ДОКЛАДЫ АКАДЕМИИ НАУК, 2010, том 431, № 4, с.
566–569
ОБЩАЯ
БИОЛОГИЯ
УДК 557.475:574.5:574.6
ВОДНЫЙ МАКРОФИТ CERATOPHYLLUM DEMERSUM
ИММОБИЛИЗУЕТ Au ПОСЛЕ ДОБАВЛЕНИЯ В ВОДУ НАНОЧАСТИЦ
© 2010 г. С. А. Остроумов, Г. М. Колесов
Представлено академиком М.А. Федонкиным 31.07.2009 г.
Поступило 02.11.2009 г.
Изучение биогенной миграции элементов – важ
ное направление исследований биосферы [1–8].
Биогенная миграция элементов в водных экосисте
мах, как пресноводных, так и морских, имеет значе
ние для самоочищения воды и формирования ее ка
чества [9–11].
Для анализа фактов, свидетельствующих о
важной роли организмов в биогенной миграции
элементов в водных экосистемах необходимы
сведения об аккумуляции, связывании и накоп
лении элементов водными организмами, в том
числе макрофитами.
В предыдущих работах были установлены кон
центрации некоторых элементов в различных био
генных образцах. Среди этих образцов – гидро
бионты и биогенный детритный материал [9, 11].
Однако эти данные касались ограниченного кру
га видов организмов и химических элементов.
В литературе, насколько известно авторам данно
го сообщения, отсутствовали сведения о содержа
нии золота (Au) в Ceratophyllum demersum L. От
сутствовала также информация о взаимодействи
ях наночастиц Au с водными макрофитами.
Целью данной работы было исследовать воз
можность иммобилизации наночастиц Au, добав
ленных в водную среду микрокосмов в присут
ствии гидробионтов – макрофитов C. demersum L.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Эксперименты проводили в пресноводных
микрокосмах. Микрокосмы были созданы при
наличии массово встречающегося вида пресно
водных организмов – водных растений C. demer
sum L. В микрокосмы вносили водные макрофи
ты и отстоенную водопроводную воду (ОВВ).
Растения C. demersum собраны в пруду в пойме
р. Москвы, в ее верхнем течении.
Московский государственный университет
им. М.В. Ломоносова
Институт геохимии и аналитической химии
им. В.И. Вернадского
Российской Академии наук, Москва
566
После формирования микрокосмов (табл. 1)
их инкубировали в условиях естественной фото
периодичности. Температура воды 17°С. В мик
рокосмы были добавлены препараты коллоидных
наноразмерных частиц (НРЧ) золота.
П о л у ч е н и е Н Р Ч. Частицы получали пу
тем окислительновосстановительной конденса
ции в водной фазе [12] с использованием золото
хлористоводородной кислоты (“Fluka”, ФРГ).
Раствор 1%ной HAuCl4 добавляли к деионизо
ванной воде высокой степени очистки, смесь до
водили до кипения, при перемешивании добав
ляли цитрат натрия, продолжали кипячение и
охлаждали до комнатной температуры. В качестве
стабилизирующих добавок использовали IgG и
бычий сывороточный альбумин (БСА, фракция
V, “Sigma”, США) [12, 13]. Получение конъюга
тов IgGНРЧ осуществляли путем смешивания
препарата НРЧ, полученного, как описано выше,
с раствором IgG с последующим добавлением БСА
и отделением частиц центрифугированием [13].
НРЧ с иммобилизованными молекулами IgG ре
суспендировали в 0.01 М Кфосфатном буфере
рН 7.0.
Размер частиц составлял 20 ± 5 нм. Препарат
НРЧ содержал 3 · 10–4 М Au. Использовали два ва
рианта методики инкубации макрофитов в среде
с НРЧ. Первый вариант (микрокосмы № 1 и 2) –
добавление обычных (без обработки IgG) наноча
стиц, без белкового покрытия. Второй вариант
(микрокосмы № 3 и 4) – добавление наночастиц
с белковым покрытием – в микрокосмах № 3 и
№ 4 такие же по размеру НРЧ золота, но ранее об
Таблица 1. Состав микрокосмов с макрофитами C. de
mersum. В каждом микрокосме по 500 мл ОВВ
Компонент
1 2 3 4 5 6
системы
C. demersum L. 7.1 5.8 5.0 5.6 5.7 5.1
(сыр. масса), г
Добавки, НРЧ Au Au AuIgG AuIgG – –
Примечание. Прочерк – контроль без Au.
