CENTRO DE LOS RECURSOS NATURALES RENOVABLES LA SALADA

TECNOLOGIA EN CONTROL AMBIENTAL- BIOTECNOLOGIA

Documento preparado por: Marta Lucia Hernández

LAS BACTERIAS

Las bacterias son un filo de microbios

unicelulares procariónticos del reino
de las móneras. En algunos medios
científicos se prefiere la
denominación de bacterio en vez de
bacteria.
Los indicios de la existencias de las
bacteria se remontan al Arcaico
primitivo, son piedras con una edad
de 3.500 millones de años, pero no
dejaron tras de sí fósil alguno
identificable.

Las bacterias se caracterizan por no tener núcleo patente, ni clorofila típica,

aunque pueden poseer otros pigmentos similares como bacterioclorina,
bacterioclorofila y bacteriopurpurina, y sin pseudópodos. La bacterioclorina es un
pigmento verde fotosintetizante que, según ciertos autores, acompaña a la
bacteriopurpurina y a la bacterioclorifila en las algas purpúreas. La bacterioclorofila
es otro pigmento fotosintetizante que, junto con la bacteriopururina, poseen las
bacterias purpúreas. La bacteriopurpurina es un pigmento rojo que enmarca a la
bacterioclorifila en las bacterias purpúreas, y que colabora con ella en la síntesis
de los glúcidos, a partir del bióxido de carbono atmosférico. Esta síntesis se
diferencia de la clorofílica en que utiliza el ácido sulfuhídrico como donador de
hidrógeno.
Las bacterias desde el punto de vista biológico, se dividen así:
• Bacterias autótrofas, capaces de sintetizar las substancias orgánicas a
partir de las minerales; las hay que son fotosintetizantes, es decir, que
utilizan la energía de las radiaciones luminosas gracias a ciertos pigmentos
que poseen, bacterioclorofila principalmente; otras son quimiosintetizantes,
y obtienen la energía necesaria a partir de reacciones químicas de
oxidación, como las bacterias nutrificantes del suelo y las sulfobacterias de
las aguas sulfurosas.
• Bacterias heterótrofas, de las cuales unas utilizan los compuestos
orgánicos elaborados por otros seres vivos a los que parasitan; las
bacterias patógenas o parásitas, productoras de enfermedades en el
Compilado por: Marta Lucia Hernandez A Centro de los Recursos Naturales
Renovables La Salada
 hombre y en los animales; otras viven en substancias orgánicas,
descomponiéndolas aprovechando la materia orgánica muerta para la
alimentación, las bacterias de la putrefacción o o saprófitas; provocando
fermentaciones, acética, butírica, láctica, etc., las bacterias zimógenas; y
por último, las bacterias simbióticas, que viven en plan o ayuda mutua con
organismos vegetales o animales, como las bacteriorrizas de las
leguminosas. Éstas son la mayor parte de las bacterias.
Haciendo referencia a su respiración, se dividen así:
• Bacterias aerobias: Utilizan oxígeno para realizar la respiración.

• Bacterias anaerobias: Para respirar sustituyen el oxígeno por otras

sustancias.

De acuerdo a su forma, se clasifican del modo siguiente:

COCOS
Los cocos son células casi esféricas. Pueden existir como células individuales,
pero se asocian también en agrupaciones características que son útiles
frecuentemente para identificar a las bacterias. ( Prescott, Harley & Klein.
Microbiología. 5ta. Edición. Editorial McGraw Hill )

Agrupaciones de los cocos:

• Diplococos: los cocos se
dividen en dos planos y
permanecen unidos en parejas.
• Estreptococos: se dividen en
planos paralelos formando
cadenas
• Tetracocos: se dividen en
dos planos perpendiculares (cuatro
células)
• Sarcina: se dividen en tres
planos perpendiculares dando agrupaciones cuboidales.
• Estafilococos: se dividen en tres planos irregulares formando racimos de
cocos.

Madigan y col. Biología de los microorganismos. 10ª. Edición. Editorial

Prentice Hall.
Agrupaciones de cocos
http://es.wikipedia.org/wiki/Imagen:Morfolog%C3%ADa_bacteriana.jpg

BACILOS
Compilado por: Marta Lucia Hernandez A Centro de los Recursos Naturales
Renovables La Salada
La otra forma más común bacteriana es el bastoncillo, denominado bacilo.
Los bacilos varían considerablemente entre la proporción de longitud y diámetro,
siendo los cocobacilos tan cortos y anchos que parecen cocos. La forma del
extremo del bacilo varía a menudo entre especies; puede ser plana, redondeada,
en forma de puro o bifurcada. Aunque muchos bacilos aparecen aislados, pueden
permanecer juntos después de dividirse, formando parejas (diplobacilo) o
cadenas (estreptobacilo, en empalizada). (Prescott, Harley & Klein.
Microbiología. 5ta. Edición. Editorial McGraw Hill,

