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Guía de prácticas
2007-II
1
INTRODUCCIÓN
La biología es la ciencia de la vida que estudia la estructura y función de los organismos vivos y sus
componentes. Las aplicaciones de la investigación básica en biología molecular son numerosas, desde la
tecnología para trasplantar corazones, manipular genes, diseñar fármacos contra microorganismos
patógenos e incrementar la producción mundial de alimentos.
La guía de prácticas del curso de Biología Celular y Molecular tiene como objetivo entrenar al estudiante
con los procedimientos llevados a cabo en el laboratorio y desarrollar su pensamiento científico que lo
lleve comprender los términos básicos de la Biología Molecular.
El estudiante debe emplear esta guía en cada práctica de laboratorio y estar informado sobre la práctica
que se llevará a cabo en cada sesión.
La guía se ha dividido en tres partes de acuerdo a cada evaluación parcial. La primera parte comprende la
célula y componentes celulares. La segunda parte incluye procesos celulares como respiración,
permeabilidad, división celular y la visualización de organelas. En la tercera parte se analizara el proceso
de meiosis, comprensión del código genético y técnicas de manipulación de ácidos nucleicos.
El alumno debe cumplir con los objetivos planteados al final de cada práctica. Así mismo debe presentar
un informe de cada práctica la semana siguiente a realizada la misma.
El alumno debe presentar un informe de cada práctica realizada que incluya las siguientes partes:
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PROGRAMACIÓN DE CONTENIDO
Nº CONTENIDO
20-25 Metodología de Evaluación. Distribución de grupos
agosto de práctica.
27-01
Bioseguridad. Microscopía
septiemb
re
03-08
septiemb Técnicas de coloración. Preparación de muestra.
re
10-15
Observación y reconocimiento de células
septiemb
procariotas
re
17-22
Observación y reconocimiento de células
septiemb
eucariotas
re
24-29
septiemb Observación de la Permeabilidad Celular
re
01-06
Observación del movimiento celular: Ciclosis
octubre
08-13
Observación de cilios y flagelos
octubre
15-20
PRIMERA EVALUACION
octubre
22-27 Observación de Inclusiones Citoplasmáticas
octubre
29-03
Observación de organelas. Mitocondrias y
noviembr
Cloroplastos
e
05-10
noviembr Técnicas de Extracción de Ácidos Nucleicos.
e
12-17
noviembr Ciclo celular: Mitosis
e
19-24
noviembr Ciclo Celular. Meiosis
e
26-01
diciembr Código Genético.
e
03-08
diciembr SEGUNDA EVALUACIÓN
e
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PRACTICA Nº 2
BIOSEGURIDAD Y MICROSCOPÍA
El trabajo en el Laboratorio requiere la observación de una serie de normas de seguridad que eviten
posibles accidentes debido al desconocimiento de lo que se está haciendo o a una posible negligencia de
los alumnos que estén en un momento dado, trabajando en el Laboratorio.
A continuación alistamos una serie de medidas e indicaciones de seguridad que deben tomarse durante
las prácticas de laboratorio.
NORMAS PERSONALES
1.Lea con atención, antes de cada práctica, las indicaciones de su guía. Siga todas las instrucciones a
menos que el profesor realice alguna modificación.
2.Cada grupo de prácticas se responsabilizará de su zona de trabajo y de su material. Se trabajará con
cuidado y de manera organizada. Así mismo se mantendrá cada mesa de trabajo limpia, seca y
ordenada.
3.Es obligatorio la utilización de mandil que le cubra brazos, piernas, torso y pies. Están prohibidos el uso
de sandalias, pantalones cortos, faldas, polos cortos, etc. en el laboratorio. La persona
inapropiadamente vestida para trabajar en el laboratorio le será negado el ingreso.
4.No deben llevarse las manos a la boca ni a la cara pues pueden estar contaminadas.
5.Si tienes el pelo largo, es conveniente que lo lleves recogido.
6.Está terminantemente prohibido fumar, tomar bebidas ni comidas.
7.En caso de derrame, accidente o daño avise inmediatamente al profesor.
8.Al término de cada práctica limpiar el área de trabajo y lavar los materiales utilizados con agua de
caño. Lavarse las manos meticulosamente con agua y jabón. Finalmente cerciorares que las llaves de
gas y agua estén cerradas.
REACTIVOS QUIMICOS
1.Usar lentes de seguridad cuando trabaje con reactivos químicos peligrosos que puedan salpicar o
derramarse.
2.Antes de utilizar un compuesto, asegurarse bien de que es el que se necesita, fijarse bien el rótulo.
3.Como regla general, no coger ningún producto químico. El profesor o profesora te lo proporcionará.
4.Nunca devuelva los sobrantes de los productos a los frascos de origen sin consultar con el profesor.
5.Es muy importante que cuando los productos químicos de desecho se viertan en la pila de desagüe,
aunque estén debidamente neutralizados, debe dejarse que circule por la misma, abundante agua.
6.No tocar con las manos y menos con la boca, los productos químicos.
7.No pipetear con la boca. Utilizar una bombilla de succión.
4
8.Los ácidos requieren un cuidado especial. Cuando queramos diluirlos, siempre echaremos el ácido
sobre agua.
9.Los productos inflamables (gases, alcohol, éter, etc.) deben estar lejos de fuentes de calor. Si hay que
calentar tubos con estos productos, se hará al baño María, nunca directamente a la llama.
