A method for preparation of frozen sections

The basics
Start with a sharp blade
I find that I always get my best quality section with a new sharp blade. I think
some of the places we try to save money in medicine are a bit "pound foolish".
Your patients surgery is costing thousands of dollars. Hundreds of dollars are spent
on disposables including lap pads, gloves, sponges, drapes, cautery, needles,
needle magnets, BP cuff, IV tubing, ……..
We are conserving pennies on what may be the most important decision impacting
on the procedure. Yet some will risk quality by trying to get "20 shaves" out of
a disposable blade.

In my practice I treat every patient to a new section of blade. I will change it as

soon as my section quality begins to fall. Some tissues such as tough collagenous
tissues or calcified tissues will quickly dull the blade. If I'm having trouble getting
a good section with a new blade on occasion I have changed to a second new
blade and easily prepared a quality section.

Safety Tip If you cut yourself on a blade used on only one patient, you will
have minimized your risk of transmittable disease. If you cut yourself on a blade
that has been used for days, it is like sleeping with numerous partners......without
the fun! In this day and age of doing FNA's with ridiculously flexible long safety
needles and using annoying safety scalpels, we can justify using a sharp blade for
safety reasons......and get the benefit ofawesome frozens every time!

Sitting or standing
I always sit on a stool when I cut. I am hoping you learn to use the brush as an
articulate fine instrument, capable of the delicately maneuvering of a
microscopically thin snowflake of tissue while in flight! Why would you want to
do this hunched over with you neck hyper extended? This position is fine if you are
bending over to look in a hole in fear of an animal jumping out at you! But for
cutting a frozen section you want to be relaxed and comfortable so that you will
have maximum control in your left hand.
The Brush
I’m a brush user. I believe everyone must first learn to be
good with a brush. I consider starting a student on the anti-
roll devise like putting a child on crutches before they
learn to walk. The purpose of the brush is to grab and
maneuver the section across the stage. The unless you
have perfect temperature, a cold section will by nature
trying to curl up and pull away from the brush. For this
reason I use a brush with stiff bristles and a fairly wide
gripping surface. I have found Chinese boar bristles to be
the stiffest and work the best for me. You can buy and 1/4
inch #2 flat or bright brushes from an art supply store for
about $3 and cut them at an angle. With this angled tip,
the brush meets the tissue flat like a broom because the
brush is held at an angle. I never understood why anyone
would want to use the flimsy camel hair brushes. The
section can easily pull away from these flexible hairs.
I am now making these brushes availablefor anyone who would like to try
Hold theapparatus
them. See brush like a pen in the left hand and stabilize the
hand by gently resting the side of the fifth finger on the
stage (or where ever you can find a place depending on your
hand size and cryostat). This gives the operator great
dexterity and allows for conservation of movement. Focus
on developing your dexterity so you can control the brush
like a fine instrument. Could you catch a snowflake as it is
falling? I cut the brush at an angle which approximates the
angle I hold the brush in my hand. This results in the brush
meeting the tissue flat over its 1/4 '' length.

Holding the brush

 Turning the wheel
Turn the wheel in a continuous uniform motion without hesitation. I have seen
many frozen sectionists using a brush stop at the beginning of the section, slowly
grab the tissue and then start to turn the wheel. In my experience this practice adds
to potential artifacts at the beginning of the section, potential variations in
thickness, and leads to difficulties when approaching tissues containing fat. With
practice, by holding the brush as I described, the operator is capable of grabbing
the tissue in a continuous motion, which began before the tissue meets the knife
and continues through the complete section. .

Movement of the brush

As the block begins to move toward the knife the brush moves downward in pace
with the block. The brush can gently rest on the bottom 2mm of the block and
"ride the block" pulling away just as the block meets the knife. It is the downward
movement of the brush that allows you to keep a continuous motion as you grab
the section.

It is like handing off a baton in a relay race. The second runner must run along
side the first runner for the handoff. The baton never slows down. If the second
runner was stopped the first runner would have to slow to a stop and the second
runner would have to accelerate with the baton again.

As the first few millimeters of the section passes the knife there will be some
degree of curling of the section. As the curl begins, the brush in motion will catch
the edge of the tissue and change to a horizontal motion toward you . The path of
the brush is an "elbow" shape down and then toward you in a continuous motion. It
is important to pull the tissue toward you rather than to press it to the cryostat
stage. Pressing tissue to the cryostat stage sometimes result in adhesion of the
tissue to the stage, especially if the tissue is fatty. This will result in a smeared
section and a need to clean the stage. This motion of grabbing and guiding the
tissue is like pulling a blanket over you in bed. As the brush returns to grab the
next section it completes a continuous elliptical motion. The continuous repeated
sectioning of a block becomes like turning the pedals of a bicycle. Both hands are
circling in synchrony.

