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ANO I VOL 1 NUM 01 O admirável mundo das células-tronco
era também necessário, junto ao cultivo destas celulares não venham a competir por nutrientes..
células, a presença de uma monocamada celular, A primeira linhagem de células-tronco
chamada de camada alimentadora. A função embrionárias foi estabelecida com o uso de uma
Figura 1: Esquema sobre a obtenção de células-tronco embrionárias a partir da massa celular interna de um blastocisto.
Após a fecundação, ocorre o início do desenvolvimento do indivíduo, chegando a formação de uma estrutura denominada de blastocisto. É nessa
fase de desenvolvimento que as células-tronco embrionárias (células pluripotentes) são retiradas, isoladas e cultivadas em laboratório (in vitro). O
cultivo normalmente é realizado sobre um tapete de células, conhecido como camada alimentadora. Este tapete celular, formado normalmente por
fibroblastos embrionários de camundongo, que tem a função de auxiliar na auto-renovação e manutenção da pluripotencialidade das células-tronco
embrionárias mantidas por longos períodos in vitro. Quando retirada a camada alimentadora e submetidas a protocolos de diferenciação específicos,
estas células podem se diferenciar em todos os tipos celulares do indivíduo adulto.
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O admirável mundo das células-tronco ANO I VOL 1 NUM 01
saudável dessas células sobre a MEF (Figura 2B). e o uso de componentes de matriz extracelular, os
Embora a utilização de MEF ainda seja a forma quais são extremamente dispendiosos. Além disso,
mais clássica de cultivo, essa metodologia essa metodologia não deixa a cultura de células-
inviabilizaria aplicações terapêuticas, uma vez que as tronco embrionárias completamente livre de
células-tronco embrionárias humanas poderiam ser componentes animais.
contaminadas por componentes animais, podendo Como promessa de solucionar os problemas
desencadear possíveis reações imunológicas. relacionados à utilização de compostos animais para o
Por esse motivo, Richard e colaboradores (2003) cultivo de células-tronco embrionárias humanas,
estudaram diferentes tipos de monocamadas pesquisadores publicaram recentemente na revista
provenientes de células humanas, como por exemplo, Nature o desenvolvimento das células 3i. Essas
células fetais originadas do músculo ou da pele e células-tronco são mantidas somente com a utilização
células adultas originadas da tuba uterina de adulto. de três compostos sintéticos, mantendo tanto sua
Eles concluíram que, por alguma razão desconhecida, capacidade de propagação indefinida, como sua
a monocamada de MEF mantinha melhor o pluripotencialidade, na ausência de qualquer produto
crescimento das células-tronco embrionárias humanas animal (Ying et al., 2008). No entanto, ainda é muito
(Figura 2C) em relação às demais células utilizadas cedo para definir essa técnica como metodologia ideal
como monocamada. para o cultivo de células pluripotentes.
No entanto, estudos recentes têm sugerido que a Embora tenhamos enfatizado o uso de
adição de outras substâncias no meio de cultivo de monocamadas para o cultivo das células
células indiferenciadas seja a melhor alternativa ao pluripotentes, é importante lembrar que essa
uso de MEF. Um estudo desenvolvido por Xu e metodologia não se restringe a manutenção do estado
colaboradores (2001) demonstrou ser possível derivar indiferenciado destas células. A utilização de
e estabelecer o cultivo de uma linhagem de células- monocamadas específicas pode privilegiar justamente
tronco embrionárias humanas livres de monocamada a diferenciação em outros tipos celulares. Por
celular murina, utilizando uma matriz extracelular exemplo, em projetos de pesquisa que utilizaram
conhecida como Matrigel. Esse composto é formado células-tronco embrionárias como alternativa
por um complexo tridimensional, o qual apresenta terapêutica para a doença de Parkinson, o cultivo
uma série de substâncias, dentre elas, fibronectina, destas células sobre monocamada de estroma de
colágeno e glicoproteínas. Outros pesquisadores medula óssea, mais conhecidas pelos cientistas como
também já comprovaram a eficácia do uso de Matrigel PA6 (Kawasaki et al., 2000) e sobre células de
como substrato no cultivo destas células (Sato et al., meninge embrionária (Hayashi et al., 2008), levaram
2004; Pebay et al., 2005; Wang et al., 2005). O a diferenciação em neurônios dopaminérgicos e não a
inconveniente deste protocolo é o custo, já que ele manutenção da pluripotencialidade, como no caso da
requer altas concentrações de fatores de crescimento monocamada de MEF.
