Dorel Lucian RADU, MD, PhD

Conferentiar universitar
UMF “Carol Davila”
Hematopoieza
 Hematopoieza
(haima=sange, poiesis=formare)

 Hematopoieza are functia de a produce

elementele si celulele din sangele periferic.

 Hematopoieza are rolul de a mentine

homeostazia elementelor sanguine.
 Hematopoieza

 Celulele stem pluripotente

 eritropoieza – productia eritrocitelor
 granulocitopoieza (mielopoieza) –
productia granulocitelor
 monocitopoieza
 megacariocitopoieza - trombocitopoieza
 limfopoieza – productia de limfocite
 Hematopoieza
 Celule stem pluripotente
 Celule progenitoare (CFU – unitati formatoare de
colonii)
 Celule precursoare (......blast, .....cite)

 Procese celulare: proliferare, diferentiere,

moarte
 Celule stem pluripotente sunt apte de
autoreinoire si totodata genereaza toate tipurile
de celule sanguine (dupa o serie de procese la
nivelul maduvei osoase)
 Celule implicate in hematopoieza
 Organizare

Celule stem
pluripotente

Celule progenitoare

Celule precursoare

Celule diferentiate (mature)

 Celulele stem

1. Celulele stem au capacitatea de autoreinnoire

1. Celulele stem formeaza tipuri celulare diferite

si diferentiate ireversibil.

1. Celulele stem pot functional sa reconstituie un

tesut in vivo
 Tipuri de celule stem

 Celule totipotente

 Celule stem pluripotente

 Celule stem multipotente

 Originea celulelor stem

 Celulele stem embrionare (ESCs)

 Deriva din embrion in special din stadiul de blastocit
 Au capacitate de autoregenerare
 Mentin capacitatea de a forma celule stem
pluripotente
 Celule stem (somatice)
 Sunt parte a celulelor tesuturilor specifice a
organismului dupa nastere
 Sunt celule destinate sa se diferentieze
 Exista mai multe tipuri de celule stem adulte
identificate: hematopoietice, mesenchimale, neurale,
hepatice, muschi, etc.
 Hemangioblastul
Studiile au demonstrat existenta unor celule la embrion ce au potential
de formare atat a celulelor sanguine cat si a celulelor endoteliale
vasculare.
Celulele au fost numite hemangioblaste si apar din mezodermul
embrionar.
 Hematopoieza in stadiile precoce ale embriogenezei

1. Hemangioblaste in “insule de celule sanguine” la nivelul sacului vitelin.

2. Hemangioblastele sunt responsabile pentru hematopoieza de la nivelul
ficatului fetal si a maduvei osoase hematogene.
 Originea celulelor la nivelul tesuturilor hematopoietice

1. Hematopoieza la nivelul sacului vitelin – apare in

saptamana 3-6 de dezvoltare embrionara. Se gasesc
eritrocite nucleate, granulocite si macrofage, nu sunt
observate limfocite.
2. Hematopoieza la nivelul embrionului (ficat si splina)
– apare intre saptamanile 6 - 22 de gestatie. Sunt
prezente eritrocite anucleate, seriile mieloide si
limfocite.
3. Maduva osoasa hematogena – apare din saptamana
20 de gestatie si este prezenta pe toata durata vietii.
Exista toate tipurile de celulele sanguine. Limfocitele
T se dezvolta in timus.
 Hematopoieza la nivelul mezodermului sacului vitelin

Sacul vitelin este primul loc al

hematopoiezei unde celulele
mezenchimale se vor diferentia in
celule numite hemangioblaste.

Aceste celule formeaza celulele

endoteliale si celulele sanguine.
 Hematopoieza la nivelul ficatului embrionar

Ficatul este colonizat de celule hematopoietice stem

Toate tipurile de celule sanguine cu exceptia

limfocitelor T se vor diferentia in ficatul si splina din
stadiul organismului de embrion

Celule la nivelul ficatului embrionar

Neutrofile (n)
 Maduva osoasa hematogena
Celulele stem vor coloniza canalele medulare ale oaselor lungi si
in cavitatile oaselor spongioase.
Toate seriile celulelor sanguine (exceptie limfocitele T) se vor
diferentia in maduva osoasa hematogena
 Recoltare de maduva osoasa
 Procedura sterila dupa anestezie locala
 Creasta iliaca posterioara
 Stern, Tibia
 Aspirat: lichid si celule
 Biopsie
 Maduva osoasa hematogena

 Doua tipuri de lame pentru microscopie:

 Sectiuni tisulare: arata toate componentele
(stroma + vase sanguine + adipocite +
cordoane hematopoietice)
 Aspirat -> frotiu: sunt evidentiate celulele din
seriile celulare si progenitorii.
 Maduva osoasa hematogena

