Uji In Vitro Aktivitas Antimalaria Majalah Farmasi Airlangga, Vol.3 No.

3, Desember 2003 99

Uji In Vitro Aktivitas Antimalaria Isolat Dari Androgrphis paniculata Terhadap Plasmodium Falciparum Pada
Stadium Gametosit.

Rr.Retno Widyowati a), IGP Santa a), Abdul Rahman a), Indah Tantular b), Aty Widyawaruyanti a)
a) b)
Bagian Ilmu Bahan Alam Fakultas Farm asi Universitas Airlangga; Bagian Parasitologi Fakultas Kedokteran
Universitas Airlangga

Research of antimalarial activity toward eradication of Plasmodium falciparum in shizontocyte stage has
been done. This article intended to describe the activity of isolate of Andrographis paniculata herbs toward
eradication of Plasmodium falciparum in gametocyte stage. Inhibition activity of 5 g/mL isolate against the
parasite as the same as Primaquin in 5 g/mL.

Keywords : Andrographis paniculata, Plasmodium fa lciparum, Gametocyte, Inhibition activity

PENDAHULUAN kemudian dikeringkan terlebih dahulu baru dilakukan

Salah satu tanaman yang sering digunakan sebagai
obat tradisional di Indonesia adalah sambiloto
(Andrographis paniculata) yang mempunyai banyak
sekali khasiat, diantaranya untuk penyakit kurap, sakit
perut, demam karena gigitan serangga/ular berbisa, tifus
dan penyakit malaria (Heyne, 1987).
Beberapa penelitian pendahuluan terhadap aktivitas
antimalaria dari tanaman ini telah dilakukan. Suyanto
(1995) yang melaporkan bahwa isolat dari ekstrak
metanol Andropraphis paniculata mempunyai daya
hambat terhadap pertumbuhan Plasmodium falciparum
in vitro pada stadium shizontosida. Kemudian dari
penelitian Widyawaruyanti (1999), dilaporkan bahwa
ekstrak non polar (kloroform dan petroleum eter) dari
herba tanaman ini juga mempunyai daya hambat
terhadap pertumbuhan Plasmodium falciparum in vitro
pada stadium shizontosida dengan membandingkan
pada kontrol positifnya (kloroquin), tanpa melakukan
penghitungan IC 50. Misra (1992) melaporkan ekstrak
dari Andrographis paniculata dapat menghambat
pertumbuhan Plasmodium berghei. Dua (1999)
melaporkan bahwa Andrographis paniculata
mempunyai efek sebagai antimalaria pada fase
shizontosida dengan harga IC 50 4 μg/mL. Menurut
Rahman (1999), ekstrak kloroform dari tanaman ini
mempunyai efek antimalaria in vivo.
Berdasarkan hal tersebut maka dilanjutkan penelitian
aktivitas antimalaria isolat dari Andrographis
paniculata sebagai bahan uji yang diduga mempunyai
aktivitas antimalaria terhadap Plasmodium falciparum
pada stadium gametosit in vitro karena gametosit yang
berada dalam tubuh manusia merupakan faktor yang
menentukan terjadinya transmisi penyakit malaria.
Gametosit yang terhisap oleh nyamuk Anopheles akan
menjadi gamet jantan dan gamet betina dalam rongga
tubuh nyamuk dan memulai fase sporogoni. Selain itu
penderita yang di dalam tubuhnya mengandung
gametosit bersifat carrier yang dapat menularkan
penyakit malaria.
BAHAN DAN METODE
Tanaman untuk Penelitian . Tanaman yang
digunakan untuk penelitian adalah herba Andrographis
paniculata yang diperoleh dari Kediri (± 700 m dpl)
pada bulan Juli tahun 2000 dalam keadaan segar,
ektraksi. Determinasi herba dilakukan d an hasilnya
disimpan di Laboratorium Botani -Farmakognosi
Fakultas Farmasi Universitas Airlangga.
Parasit Penelitian. Parasit yang digunakan adalah
isolat Plasmodium falciparum 228 yang diperoleh dari
Dr. Fumihiko Kawamoto (Oita University, Jepang) dan
dikembangbiakan di Tropical Disease Center (TDC)
Universitas Airlangga Surabaya dengan tehnik
penggantian medium setiap hari tanpa penambahan
eritrosit baru sehingga terbentuk stadium gametosit dan
kultivasi dilakukan berdasarkan metode Trager -Jensen
(1976).
Bahan Pembanding. Kontrol negatif yang digunakan
pada penelitian ini adalah parasit malaria bentuk
gametosit yang tidak diberi bahan uji dan sebagai
kontrol positif digunakan primakuin (Sigma,USA).
Bahan. Metanol teknis (Brataco, Sby, Ind.), etil asetat
teknis (Brataco, Sby, Ind.), aquabidest, khloroform
teknis (Brataco, Sby, Ind.), plate silika gel F 254
(E.merk, Darmstadt, Germany), media RPMI 1640
(Rosewell Parla Memorial Institute), Buffer phosphat
salin, gentamisin, ACD (asam sitrat, tri sodium sitrat,
dekstrosa), eritrosit manusia (PMI, Sby, Ind.), pewarna
giemsa dan serum manusia (PMI, Sby, Ind.).
Alat. Dalam penelitian ini dibutuhkan beberapa alat
yaitu maserator, rotary-evaporator, TLC-scanner,
Laminar Air Flow, inkubator CO 2 dan otoklaf.
Preparasi Isolat dari Andrographis paniculata.
Serbuk kering Andrographis paniculata 2 kg diekstraksi
berulang dengan metanol 95 % pada suhu 60 0C dengan
menggunakan maserator 4x@24 jam. Ekstrak
dipekatkan dengan rotavapor. Ekstrak pekat ini dikocok
4 kali dengan pelarut campuran etil asetat-air (200:150)
ml selama 5 menit, fraksi etil asetat yang diperoleh
dipekatkan dengan rotavapor dan dilakukan
rekristalisasi. Dari hasil fraksinasi serbuk kering
Andrographis paniculata sebanyak 2 kg diperoleh
kristal 14,408 g dan dengan KLT diperoleh noda dengan
Rf 0,125 (merah ungu), titik lebur 220 ± 100C (Fisher
John’s Point Apparatus). Konsentrasi yang digunakan
dalam bahan uji adalah 1, 3 dan 5 g/ml dengan
melarutkan dalam DMSO dan etanol 95 % (1:9) ml.
Untuk pengencerannya ditambahkan RPMI 1640.
Penyiapan Plasmodium falciparum untuk
Pembiakan. Biakan Plasmodium falciparum 228 dari
100 Majalah Farmasi Airlangga, Vol.3 No.3, Desember 2003 Widyowati et.al.