Having blocks prepared with a "handle" of embedding medium makes this job
easier without having to engage the tissue with the brush.
1) As the block descends toward the brush the brush keeps pace with the block by
gently resting on the bottom 2-3 mm of the block and “Riding the block”

2) As the block meets the blade and the sections begins it’s curl the brush leaves the
block while catching the curling edge of the section. "Catching the curl"

3) The brush jumps off the block with the curl. "The brush jumps over the blade"

3) The brush holding the curl pulls the section horizontally over the stage like a pulling
the covers over you in bed without pressing the tissue to the stage. "Pull over the
blanket"

Retrieving the section

Tissue can be picked up from the cryostat stage or from the block. I routinely pick
sections up from the stage. When the section is complete the tissue can be picked
up by holding the slide just above the section and angle the slide down to touch a
portion of the tissue. Static attraction will draw the section to adhere to and quickly
melt on to the warm slide Having a few millimeters "handle" of embedding
medium surrounding the tissue is an advantage. This extra medium allows a
margin of error for curling or flipping at either end before it involves the tissue. If I
am having particular difficulties with the section I can stop the section before the
last 2 mm. of embedding medium leaving the section attached to the block This
allows a fixed edge of the section against which to stretch the section with the
brush. Occasionally when faced with a difficult situation I may have more luck
retrieving the section from the block. This can sometimes offer a solution to
problems arising from curling or fat sticking to the stage. Some operators prefer
this technique for the majority of their sections. To retrieve from the block the
tissue is cut through and stopped when the handle of medium on the far side of the
tissue is reached. At this point the crank is moved backward and the block is
reversed away from the knife. The section is uncurled downward with the brush
over the face of the block and the section is picked up off the block face rather than
the stage .
 Retrieving from stage

Slide levers down to gently touch the section which will float
onto the slide with static or cohesive attraction. Try avoid
stretching or folding the section during this process by keeping
the a steady hand and the transverse axis of the slide parallel to
the section.

Retrieving from the block

1) A section is cut leaving an attachment of medium at the top

2) The wheel is turned in opposite direction bring the section back to the face of the
block.

3) Section is retrieved by placing the slide over the tissue on the face of the block.

Rapid fixation
As I mentioned earlier I hold the slide in my right hand as I turn the wheel. The
moment the section is complete, I immediately pick up the tissue on the slide and
in a moment it is placed into fixative.
Have your fixative opened in an immediately reachable location. Start with the
slide in your hand. If am using a staining rack I keep it outside the fixative jar so it
does not impede my swift motion. I first fix the slide in 95% ETOH then put it in
the rack
If there is delay in fixing the tissue there will be significant drying artifact. In my
experience when the frozen section is sitting cold on the stage the effect of drying
is minimal. From the time the tissue touches a warm slide it starts to under go
significant drying artifact with loss of nuclear detail and leakage of fluids from the
cytoplasm. The examples below show the same tissue after 15 seconds delay of
fixation on a warm slide and sections fixed immediately . The differences are
striking. It also demonstrates the quality of cytology possible by frozen section
using this system.

1) Bronchiolo-alveolar Carcinoma - 15
1) Kidney tubules -15 seconds drying
seconds drying
2) Same tissue immediately fixed in 95%
2) Same tissue immediately fixed 95%
ETOH
ETOH

Thickness of the section

For general surgical pathology I recommend cutting at six microns. This thickness
will give a
rich stain which is easier to interpret at scanning powers of 2x and 4x where
pathologists gather much of their information. Very thin sections will often look
pale at these powers and fine details are easy to miss. A six micron section will
afford a moment more time to avoid drying artifact. There will also be less nuclear
“holes” visible from ice crystal artifact.
Specialized situations may call for thinner or thicker sections.

Thickness must be confirmed visually. In FS technique III I will show sections

of various thicknesses. In my experience cryostats will not repeatedly cut perfect
six micron sections unless all conditions are correct and the sections are being cut
repeatedly in uniform motion. The change of surface temperature of the block
resting between sections will result in warming and expansion and a thicker section
will be cut. This is often followed by a very thin section. When warmed with the
hand the first section will often be thicker. When cutting I always let the first two
sections pass then continue on to take to the next section if it appears to be the
correct thickness. This is another reason why we want to become skilled with the
brush so that we can continuously cut the sections until we are satisfied that we
have a section of the correct thickness without other artifacts.

