12/5/2010

Materi Kuliah
Bioteknologi Pertanian
Protoplasma
Prodi Agroteknologi
Pertemuan Ke 8 • Sel tanpa dinding sel
• Dapat digunakan sebagai eksplan
TEKNOLOGI FUSI PROTOPLASMA • Digunakan untuk rekayasa genetika
– Paling sering untuk ekspresi transien
Ir. Sri Sumarsih, MP. – transformasi konifer
Email: Sumarsih_03@yahoo.com
• Digunakan untuk membuat hibrid interspesifik
Weblog: Sumarsih07.wordpress.com
Website: agriculture.upnyk.ac.id

Fusi Protoplas: Production Hibrid Melalui

Mengapa menggunakan ini? Protoplas
• Karena dapat dilakukan • Empat tahap untuk produksi hibrid:
• Dimungkinkan untuk persilangan secara luas • Isolasi Protoplas
• Digunakan untuk pengenalan ciri penyakit dan
• FusiProtoplas
kualitas
• Potensi yg sangat besar untuk masa depan jika ingin • Seleksi Hibrid
memecahkan permsalahan yang sulit di masa kini • Regenerasi tanaman
• Protoplas juga target untuk rekayasa genetika .

1
 12/5/2010

Intra Intra Inter spesifik:

Prokariot:
spesifik: spesifik:
Bacillus cereus x B. Thuringiensis
Prokariot: Eukariot:
Brevibacterium flavum x B
Bacillus spp Aspergillus lactofermentum
Brevibacterium Candida

Corynebacterium Penicillium
Eukariot:
Escherichia coli Saccharomyces Aspergillus nidulans x A rugolosus
Streptomyces Chepalosporium Penicillium crysogenum x P. notatum

Inter genetik: Isolasi Protoplas

Prokariot:
Rhizobium sp. x Escherichia coli
Brevibacterium flavum x Corynebacterium
glutamicum
Eukariot:
Candida tropicalis x Saccharomyces fibuliger
Hansenula wingei x Saccharomyces cerevisiae
• Letakkan daun dalam Buffer
– Isotonik sampai larutan yang hipertonik ringan
– Biasanya mengandung mannitol atau sorbitol
• Tambahkan enzim
– Selulase, pektinase
– Degradasi dinding sel
• Inkubasi (& pemurnian)

2
 12/5/2010

Enzym lisosim yang dapat

merusak dinding sel bakteri

Sel A

Tambahkan Enzim

Sel B

3
 12/5/2010

FUSI PROTOPLAS:
Tambah Promotor Fusi
• Tidak terjadi secara spontan
• Tambah promotor fusi
– PEG / Elektrik / Virus
• Kemudian diinkubasi

• Tiga kemungkinan produk hasil fusi:

– Sel A=Sel A
– Sel B=Sel B
– Sel A=Sel B
• Inti biasanya tidak berfusi (sel heterokarion)

Fusi Protoplas