 Coloratia May – Grunwald – Giemsa

 Coloratia Wright
 Maduva osoasa hematogena

 Maduva osoasa - organ vascular

 Maduva osoasa rosie
 Maduva osoasa galbena

MO rosie MO galbena
MADUVA OSOASA
 Maduva osoasa hematogena
 Structura maduvei hematogena
- stroma (colagen tip I si III, fibronectina, laminina si proteoglicani)
- cordoane hematopoietice
- capilare sinusoidale
 Stroma: 3D retea de fibre de reticulina, in cadrul careia
se gasesc celule reticulare, celule hematopoietice,
macrofage.
Maduva osoasa hematogena
 Maduva osoasa hematogena

 ~5,000,000 eritrocite/ L
 ~5 L de sange (persoana de 70 Kg) = 5 x
106 L X 5 x 106
 ~ 25 x 1012 eritrocite in organism
Durata de viata a eritrocitelor = 120 zile
astfel ~2 x 1011 eritrocite/zi
sau
~8,000,000,000 eritrocite/ora
 Maduva osoasa hematogena
 ~10,000 leucocite/ L (~1/2 limfocite, ~1/2 PMNs)
 ~5 L de sange (persoana de 70 Kg) = 5 x 106 mL
 ~ 5 x 1010 leucocite in organism (fara cele din MO)

 Viata medie a leucocitelor este variabila

 PMNs ~ 24 ore, limfocite de la zile la ani (celule memorie)
 Estimare ~ 2 X 1010 celule noi/zi

 Productia de eritrocite creste in anemie si de

leucocite in sepsis
Studii asupra celulelor stem hematopoietice
 In mod extensiv pe modele murine
 Se pot recolta
 Adult – maduva osoasa, sange periferic
 Peri-natal – sange din cordonul ombilical

 Teste functionale
 in vitro test clonogenic (formare de colonii)
 in vivo la soareci transplant de celule

 Markeri de suprafata
Folositi pentru caracterizare, cuantificare si izolare
 Positive pentru CD34, c-Kit, Thy-1, Flk-2/Flt-3, AC133
 Sistem de cultura in Methyl Cellulose

 Sistem de cultura in mediu

semisolid in vitro
 Sursa fiind Celulele Stem
Hematopoietice
 Aspirat de la nivelul MO (3-4%)
 Sange periferic (2%)
 Sange CO (10%)
 Formarea coloniilor: coloniile
celulelor stem multipotente
ori coloniile tipurilor celulelor
angajate specific
 Unitate formatoare de colonii
(CFU)
Cultura in Methylcellulose

CD34+ Cells

CFU-GM BFU-E CFU-Mix

Controlul hematopoiezei
 Factori de crestere si stimulare a coloniilor
 Factori de crestere si stimulare a coloniilor
Colony Stimulating Factors (CSF)
 Se definesc prin capacitatea de a stimula cresterea
coloniilor celulare
 Glicoproteine

 Exista receptori specifici la nivelul celulelor

 Au activitate biologica intensa

 Citokine
 Citokinele au functie pleiotropica
 Pot stimula sau inhiba cresterea celulelor
hematopoietice
 Factorii de reglare a hematopoiezei
 Sunt produsi de mai multe tipuri celulare
 Celule endoteliale, fibroblaste, macrofage, limfocite

 Celulele stem exprima in mod simultan receptori

pentru mai multi factori

 Cei mai multi factori sunt activi pe mai multe linii

hematopoietice

 Polifunctionali
 Proliferare, angajare catre o linie celulara, maturare,
afectare a functiilor celulare.
 Factori de crestere
Name Function Source
Stem cell factor Hematopoiesis Stromal cells
Interleukin-3 Hematopoiesis Activated T & B cells
Interleukin-6 Hematopoiesis Monocytes & fibroblast

GM-CSF CFU-GM mitosis T cells; Endo

G-CSF CFU-G mitosis Macrophage;
Endothelium M-CSF CFU-M mitosis
Macrophage; Endothelium
Interleukin-8 Neutrophil migration Leukocyte; Endothelium

EPO CFU-E differentiation; Kidneys

BFU-E mitosis

TPO CFU-meg differentiation Liver

Interleukin-11 CFU-meg differentiation
Abbreviations: GM-CSF, granulocyte monocyte colony stimulating
factor; M-CSF, monocyte CSF.
 Granulocyte Colony-Stimulating Factor
G-CSF
• Principala citokina cu rol hematopoietic asupra
productiei neutrofilelor, diferentiere si activitate
celulara.
• Stimuleaza cresterea celulelor progenitoare
angajate catre linia neutrofilelor
• Stimuleaza maturarea neutrofilelor

 Activeaza functia fagocitara a neutrofilelor

mature
 G-CSF scurteaza timpul de maturare a
neutrofilului

Multipotent Neutrophil Post-mitotic maturation

HSC precursors neutrophils

4-5 days
Blood
normal

1 day
Blood

G-CSF treated
 Utilizarea clinica a G-CSF
 Larg utilizat pentru tratarea neutropeniei
 Dupa chemoterapie in cancer
 Dupa transplant de maduva osoasa
 Mobilizarea celulelor progenitoare in
sangele periferic