 ВОДНЫЙ МАКРОФИТ 567

Таблица 2. Элементный состав в воде микрокосмов ность этого метода для анализа содержания эле
ментов в образцах биологического происхожде
Элемент Количество, мг/л ния.
Al 0.06 Пробоподготовку и определение элементов
B 0.01 вели следующим образом.
Образцы для анализа предварительно высушива
Ba 0.03
ли при 105°С, отбирали пробы массой по 15–25 мг и
Ca 49.4 вместе с образцами сравнения (KH, ST1, SGD1,
Cd <0.001 FFA, RUS1, Allende, BCR и др.) и эталонами упа
Co <0.001 ковывали в пакеты из алюминиевой фольги.
Cr <0.01 Затем образцы помещали в алюминиевый пе
нал и облучали 15–20 ч в тепловом канале ядерно
Cu <0.001 го реактора МИФИ. После облучения образцы
Fe 0.007 охлаждали, переупаковывали в чистые ампулы
K 2.3 для уменьшения фона и измеряли активность 2–
Li <0.01 3 раза (через 5–7 и 15–30 дней после облучения)
на полупроводниковых (высокоразрешающих)
Mg 12.6 германиевых детекторах (“ORTEC”) и 4096ка
Mn 0.016 нальном анализаторе импульсов NUC8192
Mo <0.01 (“EMG”, Венгрия). Идентификацию спектров и
Na 10.7 расчет содержания элементов проводили в авто
матическом режиме с использованием компью
Ni <0.002 терных программ. Подробнее метод описан в [11].
Pb <0.005 Состав ОВВ, использованной при формирова
Si 5.1 нии микрокосмов, был проанализирован мето
Sr 0.14 дом атомноэмиссионной спектрометрии с ин
дуктивно связанной плазмой (АЭС–ИСП) на
Ti <0.001
ICPспектрометре ICAP9000 (“Thermo Jarrel
Zn <0.001 Ash”). Состав воды указан в табл. 2.
Р е з у л ь т а т ы экспериментальной работы.
Результаты определения элементов с помощью
работанные иммуноглобулином кролика (IgG, НАА показаны в табл. 3. Необходимо отметить,
150 кДа) Объем добавок – 2 мл. Режим добавок: что содержание некоторых элементов в образцах
сделано по 3 добавки в каждый микрокосм с ин фитомассы C. demersum значительно варьирова
тервалом 24 ч. Через 24 ч после третьей добавки лось. Содержание ряда исследованных элементов
инкубация была закончена. Суммарная добавка в фитомассе C. demersum (усредненные данные) в
Au в микрокосмах № 1, 2, 3, 4 была эквивалентна контроле убывало в последовательности: Zn > Sr >
3.6 · 10–6 М. Микрокосмы № 5 и 6 служили кон > Zr > Au > Sc. После инкубации с наночастицами
тролем – наночастиц золота в них не добавляли. Au первое место заняло содержание Au и элемен
После окончания инкубации макрофиты были ты располагались в следующем порядке: Au > Zn >
изъяты из всех шести микрокосмов, высушены, > Sr >Zr > Sc.
растерты. Проведен нейтронноактивационный Из табл. 3 видно, что в макрофитах C. demer
анализ (НАА). Этот метод ранее мы использовали sum в микрокосмах № 1–4 существенно увеличи
для определения концентрации элементов в гид лось содержание только Au. Содержание других
робионтах [11], причем подтвердилась эффектив элементов – Sr, Sc, Zn, Zr – в C. demersum в мик

Таблица 3. Содержание Au и других элементов в фитомассе C. demersum в экспериментальных микрокосмах

№ 1–6 (мкг/г сух. массы, по результатам нейтронноактивационного анализа)
Номер микрокосма и наличие добавок наночастиц Au
Элемент
1 (+Au) 2 (+Au) 3 (+AuIgG) 4 (+AuIgG) 5 (–Au) 6 (–Au)
Sr 43 36 79 32 30 25
Sc 0.02 0.03 0.04 0.049 0.023 0.034
Zn 780 620 880 1480 810 1710
Zr 30 27 25 26 20 32
Au 1040.6 1331.0 904.2 1544.0 5.54 0.057

ДОКЛАДЫ АКАДЕМИИ НАУК том 431 №4 2010

568 ОСТРОУМОВ, КОЛЕСОВ
Таблица 4. Детектирование и содержание Au в компонентах экосистем и образцах биогенной природы
Виды образца
Биогенный детрит после длительного содержания
в условиях микрокосмов гидробионтов Viviparus
viviparus, Unio pictorum, Ceratophyllum demersum
Фитомасса C. demersum
Фитомасса C. demersum после инкубации с НРЧ
Раковины Unio pictorum
Раковины Viviparus viviparus
Океанские осадки
Железомарганцевые конкреции в Мировом океане
рокосмах № 1–4 не претерпело существенного
увеличения и существенно не отличалось от со
держания этих элементов в микрокосмах № 5 и 6,
что согласуется с тем, что эти элементы – в отли
чие от Au – не входили в состав добавок, вноси
мых в микрокосмы. Тем самым содержание каж
дого из этих четырех элементов служит дополни
тельным контролем.
