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Extraccion de ADN e identificacion

Extraccion de ADN e identificacion

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Extracción del ADN el hígado y estudio de suspropiedades
 
Mayo 6, 2009.Andrés Garro Marín
*
, Randall Hernández Hernández
*
 
*Escuela de Química, Universidad Nacional Autónoma, Heredia, Costa Rica.
La extracción del ADN se puede realizar poruna variedad de métodos, depende mucho delas propiedades fisicoquímicas de dichocompuesto. Para aislar los componentes delmaterial nucleico se utilizan variosprocedimientos, cromatografía de columna,electroforesis en gel de acrilamida, ultracentrifugación en gradiente de densidad.Aplicando experimentalmente el método decentrifugación, se llevo a cabo la extracción ydeterminación cualitativa del materialgenetico, mediante la prueba de difenilamina,la prueba de biuret y un barridoespectrofotometrico en la region entre 240 y350 nm.
El Ácido desoxirribonucleico (ADN),material genético de todos losorganismos celulares y casi todos losvirus. El ADN lleva la informaciónnecesaria para dirigir la síntesis deproteínas y la replicación. Se llamasíntesis de proteínas a la producción delas proteínas que necesita la célula o elvirus para realizar sus actividades ydesarrollarse. La replicación es elconjunto de reacciones por medio de lascuales el ADN se copia a sí mismo cadavez que una célula o un virus sereproduce y transmite a la descendenciala información que contiene. En casitodos los organismos celulares el ADNesorganizado en forma decromosomas, situados en el núcleo de lacélula [1].La molécula de ADN (figura 1) tiene laestructura de una escalera formada por azúcares, fosfatos y cuatro basesnucleotídicas llamadas adenina (A),timina (T), citosina (C) y guanina (G).El código genético queda determinadopor el orden de estas bases, y cada gentiene una secuencia única de pares debases. Los científicos utilizan estassecuencias para localizar la posición delos genes en los cromosomas y elaborar el mapa del genoma humano [3].
Figura 1. Estructura del ADN y suscomponentes además de susinteracciones por medio de puentesde hidrogeno.
(Fuente:http://www.wikipedia.com)Cada molécula de ADN está constituidapor dos cadenas o bandas formadas por un elevado número de compuestosquímicos llamados nucleótidos. Estascadenas forman una especie de escaleraretorcida que se llama doble hélice.Cada nucleótido está formado por tresunidades: una molécula de azúcar llamada desoxirribosa, un grupo fosfatoy uno de cuatro posibles compuestosnitrogenados llamados bases: adenina(abreviada como A), guanina (G),timina (T) y citosina (C). La moléculade desoxirribosa ocupa el centro delnucleótido y está flanqueada por ungrupo fosfato a un lado y una base al
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IOQUÍMICAIOQUÍMICA
 
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otro. El grupo fosfato está a su vezunido a la desoxirribosa del nucleótidoadyacente de la cadena. Estassubunidades enlazadas desoxirribosa-fosfato forman los lados de la escalera;las bases están enfrentadas por parejas,mirando hacia el interior, y forman lostravesaños [4].Los nucleótidos de cada una de las doscadenas que forman el ADN establecenuna asociación específica con loscorrespondientes de la otra cadena.Debido a la afinidad química entre lasbases, los nucleótidos que contienenadenina se acoplan siempre con los quecontienen timina, y los que contienencitosina con los que contienen guanina.Las bases complementarias se unenentre sí por enlaces químicos débilesllamados enlaces de hidrógeno [3].En 1953, el bioquímico estadounidenseJames Watson y el biofísico británicoFrancis Crick publicaron la primeradescripción de la estructura del ADN.Su modelo adquirió tal importancia paracomprender la síntesis proteica, lareplicación del ADN y las mutaciones,que los científicos obtuvieron en 1962el Premio Nobel de Medicina por sutrabajo [5].El ADN incorpora las instrucciones deproducción de proteínas. Una proteínaes un compuesto formado por moléculaspequeñas llamadas aminoácidos, quedeterminan su estructura y función. Lasecuencia de aminoácidos está a su vezdeterminada por la secuencia de basesde los nucleótidos del ADN. Cadasecuencia de tres bases, llamada triplete,constituye una palabra del códigogenético o codón, que especifica unaminoácido determinado. Así, el tripleteGAC (guanina, adenina, citosina) es elcodón correspondiente al aminoácidoleucina, mientras que el CAG (citosina,adenina, guanina) corresponde alaminoácido valina. Por tanto, unaproteína formada por 100 aminoácidosqueda codificada por un segmento de300 nucleótidos de ADN. De las doscadenas de polinucleótidos que formanuna molécula de ADN, sólo una,llamada paralela, contiene lainformación necesaria para laproducción de una secuencia deaminoácidos determinada. La otra,llamada antiparalela, ayuda a lareplicación [2].La ntesis proteica comienza con laseparación de la molécula de ADN ensus dos hebras. En un proceso llamadotranscripción, una parte de la hebraparalela actúa como plantilla paraformar una nueva cadena que se llamaARN mensajero o ARNm. El ARNmsale del núcleo celular y se acopla a losribosomas, unas estructuras celularesespecializadas que actúan como centrode síntesis de proteínas. Losaminoácidos son transportados hasta losribosomas por otro tipo de ARNllamado de transferencia (ARNt). Seinicia un fenómeno llamado traducciónque consiste en el enlace de losaminoácidos en una secuenciadeterminada por el ARNm para formar una molécula de proteína [1].Un gen es una secuencia de nucleótidosde ADN que especifica el orden deaminoácidos de una proteína por mediode una molécula intermediaria deARNm. La sustitución de un nucleótidode ADN por otro que contiene una basedistinta hace que todas las lulas ovirus descendientes contengan esamisma secuencia de bases alterada.Como resultado de la sustitución,también puede cambiar la secuencia deaminoácidos de la proteína resultante.Esta alteración de una molécula deADN se llama mutación. Casi todas lasmutaciones son resultado de erroresdurante el proceso de replicación. Laexposición de una célula o un virus a lasradiaciones o a determinadoscompuestos químicos aumenta laprobabilidad de sufrir mutaciones [3].En casi todos los organismos celulares,la replicación de las moléculas de ADNtiene lugar en el núcleo, justo antes de
 