 Neutropenia congenitala
 Eritropoietina

 Produsa predominant la nivel renal

 Stimuleaza sinteza de ARNm si globina

 Accelereaza angajarea celulelor stem

pluripotente catre dezvoltarea seriei
eritroide
 Activitate biologica
 Stimuleaza cresterea clonala in seria eritroida
 Supresia apoptozei in progenitorii seriei eritroide
 Induce eliberarea reticulocitelor din MO
 Induce sinteza globinei in precursorii seriei eritroide
 Utilizarea terapeutica
 In momentul scaderii nivelului eritropoietinei
 Insuficienta renala cronica

 Necesitatea cresterii eritropoiezei

 Pacientii dupa chemoterapie

Mai rar utilizat

 AIDS, dupa proceduri chirurgicale, copii nascuti

prematur, unele afectiuni cronice inflamatorii

 Eritropoieza

 Celulele implicate in acest proces:

proeritroblast -> eritroblast bazofil ->
eritroblast policromatofil ->eritroblast
ortocromatofil (acidofil) -> reticulocite ->
eritrocite
 Aspecte generale :
1. Toate celulele blast au nucleu
2. Celulele nu au granulatii citoplasmatice
 Eritropoieza

 Proeritroblast - 20-25 m, celula mare, nucleu

rotund, cromatina laxa dantelata, nucleoli
prezenti, citoplasma bazofila cu o zona mai
deschisa perinuclear.
 Ertroblast bazofil - 16-18 m, nucleu rotund
cu heterocromatina, citoplasma intens bazofila
(numar mare de poliribozomi).
 Eritropoieza
 Eritroblast policromatofil : 9 -12 m, nucleu rotund
heterocromatic, citoplasma albastru/roz deschis datorita
inceperii acumularii de hemoglobina
 Eritroblast ortocromatofil (acidofil) : 8 - 9 m, nucleu
foarte mic si intens colorat, citoplasma acidofila.
 Reticulocite – contine numar redus de poliribozomi ce se
coloreaza cu albastru de cresyl briliant
 Eritrocite
 Granulocitopoieza
 Celulele implicate in acest proces: mieloblaste,
promielocite, mielocite, metamielocite, granulocite
nesegmentate, granulocite mature (segmentate)
 Aspecte generale:
1. Celulele “blast” au nucleoli, celulele “cite” nu au
nucleoli, cu exceptia promielocitelor
2. Scaderea volumului celular pe parcursul diferentierii,
exceptie la promielocit
3. Prezenta de granule azurofile si granule specifice in
functie de stadiul maturarii
 Granulocitopoieza

 Mieloblast - 15-20 m, nucleu rotund cu

1 -4 nucleoli, citoplasma bazofila si fara
granule citoplasmatice.
 Promielocite - 20-25 m, nucleu ce
poate contine nucleoli; citoplasma
abundenta si bazofila cu granule azurofile
 Granulocitopoieza
 Mielocite – trei tipuri celulare, nucleul rotund se
condenseaza si este mai intens colorat decat la promielocit,
citoplasma mai putin bazofila si prezinta granule
specifice :
1. Neutrofile- 15-20 m, numeroase granule
neutrofile
2. Eozinofile - 20-25 m, granule mari rosu-portocaliu
3. Bazofile - 13-15 m, granule (cu dimensune de 0,5
m) ce se coloreaza metacromatic.
 Granulocitopoieza

 Metamielocite – nucleu reniform,

citoplasma asemanatoare mielocitelor
 Granulocite nesegmentate (nucleu in
banda) – nucleu in forma de U sau S,
citoplasma acidofila
 Granulocite segmentate (mature) –
nucleu complet segmentat
Mieloblast si promielocit
Promielocite, mielocite si metamielocite
 Originea trombocitelor
 Megacarioblaste, megacariocite, megacariocite
adulte formatoare de trombocite
 Megacarioblastul – 15-50 µm, nucleu mare
oval sau reniform, prezenta nucleolilor,
citoplasma bazofila.
 Megacariocitul – 35-150 µm, nucleu lobulat
neregulat, cromatina macrogranulara , nu se
observa nucleoli, citoplasma acidofila sau
bazofila.
 Megacariocitul adult – dimensiune pana la
150 µm, nucleu lobulat si la nivelul citoplasmei
acidofile se formeaza invaginatii ale membranei
plasmatice.
Megacariocite la nivelul maduvei osoase
 Monocitopoieza

 Monoblast – caracteristici morfologice

asemanatoare mieloblastului
 Promonocite - 10-20 m, nucleu (ce prezinta o
mica indentatie) unde cromatina este dantelata
si nucleoli prezenti , citoplasma bazofila.
 Monocite – 12- 15m, nucleu cu o dimensiune
de 50% din suprafata celulei, citoplasma cu
granule azurofile.
 Limfopoieza

 Limfoblast - 10-18 m, nucleu eucromatic cu

1-2 nucleoli,citoplasma bazofila. Unele limfocite
din maduva osoasa se diferentiaza in limfocite B,
alte limfocite din maduva osoasa migreaza in
timus unde se diferentiaza in limfocite T.
 Limfocitele B si T migreaza catre organele
limfoide secundare.
 Lymphocyte