Из таблицы видно, что среднее содержание Au
в фитомассе микрокосмов № 3 и 4 существенно
не отличалось от среднего содержания Au в фито
массе в микрокосмов № 1 и 2. Это означает, что
обработка наночастиц белком (иммуноглобули
ном) не оказывает существенного воздействия на
иммобилизацию частиц золота в присутствии
макрофитов использованного вида.
Используя значения накопления элемента Au
в фитомассе в микрокосмах 1–4, можно рассчи
тать среднее арифметическое значение этой вели
чины в фитомассе в условиях инкубации расте
ний с наночастицами Au. Эта величина составля
ет 1204.95 ± 287.69 мкг/г сухой массы (указано
стандартное отклонение). Среднее содержание
Au в фитомассе C. demersum в контрольных мик
рокосмах № 5 и 6 составило 2.80 мкг/г сухой мас
сы. Таким образом, после инкубации с наноча
стицами Au содержание этого элемента в фито
массе C. demersum превысило средний уровень в
контрольных микрокосмах в 430.3 раза.
На этом этапе работы нас интересовало общее
количество Au, ассоциированное с фитомассой и
связанное на поверхности растений, и потенци
ально возможное проникновение его внутрь тка
ней растений. В дальнейшем мы планируем уточ
нить, имеет ли место такое проникновение. По
лученные к настоящему моменту данные пока не
позволяют ответить на этот вопрос. Результаты
данной работы продолжают наши исследования
по вопросу возможности использования макро
фитов как фактора удаления металлов из водной
среды, с которой эти растения контактируют [14].
Так как других возможных путей поступления Au
в фитомассу, кроме поступления из водной среды
Содержание Au Литературные cсылки
0.025 до 0.27 (среднее – 0.15) мг/кг Результаты данной ра
детрита (на сух. массу) боты авторов
Среднее 2.80 мкг/г сух. массы То же
Увеличение от фонового в 430.3 раза То же
Среднее 0.06 мкг/г по [11]
Среднее 0.006 мкг/г по [11]
1 ⋅ 10–8 гмоль/кг Среднее, по оценкам, [7]
1 ⋅ 10–8 гмоль/кг Среднее, по оценкам, [7]
инкубации растений, не было, то прирост содер
жания этого элемента в фитомассе свидетельству
ет об изъятии Au из воды.
На основе полученных данных можно сделать
оценку приблизительного потенциала фитомас
сы C. demersum в аккумуляции иммобилизован
ных в ней элементов на больших по размеру
участках дна экосистем таких, где скапливается,
например, 50 г (в расчете на сухую массу на 1 м2)
или 500 г, или 500 кг фитомассы (на соответствен
но более крупных по размеру участках дна водных
экосистем). Потенциал аккумуляции Au может в
этих случаях достигать существенных значений:
60.2, 602.5 мг и 602.48 г соответственно. Расчеты
имеют ориентировочный характер. Речь идет об
оценке только потенциала фитомассы C. demer
sum в аккумуляции Au и не означает автоматиче
ского переноса экспериментальных данных на
природные экосистемы.
Особенностью проведенного эксперимента
является то, что иммобилизация Au произошла за
определенный отрезок времени на фитомассе
растения определенного вида в условиях, когда
изучаемый элемент был внесен в систему в кон
кретной форме НРЧ. При этом в течение инкуба
ции микрокосмов с макрофитами не было отме
чено проявлений фитотоксичности НРЧ. Однако
это еще не дает оснований для окончательного
вывода об отсутствии фитотоксичности наноча
стиц Au. При повышении концентрации этого
элемента в водной среде или изменении других
условий инкубации растений в среде, содержа
щей наночастицы Au, нельзя исключать возмож
ности проявления токсичности.
