TINDAK PROTEIN BICOID SEBAGAI AKTIVATOR TRANSKRIPSI TERHADAP

BONGKOK GEN PADA EMBRIO DROSOPHILA

Aktivator transkripsi, termasuk aktivitas gen spesifik pada sel yang berbeda, adalah
regulator yang sangat penting pada embriogenesis. Sebagai contoh, mari kita periksa. protein
bicoid di Drosophila. Embrio berasal dari ibu yang kekurangan gen bicoid * fungsional tidak
memiliki kepala atau thorax, terdiri dari abdomen diperpanjang pada akhir depannya meniru
struktur terminal posterior dikenal sebagai telson (lihat Gambar 1.20.). Dalam betina tipe liar,
sel perawat ovarium mensintesis mRNA bicoid dan transfer ke kutub anterior oosit. Diikuti
pembuahan, mRNA bicoid berfungsi sebagai sumber lokal dari protein bicoid, yang berdifusi
belakang, membentuk gradien konsentrasi dengan maksimal dekat kutub anterior dari embrio
(Gbr. 16.8)

Protein bicoid berisi homeodomain, memberikan sebuah indikasi awal bahwa protein
ini dapat bertindak sebagai faktor transkripsi. Sebuah gene target yang masuk protein bicoid
adalah bongkok * gen, yang merupakan salah satu gen transkripsi dalam embrio Drosopht7a
pertama. Embrio homozigot untuk fungsi alel yang hilangdari bagian-bagian kepala bungkuk
kurangnya posterior dan seluruh dada: Kesamaan antara fenotipe bicoid dan bungkuk
menunjukkan bahwa banyak dari fenotip bicoid mungkin disebabkan oleh kegagalan untuk
mengaktifkan gen bungkuk embrio ' . Hipotesis ini dikonfirmasi dengan memantau bungkuk
sintesis RNA atau protein pada embrio yang berasal dari tipe liar melawan ibu mutan bicoid
(et al Schroder, 1988;. Tautz, 1988).

Dalam keturunan dari tipe liar ibu, bungkuk itu * gen diekspresikan dalam setengah
bagian depan embrio pada tahap pra blastoderm (Gbr. 16.9a). Setelah pembentukan
blastoderm selular, sebuah bungkuk tambahan * domain penuh ekspresi muncul sebagai band
posterior subterminal (Gambar 16.9b). Dalam keturunan dari ngengat biwid kehilangan
fungsi utama, yang bungkuk anterior besar * domain ekspresi adalah - hilang sedangkan
domain posterior muncul dua kali-4n lokasi posterior normal dan sebagai duplikat anterior
yang sesuai dengan duplikasi telson tersebut ( ara '`16.9c): Genetik dan molekuler analisis
menunjikkan bahwa yang Trans-''.

Gambar 16.8 Daerah kontrol ekspresi gen embrio oleh aktivator transkripsi maternal
dikodekan dalam Drosophila melanogaster. Kutub telur anterior ke kiri.
(A) Ibu bicoid mRNA, diwarnai gelap di sini dengan hibridisasi insitu (lihat Metode 8.1),
menjadi dekat lokal. Sebuah kutub anterior sedangkan oosit berkembang dalam ovarium. (B)
 Protein Bicoid, dibuat terlihat oleh immunostaining (lihat Metode 4.1), disintesis
setelah telur deposisi. Protein meluruh seperti berdifusi dari mRNA-nya, sehingga
membentuk suatu gradien konsentrasi. Perhatikan akumulasi protein bicoid dalam inti dari
blastoderm (lingkaran kecil di dekat permukaan anterior embrio). Di atas nilai ambang yang
biasanya melampaui di tengah telur anterior, protein bicoid mengaktifkan gen bungkuk
embrio, seperti yang ditunjukkan pada Gambar 16.9. skrip di posterior normal dan domain
anterior mulai dari dua promotor yang berbeda, yang ditunjuk Pt dan Pz masing-masing
(Gambar 16,10). Transkrip dari Promoter dibuat dalam domain ekspresi posterior pada tahap
blastoderm selular (lihat Gambar 16.9b ) dan juga maternal selama oogenesis. Sebaliknya,
transkrip dari promotor Pz dibuat dalam anterior ekspresi domain pada tahap blastoderm
selular. Secara keseluruhan, hasil ini menunjukkan bahwa aktivitas P2 promotor bergantung
pada protein bicoid, mungkin bertindak sebagai penggerak transkripsi, sementara promotor P,
dapat diaktifkan tanpa protein bicoid.