10.Manipule con precaución los solventes volátiles e inflamables como el éter, acetona y metanol. Nunca
evapore estos solventes en una hornilla al abierto. Utilice siempre un sistema de condensación eficiente.
11.Si se vierte sobre ti cualquier ácido o producto corrosivo, lávate inmediatamente con mucha agua y
avisa al profesor.
12.Al preparar cualquier disolución se colocará en un frasco limpio y rotulado convenientemente.
13.Encienda fuego en el laboratorio solo si no existen solventes inflamables en la vecindad. La persona
que encienda el fuego debe primero verificar que no exista otra persona que este trabajando con
solventes inflamables en el laboratorio.
MATERIAL DE VIDRIO
-Ten sumo cuidado y ten en cuenta que la boca del tubo de ensayo no apunte a ningún compañero.
Puede hervir el líquido y salir disparado, por lo que podrías ocasionar un accidente.
-Calienta por el lateral del tubo de ensayo, nunca por el fondo; agita suavemente (mira la figura).
EQUIPOS ELÉCTRICOS
1Manipule cualquier equipo eléctrico con las manos secas y asegúrese que el área de trabajo también
este seca.
2Ningún cordón electrifico debe colgar fuera de la mesa de trabajo.
3Cuando desconecte algún equipo de tomacorriente, jálelo por el enchufe y no por el cordón.
UTILIZACION DE BALANZAS
1Cuando se determinan masas de productos químicos con balanza, se colocará papel sobre los platos de
la misma y si el producto fuera corrosivo, se utilizará una luna de reloj.
2Se debe evitar cualquier perturbación que conduzca a un error, como vibraciones debidas a golpes,
aparatos en funcionamiento, soplar sobre los platos de la balanza, etc.
MANIPULACIÓN DE ESPECÍMENES
1Manipule los microorganismos crecidos en una placa petri o tubo de cultivo con extremo cuidado.
Siempre utilice técnicas de esterilidad (a la llama del mechero, guantes, palillos estériles, etc.).
2Nunca llevar a la boca plantas o partes de ellas como semillas, frutos y hojas.
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S EGUNDA PARTE: MICROSCOPÍA
I. FUNDAMENTO
MICROSCOPIO COMPUESTO
El microscopio es un instrumento óptico que se compone de una serie de lentes para conseguir
imágenes aumentadas de objetos diminutos que por su extrema pequeñez no son visibles al ojo humano.
El microscopio compuesto está constituido de un SISTEMA OPTICO destinado a obtener una
imagen aumentada del objeto, un SISTEMA MECANICO que sostiene los distintos elementos ópticos y los
objetos que se van a examinar y un SISTEMA DE ILUMINACIÓN.
Dado que la imagen del microscópio no es real sino virtual, se han determinado algunos términos
de medida microscópica:
El máximo poder de resolución del microscopio óptico es de 0,2 micrómetros(0,2 µm), debido a
que la longitud de onda de la luz utilizada (400-700 µm) es un factor limitante. El ojo humano tiene un
poder de resolución de aproximadamente 100 micrómetros.
El límite de resolución puede definirse como la distancia mínima que debe existir entre dos puntos
para que se puedan distinguir como separados. El límite de resolución se puede calcular a partir de la
siguiente ecuación:
Kλ
L.R. = K = constante = 0.61
A.N
λ = longitud de onda de luz AN = apertura numérica de cada lente
objetivo es su capacidad para captar la máxima cantidad de la luz
difractada por el objeto. Depende del índice de refracción del medio.
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II. OBJETIVOS
Reconocer las partes del microscopio óptico. -Conocer su utilización para la observación de
distintas muestras biológicas.
En el laboratorio encontrarás:
- Microscopio compuesto
- Aceite de inmersión
- Colorantes
IV. PROCEDIMIENTO.
Se reconocerán las partes de un microscopio óptico. Señalar las partes del mismo en el dibujo adjunto.
Objetivos: sistema de lentes convergentes que actúa como una lente que se encuentran montados en el
revolver. Lo usual es que cada microscopio tenga cuatro objetivos de diferentes aumentos ( 4x,
10x, 40x, 100x) los que se clasifican en:
Ocular: El ocular es una lente convergente que recoge la imagen intermedia producida por el objetivo y
forma una nueva imagen virtual, derecha, y amplificada un cierto número de veces (X veces,
según se indica en el propio ocular). Los aumentos más comunes son 10X y 16X.
2.-SISTEMA DE ILUMINACIÓN.
Condensador: Sistemas de lentes convergentes que concentra el haz de luz sobre la preparación.
Portafiltro: Opcional, sirve para colocar filtro de distintos colores para mejorar el contraste.
3.-SISTEMA MECANICO
Tubo óptico: Cilíndrico ahuecado destinado a llevar el ocular en su extremo superior y los objetivos
montados en el revólver en su extremo inferior. La longitud del tubo debe ser siempre precisa.
Revólver: Pieza metálica situada en la parte inferior del tubo que por rotación sitúa los diferentes objetivos
en posición de trabajo.
Platina: Superficie plana con una perforación central para permitir el paso de la luz hacia preparación.
Posee un carro que sostiene la preparación y que puede desplazarla hacia delante y hacia el
lado izquierdo o hacia el lado derecho.
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Base o Pie: Estructura sólida y pesada que sostiene y da estabilidad a todo el instrumento.
Columna: Vástago vertical que se articula con la base y con el tubo del microscopio y lleva el mecanismo
de movimiento del mismo.
NOTA IMPORTANTE. Presta mucha atención al manejo del microscopio que tienes a tu cargo. Debes
hacerlo cuidadosamente porque son aparatos muy delicados y dejarás a consigna tu documento de
identificación.
