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SEMESTRE 3
UEP 1.3.1
• Influence du pH :
la solubilité est minimale au pH isoélectrique
3 - Précipitation des protéines
a - Précipitation totale : dénature les protéines
- Par addition:
- 80% d’éthanol à -20°C
(certaines protéines sont solubles dans l’éthanol)
- 2 volumes d’acétone à -20°C
(protéines difficile à redissoudre)
- Phénol
Les protéines se dénaturent et se solubilisent
dans le phénol
(les acides nucléiques restent dans la phase aqueuse)
- Acide trichloracétique TCA
très corrosif
-4°C pour éviter la dénaturation
lavage à l’éther
redissolution difficile
- Acide perchlorique PCA
corrosif, explosif
-4°C pour éviter la dénaturation
insoluble dans KOH à -4°C
- Sulfate de Zn + base forte (NaOH )
………….
b - Précipitation fractionnée ou différentielle
- préserve l’intégrité les protéines
- Associe force ionique et pH à -4°C
Chaque protéine ayant des caractéristiques
hydrophiles, hydrophobes et pI particuliers,
et donc une solubilité propre, permet sa
précipitation
La phase stationnaire
est un liquide fixé sur
un support inerte.
CPL
Rapport frontal : RF
RF = x / y