penyimpanan beku dihangatkan pada suhu 37 0C sambil
dikocok-kocok terus sampai cair, lalu dimasukkan
dalam tabung sentrifus steril dan disuspensik an dengan
2,0 ml larutan NaCl 12 % tetes demi tetes, didiamkan 3
menit kemudian ditambah 8,0 ml NaCl 1,6 % kemudian
disentrifuse dengan kecepatan 1500 rpm selama 5
menit. Setelah itu ditambahkan NaCl 1,6 % sebanyak
3,0 ml dan dilakukan sentrifuse 1500 rpm selama 5
menit. Lalu ditambahkan dengan RPMI lengkap 3,0 ml
dan disentrifuse 1500 rpm selama 5 menit. Supernatan
selalu dibuang. Packed cell ( 0,2 ml) disuspensikan
dengan RP-HS (RPMI dengan serum manusia)
sebanyak 4,5 ml dan ditambah dengan 0,25 ml laruta n
RBC 50 % hematokrit dan dimasukkan ke dalam botol
kultur. Biakan dimasukkan dalam candle jar dan
diinkubasi pada suhu 37 0C. Setiap 24 jam medium
diganti dengan medium yang baru. Kadar hematokrit
awal kultur dibuat 5 %. Penggantian medium dilakukan
setiap hari dan dicek kadar parasitemianya dengan
hapusan darah. Bila kadar parasitemia tinggi dilakukan
sub kultur dengan penambahan RBC kemudian
diinkubasi di candle jar selama 24 jam. Tapi bila kadar
parasitemia rendah, medium hanya diganti secara biasa
dan dibiakan terus tanpa penambahan sel darah merah
hingga terbentuk parasit pada stadium gametosit.
Uji Aktivitas Antimalaria. Pengujian isolat dari
Andrographis paniculata dilakukan dalam lempeng
sumur mikro steril yang terdiri dari 24 sumur. Bahan uji
sebanyak 20 l dimasukkan tanpa diuapkan langsung
ditambah suspensi parasit sebanyak 480 l dan
diinkubasi pada suhu 37 0C selama 24, 48, 72 dan 96
jam. Setelah 24 jam medium pada masing -masing
sumur diambil kira-kira 250 l, kemudian ditambahkan
medium yang berisi bahan uji dengan konsentrasi yang
sama dengan awal. Selanjutnya diinkubasi dalam candle
jar pada suhu 37 0C. Setelah 48 jam dilakukan
penggantian medium tanpa bahan uji. Pembuatan
hapusan darah tipis dilakukan pada 72 dan 96 jam.
Kemudian dibuat sediaan tetes darah tipis dan dihitung
jumlah eritrosit yang terinfeksi gametosit pada sumur
uji dan kontrol negatif. Jumlah gametosit yang mati
adalah jumlah eritrosit yang terinfeksi gametosit pada
sumur kontrol negatif dikurangi dengan jumlah eritrosit
yang terinfeksi pada sumur uji. Untuk melihat jumlah
eritrosit yang terinfeksi gametosit digunakan mikroskop
dengan perbesaran 10x100, data yang diperoleh
dianalisa dengan program SPSS Window 10.0
menggunakan analisa probit untuk memperoleh harga IC 50.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengujian antimalaria ini dilakukan pada sumur mikro
dan dibuat hapusan darah tipis kemudian dihitung
jumlah eritrosit yang terinfeksi parasit fase aseksual dan
seksual, maka diperoleh hasil seperti pada tabel 1 dan 2.
Besarnya aktivitas dari tiap konsentrasi diketahui
dengan menghitung prosen penghambatan yang
diberikan oleh bahan uji terhadap pertumbuhan
Plasmodium falciparum pada stadium gametosit yaitu
dengan menghitung jumlah eritrosit yang terinfeksi
gametosit pada fase I-V (Tabel 3 dan 4). Pada hari ke-3
isolat dengan konsentrasi yang tertinggi mempunyai
rata-rata daya hambat lebih kecil dari primakuin.
Sedangkan hari ke-4 tidak ada perbedaan rata -rata %
penghambatan antara primakuin dan isolat pada
konsentrasi tertinggi (α=0.05). Maka isolat dari
Andrographis paniculata mempunyai daya hambat dan
aktivitas yang sama dengan primakuin.