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debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar
el objetivo en la preparación pudiéndose dañar alguno de ellos o ambos.
b. Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparación
con el macrométrico y, cuando se observe algo nítido la muestra, girar el micrométrico hasta
obtener un enfoque fino.
5. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover
un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino.
4El empleo del objetivo de inmersión es siempre utilizando aceite de inmersión.
CUESTIONARIO
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PRACTICA Nº 3
TECNICAS DE COLORACION. PREPARACION DE MUESTRAS
I. FUNDAMENTOS
Los preparados microscopicos, constituyen una serie de preparados rutinarios de laboratorios que
tienen por objeto identificar en forma rápida el contenido de un determinado tipo de muestra, con la con la
finalidad de resolver algún problema de interés particular. Los preparados microscopicos más frecuentes
en Biología son:
Los preparados “en Fresco” son preparaciones microscópicas acuosas, que se caracterizan por que la
sustancia examen, no está adherida de un modo fijo a la superficie de la lámina portaobjeto y por lo tanto,
al ser manipulada ésta en diferentes posiciones se corre el riesgo de perder u estropear el preparado.
Los preparados “en seco” son aquellos que sufren un procesamiento previo (extensión, fijación y
coloración), y se caracterizan porque la sustancia examen se halla adherida a la superficie de la lámina
portaobjeto y por lo tanto, al ser manipulada ésta en diferentes posiciones no se estropea o pierde la
muestra.
II. OBJETIVO.
III. MATERIALES
Encontrarás en el laboratorio.
- Microscopio óptico - Safranina
- Pipetas pasteur - Eosina
- Goteros - Violeta de genciana
- Agua destilada - Wright
- Mechero - Fucsina
- Azul de metileno - Verde de Janus
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- Giemsa - Hematoxilina
IV. PROCEDIMIENTO
COLORACION SIMPLE
1. Con un mondadiente extraer mucosa labial y realizar una extensión sobre la lamina
2. Fijar al calor moderamente o al ambiente
3. colorear de 1-5’ con safranina (o Eosina) o Azul de metileno (o violeta de genciana)
4. Secar al medio ambiente
5. observa la microscopio
COLORACION DOBLE
1. Con un mondadiente extraer mucosa labial y realizar una extensión sobre la lamina
2. Fijar
3. Colorear con hematoxilina por 3-5’
4. lavar con agua destilada y dejar secar
5. Colorear con eosina por 5-10’
6. lavar con y dejar secar
7. observar al microscopio
COLORACION NEUTRA
1. Realizar un frotis con una microgota de sangre
2. dejar secar o fijar con calor
3. Colocar mitad de volumen con Wright y mitad con buffer fosfato 6.8
4. dejar coloreando por 3-5’
5. lavar con agua destilada
6. observar al microscopio
PREPARADOS EN FRESCO
1. Colocar una gota de agua estancada en una lamina
2. colocar una laminilla
3. observar
CUESTIONARIO
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PRACTICA Nº 4
OBSERVACIÓN Y RECONOCIMIENTO DE CÉLULAS PROCARIOTES
I. FUNDAMENTO
GRAM POSITIVAS: se tiñen fuertemente con violeta de genciana y adquieren una coloración violeta.
GRAM NEGATIVAS: se tiñen muy superficialmente por lo que fácilmente se decoloran con solventes
orgánicos. Se utiliza adicionalmente la safranina o fucsina, que se emplea como colorante de contraste,
adquierendo una coloración rosada.
Además de la coloración esta técnica nos permite distinguir en las bacterias: a) morfología: cocos, bacilos,
espirilos, cocobacilos, vibrios, etc) b) agrupación: pares, cadenas tétradas, racimos, sarcina
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II. OBJETIVOS
Reconocer los distintos tipos de bacterias según se tiñan o no con la Tinción Gram.
III. MATERIALES
Encontrarás en el laboratorio:
º
Microscopio óptico - Alcohol acetona
Soluciones para la tinción: - Fucsina o safranina
- Violeta de genciana
- Aceite de inmersión
- Lugol
- Mechero de alcohol
IV. PROCEDIMIENTO
La tinción Gram se realizará sobre las muestras de yogur, sarro dentario y vinagre que los alumnos
traerán.
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Bacterias del yogurt
El yogur es un producto lácteo producido por la fermentación natural de la leche. A escala industrial se
realiza la fermentación añadiendo a la leche dosis del 3-4% de una asociación de dos cepas bacterianas:
el Streptococcus termophilus, poco productor de ácido, pero muy aromático, y el Lactobacillus bulgaricus,
muy acidificante. En esta preparación se podrán, por tanto, observar dos morfologías bacterianas distintas
(cocos y bacilos) y un tipo de agrupación (estreptococos, cocos en cadenas arrosariadas). Además, el
tamaño del lactobacilo (unos 30µm de longitud) facilita la observación aunque no se tenga mucha práctica
con el enfoque del microscopio.
El vinagre es una solución acuosa rica en ácido acético resultante de la fermentación espontánea del
vino o de bebidas alcohólicas de baja graduación. La acetificación del vino es producida por bacterias
aeróbicas del ácido acético, principalmente Acetobacter aceti, aunque también Gluconobacter. Se trata de
bacilos rectos con flagelos polares.
