Estudio y Reporte de

FrotisSanguíneo
( Lámina Periférica )

Lic TM Boris Valdivia V.

Servicio de Hematología
HNGAI - Essalud
 Extensiones Sanguíneas
• El frotis sanguíneo consiste en la
extensión uniforme de una gota de sangre
sobre un portaobjetos; la misma que se
lleva a cabo con otro portaobjetos
• El frotis sanguíneo se realiza de forma
manual y automatizada ( spinner )
 Partes de una extensión
• Cabeza
- es la zona inicial de la extensión
- es la región mas gruesa
- en esta región se encuentra el mayor
número de linfocitos y GR apilados
- No es una zona de lectura
• Cuerpo
- es la zona media del frotis
- su espesor es el apropiado
- en ella existe una adecuada proporción de leucocitos
- contiene la zona ideal de observación, que
corresponde a la zona que limita con la cola
• Cola
- es la zona final de la extensión
- suele tener un aspecto redondeado
- es la región mas fina
- mayor proporción de leucocitos grandes,
hematíes deformados y tonalidad uniforme

• Características de un buen frotis

- la cabeza ha de estar cerca de uno de los
extremos del porta
- la cola debe estar cerca de uno de los bordes
- toda la extensión ha de ser fina y homogénea
- los bordes laterales han de estar separados de los
bordes del porta por 1 mm aproximadamente
- presencia de barbas en el extremo terminal
 Defectos de una extensión
• Presencia de escalones o estrías. originado por una falta
de uniformidad en el momento de realizar la extensión
• Un lámina con zonas huecas redondeadas por efecto de
restos de grasa y suciedad
• Excesiva longitud y escaso grosor o escasa longitud
excesivo grosor
• Error en el tamaño de la gota
• Error en la velocidad de la extensión
• Error por causa de un ángulo inapropiado
• Se debe tener en cuenta el Hto del paciente,
dependiendo de esta, se aplicará el ángulo apropiado de
extensión
 Coloraciones Hematológicas
• Las coloraciones • Las tinciones
hematológicas son un hematológicas se pueden
conjunto de procesos que clasificar en :
conducen a la coloración • De acuerdo al nivel de
de las estructuras que vitalidad de lo que se
componen las células quiere colorear
sanguíneas a . Vitales
• Esto tiene por objeto el
b . No vitales
aumentar el contraste
entre esas estructuras y • De acuerdo a su
el medio que las rodea, y frecuencia :
esto permite observarlas a . Rutina
con mayor facilidad b . Especiales
 Tinciones Habituales
• Colorantes ácidos: tienen especial afinidad por
las estructuras alcalinas de las células, como
por ejemplo la hemoglobina. El principal de ellos
es la eosina.
• Colorantes básicos : especial afinidad por las
estructuras ácidas de las células, como por
ejemplo los ácidos nucleicos. Uno de ellos es el
azul de metileno
• Colorantes neutros : son los que no tienen
afinidad con las estructuras ácidas o básicas,
uno de ellos es el Sudán III
• Existen también combinaciones de colorantes
que dan origen a tinciones polícromas
• El primero de ellos fue Romanowsky, y todos
los colorantes hematológicos de la actualidad
suelen derivar del que él preparó
• Estos colorantes constan de un colorante ácido
(eosina) y otros básicos (tiacinas).las tiacinas
son el azul de metileno y los azures
• También existen tinciones panópticas rápidas
que producen una coloración fácil y rápida en
las estructuras celulares
• Estructuras acidófilas : son aquellas que fijan
colorantes de naturaleza ácida. Si captan la
eosina se llaman eosinófilas. Con las tinciones
habituales adquieren un color rosado
• Estructuras basófilas : son aquellas que fijan
colorantes de naturaleza alcalina. Con los
tinciones habituales adquieren un color
azulado.
• Si se tiñen de lila o púrpura con colorantes de
tipo azur, se llaman azurófilas.
 Tinciones especiales
• Solo se usan en condiciones específicas
• Tinciones fluorescentes : emplean colorantes
(fluorocromos) que se fijan a las células y que, cuando
son estimulados por LUV, emiten una radiación visible
caracteristica.
• Tinciones Citoquímicas : demuestran la presencia, mas
o menos abundante, o la ausencia de determinadas
sustancias y/o enzimas, localizadas en el interior de los
gránulos citoplasmáticos de los leucocitos.
• Sirven para reconocer células normales de las
anómalas, y por tanto, reconocer una leucemia de otra.
Por ejemplo : PAS, Sudan Black, MPO, alfa –
Naftilestearasa, etc
Coloración Ácida
Coloración Básica
 Causas de Error en las Tinciones Habituales de
Frotis Sanguíneo
Si la tinción de una extensión sanguínea es
demasiado rosa, probablemente se deba a :