Staining the sections

Individual staining recipes are a matter of pathologist preference. My only advice
is not to rush any step of the staining process and to keep all stains and solutions
fresh and well maintained. Gentle agitation is helpful in speeding the process and
keeping the staining uniform, but the type of tissue and its adhesive nature should
be considered (see below).

When staining I find that looking at the slide after it leaves the bluing agent is a
good way to access the adequacy of the stain.
Get to know the color and shade of a well stained slide as compared to a lightly
stained slide. In our hematoxolin I look for a specific navy blue tone to tell me it is
stained well. Keep in mind the thickness of the tissue and the amount of nuclear
material will make the slide appear lighter or darker. However the is a particular
tone of blue that tells me the slide is well stained. Make your own observations.
The idea is to check the slide before continuing on with the staining.

I like many pathologists make the large part of my observations at scanning powers
i.e. 2x or 4x magnification. At these powers looking at an under stained slide is
like driving in a snowstorm, you really don't see much. When looking at lymph
nodes for metastatic disease I give particular attention to deep rich staining,
especially the eosin. If the eosin stain is rich, the the pale pink cytoplasm of a sinus
histiocyte can be more easily distinguished from the tumor cell cytoplasm which
may be more eosinophilic or clear more clear.

Why did my tissue fall off?

I'm not sure what the scientific explanation for the adhesion of tissue to the glass
slide but I would guess it has something to do with weak bonding at a molecular
level conveyed by the fluids in the fresh tissue to the glass. Anyone who knows
the explanation please let me know. I arrived at this explanation because in my
experience the dryer the tissue tissue the less tendency it has to adhere and if it has
been in formalin it seems to have had any tendency to adhere "washed away"; the
"juicier" tissues adhere better. I like to think of them as having "more glue" In my
experience I can list several situations where I have experienced sections coming
off the slide in the staining process. Obviously over agitating loosely held tissues
will shake then off.

1) Very dry tissues either by nature or desiccation. "Less glue"

2) Large ratio of perimeter to area. Thin strips that have a large perimeter to catch
the turbulence of the motion in the stain jars can easily fall off the slide. This is
especially true if thin fibrous walled cysts which are not very "juicy" tissues to
begin with. Also includes in this are amorphous necrotic tissues which have no
integrity holding them together. This also applies to very thick sections which
have a thicker wall to grab the turbulence.

3) Ammonia bluing reagent is too concentrated.-If you use ammonia for bluing my
rule is if I can smell it without putting my nose up too it its too strong.

4) 100 % Etoh instead of 95%. I have on occasion had someone place 100% Etoh
in my fixing jar instead of 95%. In my experience tissue will not stay on the slide.

5) A section is placed over embedding medium which is already on the slide.

When placing multiple sections on a slide be careful to not overlap the tissue onto
the embedding medium of the neighboring section.

Sebuah metode untuk penyusunan bagian beku

Dasar-dasar

Mulailah dengan pisau yang tajam

Saya menemukan bahwa saya selalu mendapatkan bagian saya kualitas terbaik dengan pisau yang tajam baru. Saya rasa
beberapa tempat kita mencoba untuk menghemat uang dalam kedokteran yang sedikit "bodoh pound". pasien bedah Anda
adalah biaya ribuan dolar. Ratusan dolar yang dihabiskan untuk sekali pakai termasuk bantalan lap, sarung tangan, spons,
tirai, kauter, jarum, magnet jarum, BP manset, tubing IV, ... ... ..
Kami adalah melestarikan sen pada apa yang mungkin merupakan keputusan yang paling penting yang berdampak pada
prosedur. Namun, beberapa akan risiko mutu dengan mencoba untuk mendapatkan "20 kali pencukuran" keluar dari pisau
sekali pakai.

Dalam praktek saya, saya memperlakukan setiap pasien ke bagian baru dari pisau. Aku akan berubah secepat kualitas bagian
saya mulai jatuh. Beberapa jaringan seperti jaringan collagenous sulit atau jaringan kalsifikasi akan cepat tumpul pisau. Jika
saya mengalami kesulitan mendapatkan bagian yang baik dengan pisau baru pada kesempatan saya telah berubah menjadi
sebuah pisau baru kedua dan mudah dibuat bagian kualitas.

Keselamatan Tip Jika Anda memotong diri Anda pada pisau yang digunakan hanya pada satu pasien, Anda akan memiliki
diminimalkan risiko penyakit menular. Jika Anda memotong diri Anda pada pisau yang telah digunakan selama berhari-hari, itu
seperti tidur dengan sejumlah mitra ...... tanpa menyenangkan! Di hari ini dan usia melakukan FNA dengan ridiculously fleksibel
jarum keselamatan panjang dan menggunakan pisau bedah mengganggu keselamatan, kita bisa membenarkan menggunakan
pisau yang tajam untuk alasan keamanan dan mendapatkan manfaat dari frozens mengagumkan setiap kali ......!