El sarro dental es un depósito consistente y adherente localizado sobre el esmalte de los dientes. Está
constituido principalmente por restos proteicos, sales minerales y bacterias junto con sus productos
metabólicos. La flora bacteriana de la cavidad bucal es muy variable dependiendo de las condiciones que
se den en el momento de hacer la preparación, pero suelen abundar bacterias saprófitas, pudiéndose
observar gran variedad de morfologías: espiroquetas, cocobacilos, diplococos y bacilos.
Realizar los siguientes pasos para la tinción Gram de cada una de las 3 muestras indicadas.
Deberás diferenciar los distintos tipos de bacterias que observas, tanto por su tamaño, color, forma, etc.
CUESTIONARIO
1Qué tipos de morfología (cocos, bacilos, espirales, etc) aparecen en los frotis de los cultivos de yogur,
sarro y vinagre?
2¿Por qué las bacterias Gram positivas se tiñen de azul y las Gram negativas de rosado? Explique el
fundamento de la tinción Gram.
3Dibuje y nombre 3 bacterias Gram positivas y 3 Gram negativas (consulta libros de microbiología).
4Complete la siguiente figura, indicando las partes del microscopio óptico.
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PRACTICA Nº 5
I. FUNDAMENTO
En 1939, en base a observaciones realizadas por los científicos alemanes Schleiden y Schwan, se
plasmó la teoría celular, la cual produjo un cambio radical en las ciencias biológicas. Esta teoría postula
que los “cuerpos de todos los animales y vegetales están formados de células y que solo pueden aparecer
nuevas células por división de las células preexistentes”. De ahí que los organismos por muy sencillos que
sean están constituidos por unidades vivas denominadas células.
La célula eucariota es más compleja que la célula procariota y contiene, a diferencia de esta
última, núcleo celular. Los organismos más simples (protozoarios) están constituidos de una sola célula
eucariota mientras que los más complejos o multicelulares están formados por un gran número de células
eucariota que se hallan organizadas en tejidos, órganos y sistemas.
II. OBJETIVOS
Observar y caracterizar células eucariotas de tipo vegetal (epidermis de cebolla y mucosa bucal).
Observar y caracterizar células eucariotas de tipo animal (epitelio bucal, tejido adiposo y sangre).
III. MATERIALES
Encontrarás en el laboratorio
Microscopio óptico Lanceta estéril
Cubeta de tinción Hematoxilina
Lugol Formol
Frasco lavador Eosina
Mechero de Alcohol Sudan III
Alcohol absoluto
IV. PROCEDIMIENTO
Las células de la epidermis de las hojas internas del bulbo de la cebolla, son de forma alargada y
bastante grande. La pared celular celulósica se destaca muy clara teñida por el colorante. Los núcleos son
grandes y muy visibles. En el citoplasma se distinguen algunas vacuolas grandes débilmente coloreadas.
1Separe una de las capas del bulbo de la cebolla. Con ayuda de una pinza desprenda la membrana
epidérmica que cubre la parte interna de la cebolla y extiéndala en el portaobjetos.
2Utilizando una hoja de afeitar obtenga una porción de medio centímetro cuadrado, cúbrala con una
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gota de lugol, coloque cuidadosamente el cubreobjeto y observe en el microscopio.
3Reconozca las partes de la célula vegetal.
1 Coloque una gota de agua estancada sobre un porta objeto y cubran con una laminilla.
2 Observe con el objetivo de menor aumento.
3 Ajuste el diafragma para incrementar el contraste.
4 Observe la forma, tamaño y movimiento de los organismos unicelulares (ver figura adjunta).
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Protozoarios más representativo
1 Diluya un trocito de levadura de pan (Saccharomyces cerevisiae) con agua destilada, en un tubo de
ensayo.
2 Observe con el objetivo de mayor aumento.
3 Ajuste el diafragma para incrementar el contraste.
4 Observe la forma y tamaño de estos organismos.
El azul de metileno tiñe intensamente el núcleo y con menos color el citoplasma de las células. Éste
suele ser algo granuloso.
El Sudan III es un compuesto que tiñe lípidos de color rojo intenso. En el tejido adiposo, que contiene
gran cantidad de grasas, se observarán los adipocitos teñidos por el Sudan III.
Al microscopio las células sanguíneas se verán predominantemente los glóbulos rojos, hematíes o
eritrocitos teñidos de color rojo por la eosina. No tienen núcleo y son más delgados por el centro que por
los bordes. Los glóbulos blancos o leucocitos se identifican fácilmente por la presencia de núcleo, teñido
de morado por la hematoxilina. Hay varias clases de leucocitos:
Linfocitos: de tamaño aproximado al de los glóbulos rojos, tienen un solo núcleo que ocupa casi
todo el glóbulo. -Monocitos: son los leucocitos mayores, poco frecuentes normalmente, núcleo
grande, redondo, son los más móviles y su función principal es la fagocitosis. -Polimorfonucleares:
núcleo fragmentado o arrosariado. Pueden ser eosinófilos, con abundantes granulaciones teñidas
de rojo por la eosina, neutrófilos y basófilos.
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Efectúa los siguientes pasos para ambas coloraciones, Wright y Hematoxilina-Eosina:
1 Con ayuda de una lanceta desechable, realice una punción del pulpejo del dedo anular de la mano
izquierda, previa desinfección con algodón y alcohol.
2 Tome una gota de sangre y haga un frotis fino sobre el portaobjeto
3 Colocar el frotis extendido ya seco, sobre una base plana en posición totalmente horizontal.
Para la coloración de Wright:
1Coloree con unas gotas de colorante Wright, inmediatamente agregar sobre el colorante el mismo
numero de gotas de agua destilada y mezclar rápidamente, soplando suavemente hasta que se forme
una capa plateada .