• Un pH bajo de colorante
• Un tiempo de coloración insuficiente
• Un lavado excesivamente prolongado
Si la tinción es demasiado azul probablemente
sea por :
• Un empleo de portas sucios
• Falta de filtración del colorante
• Una coloración excesivamente prolongada
• Un secado del colorante durante al tinción
• Un lavado insuficiente
 Preparación del Colorante de Wright ( Merck )
• Pesar 2 – 3 gr del colorante en polvo comercial
• 1000 ml de metanol
• Glicerina ( 5 ml ) – opcional
• Colocar en un mortero el colorante y añadir la glicerina
• Añadir de a pocos el metanol al mortero e ir machacando hasta que
adquiera una coloración azul intensa y luego verter a un frasco color
caramelo o ámbar, previo filtrado con papel filtro
• Repetir la operación hasta que se acabe el metanol
• Guardar en lugar oscuro, fuera de la luz para evitar su oxidación por aprox.
una semana hasta que madure
• Luego de cumplido el tiempo filtrar nuevamente
• Listo para su uso
técnica de tinción :
• Cubrir el frotis con el colorante por 1 – 3 minutos
• Agregar agua tamponada pH 7.2 – 7.4 por 5 – 7 minutos ( homogenizar )
• Verificar la formación de una película plateada sobre el colorante
• Lavar con agua corriente y dejar secar
• Leer con objetivo de inmersión
 Para tener en cuenta
• Un aspecto clave es el grosor del extendido.
Una extensión de calidad no debe ser gruesa ni
muy delgada
• Una extensión gruesa dificultará la observación
de la morfología eritrocitaria y la diferenciación
entre linfocitos y monocitos. Además de
dificultar al ojo inexperto la tinción de las células
sanguíneas
• Por el contrario, si es muy fina, la mayoría de
neutrófilos y monocitos se hallarán en las áreas
periféricas. Esto alterará la relación normal de la
distribución celular leucocitaria
• Se recomienda entonces, que el grosor ideal, es
aquel que nos permita leer a través de la
extensión
 Estudio de Lámina Periférica
• El estudio de lámina periférica comprende
la evaluación morfológica de las tres
líneas celulares ( elementos formes ) que
componen la sangre
• Serie Blanca : Leucocitos
• Serie Roja : Hematíes
• Serie Trombocítica : Plaquetas
 Procedimiento del Diferencial Manual de Sangre
Periférica
Examen ocular a bajo aumento ( 10X )
• Determinar las características de la tinción
• Determinar la distribución celular
a. verificar si hay presencia de agregados
plaquetarios que pueden producir errores de conteo en los
equipos o llevar a conteos bajos falsos
b. Verificar la presencia de Rouleaux en GR
c. verificar la presencia de agregados leucocitarios
causados por inadecuada mezcla de sangre después de su
colección
• Seleccionar la mejor área para una detallada evaluación
morfológica
a. buscar una distribución homogénea donde los eritrocitos no se
sobrepongan unos a otros
b. evitar áreas huecas
c. evitar áreas extremas donde los eritrocitos adopten forman
geométricas
• Lectura a mediano aumento ( 40X o 50X )
este tipo de lectura nos sirve para tener una
visión panorámica y completa del frotis y es de
utilidad para el personal adiestrado en el
reconocimiento celular, porque nos permite
lecturas a mayor velocidad, sin sacrificar la
precisión. Se recomienda su uso para láminas
de pacientes leucopénicos.
• Algunas personas inclusive pueden calcular el
numero de leucocitos pmmc contando las
células blancas normales y rotas, contando 10
campos, luego obteniendo su media y
posteriormente multiplicandolo por 3000
 Lectura a mayor aumento ( 100x )
• Se lleva acabo usando un tabulador o contómetro, manual o digital.
• Deben incluirse todas las células de la serie blanca, maduras e
inmaduras.
• No deben incluirse en el recuento de 100 leucocitos a los GR
nucleados y megacariocitos nucleados
• Cualquier leucocito conteniendo una inclusión anormal deberá ser
reportado pero con un conteo en paralelo por las 100 células
contadas
• Ejemplo : Ud observó 60 neutrófilos en su conteo de100 de los
cuales 20 de ellos tenían cuerpos de Döhle, ud deberá informar al
final del recuento : neutrófilos (60%), y cuerpos de Döhle 20%
• Se deberá reportar los siguientes inclusiones :
- cuerpos de Döhle
- cuerpos de Auer
- anomalía de Pelger Huet
- anomalía de May – hegglin
- inclusiones de Alder – Reilly
- inclusiones Chediak – Higashi
- granulaciones tóxicas
- vacuolas citoplasmáticas o degenerativas
• Usted deberá reportar cualquier célula
anormal o indiferenciada que observe
• Deberá reportar GR nucleados si estos
exceden al 6% y corregirá su recuento de
leucocitos con la siguiente formula :

