“Activity and metabolic roles of the

pentose phosphate cycle in several rat

tissues”

Trabalho realizado por:

Ana Isabel Martins
Ana Luísa Delindro
Ana Sofia Ferreira
Cristina Alves
Inês Queirós
Bioquímica II
Introdução

Bioquímica II
Principal função do ciclo das pentoses produção de NADPH, indispensável
à biossíntese de ácidos gordos

Outros papéis metabólicos importantes:

• Produção de NADPH para a redução da metamioglobina no músculo e da
metahemoglobina nos eritrócitos
• Produção de NADH para a síntese de ribose

Via das pentoses vista como um paradigma da versatilidade metabólica:

• sistema capaz de ceder diferentes produtos
• tem recursos para ajustar a sua estequiometria com as necessidades celulares
desses produtos
Resultado de um processo de
Modelo da via das pentoses optimização desenvolvido durante a
evolução metabólica para maximizar o
fluxo e minimizar o tempo de resposta.

Bioquímica II
Avaliação da actividade desta via em diferentes tecidos (2 abordagens):
• ensaio de fluxo de carbono radioactivo
• ensaio da actividade das enzimas consideradas como pontos chave da
regulação

(1) Ensaio de fluxo de carbono radioactivo:

• Este método baseia-se na libertação de CO2 a partir do metabolismo da

glicose fosforilada no C-1 ou no C-6, em experiências separadas.

•quando a glicose é fosforilada no C-1

A libertação de CO2 acontece
•A partir da glicólise acoplada ao ciclo
de Krebs, quer a partir do C-1 ou C-6

• Nos ensaios de CO2 de cada experiência, a relação ou a diferença entre

estes dois resultados dá-nos a razão entre a via das pentoses e a glicólise,
através da qual a glicose é metabolizada.
Bioquímica II
 Este método, apesar de obter alguns resultados, não é completamente fiável:

• O CO2 libertado a partir do metabolismo da glicose fosforilada no C-1 e o CO2

libertado a partir da glicólise acoplada ao ciclo de Krebs, quer a partir do C-1 ou
C-6 é válido apenas nos primeiros momentos da reacção porque as reacções da
via das pentoses reorganizam-se com o resto dos carbonos da glicose, que
podem entrar novamente na via de acordo com a sua estrutura cíclica como
substrato frio.

• Para além disso, a triose, produto da via das pentoses, é usualmente

incorporada no fluxo glicolítico, e pode fazer com que o C-1 e C-6 da glicose
libertem CO2, apesar disto se passar na via das pentoses.
 

Bioquímica II
(2) Ensaio da actividade das enzimas consideradas como pontos chave da regulação:

Actividade da desidrogénase da glicose-6-

Métodos enzimáticos utilizados fosfato ( partindo do pressuposto que é o
ponto de regulação principal da via das
pentoses ).

Não há nenhuma etapa limitante na via

das pentoses

A actividade da enzima testada em

condições velocidade inicial pode ser
diferente da que apresenta no estado de
equilíbrio.

Bioquímica II
  Vários autores têm investigado a actividade da via mediante análise de diferentes
enzimas, individualmente.

Os dados fornecem um conjunto de actividades sem fornecerem uma visão ampla da via

 A via das pentoses fosfato apresenta várias reacções com estequiometria variável.

 A actividade enzimática da glicose-6-P desidrogénase no tecido adiposo, glândula

mamária em período de lactação e no fígado é elevada.

 Método utilizado no estudo: Doseamento da actividade global da enzima com base no

registo da curva do progresso da ribose ou a transformação de glicose ou ribose
produzindo NADPH, em espectofotometria a 340nm. Aplicado em vários tecidos
de ratos, fornecendo assim uma visão ampla desta via em diferentes tecidos.

Bioquímica II
 MATERIAL E MÉTODOS
Estudo da via das pentoses

3 Ensaios

Bioquímica II
MATERIAL E MÉTODOS

Bioquímica II
 MATERIAL E MÉTODOS
Mistura incubada:
•Extracto de tecido (2-3 mg proteína)
•Substracto
•Coenzimas

Espectrofotómetro (NADPH)

Bioquímica II
Via completa das pentoses

Início da
reacção

Bioquímica II
 Via oxidativa das pentoses

Início da reacção

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Via não oxidativa das pentoses

Início da
reacção

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Resultados e discussão

Bioquímica II
• Tempo de latência e declive dependem do
tecido, da diluição da amostra e da fase
testada.

• A via completa e a via não oxidativa

necessitam de mais tempo para se formarem
todos os intermediários desde o início

Maior tempo de latência

Bioquímica II
• Relação linear entre actividade e
concentração de proteínas todos os tecidos

• Necessário para validar o método:

- avaliar a actividade nas condições mais
convenientes para obter valores mensuráveis
de declive;
- controlo do período de latência.

Bioquímica II
Actividade da via das pentoses e de cada fase

Bioquímica II
• Grande variedade de actividades nos tecidos
 diversidade de funções metabólicas

• Via das pentoses é usada de forma mais

ampla do que apenas para a síntese de ácidos
gordos.
Ex. músculo esquelético

Bioquímica II
• Necessidades de NADPH na célula são maiores
do que as de ribose

Vasta utilização do NADPH em processos

de biossíntese e desintoxicação

Bioquímica II
• Actividade da fase oxidativa é sempre maior
do que a actividade da fase não oxidativa

Fase oxidativa – papel básico da via

Fase não oxidativa – ajuste da estequiometria
de acordo com as necessidade relativas de
NADPH e ribose

Bioquímica II
 Relação OP/NOP
• Baixa relação: maior quantidade de ribose a ser
reciclada  necessidade de NADPH é maior do
que a de ribose
- Mucosa intestinal, rim, fígado

• Relação média
- Músculo esquelético, cérebro e intestino

• Elevada relação: maior parte da ribose não é

reciclada alto consumo de ribose
- Glândula mamária, tecido adiposo
Bioquímica II
 Diferença OP-NOP
• Elevado valor: elevada produção de ribose
(síntese de RNA)
- Tecido adiposo (baixa actividade mitótica)

• Baixo valor
- mucosa intestinal Actividade mitótica semelhante

• Valor moderado
- pulmão
Bioquímica II
Síntese de RNA no tecido  Síntese de
proteínas de exportação
- Fígado, glândula mamária lactante, mucosa
intestinal

Síntese de RNA nula  Síntese de proteínas

para a estrutura do tecido (enzimas, material
estrutural)
- Tecido adiposo, cérebro, rim, músculo

Bioquímica II
 Glândula mamária: mudança do estado não
lactante para o estado lactante

• Aumento da actividade global da via das

pentoses
• Manutençao da relação OP/NOP

Estrutura metabólica, no que diz respeito aos

processos suportados por esta via, é a mesma.

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Elevada actividade da via das pentoses na
glândula mamária, tecido adiposo e fígado

Aumento da actividade na mudança do

estado não lactante para o estado lactante

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