2 Dejar reposar la mezcla por 8 - 10 minutos, observando la intensidad de color.
3Lave con agua corriente y dejar secar al medio ambiente, si es posible con la lamina en forma
vertical.
4Observe al microscopio. Utilice el objetivo de 100X para la observación de las células y núcleos.
5Diferencie las diferentes formas de núcleo en los neutrófilos, basófilos , eosinófilos, monocitos y
linfocitos.
6Dibuje cada forma de núcleo.
1Colocar el frotis de sangre sobre la cubeta de tinción y añadir unas gotas de alcohol absoluto y dejar
que el alcohol se evapore para fijar la preparación.
2Cubrir con unas gotas de hematoxilina y dejar actuar durante 15 minutos. Evitar la desecación del
colorante agregando más líquido.
3Lavar la preparación y añadir unas gotas de eosina dejándola actuar 1 minuto.
4Volver a lavar hasta que no queden restos de colorante.
5Dejar secar aireando el porta o bien al calor muy lento de la llama del mechero.
6Observar al microscopio. Utilice el objetivo de 100X para la observación de las células y núcleos.
Diferencie las diferentes formas de núcleo en los neutrofilos, basofilos, eosinofilos, monocitos y linfocitos.
Dibuje cada forma de núcleo.
CUESTIONARIO
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PRACTICA Nº 6
OBSERVACIÓN DE LA PERMEABILIDAD CELULAR
I. FUNDAMENTO
La membrana celular es una bicapa lipídica fluida y semi permeable, ya que permite el paso de
algunos solutos hacia el interior de la célula. Según el medio en el que se encuentre la célula, la
membrana dejará pasar algunos solutos, modificando así la turgencia de la célula.
Se dice que un medio es hipertónico, cuando la concentración del soluto en la solución es mayor
en relación con otro medio de solución. Por ejemplo, si tenemos dos soluciones, la solución 1 con agua
destilada y la solución 2 con una solución de azúcar al 10%, se dice que la solución 2 de azúcar es
hipertónica en relación a la solución 1. Por el contrario, la solución 1 es hipotónica en relación a la
solución 2 azucarada, es decir que la concentración del soluto es menor en relación con el otro medio. Un
medio es isotónico, cuando la concentración de soluto es igual en ambos medios.
El volumen celular cambia cuando el agua penetra o sale de la célula por un proceso
denominado osmosis.
II. OBJETIVO.
III. MATERIALES
Encontrarás en el laboratorio.
- Microscopio óptico - Agua destilada
- Tubos de ensayo - Algodón
- Gradillas - Marcador de vidrio
- Solución hipotónica NaCl 0.065 M - Ligadura
- Solución hipertónica NaCl al 2% - Alcohol corriente
- Solución isotónica de NaCl al 0.9% (suero fisiológico)
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Deberás traer de casa
IV. PROCEDIMIENTO
Parte A
2Obtener 2ml de sangre venosa con la lanceta hematológica en un tubo limpio con heparina
3Dejar caer 5 gotas de sangre en cada uno de los tubos con un gotero.
4Agite los tubos y dejar en reposo durante 2 ó 3 minutos.
5Con un gotero coloque en una lámina portaobjeto una gota de cada uno de los tres tubos.
6Luego examine en el microscopio su aspecto. Observar qué efecto ha tenido las distintas soluciones
sobre la morfología del eritrocito y explicar por qué.
Parte B
1. Colocar los tres huevos en un vaso de precipitación de 1 litro y verter el vinagre hasta cubrir
completamente los huevos. Debe realizarse este proceso 24 horas antes de la práctica.
2. Al momento de la práctica lavar con mucho cuidado con agua de caño.
3. Frotar cuidadosamente con los dedos para sacar la cáscara por el lado de cámara de aire. Realizar
este proceso hasta tener casi un tercio del huevo libre de cáscara.
4. Coloquen agua de caño en uno de los vasos de precipitación de 100ml y ubiquen allí uno de los
huevos. El agua debe cubrir al huevo.
5. En otro vaso de precipitación colocar un huevo en la mezcla muy concentrada de sal en agua y colocar
allí otro de los huevos.
6. Llenar el tercer vaso con agua destilada y poner allí el tercer huevo.
7. Dejar por una hora y observar.
NOTA: En todos los vasos de precipitación, los huevos deben quedar sumergidos en el líquido.
Huevo
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CUESTIONARIO
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PRACTICA Nº 7
OBSERVACIÓN DEL MOVIMIENTO CELULAR. CICLOSIS
I. FUNDAMENTO
El hialoplasma es un medio dinámico, ya que puede pasar del estado de sol a gel acumulando
moléculas que establecen enlaces entre si y aumentando la viscosidad; pueden invertirse el proceso
pasando el hialoplasma a sol al diluirse hasta que se separan las moléculas, esto permite la creación de
corrientes internas o ciclosis y algunas células pueden emitir prolongaciones del citoplasma o
SEUDOPODOS como órganos de desplazamiento.
II. OBJETIVOS
III. MATERIALES
Encontraras en el laboratorio
- microscopio compuesto
- lugol
- Hoja de Elodea
IV. PROCEDIMIENTO
I. FUNDAMENTO
El movimiento ciliar esta adaptado al medio liquido y es cumplido por pequeños apéndices
especialmente diferenciados. Se trata de filamentos contráctiles variables en numero y tamaño, que
reciben el nombre de flagelos, si son escasos y largos y cilios, si son cortos y numerosos.
