan uncrecimiento vertiginoso en nuestros días. La EM suministra información muy valiosa sobre los compuestosquímicos: la masa molecular, la fórmula global y, a partir del patrón de fragmentaciones, la estructuramolecular. asi como la composición isotópica en sustancias naturales o marcadas. Debe reiterarse la elevadasensibilidad de la EM (en condiciones muy especiales pueden detectarse señales correspondientes a sólo 10iones) por lo que es la preferida para la determinación de trazas en química ambiental y en los controlesantidopaje.Los orígenes de la EM se remontan al estudio de la conducción de la electricidad en los gases a finales delsiglo XIX. El descubrimiento por Goldstein en 1886 de los rayos canales (iones positivos) y la medición desu razón masa/carga por Wien en 1898, mediante deflexión bajo la acción de campos eléctricos ymagnéticos, son los hitos iniciales del desarrollo de la espectrometría de masas. Wien encontró que losrayos canales tenían carga opuesta y una razón masa/carga muy superior a las del electrón, determinada esemismo año por J.J.Thomson. Thomson comienza en 1905 a estudiar estos rayos canales positivos y recibeen 1906 el premio Nóbel de Física por sus estudios de la conductividad eléctrica en gases. En 1913 lograseparar iones con diferente razón masa/carga, determinando la existencia de los dos isótopos del neón
P
20
P
 Ne y
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22
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 Ne. Francis Aston construye en 1919 el primer espectrógrafo de masas rudimentario con un poder deresolución de 130 y recibe en 1922 el premio Nóbel por su descubrimiento, mediante el espectrógrafo demasas, de un gran número de isótopos de elementos no radiactivos.1934 Mattauch y Herzog desarrollan un espectrómetro de masa de doble enfoque y Dempster en 1936 lafuente de ionización por chispa. En 1937 Aston construye un espectrógrafo con un poder de resolución de2000. En 1931 Lawrence desarrolla el ciclotrón por lo que recibe el premio Nóbel en 1939 y sus principiosson aplicados al enriquecimiento de uranio en el proyecto Manhattan.La urgente necesidad de métodos de análisis eficientes de las fracciones de petróleo durante la segundaguerra mundial llevó a la aplicación de la EM al campo de los compuestos orgánicos. Los primeros EMcomerciales aparecerán al finalizar la guerra. En 1946 Stephens presenta al concepto de EM con analizador de tiempo de vuelo. La aplicación de la EM a los compuestos orgánicos y el estudio de las fragmentacionescomo fuente de información estructural se desarrollan muy rápidamente desde fines de los años cuarenta delsiglo XX. En 1956 Mc Lafferty propone la reacción de transferencia de hidrógeno o reordenamiento que243
 
 Espectrometría de Masas
lleva su nombre. En 1959 se comienzan a desarrollar los sistemas acoplados (cromatógrafo gaseoso-espectrómetro de masas). Aparecen nuevos métodos de generación de iones y de analizadores. En 1966 seintroduce la ionización química y en 1968 Dole desarrolla la ionización por electronebulización. En 1974Comisarow y Marshall diseñan la EM mediante resonancia ión ciclotrón-transformada de Fourier y en 1976Mc Farlane y colaboradores desarrollan la EM por desorción de plasma.
 
En los años ochenta se desarrollannuevas técnicas de ionización efectivas que permiten la ionización de especies no volátiles, con mínimadescomposición. Estos métodos abren las puertas a las aplicaciones de la EM al campo de lasmacromoléculas y en particular las biomoléculas
.
En 1984 Fenn y colaboradores aplican laelectronebulización para ionizar biomoléculas. En 1985 Hillencamp, Karas y otros describen la ionización por desorción con láser inducida por matrices (MALDI) y en 1987 Tanaka perfecciona el método paraionizar proteínas intactas. En 1989 Paul recibe el premio Nóbel por el desarrollo de la trampa de iones. En2002 Fenn y Tanaka reciben el premio Nóbel de Química por el desarrollo de métodos de ionización por desorción suaves para el análisis por EM de macromoléculas biológicas.
4.1 Espectrómetro de masas4.1.1 Principios
Los fundamentos de la espectrometría de masas pueden ejemplifican mediante la técnica de ionizaciónelectrónica.Electrones acelerados a través de un campo eléctrico adquieren energía cinética considerable y pueden interactuar con moléculas (M) para originar especies cargadas:M + e- M
P
.+
P
+ 2e-En este caso M
P
.+
P
es un catión-radical molecular. Normalmente M
P
.+
P
se forma en un estado excitado y puede sufrir fragmentación , que puede ser de diferentes formas:E
P
+
P
+
P
.
P
(radical)M
P
.+
P
 P
P
.+
P
+ N (molécula)Los iones E
P
+
P
y P
P
.+
P
a su vez pueden fragmentarse y así sucesivamente. La forma de fragmentacióndependerá en cada caso de la estructura molecular. La mayoría de los iones producidos tiene una cargacorrespondiente a la pérdida de un solo electrón (e = 1.6 10
P
-19
P
C), aunque también se pueden obtener ionesmulticargados. La carga total de los iones se representa usualmente por q (q=ze), donde e es la carga del244
 
 Espectrometría de Masas
electrón y z el número de cargas sobre el ión. Todos los iones producidos son separados en un espectrómetrode masas de acuerdo con su razón masa/carga. La masa se expresa en unidades de masa atómica (u) o Dalton(Da) (1u = 1Da = 1.6654 10
P
-2
PP
7
P
kg) de manera que la razón masa/carga (m/z) se expresa en Thompson (Th =Da/z). Los iones así separados son detectados como corrientes iónicas cuyas intensidades son proporcionales a sus abundancias respectivas. Procesando esta información se obtiene un espectro de masas(EM), tal como se muestra en la Figura 4.1
Figura 4.1 Espectro de masas del metanol obtenidomediante una fuente de ionización por EI.Representado como gráfico de líneas y como tabla.
El pico más intenso en el EM se denomina pico base y en los gráficos de líneas, como el mostrado en lafigura 4.1, se utiliza como intensidad de referencia para el resto de los picos significativos.De acuerdo con lo descrito hasta el momento, un espectro de masas puede ser representado por un gráfico enel cual el eje (x) corresponde a la razón m/z de cada ión y el eje (y) a la abundancia o intensidad relativacorrespondiente a cada valor de m/z.Para obtener un espectro de masas es necesario:-
 
Introducir la muestra en forma y cantidad apropiada [Sistema de introducción de la muestra]-
 
Producir iones [Fuente de ionización]-
 
Separar los iones de acuerdo con su razón m/z [Analizador]-
 
Registrar (detectar) el resultado de la separación de los iones [Detector ]-
 
Representar los resultados.En la Figura 4.2 se muestra esquematicamente un espectrómetro de masas, en este caso con ionizaciónelectrónica y analizador magnético.245

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