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Chegando a um consenso Rehen SK, Paulsen B. 2007. Células-tronco: O que são? Para que
servem? Rio de Janeiro. Vieira e Lent, 90p.
O debate sobre qual é a melhor maneira de cultivar as
Richards M, Tan S, Fong CY, Biswas A, Chan WK, Bongso A. 2003.
células-tronco embrionárias ainda está aberto. Não é Comparative evaluation of various human feeders for prolonged
possível nesse momento escolher uma ‘estratégia undifferentiated growth of human embryonic stem cells. Stem Cells.
21:546-556.
ótima’ para o cultivo destas células, uma vez que
Sato N, Meijer L, Skaltsounis L, Greengard P, Brivanlou AH. 2004.
vários aspectos e questões fundamentais da biologia
Maintenance of pluripotency in human and mouse embryonic stem cells
deste tipo celular ainda precisam ser desvendados through activation of Wnt signaling by a pharmacological GSK-3-specific
A falta de um protocolo de cultura definido acaba inhibitor. Nat Med. 10:55-63.
retardando as pesquisas, pois impossibilita Thomson JA, Itskovitz-Eldor J, Shapiro SS, Waknitz MA, Swiergiel JJ,
Marshall VS, Jones JM. 1998. Embryonic stem cell lines derived from
comparações relacionadas à capacidade de human blastocysts. Science. 282:1145-1147.
diferenciação das células-tronco embrionárias e Watt FM, Hogan BL. 2000. Out of Eden: stem cells and their niches.
compromete os estudos de desenvolvimento celular, Science, 287:1427-30.
de modelos de doenças, de descoberta de novas Wang G, Zhang H, Zhao Y, Li J, Cai J, Wang P, Meng S, Feng J, Miao C,
Ding M, Li D, Deng H. 2005. Noggin and bFGF cooperate to maintain the
drogas e de testes toxicológicos.
pluripotency of human embryonic stem cells in the absence of feeder
Felizmente diversas pesquisas estão em layers. Biochem Biophys Res Commun. 330:934-942.
andamento para se tentar definir qual a condição ideal Ying QL, Wray J, Nichols J, Batlle-Morera L, Doble B, Woodgett J, Cohen
de cultivo. Por enquanto, é consenso que, quanto P, Smith A. 2008. The ground state of embryonic stem cell self-renewal.
Nature. 453:519-524.
menor o contato e a manipulação das células-tronco
Xu C, Inokuma MS, Denham J, Golds K, Kundu P, Gold JD, Carpenter
embrionárias humanas com diferentes tipos celulares MK. 2001. Feeder-free growth of undifferentiated human embryonic stem
e com componentes animais, mais reduzidos serão os cells. Nat Biotechnol. 19:971-974.
riscos de contaminação e a geração de injúrias nos
pacientes submetidos a terapias. A maioria dos
cientistas também concorda que é importante
continuar levando em consideração todos os
diferentes tipos de monocamadas celulares, pois elas
também poderão ter aplicação clínica.
Agradecimentos
Os autores agradecem a colaboração e orientação do
professor Stevens Kastrup Rehen e dos colegas
Priscila Britto Campos e Rafaela Sartore da Costa.
Referências bibliográficas
Dahéron L, Opitz SL, Zaehres H, Lensch WM, Andrews PW, Itskovitz-
Eldor J, Daley GQ. 2007. LIF/STAT3 signaling fails to maintain self-
renewal of human embryonic stem cells. Stem Cells. 25:770-778.
Pebay A, Wong RC, Pitson SM, Wolvetang EJ, Peh GS, Filipczyk A, Koh
KL, Tellis I, Nguyen LT, Pera MF. 2005. Essential roles of sphingosine-1-
phosphate and platelet-derived growth factor in the maintenance of human
embryonic stem cells. Stem Cells. 23:1541-1548.