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Tincion de gram-Introduccion desarrollo e interpretacion de resultados Practica 2

Tincion de gram-Introduccion desarrollo e interpretacion de resultados Practica 2

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practica de laboratorio- Tincion de gram- materiales, reactivos, metodos ,fundamento , resultados
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Practica de Microbiología 
 
2010 
 
Laboratorio de Microbiología  
LÓPEZ ARELLANO ABRAHAM UAZ, ACS, UACQ, QFB, QUINTO SEMESTRE GRUPO C 
1
Universidad Autónoma de Zacatecas
 
Francisco García SalinasÁrea de Ciencias de la SaludUnidad Académica de Ciencias QuímicasQuímico Farmacéutico Biólogo
REPORTE DE PRÁCTICA: LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA
RACTICA
TINCION
 
DE
 
GRAM
*López Arellano AbrahamM. en C. Rubén Méndez Márquez
*5°Semestre Grupo ³C´ Programa educativo Q.F.B. UACQ, ACS, Campus UAZSiglo XXI, carretera Zacatecas-Guadalajara Km 6 s/n ejido La Escondida Cp. 98160Zacatecas Zac. Ciclo agosto-diciembre 2010
Lunes 30 de agosto-lunes 6 de septiembre 2010
OBJETIVO
Mostrar la importancia de una tinción para la diferenciación de bacterias basándose en laspropiedades estructurales de la pared celular, aplicando el mecanismo de la coloración deGram, con microorganismos conocidos y desconocidos.
RESÚMEN
La tinción de Gram es una prueba útil y de fácil realización que permite diferenciar las dosprincipales clases de bacterias con el objeto de instaurar un tratamientoSe colocan sobre un portaobjetos bacterias fijadas por calor o secadas de algún otro modo yse tiñen con cristal violeta a continuación, se añade una solución yodada que actúa comomordiente y luego se realiza un lavado con un agente decolorante (acetona) y agua con elfin de eliminar el colorante no fijado. Posteriormente se cubre con un colorante de contraste,safranina, para teñir de rojo las células que no hayan retenido el cristal violeta. Todo esteproceso tiene una duración inferior a 10 minutos. [1]
Palabras clave:
Pared celular, Gram positiva, Gram negativa.
 
Practica de Microbiología 
 
2010 
 
Laboratorio de Microbiología  
LÓPEZ ARELLANO ABRAHAM UAZ, ACS, UACQ, QFB, QUINTO SEMESTRE GRUPO C 
2
INTRODUCCIÓN Y FUNDAMENTO
La tinción de Gram es uno de los métodos de tinción más importantes en el laboratoriobacteriológico y con el que el estudiante debe estar perfectamente familiarizado. Su utilidadpráctica es indiscutible y en el trabajo microscópico de rutina del Laboratorio deMicrobiología las referencias a la morfología celular bacteriana (cocos, bacilos, positivos,negativos, etc.) se basan justamente en la tinción de GRAMEsta tinción se denominada así por el bacteriólogo danés Christian Gram, quien la desarrollóen 1844. Sobre la base de su reacción a la tinción de Gram, las bacterias pueden dividirseen dos grupos, Gram positivas y Gram negativas (en este caso, los términos positivo ynegativo no tiene nada que ver con carga eléctrico, sino simplemente designan dos gruposmorfológicos distintos de bacterias).Las bacterias Gram-positivas y Gram-negativas tiñen de forma distinta debido a lasdiferencias constitutivas en la estructura de sus paredes celulares. La pared de la célulabacteriana sirve para dar su tamaño y forma al organismo así como para prevenir la lisisosmótica. El material de la pared celular bacteriana que confiere rigidez es el peptidoglicano.La pared de la célula Gram-positiva es gruesa y consiste en varias capas interconectadas depeptidoglicano así como algo de ácido teicoico. Generalmente, 80%-90% de la pared de lacélula Gram-positiva es peptidoglicano. La pared de la célula Gram-negativa, por otro lado,contiene una capa mucho más delgada, únicamente de peptidoglicano y está rodeada por una membrana exterior compuesta de fosfolípidos, lipopolisacáridos, y lipoproteínas. Sólo10% - 20% de la pared de la célula Gram-negativa es peptidoglicano.Debido a su importancia en taxonomía bacteriana y a que indica diferencias fundamentalesde la pared celular de las distintas bacterias, describiremos aquí con algún detalle la tinciónde Gram y las interpretaciones que actualmente se hacen sobre el porqué de sufuncionamiento.Las células Gram positivas, a causa de sus paredes celulares más espesas (tienen máspeptidoglicano y menos lípido), no son permeables al disolvente ya que éste deshidrata lapared celular y cierra los poros, disminuyendo así el espacio entre las moléculas yprovocando que el de complejo cristal violeta-yodo quede atrapado dentro de la paredcelular.Para poner de manifiesto las células Gram negativas se utiliza una coloración de contraste.Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina básica. Despuésde la coloración de contraste las células Gram negativas son rojas, mientras que las Grampositivas permanecen azules.Deben destacarse algunos aspectos cruciales de la tinción de Gram:1) El tratamiento con cristal violeta debe preceder al tratamiento con yodo. El yodo por sísolo tiene poca afinidad con las células.2) La decoloración debe realizarse con poca agua para evitar que pierdan la tinción lascélulas Gram positivas. EI proceso de decoloración debe ser corto y es esencial un cálculopreciso del tiempo para obtener resultados satisfactorios.3) Cultivos más viejo de 24 horas pueden perder su habilidad de retener el complejo cristalvioleta - yodo.
 
Practica de Microbiología 
 
2010 
 
Laboratorio de Microbiología  
LÓPEZ ARELLANO ABRAHAM UAZ, ACS, UACQ, QFB, QUINTO SEMESTRE GRUPO C 
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El carácter de Gram positivo no es siempre un fenómeno del todo o nada. Algunosorganismos son más Gram positivos que otros y algunos son Gram-variables, es decir, unasveces Gram positivos y otras Gram negativos.Morfología ultramicroscópica de las bacterias: estructuras internas
Pared celular 
Debajo de las sustancias extracelulares, como son las cápsulas y cubiertas mucilaginosas, yen la periferia de una delicada membrana que está en inmediato contacto con el citoplasma,se encuentra la pared celular.Las paredes celulares pueden destruirse o romperse encondiciones especiales.Constituyentes importantes de la pared celular son los aminoácidos, amino azúcares,azúcares y grasas. Estas sustancias están enlazadas formando el polímero complejo queforma la pared celular.Entre los constituyentes de la pared celular de las bacterias Gram-positivas y Gram-negativas existen importantes diferencias. Por ejemplo, las paredes de las bacterias Gram-positivas contienen menos aminoácidos que las Gram-negativas; el contenido graso esmucho más elevado en las Gram-negativas que en las Gram-positivas. Este hecho se hapropuesto como explicación del mecanismo de la reacción al Gram (ver las dos imágenes juntas). [2]*Bacteria Gram Positiva Bacteria Gram Negativa

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