Duduk atau berdiri

Aku selalu duduk di bangku ketika saya dipotong. Saya berharap Anda belajar menggunakan sikat sebagai instrumen
mengartikulasikan halus, mampu melakukan manuver halus kepingan salju tipis mikroskopis dari jaringan sementara di
penerbangan! Mengapa Anda ingin melakukan ini membungkuk di atas dengan Anda leher hyper diperpanjang? Posisi ini baik-
baik saja jika Anda membungkuk untuk melihat lubang di takut binatang melompat keluar pada Anda! Tapi untuk memotong
bagian yang dibekukan Anda ingin menjadi santai dan nyaman sehingga Anda akan memiliki kontrol yang maksimum di tangan
kiri Anda.

Sikat

Saya pengguna sikat. Saya percaya setiap orang harus terlebih dahulu belajar untuk menjadi baik dengan kuas. Saya
menganggap mulai seorang mahasiswa pada roll-anti merancang seperti meletakkan anak pada kruk sebelum mereka belajar
berjalan. Tujuan dari sikat ini adalah untuk ambil dan manuver bagian di panggung. Kecuali Anda memiliki temperatur yang
sempurna, bagian dingin akan oleh alam mencoba meringkuk dan menarik diri dari sikat. Untuk alasan ini saya menggunakan
kuas dengan bulu kaku dan mencengkeram permukaan yang cukup lebar. Saya telah menemukan bulu babi Cina menjadi
paling berat dan bekerja yang terbaik untuk saya. Anda dapat membeli dan 1 / 4 inci # 2 sikat datar atau terang dari toko
peralatan seni bagi sekitar $ 3 dan memotong mereka di sudut. Dengan ujung siku, sikat memenuhi jaringan pipih seperti sapu
karena sikat yang diadakan di sudut. Aku tidak pernah mengerti mengapa ada orang yang ingin menggunakan sikat rambut
tipis unta. Bagian ini dapat dengan mudah menarik diri dari rambut-rambut yang fleksibel.

Saya sekarang membuat orang ini sikat availablefor yang ingin mencobanya. Lihat aparat

Holding sikat

Pegang sikat seperti pena di tangan kiri dan menstabilkan tangan dengan lembut beristirahat sisi jari kelima di atas panggung
(atau tempat yang pernah Anda dapat menemukan tempat yang tergantung pada ukuran tangan Anda dan cryostat). Hal ini
memberikan operator ketangkasan besar dan memungkinkan untuk konservasi gerakan. Fokus pada pengembangan
ketangkasan Anda sehingga Anda dapat mengontrol sikat seperti instrumen baik. Bisakah Anda menangkap kepingan salju
seperti itu jatuh? Aku memotong sikat pada sudut yang mendekati sudut saya menahan sikat di tanganku. Hasil ini di sikat
pertemuan jaringan datar di atas 1 / 4 panjang''nya.

Menghidupkan roda

Putar roda dengan gerakan seragam terus menerus tanpa ragu-ragu. Saya telah melihat banyak sectionists beku
menggunakan sikat berhenti di awal bagian tersebut, perlahan-lahan ambil jaringan dan kemudian mulai memutar roda. Dalam
pengalaman saya praktik ini menambah artefak potensial pada awal bagian ini, potensi variasi ketebalan, dan menyebabkan
kesulitan saat mendekati jaringan yang mengandung lemak. Dengan latihan, dengan memegang kuas seperti yang saya
jelaskan, operator mampu meraih jaringan dalam gerakan terus-menerus, yang dimulai sebelum jaringan memenuhi pisau dan
berlanjut melalui bagian lengkap. .

Gerakan sikat

Sebagai blok mulai bergerak ke arah pisau sikat yang bergerak ke bawah berpacu dengan blok. sikat yang lembut dapat
beristirahat di bawah 2mm blok dan "naik blok" menarik diri sama seperti blok memenuhi pisau. Ini adalah gerakan ke bawah
dari sikat yang memungkinkan Anda untuk menyimpan gerakan terus menerus saat Anda mengambil bagian.

Hal ini seperti menyerahkan off tongkat dalam perlombaan estafet.Pelari kedua yang harus dijalankan di sepanjang sisi runner
pertama untuk handoff. tongkat tidak pernah melambat. Jika pelari kedua adalah menghentikan pelari pertama harus lambat
untuk berhenti dan kedua pelari harus mempercepat dengan tongkat lagi.