Tabel 1. Hasil Penghitungan Eritrosit yang Terinfeksi Parasit Fase Aseksual dan Seksual terhadap Plasmodium
falciparum pada 72 jam tiap 5000 eritrosit.

Bahan uji Konsentrasi . Eritrosit yang . Eritrosit yang

(g/ml) terinfeksi parasit terinfeksi parasit fase
fase aseksual seksual
. Gamet . Gamet fase Total
fase I-III IV-V
Kontrol Negatif - 19 40 1 41
14 42 1 43
Isolat A. panicu lata 1 26 39 - 39
- 20 35 2 37
3 18 28 3 31
18 27 1 28
5 17 22 - 22
8 18 2 20
Primakuin 1 31 28 2 30
21 28 2 30
3 11 24 - 24
21 27 1 28
5 13 16 2 18
22 18 1 19
 Uji In Vitro Aktivitas Antimalaria Majalah Farmasi Airlangga, Vol.3 No.3, Desember 2003 101

Tabel 2. Hasil Penghitungan Eritrosit yang Terinfeksi Parasit Fase Aseksual dan Seksual terhadap Plasmodium
falciparum pada 96 jam tiap 5000 eritrosit.
Bahan uji Konsentrasi . Eritrosit yang . Eritrosit yang
(g/ml) terinfeksi parasit terinfeksi parasit fase
fase aseksual seksual
. Gamet . Gamet fase Total
fase I-III IV-V
Kontrol Negatif - 21 27 3 30
21 28 4 32
Isolat A. paniculata 1 23 22 1 23
19 20 1 21
3 22 18 1 19
9 19 2 21
5 8 13 1 14
5 10 2 12
Primakuin 1 9 19 2 21
11 18 1 19
3 6 16 - 16
4 18 2 20
5 6 11 3 14
5 12 - 12

Tabel 3. Hasil Penghitungan % Penghambatan Pertumbuhan Plasmodium falciparum pada 72 jam tiap 5000 eritrosit
Bahan uji Konsentrasi Total eritrosit % Penghambatan Rata-rata %
(g/ml) yang terinfeksi gametosit Penghambatan
(Var.)
Kontrol Negatif - 41 0 0
43 0
Isolat A. paniculata 1 39 7,14 9.52 (2,38)
37 11,91
3 31 26,19 29,76 (3,57)
28 33,33
5 22 47,62 50,0 (2,38)
20 52,38
Primakuin 1 30 28,57 28,57
30 28,57
3 24 42,86 38,09 (4,76)
28 33,33
5 18 57,14 55,95 (1,19)
19 54,76