Estas prolongaciones motoras se presentan con relativa frecuencia en toda la escala zoológica y en
algunas células vegetales. En los protozoarios, particularmente en los infurios; hay centenares o miles de
pequeños cilios cuyo movimiento permite al organismo desplazarse con rapidez en el medio líquido. En
regiones especiales de estos infusorios ciertos cilios se fusionan y forman apéndices cónicos más
gruesos denominados CIARIOS, o las membranas conocidas como ondulantes.
En Protozoarios, toda la clase flagelados se caracteriza por la presencia de flagelos. Entre los
metazoarios, solo los espermatozoides tienen la propiedad de desplazarse como células aisladas por
medio de esos apéndices. En cambio es relativamente fácil encontrar células epiteliales provistas de
cilios vibrátiles y capaces de constituir verdaderas laminas ciliadas del cuerpo y determinar el movimiento
del animal como es el caso de algunos platelmintos y nemertinos, larvas de equinodermos, moluscos y
anélidos.
II. OBJETIVOS
III. MATERIALES
Encontraras en el laboratorio
- microscopio compuesto
- Estereoscopio
- Ringer anfibio
- Set de coloración neutra: Wrigth
- Mechero de alcohol
- Cajas Petri
IV. PROCEDIMIENTO
1. Obtenga un sapo espinal, seccionando el neuro eje entre la medula espinal y el bulbo
raquídeo
2. Coloque el animal en posición de cubito dorsal en una tabla de disección
3. Pasando un hilo grueso a través de la mandíbula inferior, fijándolo a la tabla de disección
de modo que la boca del sapo quede abierta
4. Humedecer frecuentemente el epitelio bucal con solución Ringer anfibio
5. Sobre una zona determinada del epitelio bucal del paladar del sapo, colocar una pizca de
carbón animal
6. Luego con la ayuda del estereoscopio, determine la dirección y sentido del movimiento
ciliar. Esquematizar
1. Con una pipeta Pasteur, obtener una muestra de cultivo de protozoarios y realizar en fresco
2. Observar a menor y mayor aumento un Paramecium
3. Identificar los cilios en constante movimiento. Esquematizar
I. FUNDAMENTO
Todas las funciones intracelulares (síntesis de proteínas, replicación de DNA y rutas metabólicas
en general) son realizadas gracias una compleja organización de las organelas. Una célula eucariota
típica contiene organelas membranosas (retículo endoplasmático, aparato de golgi, peroxisomas,
mitocondrias, etc.) y organelas no membranosas (ribosomas, proteosomas, etc.). Todas ellas efectúan
una función puntual en la célula que le permite su supervivencia y replicación.
II. OBJETIVOS
III. MATERIALES
Encontrarás en el laboratorio:
- Microscopio óptico
- Verde de Janus
- Agua destilada
- Lugol
- Hojas de Elodea (planta acuática que se conseguir en las tiendas donde venden pescaditos)
- Hisopo
- Materiales de disección: tijera, pinza,)
- Estilete
- Láminas portaobjetos y cubreobjetos
-Tomate
- Gotero
IV. PROCEDIMIENTO
La pulpa del tomate nos muestra las células generalmente bastante sueltas unas de otras. En el
citoplasma se percibe una serie de gránulos rojizos-anaranjados que son los cromoplastos. El núcleo
puede llegar a observarse por su típico aspecto y tamaño. Es frecuente la presencia de gránulos de
almidón de forma arriñonada. En las células menos alteradas por la compresión se ven grandes
vacuolas incoloras.
1Cortar con el bisturí un pequeño trozo de uno o dos milímetros de grosor, de la parte pulposa del
tomate.
2Llevarlo sobre un porta, sin poner agua.
3Poner el cubre-objeto y comprimir suavemente la preparación.
4Observar al microscopio
CUESTIONARIO
1¿Qué función cumplen las inclusiones citoplasmática en las células vegetales y animales,
respectivamente?
PRACTICA Nº 10
OBSERVACIÓN DE ORGANELAS.
MITOCONDRIAS Y CLOROPLASTOS
I. FUNDAMENTO
II. OBJETIVOS
III. MATERIALES
Encontrarás en el laboratorio:
- Microscopio óptico
- Verde de Janus
- Agua destilada
- Lugol
- Hojas de Elodea (planta acuática que se conseguir en las tiendas donde venden pescaditos)
- Hisopo
- Materiales de disección: tijera, pinza
- Estilete
- Láminas portaobjetos y cubreobjetos
- Gotero
IV. PROCEDIMIENTO
1 En un portaobjetos coloque una porción pequeña de hoja de Elodea y agregue una gota de agua.
2 Cubrir la muestra con una lámina portaobjetos.
3 Aprecie la forma de los cloroplastos y el movimiento de estos.
CUESTIONARIO
1. ¿Qué función cumplen los cloroplastos y mitocondrias en las células vegetales y animales,
respectivamente?
PRACTICA Nº 11
I. FUNDAMENTO
La extracción de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los iones
salinos son atraídos hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolución y
posterior extracción de la célula. Se empieza por lisar (romper) las células mediante un
detergente, vaciándose su contenido molecular en una disolución tampón en la que se
disuelve el ADN. En ese momento, el tampón contiene ADN y todo un surtido de restos
moleculares: ARN, carbohidratos, proteínas y otras sustancias en menor proporción.
1Liberación del ADN en forma soluble por medio de la destrucción de los sistemas
membranosos de los tejidos (membrana celular y nuclear).