Sebagai beberapa milimeter pertama bagian melewati pisau akan ada beberapa derajat melingkar bagian tersebut. Sebagai
curl dimulai, sikat dalam gerak akan menangkap tepi jaringan dan berubah menjadi gerakan horisontal ke arah Anda. Jalur
sikat adalah sebuah "siku" bentuk ke bawah dan kemudian ke arah Anda dalam gerakan terus-menerus. Hal ini penting untuk
menarik jaringan ke arah Anda bukan untuk tekan untuk tahap cryostat.Menekan jaringan untuk tahap cryostat kadang-kadang
menyebabkan adhesi dari jaringan ke panggung, terutama jika jaringan adalah lemak. Hal ini akan mengakibatkan bagian
diolesi dan kebutuhan untuk membersihkan panggung. Gerak ini meraih dan membimbing jaringan adalah seperti menarik
selimut atas kamu di tempat tidur. Sebagai kembali sikat untuk ambil bagian berikutnya itu selesai gerakan elips terus
menerus. The sectioning diulang terus menerus blok menjadi seperti memutar pedal sepeda. Kedua tangan berputar-putar
selaras.

Setelah blok disiapkan dengan "menangani" embedding media membuat pekerjaan ini lebih mudah tanpa harus melibatkan
jaringan dengan sikat.
1) Sebagai blok turun menuju sikat sikat terus berpacu dengan blok tersebut dengan lembut beristirahat di bawah 2-3 mm dari
blok dan "Riding blok"

2) Sebagai blok memenuhi pisau dan bagian mulai itu curl sikat daun blok saat penangkapan tepi keriting bagian
tersebut."Penangkapan curl"

3) sikat yang melompat dari blok dengan curl. "Sikat melompati pisau"

3) Sikat yang memegang gulungan menarik bagian horizontal di atas panggung seperti menarik selimut atas kamu di tempat
tidur tanpa menekan jaringan ke panggung. "Tarik atas selimut"

Mengambil bagian

Jaringan bisa diambil dari tahap cryostat atau dari blok tersebut.Saya rutin mengambil bagian-bagian dari panggung. Ketika
selesai bagian jaringan dapat diambil dengan memegang geser tepat di atas bagian dan sudut geser ke bawah menyentuh
sebagian dari jaringan. daya tarik statis akan menarik bagian untuk mematuhi dan cepat mencair pada slide hangat Memiliki
beberapa milimeter "menangani" embedding medium jaringan adalah sebuah keuntungan. Ekstra media ini memungkinkan
margin kesalahan untuk keriting atau membalik di kedua ujung sebelum melibatkan jaringan. Jika saya mengalami kesulitan
tertentu dengan bagian bagian saya bisa berhenti sebelum 2 terakhir mm. embedding medium meninggalkan bagian yang
melekat pada blok ini memungkinkan tepi tetap bagian terhadap yang untuk meregangkan bagian dengan sikat. Kadang-
kadang ketika dihadapkan dengan situasi sulit saya mungkin lebih beruntung mengambil bagian dari blok tersebut. Hal ini
kadang-kadang dapat menawarkan solusi untuk masalah yang timbul dari alat pengeriting atau lemak menempel ke
panggung. Beberapa operator lebih memilih teknik ini untuk sebagian besar bagian mereka. Untuk mengambil dari blok
jaringan dipotong melalui dan berhenti ketika pegangan media di sisi jauh jaringan tercapai.Pada titik ini engkol bergerak
mundur dan blok dibalik jauh dari pisau. Bagian ini uncurled ke bawah dengan kuas di atas wajah blok dan bagian diangkat
dari muka blok bukan panggung.

Mengambil dari panggung

Geser tuas ke lembut menyentuh bagian yang akan mengapung ke slide dengan daya tarik statis atau kohesif. Cobalah
menghindari peregangan atau melipat bagian selama proses ini dengan menjaga tangan mantap dan sumbu transversal
sejajar slide ke bagian.

Mengambil dari blok

1) bagian A dipotong meninggalkan lampiran medium di bagian atas

2) Roda dihidupkan dalam arah berlawanan bagian membawa kembali ke wajah blok.

