Cromatografia de

Afinidade
Aline Cardoso
Bárbara Alamis
Gabriel Branzani
Isabela Rovero
Marcos Maldonado
Rafael Medeiros
3º A – Farmácia
FMU - Liberdade
 O que é?

Cromatografia de afinidade é uma técnica

que utiliza propriedades físico-químicas
para separação dos componentes de uma
mistura protéica.
 Como funciona?

A Cromatografia de Afinidade se baseia

numa especificidade biológica da proteína
que se pretende analisar, tal como a
afinidade de uma enzima a um substrato
ou a ligação entre antígeno e anticorpo.
 Como funciona?

Consiste na separação de proteínas de

uma mistura e é dividida em duas fases:
uma estacionária, aonde a proteína a se
analisar se liga a polímeros com ligantes
específicos contidos na parede do tubo; e
outra, aonde há a eluição das proteínas
indesejadas restando somente aquela a
ser estudada.
Fase Estacionária

Na fase estacionária, a proteína de interesse

se liga ao composto contido no tubo. Por
exemplo: numa mistura de proteínas A, B, C
e D, desejamos estudar a proteína A, que se
liga facilmente com glicose. Portanto, a
parede do tubo aonde essa mistura será
despejada conterá glicose, que logo atrairá a
proteína A para si, conseqüentemente
separando-a das demais, que serão filtradas
do tubo.
 Eluição

Após restar no tubo apenas os ligante com

as proteínas de interesse, é despejado no
tubo uma solução contendo os mesmos
ligantes contidos na parede do tubo ou
reagente desnaturantes (uréia, guanidina,
etc) desprendendo a proteína da parede do
tubo. No exemplo, é adicionado uma solução
de resíduos de glicose que fazem com que a
proteína A se desprenda da parede do tubo,
sendo despejada, em meio a solução, em
outro tubo para estudo.
Resumo
 Aplicações
Purificar e concentrar uma substância de
uma mistura em uma solução tampão;
Reduzir a quantidade de
uma substância em uma mistura;
Entender as ligações entre compostos
biológicos e determinadas substâncias,
como as drogas;
Purificar e concentrar uma solução
enzimática.
 Referências Bibliográficas
http://www.bio.davidson.edu/courses/gen
omics/method/Affinity.html
http://www.quimica.ufscar.br/ignez/Aula0
8-extracao-3D-
http://teachline.ls.huji.ac.il/72682/Bookle
ts/PHARMACIA-AffinityManual.pdf08-10-
07.pdf