Leucocitos contados / mm3 x 100

= leucocitos corregidos / mm3
100 + Nº hematíes nucléados

Ejemplo : si un paciente tiene un conteo de 15,000 leucocitos pmmc y 35 %

de GRN, su conteo corregido será de 11,111 pmmc
 Evaluación de la Serie Roja
• En este punto el observador deberá
reportar su minucioso examen de los GR,
indicando la presencia de Hipocromía,
Anisocitosis y Poiquilocitosis.
• Deberá reportar también inclusiones
eritrocitarias y hemoparásitos si los
hubiera.
• Tambien indicará la presencia de células
inmaduras de la serie roja si las hubieran
M
A
D S
U E R
R R O
A I J
C E
I A
Ó
N
• Hipocromía : cuando una célula roja individual contiene
un área pálida central que es mayor a la tercera parte de
su diámetro se denomina célula hipocrómica
• Rango medio para denominar hipocrómía en 10 campos
microscópicos ( 100 – 160 hematíes por campo )

a. normocromía : 0 - 5
b. leve hipocromía : 6 - 15
c. moderada hipocromía : 16 - 30
d. marcada hipocromía : > 30

• Nota : la hipercromía no esta reportada aquí pero se

relaciona con la presencia de esferocitos.

• Hipercromía : se denomina así a las células rojas

profundamente coloreadas en relación al resto, y esto
debido a su alto contenido en hemoglobina, mayor al
que debería contener
 • Anisocitosis : cuando se
presenta en el campo
eritrocitos de diferentes
tamaños
• Normocítos :
diámetro longitudinal : 7
–8µ
– Diamatro transversal
( espesor )
periférico : 2 µ
central : 1 µ
- Superficie : 120 - 140 µ
- Volumen : 80 – 95 µ
Rango medio para anisocitosis / 10 campos
• Microcitosis : hematíes
con un diámetro inferior a
7 µ y un volumen inferior
a 80 µ3
• Macrocitosis : hematíes
con un diámetro superior
a las 8 µ y un volumen
superior a las 100 µ3
• Megalocitos : hematíes
con diámetro superior a
las 11µ

Normal Leve Anisocitosis Moderada Anisocitosis Marcada Anisocitosis

0-5 6 - 15 15 - 30 > 30
• Poiquilocitosis : cuando se presentan varias formas
diferentes en los hematíes en un campo microscópico
• Si se observa solo un tipo leve de anormalidad la
poiquilocitosis será leve, pero si coexisten diferentes
formas de hematíes, entonces será marcada, no
importando que individualmente sean leves
• Se recomienda que cada forma anormal sea evaluada
separadamente

Rango medio para tipificar poiquilocitosis /10 campos

• Normal : 0 - 1
• Leve : 1 - 5
• Moderada : 6 - 15
• Marcada : > 15
 Acantocitos
• AHA
• A. sideroblástica
• AHM
• Enfermedad hepática
• Enfermedad renal
• Post- esplecnotomía

Drepanocitos
• Células facliformes
• A. drepanocítica
• Enfermedad Hb S - C
 Esquistocitos
• Son GR fragmentados
• AHM
• A. megaloblastica
• Talasemia mayor
• A. hemolíticas
• Leucemia aguda
• Hiperesplenismo

Megalocitos

• Anemias megaloblasticas
• Diámetro > a 11 micras
• ANEMIA MEGALOBLASTICA
• ELIPTOCITOSIS HEREDITARIA
• MIELOFIBROSIS
• TALASEMIA MAYOR
• TRAUMA MECANICO
 Rouleaux
• Cuando los GR se
presentan en fila de
moneda
• Mieloma Multiple
• Incremento de
gamma globulina
• Macroglobulinemia de
Waldenstrom
 Dianocito
Célula en Tiro al Blanco

• ESTOMATOCITOSIS HERDITARIA
• LEUCEMIA AGUDA
• ALCOHOLISMO CON ENFERMEDAD HEPÁTICA
• ARTEFACTOS
• TALASEMIAS
Anillo de Cabot Cuerpos de Pappenheimer

