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Técnicas histológicas y coloraciones

Técnicas histológicas y coloraciones

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TÉCNICAS HISTOLÓGICAS Y COLORACIONES
En este capítulo estudiaremos: D1. GeneralidadesD2. Técnicas histológicasD3. Técnicas especialesD4. Las coloraciones empleadas en histología
D1. GENERALIDADES
 Técnicas histológicas es el conjunto de procedimientos utilizados para el estudio microscópico(histológico) de las piezas anatómicas. Estos procedimientos complejos, que van desde larecepción de una pieza anatómica hasta el diagnóstico microscópico de la misma, si bien escierto que no van a ser realizados ni por el estudiante ni por el médico que no se dediquen a lainvestigación histológica e histopatológica, pero es necesario el que ellos conozcan susfundamentos, su ejecución, la interpretación de los resultados para una mejor comprensión delestudio histológico, por lo que aquí se los trata de una manera resumida. Todas las técnicas tienen en común el que requieren de un corte muy delgado del tejido(llamado corte histológico), y el montarlo en una lámina muy fina de vidrio, la cual se la sometea diversas coloraciones antes de observarla al microscopio, ya que luego se la cubre por unalaminilla.
D2. TÉCNICAS HISTOLÓGICAS
Hay dos técnicas principales para proceder a la preparación y tinción de los cortes histológicosde los tejidos: la de la parafina y la de la congelación. La importancia y la utilización de cadauna de ellas, tiene su justificación precisa, como se verá a continuación.
D2.1. L
A
 
TÉCNICA
 
DE
 
LA
 
PARAFINA
:
se inicia siempre por la obtención de la muestra, la que pasaluego, por los siguientes procedimientos: fijación, deshidratación, aclaración, inclusión, seccióny finaliza con el montaje y la tinción.
a.
 
L
A
 
OBTENCIÓN
 
DE
 
LA
 
MUESTRA
:
es el tomar un pequeño fragmento de órgano o tejido, lo cual se verifica yaen el cadáver (necropsia), o ya en el vivo (biopsia), en este caso, ya en un acto operatorio, o ya mediantemétodos especiales, por los cuales y sin que se haga una verdadera intervención quirúrgica, se obtienenfragmentos de tejido para su estudio microscópico.En los dos casos, este paso debe ser realizado mediante movimientos delicados y usando instrumentalbien afilado, para no producir cambios artificiales en las estructuras a observar, ya por presionesindebidas o ya por secciones realizadas con instrumentos en mal estado.
Dr. Gustavo Mora Venner Pág. D-1
 
Pág. D-2 Dr. Gustavo Mora Venner 
En una necropsia se tratará de obtener las muestras lo más rápidamente posible para que los órganos nosufran lesiones postmortem, ésto es, las que necesariamente ocurren una vez que se ha producido lamuerte; como la muestra así obtenida debe ser sometida a los siguientes pasos, para que losprocedimientos de éstos actúen bien, el fragmento debe ser de pocos milímetros de espesor.
b.
 
F
IJACIÓN
:
la muestra obtenida es de un tejido blando y a veces demasiado blando, por ello, este paso dela técnica tiene por finalidad endurecerlo, a la vez que detiene las degeneraciones postmortem. Elfundamento de este paso es el coagular las proteínas del tejido para que se enduren; para conseguir ésto,se acude al aldehído fórmico en solución al 4%. Al endurecer las proteínas por coagulación, éstasaprisionan a algunos de los demás elementos de los tejidos y realmente causan la fijación del mismo. Losfijadores son antisépticos, por lo que matan a cualquier agente patológico que contenga el fragmento.
c.
 
D
ESHIDRATACIÓN
:
como para realizar los cortes de las muestras es necesario incluir a éstas en una sus-tancia que se endure completamente, se emplea para este fin, la parafina, pero ésta necesita tener en lamuestra un espacio para ocupar; los técnicos entonces idearon al conocer que el tejido tenía muchacantidad de agua (aproximadamente el 65%), el eliminar ésta y reemplazarla por la parafina líquida, conlo cual se cumple el paso de la deshidratación. Para ésto, se lava la muestra con alcoholes de grado cadavez superiores hasta llegar al alcohol absoluto, que elimina completamente el agua del tejido.
d.
 