Untuk menguji apakah protein bicoid mengikat langsung ke daerah lebih tinggi terkait
dengan 1'z promotor bongkok, Driever dan Niisslein-Volhard (1989) menggunakan teknik
yang dikenal sebagai footpriuting DNase. Untuk prosedurini para peneliti kloning segmen
bungkuk-'gen mengandung promotor P. dan daerah hulu, yang sebagian besar berisi apapun
yang terkait dengan Pz. DIv'A ini diizinkan untuk mengikat protein bicoid in vitro dan
kemudian terkena deoxyribonuclease I (DNase I), suatu enzim yang mencerna DNA
telanjang tetapi tidak DNA yang berkaitan dengan prctein. Setiap segmen dilindungi dari
serangan DNase sehingga harus terikat dengan protein bicoid. Unsur-unsur DNA yang paling
kuat dilindungi,, disebut A,, A:, dan A,, yang terletak tepat di hulu dari promotor P_ (Gbr.
16,10) -.
 
Gambar 16,9 Ekspresi gen bungkuk pada Orosophila EMB, yos ditunjukkan oleh
immunostaining. Kutub posterior(ke kanan) ditandai oleh sel kutub. (A, b) Jenis tipe embrio.
Sebelum pembentukan blastoderm (a), protein bungkuk ditemukan hanya dalam setengah
bagian depan. Di fase blastoderm selular (b), sebuah domain ekspresi tambahan muncul
sebagai band subterminal di dekat kutub posterior. Id Embrio berasal dari seorang ibu mutan
bicoid.

TO menguji fungsi elemen:,, melalui A, in vivo, Driever dan rekan kerja (1989a)
disambung segmen DNA yang mengandung unsur dan promotor Pz di depan wilayah
ditranskripsikan dari gen reporter IacZ. Gen fusi ini diperkenalkan ke dalam garis kuman
embrio host oleh transformasi P-elemen (lihat Bagian I5.6). Pola ekspresi transgen yang erat
menirukan domain ekspresi anterior gen bungkuk penduduk sebagaiF firasat anterior ekspresi
domain yang hilang, sedangkan posterior domain diduplikasi anterior.

Gambar 16.10 Peta gen bungkuk 'yang menunjukkan situs pengikatan bagi protein bicoid.
Bungkuk gen ditranskripsi dari dua promoter P, dan P,. MRNA yang berasal dari PZ adalah
2,9 kb panjang dan diekspresikan dalam setengah bagian depan embrio. MRNA yang berasal
dari P, adalah 3,2 kb panjang dan dinyatakan di dekat kutub posterior embrio. (MRNA ini
juga ditranskripsi maternal dan disimpan dalam oosit selama oogenesis.) Daerah
diterjemahkan (merah tua) dari dua mRNA adalah identik. A, B, dan C adalah penambah
daerah dilindungi dari DNase saya di hadapan protein bicoid. Sebagian besar sangat pro ¬
dilindungi adalah erements A,, A =, dan A, yang terletak di sebelah promotor = P.
diharapkan (bandingkan Gambar. 16.9b dan 16.11a). Setelah penghapusan berturut-turut
elemen A, untuk Ay ekspresi gen fusi menjadi semakin lemah, dan batas dari domain
ekspresi menjadi kurang tajam (Gbr. 16.11bd). Juga, batas dari domain ekspresi tampak M ¬
menyerahkan kembali ke arah kutub anterior.