Punteado Basófilo Cuerpos de Heinz

 Pappenheimer
Cuerpos de Howell Jolly

Policromatofilía

Reticulocitos
• El recuento diferencial leucocitario
suministra información sobre aspectos
cualitativos y cuantitativos de los
diferentes leucocitos de la sangre y
permite la detección de células anormales
• Se basa en la observación microscópica
de 100 a 200 leucocitos dispuestos en una
extensión de sangre ( frotis )
convenientemente teñida
• La calidad de la extensión de la sangre es
de vital importancia para la realización
de una correcta lectura de la lámina.
 Serie Blanca
• La fórmula leucocitaria es la denominación usual
que se da al recuento porcentual de los
diferentes leucocitos que circulan en la sangre
• En condiciones de normalidad esta constituida
por 5 poblaciones de leucocitos :
• Neutrófilos ( en su gran mayoría segmentados )
• Eosinófilos
• Basófilos
• Monocitos
• Linfocitos
 Variables que pueden influir en la formula
leucocitaria realizada mediante el método
visual
• Distribución irregular y no aleatoria de los leucocitos en
la extensión
• Realización de la lectura en una zona inapropiada
• Variaciones de la calidad y las características de la
tinción ( tinción ácida o básica )
• Observación de un número insuficiente de células
• Pericia del observador en la identificación celular
– neutrófilos segmentados Vs neutrófilos en banda
– monocitos Vs linfocitos activados o atípicos
– formas inmaduras de granulocitos neutrófilos
 SERIE

MIELOIDE
Mieloblastos :
• Es redondeado
• Diámetro entre 15 – 20 µ
• Su núcleo es grande,
redondeado, rojizo y tiende a
centrarse
• Su cromatina es laxa y
contiene de 2 a 3 nucleolos
visibles
• Su citoplasma es basófilo y
algunas contienes finas
granulaciones azurófilas
 Promielocito :
• Se origina por maduración y
maduración del mieloblasto
• Es redondeado
• Diámetro de 16 – 25 µ
• Núcleo grande,
redondeado, menos rojizo y
tiende a excentrarase
• Cromatina laxa y
generalmente se observa
nucleolos en ella, puede
presentar zonas de
condensación
• Citoplasma abundante,
repleto de gránulos
primarios muy azurófilos
M
I
E
L
O
C
I
T
O
S
JUVENILES O METAMIELOCITOS
METAMIELOCITOS
 Metamielocitos Vs No Segmentados

Regla de la Mediana : Si al completar mentalmente la circunferencia

nuclear y trazamos una línea media imaginaria
y esta muestra la hendidura antes de la media
estamos frente a un juvenil o metamielocito. Si
por el contrario la hendidura esta detrás de la
línea media, estamos frente a un abastonado

Juvenil No Segmentado
 Metamielocitos Vs No segmentados

Regla del Diámetro : esta se basa en el ancho del núcleo. Si la anchura

de esta es similar a la mitad de la longitud del núcleo
estamos frente a un metamielocito o juvenil, en cambio
si el ancho nuclear es menor a la mitad de la longitud
´ del núcleo, estamos frente a una célula en banda.

Juvenil No Segmentado
 CÉLULAS
EN
BANDA
O
EN
CAYADO
O
ABASTONADOS
Células Neutrófilas en Banda
Neutrófilos Vs No Segmentados
Regla del Tercio Regla del Filamento
• Si la estrangulación • Se dice que estamos
de la continuidad frente a un
nuclear es menor a segmentado siempre
un tercio de la parte y cuando se observe
mas ancha del mismo un núcleo
núcleo, entonces es polisegmentado y se
un segmentado observe al menos un
puente de cromatina
Neutrófilos Vs No Segmentados

Neutrófilos Células en Banda

Criterios para la diferenciación entre neutrófilos Vs no
segmentados

Fig. 2

Si seguimos con la mirada la continuidad nuclear

Y en algún momento esta se entrecruza con otra
Línea del mismo núcleo , entonces lo llamamos
Segmentado. Del mismo modo si al termino de la
Observación de la continuidad de la membrana
Nuclear sobra núcleo lo llamamos segmentado.
( Fig. 1 )