3) Bagian ini diambil dengan menempatkan slide atas jaringan di muka blok.
Rapid fiksasi

Seperti yang saya sebutkan sebelumnya aku terus geser di tangan kanan saya saat aku menoleh roda. Pada saat bagian
selesai, saya langsung mengambil jaringan pada slide dan di saat ia ditempatkan ke fiksatif.
Apakah fiksatif Anda dibuka di lokasi segera terjangkau. Mulailah dengan slide di tangan Anda. Jika saya menggunakan rak
pewarnaan aku tetap di luar tabung penguat sehingga tidak menghambat gerak cepat saya. Saya pertama kali memperbaiki
slide dalam 95% ETOH lalu meletakkannya di rak

Jika ada keterlambatan dalam memperbaiki jaringan akan ada artefak pengeringan signifikan. Dalam pengalaman saya ketika
bagian beku dingin duduk di panggung pengaruh pengeringan minimal. Sejak saat menyentuh jaringan slide hangat itu mulai di
bawah pergi artefak kekeringan yang signifikan dengan hilangnya detail nuklir dan kebocoran cairan dari sitoplasma. Contoh di
bawah menunjukkan jaringan yang sama setelah 15 detik delay fiksasi pada slide hangat dan bagian tetap segera. Perbedaan
yang mencolok. Hal ini juga menunjukkan kualitas sitologi mungkin dengan bagian yang dibekukan menggunakan sistem ini.

1) Bronchiolo-alveolar Carcinoma - 15 detik pengeringan

2) jaringan Sama segera tetap 95% ETOH

1) Ginjal tubulus -15 detik pengeringan

2) jaringan Sama segera tetap di 95% ETOH

Tebal bagian

Untuk patologi bedah umum saya sarankan pemotongan di enam mikron. ketebalan ini akan memberikan
kaya noda yang lebih mudah untuk menginterpretasikan pada kekuatan scanning 2x dan 4x mana patolog mengumpulkan
banyak informasi mereka. Sangat tipis bagian sering akan terlihat pucat pada kekuasaan ini dan detail halus mudah untuk
dilewatkan. Bagian mikron enam akan mampu saat lebih banyak waktu untuk menghindari pengeringan artefak. Juga akan ada
kurang nuklir "lubang" terlihat dari artefak kristal es.
situasi khusus mungkin panggilan untuk bagian tipis atau lebih tebal.

Tebal harus dikonfirmasi secara visual. Dalam teknik FS III Aku akan menunjukkan bagian dari berbagai ketebalan. Dalam
saya cryostats pengalaman tidak akan berulang kali dipotong sempurna enam bagian mikron kecuali semua kondisi benar dan
bagian-bagian yang dipotong berulang kali dalam gerak seragam.Perubahan suhu permukaan blok beristirahat di antara
bagian akan mengakibatkan pemanasan dan perluasan dan bagian tebal akan dipotong. Hal ini sering diikuti oleh bagian yang
sangat tipis.Ketika hangat dengan tangan bagian pertama akan sering tebal.Ketika memotong saya selalu membiarkan dua
bagian pertama lulus kemudian melanjutkan untuk dibawa ke bagian berikutnya jika muncul menjadi ketebalan yang benar. Ini
adalah alasan lain mengapa kita ingin menjadi terampil dengan sikat sehingga kami dapat terus memotong bagian sampai kita
puas bahwa kami memiliki bagian dari ketebalan yang benar tanpa artefak lainnya.

Pewarnaan bagian

resep pewarnaan individu adalah masalah preferensi ahli patologi.hanya saran saya tidak terburu-buru setiap langkah dari
proses pewarnaan dan untuk menyimpan semua noda dan solusi segar dan terawat dengan baik. agitasi lembut sangat
membantu dalam mempercepat proses dan menjaga seragam pewarnaan, tetapi jenis jaringan dan sifat perekat yang harus
dipertimbangkan (lihat di bawah).

Ketika pewarnaan saya menemukan bahwa melihat slide setelah meninggalkan agen bluing adalah cara yang baik untuk
mengakses kecukupan noda.
Kenali warna dan naungan slide bernoda baik dibandingkan dengan slide ringan bernoda. Dalam hematoxolin kami saya
mencari angkatan laut tertentu nuansa biru untuk memberitahu saya itu ternoda baik. Perlu diketahui ketebalan jaringan dan
jumlah bahan nuklir akan membuat slide tampak lebih terang atau lebih gelap. Namun adalah nada tertentu biru yang
memberitahu saya geser baik bernoda. Membuat pengamatan Anda sendiri.Idenya adalah untuk memeriksa slide sebelum
melanjutkan dengan pewarnaan.

Saya suka Patolog banyak membuat sebagian besar dari pengamatan saya di kekuasaan pemindaian yaitu 2x atau 4x
pembesaran. Pada kekuasaan ini melihat di bawah slide bernoda seperti mengemudi di badai salju, Anda benar-benar tidak
melihat banyak. Ketika melihat kelenjar getah bening untuk penyakit metastatik saya memberikan perhatian khusus terhadap
eosin dalam pewarnaan kaya, khususnya. Jika eosin noda kaya, yang sitoplasma pink pucat dari histiosit sinus dapat lebih
mudah dibedakan dari sitoplasma sel tumor yang mungkin lebih eosinofilik atau menghapus lebih jelas.