2Separación de los complejos de nucleoproteína por denaturación de la parte proteica.
3Separación del ADN de las otras macromoléculas por solubilidad diferencial.
4Precipitación del ADN por insolubilidad en alcohol y bajas temperaturas.
II. OBJETIVOS
1El objetivo fundamental de esta práctica es utilizar unas sencillas técnicas para poder
extraer el ADN de un tejido animal y por el aspecto que presenta, confirmar su estructura
fibrilar.
2A partir de la longitud enorme de las fibras también se confirma que en el núcleo el ADN se
encuentra replegado.
III. MATERIALES
Encontrarás en el laboratorio:
- 2 Tubos de prueba de 20 ml - Vaso de precipitación de 500ml.
- 5 Baguetas - Medio de homogenización:
- Etanol helado -Lauril Sulfato de Sodio (SDS o -Hielo SLS) 50 g
- 5 Pipetas de 10ml - Cloruro de Sodio 8. 770 g
- Baño María - Citrato de Sodio 4.110 g
- Mortero con pilón - EDTA 0.292 g
0
Debes traer de casa
- Choro (10 por mesa) o hígado de pollo (100 g)
- Guantes
- Materiales de disección: tijera, pinza, estilete.
IV. PROCEDIMIENTO
Para la extracción DE ADN del manto de choro, con etanol, seguiremos los siguientes pasos.
Tejidos más resistentes, como por ejemplo hueso o diente, necesitan tratamientos
mecánicos especiales. Aquellos tejidos con células cuya pared celular es resistente, como
por ejemplo vegetales, hongos o bacterias, requieren también condiciones drásticas. Uno de
los métodos más utilizados consiste en congelar la muestra en nitrógeno líquido y,
manteniéndola congelada, pulverizarla con un mortero. Así, además de desintegrar la
muestra, se logra que ésta se mantenga a muy baja temperatura durante el tratamiento,
con lo cual se evita la acción de enzimas endógenas que pudieran degradar el material de
interés.
Los geles de agarosa son el medio más popular para separaciones electroforéticas de
ácidos nucleicos de mediano y gran tamaño. Las concentraciones más típicas de agarosa
van de 0.3 hasta 2.5 %, y esta concentración depende de los tamaños de los ácidos
nucleicos a separar. Aunque los geles de agarosa carecen de fuerza mecánica
(especialmente los más diluidos), la manipulación se facilita por el uso de geles horizontales,
los cuales pueden ser soportados por lámina de vidrio o de plástico
II. OBJETIVOS
En el gel aparecen 3 carriles o calles, cada uno con una muestra distinta (M, 1 y 2). Los
pocillos son jequecillos hechos en el gel para introducir ahí la muestra.
CUESTIONARIO
1Esquematice los pasos seguidos en la práctica para extraer ADN de las células animales.
2¿Qué es la agarosa y qué importancia tiene en Biología Molecular?
3¿Qué es la poliacrilamida y cuál es su importancia en la biología Molecular?
4¿Qué paso hubiera sido necesario si se hubiera querido extraer proteínas y lípidos de la muestra
homogenizada?
5Interprete el siguiente gel de agarosa, siendo lo más explícito posible.
PRACTICA Nº 12
DIVISIÓN CELULAR : MITOSIS
I. FUNDAMENTO
II. OBJETIVOS
Reconocer las distintas fases del ciclo celular en células somáticas de raíz de cebolla.
III. MATERIALES
Encontrarás en el laboratorio
- Placa Petri
- Orceína acética
- Pinza de madera
- Microscopio
- Mechero de alcohol
- Acido Acético
- Etanol
0
Traer el alumnado
IV. PROCEDIMIENTO
Preparación de la Muestra
1 Disponer de gran número de raíces de cebolla, haciendo cortes de la parte terminal
(aproximadamente de 0.5cm.) y depositar en una placa Petri.
2 Colorear con orceína por 10 minutos: contiene orceína A que interrumpe el proceso si se está dando
en ese momento y reblandece la unión de las células muertas, así como orceína B que tiñe la cromatina
o material hereditario.
3 Luego calentar la muestra sólo hasta que emane vapores por 2 veces consecutivas con intervalos de
enfriamiento.
4 Trasladar las raíces a diferentes portaobjetos, separar solo el ápice (parte terminal de la raíz) y agregar
una gotita de orceína y cubrir con el cubreobjeto.
5 Apretar la muestra suavemente con la yema de los dedos.
6 Secar el exceso de colorante con papel secante y llevar al microscopio para su observación a menor y
mayor aumento.
1¿Por qué hemos tomado muestras de la punta de las raicillas y no, por ejemplo, de una hoja de la
cebolla, que habría resultado más sencillo?
2¿Qué diferencias y semejanzas existen entre la mitosis de una célula animal y una célula vegetal?
3¿Qué otros tipos de división celular conoces (tanto en eucariotas como en procariotas) que no sean el
de la mitosis?
4¿Qué ocurriría si la mitosis no tuviese un control (no estuviese regulada) y las células estuvieran
continuamente dividiéndose?
5Describa la fecundación en humanos
PRACTICA Nº 13
DIVISIÓN CELULAR : MEIOSIS
I. INTRODUCCIÓN
La meiosis es un proceso celular, ligado a la reproducción sexual, por el cual, la célula madre de
naturaleza diploide, da origen a los gametos de naturaleza haploide, de tal manera que en la
fecundación se reestablece el número diploide de cromosomas. Así, mientras la mitosis es un proceso de
división celular con formación de dos núcleos hijos con el mismo número de cromosomas que la célula
original, en la meiosis en cambio hay dos divisiones celulares con reducción del número de cromosomas
a la mitad.
