Universidad Nacional Autó noma de México.

Facultad de Química
Aplicaciones de la bioquímica y la biología molecular.

Arciniega Ruiz Juan Manuel, Calzadíaz Ramírez Liliana, Galindo Campos Luis,
Ramírez Ibá ñ ez Nancy Delia, Bohó rquez Enrique

INTRODUCCIÓN

Las Betaína Aldehído Deshidrogenasas (BADH EC 1.2.1.8) son enzimas que

pertenecen a la superfamilia de las aldehído deshidrogenasas (ALDH´s). Catalizan la
oxidación irreversible de los aldehídos a sus correspondientes ácidos carboxílicos, con
la reducción del NAD+ o NADP+. Concretamente las BADH catalizan la oxidación
reversible de la betaína aldehído a glicina betaína.

Las BADH son enzimas de origen muy antiguo altamente conservadas, se encuentran
desde arqueobacterias hasta en mamíferos, sin embargo una de las más importantes
para la clínica es la BADH del patógeno humano oportunista Pseudomonas
aeuroginosa (PaBADH).

La PaBADH es una enzima tetramérica que cataliza un paso intermedio del

catabolismo de la colina y de precursores de colina como acetilcolina, fosfatidilcolina, al
mismo tiempo que provee a la bacteria del osmoprotector glicina Betaína importante
para resistir el estrés osmótico existente en los tejidos infectados y de equivalentes de
reducción como NADH y NADPH.

La acción catalizada por la BADH es irreversible por lo que su actividad no es inhibida

por la glicina betaina, sin embargo el otro producto de la reacción 1, el NADPH si es un
inhibidor competitivo con respecto a NADP + y mixto con respecto a NAD +, Las
constantes de inhibición se encuentran en el intervalo de 50-180µM indicando una alta
afinidad por la enzima. La inhibición competitiva puede ser revertida por un incremento
de la concentración de sustrato, mientras que el componente incompetitivo de la
inhibición mixta hace que el grado de inhibición no solo no disminuya sino que se
incremente a medida que se acumula el sustrato.

OBJETIVO:

Inactivar la enzima PaBADH mediante una inhibición por producción de NADPH.

Empleando un vector de clonación en el bacteriófago PM2 que sobreexprese el gen de
la enzima Glucosa deshidrogenasa (EC 1.1.5. 2)

La enzima Glucosa deshidrogenasa cataliza la reacción:

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Reacción 1

JUSTIFICACIÓN:

El NADPH es un producto de la reacción 1, si logramos un exceso de NADPH en la

célula no solo se inhibirá la enzima, sino que también se producirá un exceso de estrés
oxidativo que matara a la bacteria. La glucosa deshidrogenasa de Pseudomonas
aeruginosa es una proteína de 803 amino ácidos codificada en el locus PA2290.

El empleo de un virus como vectores de clonación posee diversas ventajas en primer

lugar el bacteriófago PM2 infecta específicamente a Pseudomonas aeruginosa sin
afectar las células del paciente, por otro lado el virus en sí mismo es un agente
terapéutico ya que causa la lisis de la bacteria y por consiguiente su muerte.

PROCEDIMIENTO:

*Extraer y purificar el DNA de Pseudomona aeruginosa.

*Separar el gen de la glucosa deshidrogenasa. Mediante enzimas de restricción

específicas.

*Purificar el DNA del bacteriófago PM2 y cortarlo con la misma enzima de restricción
que el gen de interés.

*Unir ambos fragmentos mediante una DNA ligasa.

*Los vectores recombinantes del virus se empaquetan in vitro en las cápsides proteicas
del fago.
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*Los bacteriófagos recombinantes pueden administrarse tópicamente o por vía oral

previo tratamiento del paciente con antiácidos y gelatina para proteger al virus de la
acidez gástrica.

Conclusiones:

Actualmente algunos investigadores han demostrado que la terapia fágica es eficiente

en el tratamiento de enfermedades causadas por bacterias como E. coli, S.
pneumoniae y P. aeruginosa, incluso se han reportado éxito en un 90% de los casos.

Aunado al hecho de que el bacteriófago por sí mismo promueve la muerte de la

bacteria al sobreexpresar la enzima glucosa deshidrogenasa que como producto
genera NADPH se llevara a cabo una inhibición por producto de la Betaína aldehído
deshidrogenasa una enzima esencial para el desarrollo y supervivencia de la bacteria.

Referencias:

http://www.revistaaquatic.com/aquatic/pdf/18_2.pdf

http://www.personales.ulpgc.es/ecastro.dbbf/Descargas/Transparencias/DNA
%20recombinante.pdf.

*Brown Et. Al. Genomas, 3° Edición, Editorial Medica Panamericana, Madrid España
2007, pp 50-55.
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