UNIVERSIDAD TECNOLÓGICA DE MORELIA

BIOTECNOLOGÍA 4B

INMUNOLOGÍA

PRÁCTICA: REACCIONES ANTÍEGENO-ANTICUERPO: REACCIONES DE

AGLUTINACIÓN

ELABORÓ: LIZBETH GONZALEZ PALOMARES

EDSON AARON VAZQUEZ DURAN

SALVADOR VILLA CHAVEZ

HUGO CESAR BRAVO ÁLVAREZ

ESTEFANÍA SAUCEDO CORREA

ASESORÓ: M.C. ANA PATRICIA OROZCO ORTIZ

MORELIA MICHOACÁN, 25 DE NOVIEMBRE DE 2010

OBJETIVO: Observar la reacción antígeno-anticuerpo en la determinación de grupo
sanguíneos (ABO Y Rh)

INTRODUCCIÓN: Es la interacción entre un anticuerpo y una partícula antigénica que se

visualiza por la formación de agregados o grumos macroscópicos. En este proceso, el
anticuerpo es conocido como aglutinina y el antígeno como el aglutinógeno. Las
reacciones de aglutinación utilizan el mismo principio de las reacciones de precipitación.
Cuando el anticuerpo está en exceso inhibe la reacción de precipitación, lo mismo ocurre
en las reacciones de aglutinación. Esta inhibición es llamada el efecto prozona. Esta técnica
es ampliamente usada para la identificación rápida de bacterias, hongos, grupos
sanguíneos y otros antígenos; también es utilizada para la detección de anticuerpos que
pueden ser indicativos de un estado de enfermedad. La temperatura, el pH, la
concentración de electrolitos, son importantes para la realización de la prueba. La
reacción final se evidencia por la formación de malla o grumos visibles
macroscópicamente. La unión antígeno-anticuerpo (Ag-Ac) es una interacción reversible
en la que están involucrados enlaces no-covalentes. En la interacción in Vitro de un  Ag
con su correspondiente Ac se distinguen 2 etapas: la interacción primaria no visualizable y
la interacción secundaria, que sigue a la anterior y se caracteriza por la aparición de un
fenómeno visible como la aglutinación o la precipitación. Por otro lado, no siempre que se
produce la interacción primaria Ag-Ac, se produce la interacción secundaria, ya que, para
conseguir fenómenos visibles, son indispensables determinadas concentraciones y
características de los Ags y Acs.

Hemaglutinación

Las reacciones de aglutinación son realizadas para la tipificación de células sanguíneas. En

la tipificación de los antígenos del sistema ABO, las células sanguíneas son mezcladas en
una placa con un antisuero especifico para los antígenos A y B del grupo sanguíneo.

Si el antígeno está presente en las células, éstas se aglutinaran, formando agregados

Visibles en la placa.
La determinación de los antígenos que están presentes en las células sanguíneas de
un donador es básico para clasificar el tipo de sangre para las transfusiones
 MATERIAL APARATOS REACTIVOS MATERIAL
BIOLÓGICO
Gradilla metálica Centrifuga Anti sueros (anti- Sangre total con
A,B,AB, anti-D o Rh) anticoagulante
Tubo de hemolisis Baño María SS al 0.9 %
Placas excavadas de H2O
vidrio o
portaobjetos
Palillos de madera Suero de Coombs
Lancetas y torundas
Pipeta pasteur
Jeringas de 5.0 ml

PROCEDIMIENTO
TIPIFICACIÓN DE GRUPOS SANGUINEOS: SISTEMA ABO Y Rh

A) Método en placa (directa)

Obtener 5 ml de sangre Rotular una placa de la Del tubo que contiene

y colocar en un tubo,
esperar a que retraiga
el coagulo y centrifugar
a 3000 rpm/5min
manera anti-A, anti-B, la sangre tomar del
anti-AB y testigo y otra fondo con pipeta
con anti-D o Rh. Pasteur eritrocitos y
colocar un gota sobre
cada marca de las
placas