La meiosis es un proceso citológico que comprende dos divisiones celulares. En la primera división
meiótica ocurre una serie de intercambios de material genético entre los cromosomas homólogos. Este
fenómeno es un proceso complejo que comprende una larga profase en la que, para su mejor estudio y
comprensión, se distinguen los estadios: Leptoteno, Cigoteno, Paquiteno, Diploteno y Diacinesis. Entre la
telofase I y el comienzo de la segunda división meiótica, a diferencia con la mitosis, no hay un período de
síntesis y duplicación del ADN, por lo demás la división meiótica II, tiene lugar como la mitosis normal en
cada una de las células haploides (meiocitos de segundo orden), resultantes de la división meiótica I.
II. OBJETIVOS: Al finalizar la presente práctica los alumnos estarán capacitados para:
2.1 Reconocer y diferenciar los estados fisiológicos por los que atraviesan los cromosomas
durante el proceso meiótico en células animales.
IV: PROCEDIMIENTO
- Anasteciar los animales en las placas petri, colocando dentro de un pedazo de algodón
embebido en cloroformo.
- Disecar el animal con la ayuda del estereomicroscopio o lupas, colocándolo en posición dorsal.
Separar los testículos adicionándoles la solución salina procurando no exponer los órganos al
aire para evitar posibles desecaciones.
- Seccionar los testículos en partes pequeñas de 2 a 3 mm y colocarlos en un vial con fijador
carnoy por espacio de 30 min.
- Traspasar los fragmentos a una luna de reloj que contiene carmín acético y lleve al calor del
mechero hasta que entre en ebullición por espacio de 15 segundos de 5 a 7 veces.
- Retire el fragmento del testículo con una pinza de punta fina y colóquela sobre un portaobjetos y
agréguela una gota de carmín acético.
- Tape la preparación con una laminilla cubre objetos y sobre esta ponga un papel absorbente.
Presione el cubre objetos con la yema del dedo pulgar y luego con la extremidad plana de un
lápiz presionar un poco mas fuerte hasta convertir el material del porta objetos en una capa
delgada (squash). Al realizar esta operación, tenga cuidado para no romper el cubre objetos.
- Limpie el exceso de colorante del porta objetos con papel higiénico y lleve el preparado al
microscopio para su observación a menor y mayor aumento.
- Observar y esquematizar.
PRACTICA Nº 14
CÓDIGO GENÉTICO Y TRADUCCIÓN DE PROTEÍNAS
I. FUNDAMENTO
II. OBJETIVOS
- Reconocer los codones y anticodones posibles para los aminoácidos que forman
las proteínas.
- Analizar posibles mutaciones en los codones que alteren la secuencia de una
proteína y con ello su función.
III. MATERIALES
IV. MÉTODOS
4.3. Los siguientes problemas deberán ser solucionados en clase con ayuda del profesor:
Primer problema: Transcripción y traducción
Se tiene la siguiente secuencia de ADN (cadena codante) que es parte del gen de transferrina.
5´ ATGGCATCCTACGATCAGTATCCTATACGC 3´ ……… (EL GEN CONTINÚA)
Determine:
1la secuencia no codante del respectivo trozo del gen
2la secuencia del ARNm respectivo, transcrito a partir del trozo de dicho gen
3Utilizando la tabla del código genético, deduzca la secuencia de aminoácidos que
codificará dicha cadena (considerando que se incubó el ADN en un extracto crudo de células
de reticulocitos de conejo que contenía los respectivo ARNt, enzimas, ATP, GTP, etc.)
Determine:
1la secuencia del ARNm respectivo, transcrito a partir del trozo de dicho gen
2la secuencia de aminoácidos que, tras esas mutaciones, se codifica
3qué mutaciones han sido conservativas y cuales no.
……. 5´ CCGTCAGAACTCGAAGCTCCGGACTTAGCT 3´ ……
Determine:
1la secuencia de aminoácidos codificada en la mitocondria, a partir de dicha cadena
nucleotídica
2¿cuál serían los aminoácidos cambiados si dicho gen se codificara en el
citoplasma?________
____________________________________________________________________________________
APÉNDICE 1: Preparación de colorantes
Agua destilada...............................................................................100 ml
Agua destilada...............................................................................100 ml
Solución B
Ácido tánico................................................................................3 g
Agua destilada.........................................................................100 ml
Solución C
Cloruro sódico..........................................................................1,5 g
Agua destilada.................................................................................100 ml
Agua destilada...................................................................................100 ml
Agua destilada.................................................................................100 ml
9. Fucsina fenicada de Ziehl-Neelsen: Para tinción ácido-alcohol resistente.
Fucsina básica......................................................................................1 g
Etanol 95%........................................................................................10 ml
Fenol 5% en solución acuosa............................................................100 ml
Fenol................................................................................................100 g
Glicerol.............................................................................................200 ml
Agua.................................................................................................100 ml
Glicerol.....................................................................................10 ml
Ácido acético.....................................................................................45,8 ml
Agua..................................................................................................45,8 ml
Ácido acético.....................................................................................55 ml
Agua..................................................................................................55 ml
16. Safranina: Colorante de contraste para tinción Gram (preferible a la fucsina) y esporas.
Safranina.........................................................................................0,25 g
Agua destilada..................................................................................100 m