PRACTICA DE LABORATORIO NO 2

REACCIONES DE CARACTERIZACION DE
AMINOACIDOS Y PROTEÍNAS

GÓMEZ CHRISTIAN (28035149)

GUERRERO CHRISTIAN (26035140)
MIDEROS CRISTIAN (29035142)

RESUMEN
Se realizó la caracterización de aminoácidos y proteínas tales como glicina, prolina,
fenilalanina, tirosina, triptófano, arginina, metionina, cisteína, cistina, caseína, muestra
problema y biológica (frijol rojo) mediante las reacciones: de nihidrina, biuret, xantoproteíca,
Millon, reconocimiento de arginina y la determinación de aminóacidos azufrados. Se
obtuvieron resultados positivos y negativos para cada reacción dependiendo de la estructura
de los anteriores aminoácidos. Xxxxxx y xxxxx

Palabras claves: caracterización, reacción, aminoácido y proteína

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http://books.google.com/books?
id=Pm7lNZzKlaoC&pg=PA908&dq=caracterizacion+de+aminoacidos+y+proteinas+ninhi
drina&hl=es&ei=CFueTIPNNsKBlAfHidXsAg&sa=X&oi=book_result&ct=result&resnum=
2&ved=0CDQQ6AEwAQ#v=onepage&q&f=false

INTRODUCCION

Basándose en las diferentes estructuras que poseen los aminoácidos, incluyendo los grupos
característicos que algunos de ellos poseen, se puede plantear que existen diferentes tipos de
reacciones que permiten determinarlos. Entre ellas están:

1. Reacción de Ninhidrina: permite identificar la presencia de proteínas y aminoácidos libres.

El grupo α-amino de los aminoácidos al reaccionar con la ninhidrina (hidrato de
tricetohidrindeno) forma complejos de color azul-violeta.

2. Reacción de Biuret: permite determinar la presencia de enlaces peptídicos en una muestra

debido a la formación de un compuesto de coordinación de color violeta. El reactivo de Biuret
consiste en CuSO4 en solución acuosa alcalina.

3. Reacción de Millón: permite identificar la presencia de tirosina en una muestra. La mezcla

de nitrito y nitrato mercúricos y de ácido nítrico, (reactivo de Millón) reacciona con este
aminoácido formando una sal de color rojo.

4. Reacción de Xantoproteica: esta prueba caracteriza a los aminoácidos aromáticos. Los

aminoácidos reaccionan con ácido nítrico concentrado y forman nitrocompuestos de color
amarillo.
5. Reconocimiento de arginina: El grupo imino presente en la cadena lateral de la arginina
reacciona con soluciones de α-naftol en presencia de Bromo en medio alcalino formando
complejos coloreados rojos.

6. Determinación de Aminoácidos azufrados: la Metionina, la Cisteina y la Cistina se

reconocen por la formación de precipitados de Sulfuro de Plomo de color gris oscuro o negro
que se forman cuando reacciona el ión sulfuro con una sal soluble de Plomo en medio
alcalino. (Beyer et al, 1986)

MATERIALES Y METODOS

Reacción de Ninhidrina
Se tomo una muestra de glicina, metionina, prolina, muestra biológica (frijol rojo) y muestra
problema, en distintos tubos de ensayo. Se adicionó 1 mL de ninhidrina a cada tubo y se
calentó a ebullición en baño maría durante 10 minutos.

Reacción de Aminoácidos Azufrados

Se tomo una muestra de glicina, metionina, cisteína, cistina, muestra biológica y problema,
en distintos tubos de ensayo. Se adicionó 2 mL de hidróxido de sodio al 30% a cada tubo y se
calentó a baño maría durante 10 minutos, se enfrió los tubos en baño de hielo, posteriormente
se adiciono 1 mL de acetato de plomo al 10% y se calentó suavemente, se dejo en reposo
durante 30 minutos.

Reacción de Biuret
Se tomo 1mL de glicina, muestra biologica y problema, en distintos tubos de ensayo. Se les
adicionó 2 mL de hidróxido de sodio al 30% y posteriormente se adicionó 3 gotas de sulfato
cúprico al 1%. La ecuación que identifica esta reacción es:

Proteína + NaOH →

Reacción Xantoproteica
Se adiciono 1ml de glicina, fenilalanina, tirosina, triptófano, muestra biologica y problema en
distintos tubos de ensayo, posteriormente se les agregó 1 mL de acido nítrico concentrado y
se calentó a baño maría durante 10 minutos.

Reacción de Millón
Se adiciono 2mL glicina, tirosina, triptófano, muestra biologica y problema, en distintos tubos
de ensayo. Se añadió 0.5 mL de reactivo de millón al 0.5%, posteriormente se les agregó 1
mL de nitrito sódico al 0.5%y se calentó en baño maría durante 10 minutos.