Tabel 4. Hasil Penghitungan % Penghambatan Pertumbuhan Plasmodium falciparum pada 96 jam tiap 5000 eritrosit
Bahan uji Konsentrasi Total eritrosit % Penghambatan Rata-rata %
(g/ml) yang terinfeksi Penghambatan
gametosit (Var.)
Kontrol Negatif - 30 0 0
32 0
Isolat A. paniculata 1 23 25,81 29,03 (3,23)
- 21 32,26
3 19 38,71 35,48 (3,23)
21 32,26
5 14 54,84 58,07 (3,23)
12 61,29
Primakuin 1 21 32,26 35,48 (3,23)
19 38,71
3 16 48,39 41,94 (6,45)
20 35,48
5 14 54,84 58,07 (3,23)
12 61,29
102 Majalah Farmasi Airlangga, Vol.3 No.3, Desember 2003
Untuk mengetahui hubungan antara peningkatan
konsentrasi dengan besarnya aktivitas dibuat grafik
antara konsentrasi dengan % penghambatan kemudian
dianalisa menggunakan probit dari program SPSS
window 10.0 sehingga akan dik etahui harga IC 50
(Gambar 1 dan 2).
Gambar 1. Grafik Analisis Probit dari Daya Hambat
Isolat dari Andrographis paniculata terhadap P.
falciparum Stadium Gametosit pada 72 jam
Gambar 2. Grafik Analisis Probit dari Daya Hambat
Isolat dari Andrographis paniculata terhadap P.
falciparum Stadium Gametosit pada 96 jam
Pada hari ke-3 didapatkan IC 50 isolat dari
Andrographis paniculata 4,92 g/ml tidak berbeda
secara bermakna dengan IC 50 primakuin yaitu 4,54
g/ml. Pada hari ke-4 IC50 isolat dari Andrographis
Widyowati et.al.
paniculata 4,28 g/ml tidak berbeda secara bermakna
dengan IC 50 primakuin yaitu 4,05 g/ml (α = 0.05).
Kesimpulan. Berdasarkan hasil penelitian tersebut
dapat disimpulkan isolat dari Andrographis paniculata
mampu menghambat pertumbuhan Plasmodium
falciparum pada stadium gametosit in vitro.
Ucapan Teimakasih. Ucapan terima kasih
disampaikan kepada drh. Suhintam Pusarawati, MKes,
Dra. Wiwied Ekasari, MSi, Apt, Drs. Herra Studiawan,
MS, Direktur beserta staf TDC Unair, Kepala lab dan
karyawan fitokimia dan Laboratorium Dasar Bersama
yang telah banyak membantu dalam penyelesaian
penelitian ini, serta Fakultas Farmasi yang telah
mendanai penelitian ini melalui Project Grand QUE 2000 .
DAFTAR PUSTAKA
Departemen Kesehatan (1979), Materia Medika
Indonesia III, Jakarta, hal.20
Departemen Kesehatan (1983), Pemanfaatan Tanaman
Obat-obatan, Jakarta, hal.95-119
Dua (1999), Screening of Natural/Synthetic Compounds
for Antimalarial Activity, p.77-81
Heyne K, 1987, Tumbuhan Berguna Indonesia, Jilid 3,
Terjemahan Badan Litbang Kehutanan, Jakarta, hal
926-927
Misra P, Pal N, Guru P, Katiyar V, Srivastava, Tando n,
(1992), Antimalarial activity of Andrographis
paniculata against Plasmodium berghei in Mastomys
natalensis, International Journal of Pharmacognocy
30 (4), p. 263-274
Mubin A, Pain S, (1992), Malaria Tropika dengan
Beberapa Komplikasi, Cermin Dunia Kedokteran no.
74, Jakarta, hl. 48-51
Rahman A, Futura T, Kajima S (1999), Antimalaria
Activity of Malaysian Medicinal Plants, Journal of
Ethnopharmacology 64, p. 249-254
Suyanto (1995), Uji Aktivitas Antimalaria Secara In
Vitro Isolat Andrographis paniculata Nees, Skripsi,
Fakultas Farmasi Universitas Airlangga
Trager W, Jensen S B (1976), Human Malaria Parasites
in Continuous Culture, Science, p. 673-675
Widyawaruyanti A (1999), Aktivitas Imunomodulator
Senyawa-senyawa Diterpenoid dari Andrographis
paniculata Nees Terhadap Fungsi Sitotoksisitas
Limfosit T-Sitotoksik (CD 8+) Mencit, Tesis,
Program Pasca Sarjana Universitas Airlangga,
Surabaya