Mengapa jaringan saya jatuh?

Saya tidak yakin apa penjelasan ilmiah untuk adhesi jaringan ke slide kaca tapi saya akan kira itu ada hubungannya dengan
ikatan lemah pada tingkat molekul yang disampaikan oleh cairan di jaringan segar untuk kaca. Siapa saja yang mengetahui
penjelasan silakan beritahu saya. Aku tiba di penjelasan ini karena dalam pengalaman saya pengering jaringan jaringan
rendah kecenderungan itu harus mengikuti dan jika sudah di formalin itu tampaknya telah punya kecenderungan untuk
mematuhi "hanyut", yang "juicier" mematuhi jaringan yang lebih baik. Saya suka berpikir tentang mereka sebagai memiliki "lem
lebih" Dalam pengalaman saya, saya bisa daftar beberapa situasi di mana saya memiliki bagian mengalami datang dari slide
dalam proses pewarnaan. Jelas lebih longgar mengagitasi jaringan diadakan akan menggoncangkan kemudian pergi.

1) Sangat jaringan kering baik oleh alam atau pengeringan."Kurang lem"

2) besar rasio keliling ke daerah. strip tipis yang memiliki perimeter besar untuk menangkap pergolakan gerakan dalam stoples
noda dapat dengan mudah jatuh dari slide. Hal ini terutama berlaku jika kista berdinding tipis berserat yang tidak sangat "juicy"
jaringan untuk memulai dengan. Juga termasuk dalam ini adalah jaringan nekrotik amorf yang tidak memiliki integritas
menahan mereka bersama-sama. Ini juga berlaku untuk bagian yang sangat tebal yang memiliki dinding tebal untuk merebut
turbulensi.

3) reagen Amoniak bluing terlalu concentrated.-Jika Anda menggunakan amoniak untuk bluing aturan saya adalah jika saya
bisa mencium tanpa meletakkan hidungku terlalu itu terlalu kuat.

4) 100% ETOH bukan 95%. Saya miliki di kesempatan memiliki tempat seseorang 100% ETOH dalam stoples saya
memperbaiki, bukan 95%. Dalam jaringan pengalaman saya tidak akan tinggal pada slide.

5) Bagian A ditempatkan di atas embedding media yang sudah pada slide. Ketika beberapa bagian menempatkan pada slide
berhati-hati untuk tidak tumpang tindih jaringan ke media embedding dari bagian tetangga.

Prosedur bagian beku adalah prosedur laboratorium patologis untuk melakukan analisis mikroskopis cepat spesimen. Hal ini
paling sering digunakan dalam operasi oncological. Nama teknis untuk prosedur ini adalah cryosection.
Kualitas slide yang dihasilkan oleh bagian yang dibekukan adalah kualitas lebih rendah daripada formalin tetap, lilin tertanam
pemrosesan jaringan. Sementara diagnosa dapat diberikan dalam banyak kasus, pengolahan jaringan tetap lebih disukai
dalam kondisi banyak untuk diagnosis yang lebih akurat.
Konsultasi intraoperatif adalah nama yang diberikan kepada seluruh intervensi oleh ahli patologi, yang meliputi tidak hanya
bagian yang dibekukan tetapi juga evaluasi kotor spesimen, pemeriksaan preparat sitologi yang diambil pada spesimen
(misalnya jejak sentuhan), dan aliquoting spesimen untuk khususpenelitian (misalnya teknik patologi molekuler, flow
cytometry).Laporan yang diberikan oleh ahli patologi biasanya terbatas untuk diagnosis "benign" atau "ganas", dan
dikomunikasikan kepada operasi surgeon melalui interkom. Ketika beroperasi pada keganasan dikonfirmasi sebelumnya,
tujuan utama dari ahli patologi adalah untuk menginformasikan dokter bedah jika bedah margin jelas kanker sisa, atau jika
kanker sisa hadir di margin bedah. Metode pengolahan biasanya dilakukan dengan teknik kemalasan roti. Namun marjin
operasi dikendalikan (CCPDMA) dapat dilakukan dengan menggunakan berbagai jaringan pemotongan dan pemasangan
metode, termasuk bedah Mohs.
Isi [hide]
1 Prosedur
2 Penggunaan
3 Sejarah
4 Referensi
5 Pranala luar
[Sunting] Prosedur