la división celular. Empieza con laseparación de las dos cadenas depolinucleótidos, cada una de las cualesactúa a continuación como plantilla parael montaje de una nueva cadenacomplementaria. A medida que lacadena original se abre, cada uno de losnucleótidos de las dos cadenasresultantes atrae a otro nucleótidocomplementario previamente formadopor la célula. Los nucleótidos se unenentre sí mediante enlaces de hidrógenopara formar los travesaños de una nuevamolécula de ADN. A medida que losnucleótidos complementarios vanencajando en su lugar, una enzimallamada ADN polimerasa los uneenlazando el grupo fosfato de uno conla molécula de azúcar del siguiente, paraasí construir la hebra lateral de la nuevamolécula de ADN. Este procesocontinúa hasta que se ha formado unanueva cadena de polinucleótidos a lolargo de la antigua; se reconstruye asíun nueva molécula con estructura dedoble hélice [2].Existen numerosas técnicas yprocedimientos que emplean loscientíficos para estudiar el ADN. Unade estas herramientas utiliza un grupode enzimas especializadas, denominadasenzimas de restricción, que fueronencontradas en bacterias y que se usancomo tijeras moleculares para cortar losenlaces fosfato de la molécula de ADNen secuencias específicas. Las cadenasde ADN que han sido cortadas con estasenzimas presentan extremos de cadenasencilla, que pueden unirse a otrosfragmentos de ADN que presentanextremos del mismo tipo. Loscientíficos utilizan este tipo de enzimaspara llevar a cabo la tecnología delADN recombinante o ingenieríagenética. Esto implica la eliminación degenes específicos de un organismo y susustitución por genes de otro organismo[3].Otra herramienta muy útil para trabajar con ADN es un procedimiento llamadoreacción en cadena de la polimerasa(RCP), también conocida como PCR por su traducción directa del inglés(polymerase chain reaction). Estatécnica utiliza una enzima denominadaADN polimerasa que copia cadenas deADN en un proceso que simula la formaen la que el ADN se replica de modonatural en la célula. Este proceso, queha revolucionado todos los campos de labiología, permite a los científicosobtener gran número de copias a partir de un segmento determinado de ADN[1].La tecnología denominada huella deADN (DNA fingerprinting) permitecomparar muestras de ADN de diversosorígenes, de manera análoga a lacomparación de huellas dactilares. Enesta técnica los investigadores utilizantambién las enzimas de restricción pararomper una molécula de ADN enpequeños fragmentos que separan en ungel al que someten a una corrienteeléctrica (electroforesis); de estamanera, los fragmentos se ordenan enfunción de su tamaño, ya que los máspequeños migran más rápidamente quelos de mayor tamaño. Se puede obtener así un patrón de bandas o huellacaracterística de cada organismo. Seutiliza una sonda (fragmento de ADNmarcado) que hibride (se unaespecíficamente) con algunos de losfragmentos obtenidos y, tras unaexposición a una película de rayos X, seobtiene una huella de ADN, es decir, unpatrón de bandas negras característicopara cada tipo de ADN [4].Un procedimiento denominadosecuenciación de ADN permitedeterminar el orden preciso de basesnucleótidas (secuencia) de un fragmentode ADN. La mayoría de los tipos desecuenciación de ADN se basan en unatécnica denominada extensión deoligonucleótido (primer extension)desarrollada por el biólogo moleculabritánico Frederick Sanger. En estatécnica se lleva a cabo una replicación

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