В работе впервые определена концентрация
Au и ряда других элементов в фитомассе C. dem
ersum после инкубации растений в микрокосме с
добавками наночастиц Au.
Итак, 1) впервые получены данные, которые
показывают, что наночастицы Au в существенном
количестве связываются с живой фитомассой
водных растений C. demersum. В результате свя
зывания и/или иммобилизации наночастиц Au
ДОКЛАДЫ АКАДЕМИИ НАУК том 431 №4 2010
 ВОДНЫЙ МАКРОФИТ
содержание этого элемента в фитомассе, изме
ренное методом НАА, превышало фоновый уро
вень в 430.3 раза; 2) модификация наночастиц
белком (иммуноглобулином) не оказывала суще
ственного влияния на способность наночастиц к
иммобилизации макрофитами. Результаты вно
сят вклад в понимание потенциальной роли этих
организмов в биогенной миграции элементов.
Полученные данные позволяют полнее оценить
потенциальную роль фитомассы указанного вы
ше вида макрофитов как фактора концентриро
вания элементов (на примере Au) в водной систе
ме.
В.И. Вернадский акцентировал “…значение …
живых масс… как мест сильнейшей миграции
атомов в биосфере” и выделял среди важнейших
функций живого вещества концентрационную
функцию [1]. Полученные и изложенные в этой
работе данные об иммобилизации Au фитомассой
C. demersum подтверждают на конкретном при
мере эти положения В.И. Вернадского. Новые ре
зультаты дополняют имеющуюся информацию о
полифункциональной роли биоты в миграции
элементов и сопряжении геохимических и гидро
биологических процессов [1–11]. Накопление
новых фактов о взаимодействии наночастиц Au с
водными организмами представляет интерес и в
плоскости ведущихся исследований взаимодей
ствия золота и его наночастиц с организмами и
клетками в медицинских целях, а также для раз
работки новых биотехнологий очищения воды и
методов выявления в воде патогенов [15].
Авторы благодарны Ю.А. Моисеевой, Е.А. Со
ломоновой, Г.Ю. Казакову, А.В. Клепиковой за
помощь и обсуждение.
ДОКЛАДЫ АКАДЕМИИ НАУК том 431 №4 2010
569
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Вернадский В. И. Химическое строение биосферы
Земли и ее окружения. М.: Наука, 1965. 374 с.
2. Добровольский Г.В. // Экол. химия. 2007. Т. 16. № 3.
С. 135–143.
3. Добровольский Г.В. // Вода: технология и экология.
2007. № 1. С. 63–68.
4. Перельман А.И., Касимов Н.С. Геохимия ландшаф
та. М.: Астрея, 2000. 763 с.
5. Ивантер Э.В., Медведев Н.В. Экологическая ток
сикология природных популяций. М.: Наука, 2007.
229 с.
6. Ермаков В.В., Тютиков С.Ф. Геохимическая эколо
гия животных. М.: Наука, 2008. 315 с.
7. Корж В.Д. Геохимия элементного состава гидро
сферы. М.: Наука, 1991. 244 с.
8. Донченко В.К., Иванова В.В., Питулько В.М. Эко
логохимические особенности прибрежных аква
торий. Спб.: НИЦЭБ РАН, 2008. 544 с.
9. Ostroumov S.A. // Hydrobiologia. 2005. V. 542. P. 275–
286.
10. Ostroumov S.A. // Hydrobiologia. 2002. V. 469. P. 203–
204.
11. Остроумов С.А., Колесов Г.М., Сапожников Д.Ю.
Проблемы экологии и гидробиологии. 2008. М.:
МАКС Пресс, С. 47–53.
12. Бызова Н.А., Сафенкова И.В., Чирков С.Н. и др. //
Прикладная биохимия и микробиология. 2009.
№ 2. С. 225–231.
13. Дрыгин Ю.Ф., Блинцов А.Н., Осипов А.П. и др. //
Биохимия. 2009. Т. 74. № 9. С. 1212–1220.
14. Остроумов С.А., Шестакова Т.В. // ДАН. 2009.
Т. 428. № 2. С. 282–285.
15. Li X.X., Cao C., Han S.J., Sim S.J. // Water Res. 2009.
V. 43. № 5. P. 1425–1431.