Reacción de Arginina
En cuatro tubos de ensayo se adiciono 1mL de glicina, arginina, muestra biologica y problema
respectivamente. Posteriormente a cada tubo se adicionó 1mL de hidróxido de sodio al 30% y
0.05mL de α-naftol al 0.05%. Se agito y se dejó enfriar 10 minutos en baño de hielo.
Seguidamente se añadió 5 gotas de hipobromito sódico a 1N y urea al 40%.
RESULTADOS
Tabla No. 1: Caracterización de aminoácidos y proteínas.
Prueba muestra Ninhidrina Biuret Xantoproteica Millón Arginina azufrados
Biologica
Muestra (frijol rojo) + + + + + +
problema + - + - + -
Glicina + - - + - -
Prolina +
Fenillalanina -
Tirosina + +
Triptófano + -
Arginina +
Metionina + -
Cisteína +
Cistina -

DISCUSION DE RESULTADOS

Reacción de la Ninhidrina: la prueba fue positiva para todas las pruebas: glicina, metionina,
prolina, y muestra biologica (frijol rojo) debido a que estas presentan un grupo amino libre, el
cual reacciona con la ninhidrina, el cual es un agente oxidante fuerte que efectúa la
descarboxilación oxidativa de los aminoácidos, y forman dióxido de carbono, amoníaco y un
aldehído que contiene un átomo de carbono menos que el compuesto original. El amoníaco y
la hidridantina así formadas reaccionan con una segunda molécula de ninhidrina que da lugar
a la formación de un pigmento color azul o violeta, del que solamente el átomo de nitrógeno
pertenece al aminoácido (Lehninger, 1979). Se debe tener en cuenta que la coloración
azulada o violeta de las reaaciones es proporcional a la concentración del aminoácido. En el
caso de la prolina y muestra problema, que estructuralmente no poseen el grupo amino libre,
sino un grupo imino, la coloración final es amarilla.

Reacción De Aminoácidos Azufrados: la prueba fue positiva para la cisteína y la muestra

biologica debido a que son aminoácidos que poseen azufre en su estructura. En el caso de la
cisteína, los grupos tiol de dos moléculas de cisteína se han oxidado para formar un grupo
disulfuro de modo que se establece un enlace covalente transversal entre ellas. (Rivera et al,
2001) La reacción se lleva a cabo en un medio alcalino, es decir en presencia de NaOH, el
cual permite la separación del azufre de la estructura del aminoácido. Al añadir una sal
soluble en agua, como lo fue el acetato de plomo, el azufre se combina con el plomo para
producir un precipitado de color negro que corresponde a sulfuro de plomo.
Por el contrario para la muestra problema, glicina, metionina y cistina la prueba fue negativa,
ya que no poseen azufre en su estructura.

La ecuación de la reacción para el caso de la cisteína es:

Reacción de Biuret: fue una prueba positiva solo para las proteínas, es decir para la muestra
biologica, mas no para los aminoácidos analizados, debido a que esta reacción detecta
enlaces peptídicos y no aminoácidos libres. El NaOH se constituye en el medio que permite la
formación de complejos de coordinación Cu 2+ y los pares de electrones no compartidos del
nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos. Por tanto, el reactivo de biuret cambió a
color violeta en presencia de las anteriores proteínas.

Reacción Xantoproteica: esta prueba fue positiva para la tirosina, triptófano, muestra
problema y biologica. Este comportamiento se debe a la presencia de anillos bencénicos en la
estructura de las anteriores proteínas y aminoácidos. Los anillos aromáticos presentes
reaccionaron con ácido nítrico concentrado formando nitroderivados de color amarillo.
En el caso de la muestra biologica (frijol amarillo), se obtuvo un resultado positivo debido a
que de “100g de proteína ésta se encuentra conformada por un 5.2g de fenílalanina, 4.7g de
tirosina y 1.6g de triptófano”3.

En el caso de la fenílalanina, a pesar de que posee un anillo aromático en su estructura la

prueba fue negativa, ya que esta no reacciona en las condiciones que se realiza en el
laboratorio.
Pero la ecuación de la reacción se presenta a continuación:

Reacción de Millón: esta prueba fue positiva para la muestra biologica, glicina y tirosina
debido a que estos poseen en su estructura un grupo hidroxifenilo, el cual reacciona frente a
las sales de Mercurio a pH ácido, formando en un principio nitrotirosina y mas adelante una
sal mercúrica de color rojo. En el caso del triptófano y la muestra problema xxxxxx

Reacción de Arginina: la prueba fue positiva para la arginina y la muestra biologica (frijol
rojo) debido a que el grupo guanidinio presente en la cadena lateral de la arginina reacciona
con soluciones de α-naftol y se oxida en presencia de hipobromito perdiendo un grupo imino.
La arginina oxidada reaccionó con otra molécula de α-naftol en medio alcalina formando un
complejo coloreado rojo, tal como se muestra en la siguiente reacción:

En el caso de la glicina el resultado fue negativa,

pero estos aminoácidos no poseen un grupo guanidinio por tanto se establece que se
presentó un error experimental en los patrones establecidos para la clasificación de la prueba.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

 H. Beyer, W. Walter; 1986; Manual de química orgánica, Editorial Reverte, Madrid, pág.
908
 C. Mathews ; V. Holde; 2002 K.E.; 2ª Edición. Editorial Mc Graw Hill. Páginas 143-148 [3]

 J. Rivera; C. López; 2001; Bioquímica estructural: conceptos y tests, Editor Tebar, pág. 93