Agrupaciones de bacilos
http://es.wikipedia.org/wiki/Imagen:Morfolog%C3%ADa_bacteriana.jpg

OTRAS FORMAS
Aparte de estas dos formas más frecuentes, las bacterias pueden adquirir una
gran variedad de formas.
• Vibrios: bacterias en forma de bastoncillos, curvados, con forma de coma o de
espiral incompleta
• Actinomicetos: largos filamentos multinucleados característicos o hifas, que
pueden ramificarse para constituir una red denominada micelio.
• Espirilos: Forma de bacilos largos retorcidos como espirales o hélices rígidos.
• Espiroquetas: Forma de bacilos largos retorcidos como espirales o hélices
flexibles.
• Con yema: de forma ovalada a pera que produce una yema al final de una larga
hifa.
• Con pedúnculos: Forma bacilar que tiene prolongaciones en forma de rabillo o
chichón.
• Pleomórficas: bacterias que tienen formas variables, aunque generalmente
tienen forma bacilar.

(Prescott, Harley & Klein. Microbiología. 5ta. Edición. Editorial McGraw Hill )

Compilado por: Marta Lucia Hernandez A Centro de los Recursos Naturales

Renovables La Salada
 Distintas formas y apéndices bacterianos
http://es.wikipedia.org/wiki/Imagen:Morfolog%C3%ADa_bacteriana.jpg

CULTIVO DE BACTERIAS

Modificado de:
http://universitas.usal.es/web/fundacion/universitas/es/sistemas/microacua/D
emo1/fotos/aislamiento1.jpg y
http://fotciencia06.fecyt.es/macro/inconfundible.html

Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que en concentraciones

adecuadas y en condiciones físicas óptimas, permiten el crecimiento de los
microorganismos.
Estos medios son esenciales en el Laboratorio de Microbiología por lo que un
control en su fabricación, preparación, conservación y uso, asegura la exactitud,
confiabilidad y reproducibilidad de los resultados obtenidos.
En los laboratorios de microbiología se utilizan diferentes tipos de medios de
cultivo que pueden ser preparados en forma líquida o en forma sólida.
Usualmente para preparar un medio sólido se parte de un medio líquido al que se
le añade un agente solidificante como el agar, la gelatina o la sílicagel.
Compilado por: Marta Lucia Hernandez A Centro de los Recursos Naturales
Renovables La Salada
Los medios de cultivo se pueden clasificar de acuerdo a la naturaleza de sus
constituyentes en:
• Medios naturales o complejos: constituidos por sustancias complejas de
origen animal o vegetal, las que son usualmente complementadas por la adición
de minerales y otras sustancias. En ellos no se conocen todos los componentes ni
las cantidades exactas presentes de cada uno de ellos.
• Medios definidos o sintéticos: son los medios que tienen una
composición química definida cualitativa y cuantitativamente. Generalmente se
usan en trabajos de investigación.
http://www.ucv.ve/Farmacia/Micro_web/Catedras02/medicult.pdf

De acuerdo con el medio de cultivo, éstos se clasifican en:

• Medios de enriquecimiento: son medios líquidos que favorecen el
crecimiento de un tipo de microorganismo en particular. Permiten aumentar
el número de microorganismos de ese tipo. Usualmente contienen una o
más sustancias inhibidoras del crecimiento de los microorganismos con
excepción de los que se quieren cultivar.
• Medios selectivos: son parecidos a los de enriquecimiento, se diferencian
por ser medios sólidos y están diseñados para el aislamiento de
microorganismos específicos.
• Medios diferenciales: son medios que contienen indicadores de productos
derivados de la actividad microbiana de los microorganismos. No contienen
ningún tipo de sustancia con actividad antimicrobiana. Permiten revelar
características fisiológicas de los microorganismos.

Garay Martínez y col. Guía de Microbiología General. Academia de Microbiología

CUCEI. 2007. Medio de cultivo diferencial

Prueba de citrato de Simmons

http://quimicosclinicosxalapa04.spaces.live.com/?
_c11_BlogPart_pagedir=Next&_c11_BlogPart_handle=cns!204AC1C68E772D5!
1536&_c11_BlogPart_BlogPart=blogview&_c=BlogPart&partqs=cat
%3DMICROBIOLOGIA-