Jaringan tertanam dalam OCT, dipasang pada chuck di cryostat dan siap untuk bagian produksi
Instrumen kunci untuk cryosection adalah cryostat, yang pada dasarnya menggunakan mikrotom di dalam freezer. mikrotom ini
dapat dibandingkan dengan alat pengiris sangat akurat "deli", mampu mengiris bagian setipis 1 micrometre. Potongan histologi
yang biasa dipotong di 5 sampai 10 mikrometer. Spesimen bedah ditempatkan pada chuck logam dan beku cepat ke sekitar
-20 sampai -30 ° C. Spesimen tertanam dalam gel seperti media dikenal sebagai senyawa suhu optimal pemotongan
(Oktober).Pada suhu ini, jaringan paling menjadi rock-hard. Biasanya suhu dingin diperlukan untuk jaringan kaya lemak atau
lipid, dan suhu dingin untuk kulit. Setiap jaringan memiliki suhu yang lebih disukai untuk pengolahan. Selanjutnya itu dipotong
beku dengan bagian mikrotom dari cryostat, bagian ini mengangkat telepon pada slide kaca dan pewarnaan (biasanya dengan
hematoxylin dan eosin, H & E noda). Penyusunan sampel jauh lebih cepat dibandingkan dengan teknik histologi tradisional
(sekitar 10 menit vs 16 jam).Namun, kualitas teknis dari bagian jauh lebih rendah. Seluruh laboratorium dapat menempati
ruang kurang dari 9 meter persegi (0,84 m2), dan ventilasi minimum diperlukan dibandingkan dengan standar yang tertanam
lilin laboratorium spesimen.
[Sunting] Penggunaan

Penggunaan utama dari prosedur bagian yang dibekukan adalah pemeriksaan jaringan saat operasi berlangsung. Hal ini
mungkin karena berbagai alasan:
Dalam melaksanakan operasi Mohs - metode sederhana untuk mengendalikan margin 100% dari spesimen bedah.
Jika tumor tampaknya telah menyebar, sebuah contoh dari metastasis diduga dikirim untuk cryosection untuk mengkonfirmasi
identitasnya. Ini akan membantu dokter bedah memutuskan apakah ada gunanya melanjutkan operasi. Biasanya, operasi
agresif dilakukan hanya jika ada kesempatan untuk menyembuhkan pasien. Jika tumor telah menyebar, pembedahan biasanya
tidak kuratif, dan ahli bedah akan memilih operasi yang lebih konservatif, atau tidak reseksi sama sekali.
Jika tumor telah resected tetapi tidak jelas apakah margin bedah bebas tumor, konsultasi intraoperatif diminta untuk menilai
kebutuhan untuk membuat reseksi lebih lanjut untuk margin yang jelas.
Dalam prosedur sentinel node, node sentinel mengandung jaringan tumor meminta suatu diseksi kelenjar getah bening lebih
lanjut, sementara simpul jinak akan menghindari seperti prosedur.
Jika operasi eksploratif, pemeriksaan cepat lesi mungkin membantu mengidentifikasi kemungkinan penyebab gejala
pasien. Hal ini penting untuk dicatat, bagaimanapun, bahwa ahli patologi sangat terbatas oleh kualitas teknis yang buruk dari
bagian beku. Diagnosis akhir ini jarang ditawarkan intraoperatively.
Jarang, cryosections digunakan untuk mendeteksi keberadaan zat hilang dalam teknik histologi tradisional, untuk lipid
misalnya.Mereka juga dapat digunakan untuk mendeteksi beberapa antigen bertopeng dengan formalin.
cryostat ini tersedia di perangkat portabel kecil dengan berat kurang dari 80 lb (36 kg), ke lb stasioner besar 500 perangkat
(230 kg) atau lebih. Laboratorium seluruh histologis dapat dilakukan dalam satu kotak portable, membuat bagian histologi beku
alat mungkin dalam kedokteran primitif.
[Sunting] Sejarah

Prosedur bagian beku seperti sekarang dipraktekkan di laboratorium medis berdasarkan uraian oleh Dr Louis B. Wilson pada
tahun 1905. Wilson mengembangkan teknik dari laporan sebelumnya di atas permintaan Dr William Mayo, ahli bedah dan
salah satu pendiri Mayo Clinic. Laporan sebelumnya oleh Dr Thomas S. Cullen di Johns Hopkins Hospital di Baltimore juga
terlibat bagian yang dibekukan, tetapi hanya setelah fiksasi formalin, dan ahli patologi Dr William Welch, juga di Hopkins,
bereksperimen dengan prosedur Cullen's tapi tanpa konsekuensi klinis. Oleh karena itu, Wilson biasanya dikreditkan dengan
prosedur yang benar-benar merintis (Gal & Cagle, 2005).
[Sunting] Referensi