Buscar la Presencia de Adicionar a cada gota

aglutinación antes de de sangre el antisuero
25 segundos. correspondiente y al
testigo adicionar gotas
de albumina al 25%
 B) Método del Tubo (indirecta)

Preparar suspensión de Marcar 5 tubos: anti-A, Adicionar dos gotas de

glóbulos al 2% en SS al anti-B, anti-AB, anti-D y suspensión de
o.85% (2 gotas de testigo eritrocitos a cada tubo y
eritrocitos en 2 ml de dos gotas del antisuero
SS) correspondiente

Resuspender los Mezclar y centrifugar a

glóbulos con 1000 r.p.m durante 1
no agitación
ligera. Observe si hay min
aglutinación.
Nota: No se muestra el procedimiento para determinar DU ya que nuestro paciente tenia
un Rh +

RESULTADOS/OBSERVACIONES
En la prueba directa no pudimos observar aglutinación en ninguna de los antisueros A, B,
AB dado que nuestro paciente dio O aunque al determinar el factor Rh tampoco la
muestra presentaba aglutinación.

En la prueba indirecta pudimos observar aglutinación únicamente en le factor Rh por lo

tanto quiere decir que nuestro paciente es O+

En la muestra de testigo no veríamos nada ya que no hay reacción ag-ac porque la

albumina es solo una proteína.

Resultados Generales Del Grupo

Paciente D (Rh) A B AB Grupo

Sanguineo
Hugo x x x x O-
Aarón  x x x O+
Maestra  * x  A+
Adanely  x x x O+
*Presenta mayor aglutinación.

Por lo tanto podemos decir que el 50% representa al grupo O+ como grupo dominante.

O+ 50%
A+ 25%
O- 25%
CONCLUSIÓN: Las reacciones de aglutinación son de suma importancia en la clínica
Medica ya que son útiles en la determinación de grupos sanguíneos pero también para
prevenir enfermedades autoinmunitarias en la transfusión de sangre ya que logramos
establecer la compatibilidad de los tipos sanguíneos.

CUESTIONARIO

¿Qué son los grupos sanguíneos?

Un grupo sanguíneo es una clasificación de la sangre de acuerdo con las características

presentes o no en la superficie de los glóbulos rojos y en el suero de la sangre. Las dos
clasificaciones más importantes para describir grupos sanguíneos en humanos son los
antígenos (el sistema ABO) y el factor RH

¿Qué es el factor Rh?

Es una proteína integral de la membrana aglutinógena que está presente en todas las
células. Un 85% de la población tiene en esa proteína una estructura dominante, que
corresponde a una determinada secuencia de aminoácidos que en lenguaje común son
denominados habitualmente Rh+.

Tener Rh– [erre hache negativo] significa que se tiene la misma proteína pero con
modificaciones en ciertos aminoácidos que determinan diferencias significativas en la
superficie de los glóbulos rojos, y hacen a los humanos Rh– disponer de anticuerpos
(aglutininas) en el plasma que reaccionan con los glóbulos rojos Rh+ [erre hache positivo].

¿Qué otros sistemas de grupos sanguíneos diferentes al ABO y factor Rh se conocen?

* Sistema del Grupo Sanguíneo ABO

* Sistema del Grupo Sanguíneo Duffy
* Sistema del Grupo Sanguíneo I
* Sistema del Grupo Sanguíneo de Kell
* Sistema del Grupo Sanguíneo de Kidd
* Sistema del Grupo Sanguíneo de Lewis
* Sistema del Grupo Sanguíneo Lutheran
* Sistema del Grupo Sanguíneo MNSs
* Sistema del Grupo Sanguíneo P
* Sistema del Grupo Sanguíneo Rh-Hr
*Sistema Chido/Rodgers (Ch/Rg)
*Sistema Cartwrigth (Yt)
*Sistema Cromer
*Sistema Colton (Co)
*Sistema Knops (Kn)
*Sistema Ok
*Sistema P

¿Qué importancia tiene la tipificación de grupos sanguíneos?