A
CLARACIÓN
:
luego de eliminada el agua, la muestra queda con alcohol en el que tampoco se disuelve laparafina, por lo que los investigadores debieron buscar un solvente común de cera de parafina y dealcohol, y para este efecto se emplea el xilol, a cuya acción se somete a la muestra, con lo que se eliminade ella a todo el alcohol.
e.
 
I
NCLUSIÓN
:
realizada la aclaración, la muestra se incluye en parafina líquida, la que penetra en elfragmento y sustituye al xilol.
f.
 
S
ECCIÓN
:
al enfriarse la parafina, ésta se endura y con ella se endura también el fragmento orgánico dela muestra, constituyendo un bloque compacto de parafina que fácilmente se presta para ser cortado. Pa-ra cumplir con este paso, debió investigarse mucho y mejorar los instrumentos que se empleaban, ya quese necesitaban hacer cortes de pocas micras de espesor (entre 5 y 10 micras); por ello, se ideó el aparatollamado MICROTOMO (Fig. D-1 y D-2), que por una parte dispone de una cuchilla muy fina y por otra deun sistema con movimiento, de modo que, cada vez que la cuchilla realiza una sección, hace avanzar a lamuestra una cantidad fija de micras que se pueden graduar a voluntad. De este modo, se logra obteneruna verdadera cinta de cortes sucesivos, en los cuales, el borde uno se adhiere al borde del siguiente.
Fig. D-1. Fotografía que muestra a un técnico utilizandoun ultramicrotomo, aparato que está en funcionamiento.
 
Dr. Gustavo Mora Venner Pág. D-3
g.
 
M
ONTAJE
 
 Y 
 
TINCIÓN
:
una vez que se ha obtenido la cinta de los cortes, se procede a montar uno de ellossobre una laminilla portaobjetos para proceder y someterlo a la tinción. Como el corte del tejido tiene ensu interior parafina y como la mayor parte de los colorantes más usuales no son solubles en la parafina ysi en agua (ver sobre ésto más adelante en este mismo libro), hay que volver a hidratar al corte, de modoque permita colorearlo. Luego, y una vez montado el corte en a placa, se procede a realizar los pasosinversos que se han analizado hasta llegar a la inclusión; por ello, primero se lavará en xilol, con lo cualse disuelve la parafina, luego se lavará en alcoholes decrecientes de grado para eliminar el xilol yfinalmente, se lo lavará con agua, para que ésta ocupe las partes anteriormente llenas de ella y así puedaser teñido con colorantes solubles en agua. Realizada la coloración, se procederá nuevamente al lavadocon alcoholes crecientes y luego con xilol, para finalmente proceder a la observación del cortemicroscópico (Fig. D-3).
D2.2. L
A
 
TÉCNICA
 
DE
 
LA
 
CONGELACIÓN
:
es la otra técnica más usada para realizar estudios histoló-gicos y sobre todo histopatológicos, pues de ella nos valemos cuando el cirujano necesita porejemplo, un diagnóstico histopatológico de un supuesto tumor canceroso durante el curso deuna intervención quirúrgica; con el diagnóstico del tejido obtenido durante la cirugía, él sabráque conducta seguir durante la operación, ya que si se comprueba que es maligno, deberá ha-cer resecciones quirúrgicas mayores, caso contrario, solo extirpará el tumor o solo la parteextraída par la observación y no proseguirá su intervención; como en el ejemplo indicado, te-nemos infinitos de los que se vale la cirugía para sus intervenciones, mediante el uso de la téc-nica de la congelación.La técnica en mención consiste en realizar la solidificación del fragmento de muestra mediantela congelación. Este procedimiento se realiza de varias maneras, siendo la más usada, la quese vale de una corriente de bióxido de carbono, que se conecta al portapiezas, mediante undispositivo, cuya espita o válvula sobresale sobre la pieza para producir el llamado hielo seco,luego de lo cual se realiza enseguida el corte y la observación al microscopio.Actualmente, se usa mucho el aparato llamado CRIOSTATO (Fig. D-4), que permite lacongelación de la muestra y su corte a igual temperatura, con lo cual se abrevia el tiempo depreparación.
D3. TÉCNICAS ESPECIALES
Fig. D-2. Fotografía de un ultramicrotomo, que enprimer plano muestra el cuchillo para losultradelados cortes de teido.

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