BACTERIOLOGIA
(http://www.ucv.ve/Farmacia/Micro_web/Catedras02/medicult.pdf )
Compilado por: Marta Lucia Hernandez A Centro de los Recursos Naturales
Renovables La Salada
Los medios de cultivo se pueden preparar en el laboratorio a partir de cada uno de
sus constituyentes básicos o por simple rehidratación de productos asequibles
comercialmente (medios de cultivo deshidratados). Generalmente se prefiere el
uso de los medios de cultivo deshidratados porque, además de simplificar el
trabajo, con ellos se tiene mayor probabilidad de obtener resultados reproducibles.
Para su preparación se deben tener en cuenta los siguientes aspectos:
• Prepararlos sólo a partir de productos que provengan de fabricantes o
proveedores que suministren productos de calidad.
• Utilizar agua destilada o desmineralizada con una calidad microbiológica y
fisicoquímica adecuada.
• Utilizar materiales de vidrio, bien lavados y enjuagados con agua destilada o
desmineralizada.
• Controlar el tiempo y la temperatura recomendada durante su esterilización.
Nunca se deben exceder las condiciones señaladas por el fabricante.

TAXONOMIA (http://microbiosdetrigoso.blogspot.com/2007/10/explosin-
bacterias-inmunologa-vacunas-y.html )

Rama de la biología que se ocupa de Nombrar, Organizar y Mostrar Relaciones

entre seres vivos
Funciones:
1. Identificar y describir la unidad taxonómica básica o especie
2. Visualizar la forma apropiada de catalogar esas unidades
Tiene tres disciplinas de apoyo:
.1 La Clasificación: Define los criterios, organiza y agrupa a los seres vivos. Es
el arreglo ordenado de las unidades a grupos
.2 La Nomenclatura: Se ocupa de los problemas técnicos de los nombres. Es
rotular o nombrar unidades definidas por clasificación
.3 La Identificación: Es la aplicación práctica de lo anterior

http://www.unap.cl/csmar/BioTecnologia/Clase12.pdf

CARACTERIZACIÓN DE LAS ESPECIES

De un modo ideal, las especies deberían caracterizarse basándose en la
descripción completa de sus fenotipos o incluso de sus genotipos. La práctica
taxonómica no llega a estos ideales ya que en la mayor parte de los grupos de
seres vivos la descripción del fenotipo es fragmentaria y la caracterización del
genotipo es incompleta.

Los caracteres fenotípicos de más fácil determinación son los estructurales y

anatómicos que pueden observarse directamente. La clasificación de las bacterias
constituye una excepción dada su extrema simplicidad estructural, esto hace que
Compilado por: Marta Lucia Hernandez A Centro de los Recursos Naturales
Renovables La Salada
se disponga de un rasgo demasiado reducido de caracteres para poder hacer una
caracterización adecuada.

Por ello, los taxónomos bacterianos se vieron forzados a buscar otros tipos de
propiedades, bioquímicas, fisiológicas, ecológicas, para añadir a las propiedades
estructurales.

La clasificación de las bacterias se basa en atributos funcionales, la mayor parte

de las bacterias sólo pueden identificarse por lo que hacen y no simplemente por
su apariencia. Esto representa un problema adicional para el taxónomo
bacteriano, el estudio de estas propiedades funcionales conlleva a la realización
de experimentos, por lo tanto éste nunca podrá estar seguro de haber llevado a
cabo los experimentos adecuados con fines taxonómicos: podría ocurrir que
omitiera la realización de ciertos experimentos que indicaran la existencia de
agrupamientos significativos dentro de una colección de cepas.

Sin embargo, está tomando auge una nueva alternativa que podría resolver pronto
el problema, son las técnicas moleculares para la caracterización genotípica
bacteriana, que proporcionan una posible base objetiva para la definición de
especie bacteriana.
http://www.revistaciencias.com/publicaciones/EpZyFFlAZyqorLnlLE.php

Parámetros morfológicos:
• forma
• tamaño
• motilidad (móvil, no-móvil); flagelo (posición, número, etc.)
• inclusiones celulares
• color
• morfología de la colonia
• características ultraestructurales
• tinciones

Parámetros fisiológicos y metabólicos:

• composición de la membrana
• composición y estructura de la pared celular (LPS)
• metabolismo energético básico
• caracteres nutricionales y metabólicos
• requisitos nutricionales especiales
• susceptibilidad a bacteriófagos

Características moleculares:
• comparación de proteínas, enzimas, poliaminas
• composición de ácidos nucleicos (%G+C)
• hibridación de ácidos nucleicos
Compilado por: Marta Lucia Hernandez A Centro de los Recursos Naturales
Renovables La Salada
 • secuencia de ácidos nucleícos

http://www.unap.cl/csmar/BioTecnologia/Clase12.pdf

FACTORES AMBIENTALES QUE INFLUYEN

El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve

afectado por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos,
son ajenos por completo al propio medio.
1- Disponibilidad de nutrientes adecuados: Un medio de cultivo adecuado para
la investigación microbiológica ha de contener, como mínimo, carbono, nitrógeno,
azufre, fósforo y sales inorgánicas. En muchos casos serán necesarias ciertas
vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento. Siempre han de estar
presentes las sustancias adecuadas para ejercer de donantes o captadores de
electrones para las reacciones químicas que tengan lugar.

Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones de

carne, extractos de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la preparación de
estas sustancias para su aplicación a los medios de cultivo provocaban la pérdida
de los factores nutritivos lábiles.

Actualmente, la forma más extendida de aportar estas sustancias a los medios es

utilizar peptona que, además, representa una fuente fácilmente asequible de
nitrógeno y carbón ya que la mayoría de los microorganismos, que no suelen
utilizar directamente las proteínas naturales, tienen capacidad de atacar los
aminoácidos y otros compuestos más simples de nitrógeno presentes en la
peptona.

Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas específicas por lo que se añade a

muchos medios sustancias como suero, sangre, líquido ascítico, etc. Igualmente
pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y sales minerales como las de calcio,
magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias promotoras del crecimiento,
generalmente de naturaleza vitamínica.

Muy a menudo se añaden al medio de cultivo ciertos colorantes, bien como

indicadores de ciertas actividades metabólicas o bien por sus capacidades de
ejercer de inhibidores selectivos de ciertos microorganismos.
http://www.qb.fcen.uba.ar/microinmuno/SeminarioMedios.htm

2- Consistencia adecuada del medio: Partiendo de un medio líquido podemos

modificar su consistencia añadiendo productos como albúmina, gelatina o agar,
con lo que obtendríamos medios en estado semisólido o sólido.

Compilado por: Marta Lucia Hernandez A Centro de los Recursos Naturales

Renovables La Salada
Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos
microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al
punto de fusión de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla.
Actualmente los medios sólidos son de uso universal, por su versatilidad y
comodidad, pero hay también gran cantidad de medios líquidos cuyo uso está
ampliamente extendido en el laboratorio.

3- Presencia (o ausencia) de oxígeno y otros gases: Gran cantidad de

bacterias pueden crecer en una atmósfera con tensión de oxígeno normal.
Algunas pueden obtener el oxígeno directamente de variados sustratos. Pero los
microorganismos anaerobios estrictos sólo se desarrollarán adecuadamente en
una atmósfera sin oxígeno ambiental. En un punto intermedio, los
microorganismos microaerófilos crecen mejor en condiciones atmosféricas
parcialmente anaerobias (tensión de oxígeno muy reducida), mientras los
anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de
las citadas condiciones.

4- Condiciones adecuadas de humedad: Un nivel mínimo de humedad, tanto en

el medio como en la atmósfera, es imprescindible para un buen desarrollo de las
células vegetativas microbianas en los cultivos. Hay que prever el mantenimiento
de estas condiciones mínimas en las estufas de cultivo a 35-37ºC proporcionando
una fuente adecuada de agua que mantenga la humedad necesaria para el
crecimiento de los cultivos y evitar así que se deseque el medio.
http://www.qb.fcen.uba.ar/microinmuno/SeminarioMedios.htm

5- Luz ambiental: La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la

oscuridad que en presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sería el
caso de los microorganismos fotosintéticos. Garay Martínez y col. Guía de
Microbiología General. Academia de Microbiología CUCEI. 2007

6- pH: La concentración de iones hidrógeno es muy importante para el crecimiento

de los microorganismos. La mayoría de ellos se desarrollan mejor en medios con
un pH neutro, aunque los hay que requieren medios más o menos ácidos. No se
debe olvidar que la presencia de ácidos o bases en cantidades que no impiden el
crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos
metabólicos normales.

7- Temperatura: Los microorganismos mesófilos crecen de forma óptima a

temperaturas entre 15 y 43ºC. Otros como los psicrófilos crecen a 0ºC y los
temófilos a 80ºC o incluso a temperaturas superiores (hipertemófilos). En líneas
generales, los patógenos humanos crecen en rangos de temperatura mucho más
cortos, alrededor de 37ºC, y los saprofítos tienen rangos más amplios.

8- Esterilidad del medio: Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente
estériles para evitar la aparición de formas de vida que puedan alterar,

Compilado por: Marta Lucia Hernandez A Centro de los Recursos Naturales

Renovables La Salada
enmascarar o incluso impedir el crecimiento microbiano normal del o de los
especimenes inoculados en dichos medios. El sistema clásico para esterilizar los
medios de cultivo es el autoclave (que utiliza vapor de agua a presión como
agente esterilizante)
http://www.qb.fcen.uba.ar/microinmuno/SeminarioMedios.htm

Compilado por: Marta Lucia Hernandez A Centro de los Recursos Naturales

Renovables La Salada