Antes de administrar una transfusión sanguínea, es necesario determinar el grupo

sanguíneo de la persona receptora y el grupo sanguíneo de la persona donante para evitar
enfermedades. Cuando se hace una transfusión con sangre incompatible se produce una
lisis de los hematíes donantes (hemólisis = destrucción de los eritrocitos), lo que puede
dar lugar a situaciones letales, como una insuficiencia renal aguda.

¿Qué importancia tiene la prueba DU en la tipificación de grupos sanguíneos?

Bastante porque en ocasiones el paciente puede decirse que tiene un Rh negativo ya que
lo proteína D esta ausente en sus eritrocitos , sin embargo puede considerarse un error
porque puede estar presente pero no ser detectada por los antisueros y si se realiza una
transfusión pensando que tiene un Rh negativo ocasionaría problemas al receptor.

Describe a que se refiere la hemaglutinación pasiva

Las reacciones de aglutinación pasiva se basan en el empleo de una partícula aglutinante

inerte a la cual se le ha unido un antígeno ejemplo:
Describe los métodos de aglutinación pasiva. Realiza esquemas para explicar su
fundamento.

- Aglutinación activa: anticuerpos dirigidos contra componentes de las partículas

(eritrocitos, bacterias). Un ejemplo de este caso es la determinación de grupos
sanguíneos.

- Aglutinación pasiva: los anticuerpos se dirigen contra moléculas que se han adherido
intencionalmente a una partícula que actúa como medio de soporte pasivo (látex). Una
variante es la aglutinación pasiva reversa, en donde lo que se detecta es el antígeno y las
partículas están recubiertas por el anticuerpo.

Las reacciones de aglutinación directa se basan en la sensibilización de la partícula

inerte con el Ag, por lo que resultan útiles para la detección y titulación de Ac en distintos
fluidos biológicos. Como ejemplos, basta repasar la información brindada en la tabla
anterior.

Por el contrario, las reacciones de aglutinación reversa se basan en la inmovilización

del Ac (en general, se inmoviliza un anticuerpo monoclonal –AcMo-) en la superficie de la
partícula inerte, siendo este tipo de reacciones particularmente útiles para la detección de
Ag en distintas muestras biológicas.
Esquematiza y describe el fundamento de 2 reacciones de precipitación

Inmunodifusión en gel: se enfrentan antígenos y anticuerpos colocándolos en hoyos o

pozos circulares adyacentes hechos en la agarosa, para que se formen líneas de
precipitación entre ellos.

Inmunoelectroforesis: Algunas mezclas de antígenos son muy complejas como para ser
analizadas por difusión y precipitación simples, por lo que fue necesario desarrollar este
método, que consiste en separar los antígenos según su carga eléctrica y visualizarlos
después por precipitación.

Estas técnicas sólo permiten analizar los antígenos y los anticuerpos de forma cualitativa,
pero mediante una modificación posterior se desarrolló la técnica de:

Inmunodifusión radial: Para cuantificar se incorpora al gel cierta cantidad de de los

anticuerpos correspondientes, con lo que al aplicar la muestra al hoyo y dejarla difundir
libremente, se forma un precipitado circular, en forma radial.
El diámetro del círculo del precipitado guarda proporción con la cantidad de antígeno en
la muestra. De esta forma, se puede establecer una curva de referencia o calibración con
cantidades conocidas del antígeno e interpolar los valores de las muestras desconocidas.

REFERENCIAS

http://clasedeinmunologia2.blogspot.com/

http://www.scribd.com/doc/7219379/Guia-de-Tecnicas#

Inmunología, A. Arnaiz –Villena, J.R. Regueira, ed. Complutense

Técnicas y Métodos de Laboratorio Clínico, José Manuel González de Buitrago, ed.

Masson.