Dalam penelitian lebih lanjut, domain DNA yang mengandung A, untuk Aj

mengungkapkan karakteristik suatu enhancer: Orientasi ini bisa dibatalkan tanpa kehilangan
aktivitas, dan ruld dipindahkan lebih dari 1 kb dari promotor dan masih-etain aktivitas yang
cukup 2itestions

L dimana Anda akan mengharapkan gen fusi bungkuk-IacZ untuk diungkapkan jika
diperkenalkan ke dalam embrio yang berasal dari perempuan kurang gen bicoid fungsional? .
Mengingat bahwa penghapusan. A, elemen penambah mengakibatkan ekspresi gen fusi
dalam domain anterior lebih kecil, bagaimana bisa gradien protein bicoid di kontrol
Drosophila beberapa ekspresi gen target alami dengan domain ekspresi terhuyung-huyung?
Hasil yang baru saja dijelaskan menunjukkan bahwa tindakan maternal protein ncoded birnjd
sebagai penggerak transcriptional n Promotor P2 gen bungkuk embrio '. Bove konsentrasi
ambang tertentu dari radient bicoid, sel blastoderm mengekspresikan bungkuk 'di ve1 tinggi.
Seperti yang akan kita bahas dalam Bagian 22.3 dan 22.4, protein bicoid meningkatkan atau
menghambat ekspresi khusus kawasan ¬ pada beberapa gen embrionik lainnya

.
 KEGIATAN TRANSKRIPSI FAKTOR ORANG MUNGKIN REGUJITED

Mengingat pentingnya kontrol transkripsi, tidak mengherankan bahwa beberapa

regulasi mekanisme telah berevolusi yang mengontrol transkripsi mengikat untuk sinyal
lingkungan atau endogen. Untuk ujian ¬ Misalnya, segala jenis tampaknya memiliki satu set
gen, Qerres panas yang disebut shock, yang ditulis sebagai respons terhadap panas dan jenis
lain stres lingkungan. Pada vertebrata, kehadiran zat beracun dalam darah memicu transkripsi
gen yang menyandi protein detoksifikasi seperti thiorreirrs rnetallo ¬, yang menghilangkan
kadmium dan logam berat lainnya dari serum darah. Para peneliti sering menggunakan
peraturan daerah gen tersebut dalam transgen dirancang untuk diungkapkan kondisi sekutu ¬,
seperti yang dijelaskan dalam Bagian 15.6.

Banyak faktor transkripsi disintesis dalam bentuk prekursor tidak aktif, sehingga
mereka mengaktifkan sendiri menjadi tingkat regulasi. Sebagai orang disebutkan
sebelumnya, beberapa faktor yang terdiri dari dua atau lebih polypepHdes yang membentuk
protein yang aktif hanya setelah multimerization. Untuk faktor transkripsi lain, langkah diatur
adalah transportasi dari sitoplasma, di mana mereka disintesis, untuk inti, di mana mereka
berfungsi. Misalnya, protein punggung, yang memiliki fungsi yang sama untuk sumbu
dorsoventral embrio Drosophila sebagai bicoid memiliki untuk sumbu anteroposterior,
dicegah dari memasuki inti oleh setiap proteinnya terkait proregulasi, kaktus (lihat Bagian
22.6). Masih faktor transkripsi lain diaktifkan oleh fosforilasi dan / atau de fosforilasi amino
tertentu dari TI. Hunter dan M. Karin, 1992). Aktivitas protein kinase dan protein fosfatase
katalisator langkah-langkah ini mungkin tergantung pada gilirannya pada fosforilasi negara
mereka sendiri, sehingga mereka membentuk air terjun peraturan yang pada akhirnya
mengatur aktivitas dari faktor transkripsi (lihat Gambar. 2.28). Akhirnya, banyak faktor
transkripsi diaktifkan oleh pengikatan ligan yaitu, sebuah molekul yang cocok kecil seperti
hormon: reseptor Sehubungan dengan ligan, faktor transkripsi tersebut juga disebut.
Hormon adalah molekul sinyal yang dibawa oleh aliran darah ke seluruh sel dalam tubuh.
Namun setiap hormon memunculkan:. respon hanya dalam beberapa sel, disebut sel target,
dan hanya dari beberapa gen, yang disebut gen target. Karena dalam sikap, produksi protein
putih telur di saluran telur ayam dikontrol oleh hormon seks estrogen dan progesteron. Di
hadapan EHI dari salah satu hormon, sel-sel saluran telur tertentu mensintesis ovalbumin dan
protein putih telur lainnya dalam jumlah besar. Setelah 10 jam rangsangan hormon, tingkat
ovalbumin dalam sel-sel ini meningkat drastis dari jumlah jejak lebih dari SO% dari seluruh
protein yang baru disintesis. Lonjakan dalam hasil sintesis ovalbumin dari curam di lipatan
dalam produksi ovalbumin mRNA, indikasi transkripsi dari gen ovalbumin (Gbr. 16,12).
Kekhususan mengejutkan dari tindakan hormon ini disebabkan oleh mekanisme molekuler
oleh hormon steroid yang bertindak atas gen target mereka:

 
Gambar 16.11 Analisis sekuens enhancer bungkuk 'oleh gen fusi terdiri dari bungkuk P
promotor = dan sejumlah variabel elemen penguat (A, A,) disambung ke gen IacZreporter.
Setiap gen fusi digunakan untuk membuat jalur trans ¬ genic Drosophila dengan transformasi
P-elemen. Diagram: bagaimana urutan enhancer bungkuk hadir dalam re ¬ gen fusi
perspektif. The photomicrographs menunjukkan embrio patri untuk IacZexpression. (A) Bila
penambah elemen 'Aku ke A, semua yang hadir, gen fusi dinyatakan dalam pola yang serupa
dengan yang ada pada bungkuk warga gen dalam domain anterior (bandingkan dengan
Gambar. 16.9b). (B-dl Sebagai elemen enhancer secara progresif dihapus, IacZexpression
menjadi semakin lemah dan batas posterior dari domain ekspresi menjadi kurang jelas.
Hormon Steroid adalah molekul lipid-larut kecil. Mereka bisa menyeberang membran plasma
dengan difusi sederhana dan merasuki semua sel dari suatu organisme. sel target dibedakan
dari sel-sel non-target oleh adanya pencocokan crlrlor n •. Reseptor untuk beberapa hormon
steroid, termasuk progesteron dan testosteron, biasanya terletak di sitoplasma sel. Masing-
masing aseptor terdiri dari dua polipeptida terkait reseptor dan protein (Gbr. 16.13). Setelah
mengikat hormon, reseptor ini mengalami proses aktivasi yang melibatkan pelepasan protein
penghambatan. hormon kompleks receptor kemudian bergerak ke inti dan mengikat
 
Gambar 16,12 CNalbumin sintesis dalam sel-sel saluran telur dari ENS ¬ ayam disuntik
dengan progesteron. Aplikasi hormon menyebabkan peningkatan tajam dalam konsentrasi
ovalbumin (garis hitam) mRNA dan laju sintesis ovalbumin (garis berwarna).
 
Gambar 16,13 model Umum aktivasi gen oleh sekelompok hormon steroid termasuk
progesteron dan testosteron. Hormon mencapai semua sel pada suatu organisme melalui
aliran darah dan difusi. Namun, hanya beberapa sel (disebut sel target hormon) mempunyai
protein reseptor yang cocok dengan hormon dapat mengikat. Reseptor biasanya terletak di
sitoplasma, di mana hal ini terkait dengan protein lainnya. Hormon menggantikan mengikat
protein penghambatan sebelumnya yang terkait dengan reseptor. Kompleks hormon-reseptor
daripada memasuki inti dan mengikat gen tertentu (disebut gen target dari Depdiknas) yang
memiliki enhancer dengan elemen tanggapan kembali pencocokan steroid (SRE). Kompleks
hormon-reseptor mengikat kepada SRE sebagai dimer. Acara ini biasanya mengaktifkan,
tetapi dalam beberapa kasus menghambat, transkripsi dari gen target.
untuk sekuens enhancer tertentu yang diketahui sebagai respon elrurents steroid. elemen
tersebut adalah fitur karakteristik dari gen target yang merespon hormon steroid. Reseptor
untuk hormon steroid lain, termasuk estrogen dan hormon serangga ecdysone molting,
bertindak sama kecuali bahwa mereka sudah berada dalam inti kedepan akan mereka terikat
oleh ligan masing-masing. Memang, ini mengikat reseptor untuk unsur respons mereka dan
menghambat transkripsi gen target mereka sebelum kembali septor terikat oleh ligan mereka
dan kemudian bertindak sebagai aktivator transkripsi. Untuk reseptor hormon steroid khas,
mungkin ada sekitar 50 gen target.