Si al observar la continuidad nuclear no notamos

Cruce de líneas, entonces lo estamos frente a un
Abastonado. ( fig. 2 )
 • Son células redondeadas, de
tamaño entre 12 y 14 um.
NEUTRÓFILOS • Su núcleo está segmentado en
POLISEGMENTADOS 2 a 5 lóbulos, unidos por unos
finos puentes cromatínicos.
• El citoplasma es rosa pálido y
contiene numerosos gránulos
neutrófilos que se tiñen de
color marrón con las
coloraciones panópticas
habituales, así como cierto
número de gránulos primarios
( 10 – 20 % ) o azurófilos
dificilmente visibles al quedar
enmascarados por los
neutrófilos.
• Su núcleo es de color violeta
oscuro y presenta cromatina
densa
• Algunas veces su núcleo
presenta un pequeño ápéndice
en “palillo de tambor”
( cromatina sexual )
Granulaciones Tóxicas Pelger - Huet
Vacuolas Citoplasmáticas Vacuolas Degenerativas
BASÓFILO
• Poseen un núcleo
bilobulado y grandes
gránulos esféricos
basofílicos y
metacromáticos
dados por heparina e
histamina. Liberan
además aminas
vasoactivas y
sustancia de reacción
lenta de la anafilaxia.
Eosinófilos • Célula redondeada
• 12 – 17 µ
• Núcleo violeta,
generalmente bilobulado
simétrico unido por un
puente de cromatina o en
forma de anteojos
• Presenta gránulos,
grandes y acidófilos que
no cubren el núcleo
• Estos gránulos se tiñen
con la eosina y contienen
diversas sustancias como
la peroxidasa, fosfatasa
ácida, hidrolasas, etc
Serie Linfoide:
Linfocitos

Linfoblasto

Prolinfocitos
 • Diámetro variable de 7 – 18 µ
Linfocitos • Pueden diferir en su relación
N/C
• El citoplasma es variable (
escaso o abundante )
• Su coloración es azul pálida,
pero aumenta en los linfos
reactivos ( estimulados )
• Pueden presentar una
granulación azurófila escasa
en el ciptoplasma
• Núcleo redondeado y
cromatina compacta
• La densidad de la cromatina
puede variar entre los
diferentes estadíos. Es
generalmente elevada pero
pueden presentar zonas mas
laxas
LINFOCITOS ATÍPICOS
MAS LINFOCITOS ATÍPICOS
Serie Linfocítica : Criterios
Plasmocitos • 8 – 20 µ de diámetro
• Relación N/C 2:1 o 1:1
• Núcleo redondo u oval
• Cromatina densa azul –
purpura con grandes
muescas cerca al margen
nuclear
• No presenta nucleolos
• Citoplasma moderado,
basófilo, con zona clara
perinuclear adjacente al
núcleo
• Puede contener una o
mas vacuolas
• No presenta
granulaciones
citoplasmáticas
MONOCITOS
• Son las células circulantes de
mayor tamaño. Poseen un núcleo
excéntrico en forma de U ó en
forma “arriñonada”
• El núcleo suele presentar una
ubicación central
• 14 – 20 µ de diametro
• Citoplasma abundante y de color
lila pálido
• Presenta fina granulación azurófila
• Presenta cromatina laxa o
filamentosa
• En ocasiones se halla vacualizado

• Son los precursores del sistema

mononuclear fagocítico, que
incluye macrófagos (histiocitos),
osteoclastos, macrófagos
alveolares, células de Kupfer en el
hígado y la microglia en el sistema
nervioso central.
 Promonocito

Serie Monocítica

Monoblasto

Monocito
 Serie Trombocítica
• Debemos reportar la cantidad de plaquetas en
lámina ( trombocitopenias o trombosis )
• Debemos dar un informe detallado sobre la
citomorfología de las plaquetas
• Reportar si hay plaquetas normales,
degranuladas, pequeñas o macroplaquetas
• Se debe informar si existe la presencia de
agregados plaquetarios
• Es muy importante una impecable técnica en el
momento de realizar el frotis, es decisivo.
 Promegacariocito Megacariocito en Brotación

Megacariocito Granular Megacariocito Productor de Plaquetas

 Serie Trombocítica
• Las plaquetas son las
células sanguíneas mas
pequeñas del organismo
• Se producen por
fragmentación simple del
citoplasma de los
megacariocitos.
• Son células anucleadas de
forma discoide de 2 – 4
micras de diámetro y 8
micras de volumen.
Trombocitopenia : • poseen una vida media de
7 - 10 días y su rango va
Leve : 150,000 - 100,000
Moderada : 100,000 - 50,000 de 150,000 a 450,000
Severa : < 50,000 pmmc
Macroplaqueta Plaquetas Normales

≥ 450, 000 pmmc se denomina trombocitosis

≥ 1’000,000 pmmc se denomina trombocitemia

Recuento en Lámina Periférica
Damacheck :

• ( Rcto 1000 GR + F ) x 100

• Factor = ?

• Hto ≤ 35 ( + 5 )
• Hto : 35 - 39 ( + 3 )
• Hto : ≥ 40 ( + 1 )