Reseptor untuk hormon steroid, vitamin D, dan membentuk asam retinoat keluarga
protein yang sama, semua yang bertindak sebagai faktor transkripsi. Kesamaan dalam
keluarga reseptor steroid menunjukkan bahwa gen mereka telah berevolusi oleh duplikasi dan
selanjutnya sequence divergensi16,5 kromatin

Struktur dan Transkripsi

Sejauh ini dalam diskusi kita kontrol transkripsi, kita telah mengasumsikan bahwa
DNA genom mudah diakses untuk interaksi dengan RNA polimerase dan faktor transkripsi.
Namun, DNA genom eukariota adalah terkandung di kromatin, di mana DNA dikaitkan
dengan sejarah dan protein berbagai nonhistone. Asosiasi tersebut, yang berubah selama
siklus sel dan tergantung pada tahap perkembangan sel, sangat dapat mempengaruhi
aksesibilitas gen untuk transkripsi. Sebagai aturan, DNA dalam kromatin kental kurang aktif
ditranskripsi dari DNA dalam kromatin decondensed.

Daerah kromosom Heterokromatik Tidak Ditranskrip.

Selama siklus sel, kromosom paling alternatif menjadi negara yang sangat kental dan
keadaan lebih menyebar. Negara kental selama fase M memungkinkan kromosom untuk
memisahkan sehingga mitosis dapat terjadi. Tidak ada sintesis RNA diamati selama fase ini.
sekering negara selama interfase memungkinkan DNA kromosom akan ditranskripsi.
Kromosom, atau bagiannya, yang menunjukkan perubahan siklus disebut euchromatin (Gk.
eu, "baik", juga "benar"; kroma, "warna", merujuk pada kestabilan kromatin pekat). Namun,
daerah kromosom tetap sangat dipadatkan bahkan selama interfase. The kromatin di wilayah
ini disebut heterochromatin (Gk. heteros, "lainnya"). Auto radiografi sel diinkubasi dengan
['H) uridin menunjukkan bahwa RNA sedikit atau tidak ada disintesis dalam heterochromatin
(Gbr. 16.14).

Beberapa daerah heterochmmatic, disebut heterochromatin konstitutif, yang hadir di semua

individu dan sel-sel dari suatu spesies. Kromosom lain daerah, yang dikenal sebagai fakultatif
dubur lebih lanjut), adalah pembentukan badan Barr pada mamalia dengan jumlah abnormal
kromosom X telah menunjukkan bahwa sel-sel yang paling tidak aktif semua chroyosomes X
kecuali satu. Ini adalah sarana crisation dosis> yaitu, penyesuaian ekspresi gen terkait-X
sehingga jumlah produk gen yang sama dibuat pada kedua jenis kelamin (lihat Bagian 26.3).
The inaktivasi kromosom X supernumerary terjadi selama belahan, dan tampaknya skr ¬ oc
secara acak pada sel-sel dari massa sel bagian dalam, yang memberikan
menimbulkan embrio yang tepat. Sejak saat itu, yang aktif atau dalam keadaan aktif ¬
masing-masing kromosom X ditularkan secara klonal heterochromafin, yang heterochromatic
hanya dalam satu jenis kelamin atau pada tahap tertentu dari perkembangan. Sebuah contoh
yang menonjol dari heterochromatin fakultatif dapat ditemukan dalam sel-sel mamalia betina
normal, yang masing-masing satu dari dua kromosom X heterochmmatic. Ini
hetenochromatic kromosom X, disebut tubuh Barr, setelah ditemukannya, tidak ada dari laki-
laki normal (Gambar 16,15).

Gambar 16.14 Korelasi antara transkripsi dan status kromatin. Ini elektron transmisi grafik ¬
mikro menunjukkan inti betis timus setelah inkubasi dengan t'H) uridin. Garis Wiggly gelap
butir perak (auto signais radiografi, lihat Metode 3.1) yang menunjukkan tekanan baru
disintesis RNA. Perhatikan bahwa sinyal-sinyal muncul kebanyakan atas (cahaya) bidang
decondensed dari kromatin, meskipun konsentrasi DNA jauh lebih tinggi di daerah kental.

Gambar 16,15 Barr dalam inti tubuh manusia sel epitel oral diwarnai dengan violet
cresylecht. (A) Normal XY jantan, dengan tidak ada badan Barr. (Bl Normal XX perempuan,
dengan satu tubuh Bart Ie1 Wanita dengan tiga kromosom X dan dua Barr badan. Dalam
setiap kasus, satu kromosom X per inti yang tersisa aktif.