Extracción y caracterización de alcaloides de Brugmansia sp (solanáceae) y de C.

americana

Leidy Johanna Madroñero1 113870

Luz Adriana Pedraza Herrera1 113812
1 departamento de Biología- universidad Nacional de Colombia

Objetivos:

 Realizar extracción de alcaloides a partir de flores de Brugmansia sp y de Curatella

americana
 Identificar los alcaloides extraídos mediante pruebas con reactivos de precipitación y
por cromatografía de capa delgada.

Introducción:

La palabra alcaloide proviene Etimológicamente del árabe alkaly y del griego eidos aspecto, (de
aspecto alcalino), los alcaloides son compuestos nitrogenados derivados del metabolismo
secundario de las plantas en estado libre, como sales y como N-óxidos, generalmente son
sintetizados a partir de aminoácidos y reaccionan como bases frente a los ácidos.

Los alcaloides se dividen en cuatro clases: Alcaloides verdaderos, Protoalcaloides,

Pseudoalcaloides, Alcaloides imperfectos.

La función que cumplen los alcaloides en las plantas aún no es clara, sin embargo se piensa que
úeden intervenir en procesos como de desecho o almacenamiento de nitrógeno sobrante o no
metabolizado, también se los ha asociado con procesos de protección a la planta de depredadores
debido a su sabor amargo (Arango G. 2008); por otra parte se ha demostrado que los alcaloides
pueden servir como reguladores del crecimiento, se ha visto que los alcaloides derivados de
la putrescina se incrementan notablemente durante la germinación de algunas plantas
como la cebada, cuando se encuentran en suelos deficientes de potasio (Evans WC. 2000).

El fundamento de la extracción se basa en el carácter básico de los alcaloides y en el hecho de su

existencia en las plantas como sales de ácidos orgánicos o como combinaciones solubles de
otras sustancias , entre los principales se encuentran: los ácidos tíglico, 3-metil butírico, benzoico,
cinámico, hidroxifenil propiónico, trópico y tricarboxílicos, y además con otro tipo de
sustancias como taninos y fenoles (París M. 1981).

Para la extracción de alcaloides se debe tener en cuenta que debido a que los alcaloides son
compuestos de carácter básico, su solubilidad en los diferentes solventes varía en función del
pH, es decir según el estado en que se encuentre sí están en forma de base, son solubles en
solventes orgánicos no polares como benceno, éter etílico, cloroformo, diclorometano, acetato
de etilo. En forma de sales, son solubles en solventes polares agua, soluciones ácidas
e hidroalcohólicas.

Para la detección de alcaloides se utilizan reactivos como: la solución de yodo-yoduro de potasio

(Reactivo de Wagner), mercurio tetrayoduro de potasio (reactivo de Mayer), tetrayodo bismuto
de potasio (reactivo de Dragendorff), solución de ácido pícrico (reactivo de Hager), ácido sílico
túngtico (reactivo de Bertrand), p-dimetilamino benzaldehido (reactivo de Ehrlich); nitración de
alcaloides (reacción de Vitali-Morin se usa para alcaloides en estado base) (Arango G. 2008)

Metodología:

pesar el material vegetal tomar la fase acuosa adicionar NH4OH

extraer con CHCl3.

adicionar NH4OH extraer con H2SO4 tomar fase orgánica

transvasar el filtrado a un deshidratar con sulfato de

agregar CHCl3-éter etlílico
embudo de decantación sodio-anhidro

concentrar y realizar las

distribuir en 5 tubos de pruebas de identificación:
agitar y calentar filtrar
ensayo más un vial reactivos de precipitado y
cromatografía

Resultados:

Reactivos de Flores de Curatella Observaciones Hojas de

precipitado/extracto brugmansia americana Brugmansia*
Reactivo de mayer (-) (-) No hubo formación de (+)
precipitado
Reactivo de hager (-) (-) No hubo formación de (+)
precipitado
Reactivo de valser (-) (-) No hubo formación de (+)
precipitado
Ácido tánico (-) (-) No hubo formación de (+)
precipitado
Reactivo de bouchardat (-) (-) No hubo formación de (+)
precipitado
Reactivo de dragendorff (-) (-) No hubo formación de (+)
precipitado
Tabla 1. Pruebas de identificación de alcaloides
*resultados del grupo que trabajó con hojas de brugmansia.

Imagen 1. Cromatografía de capa delgada.

Discusión de resultados:

En la práctica realizada se buscó obtener los alcaloides de Brugmansia sp y de Curatella

americana mediante extracción ácido-base, teniendo en cuenta dos principios relacionados con los
alcaloides, primero, la capacidad que tienen los alcaloides de reaccionar como bases frente a la
adición de un ácido y segundo, las diferencias en la solubilidad de los alcaloides en su estado de
base, en un solvente orgánico, o en su estado de sal, en soluciones acuosas. Debido a que los
alcaloides en las plantas se encuentran en forma de sales de ácidos orgánicos o como
combinaciones solubles de otras sustancias (Evans et al. 200), para su extracción fue necesario,
como primer paso, alcalinizar con NH 4OH, ya, en estado de base, los alcaloides pueden
solubilizarse en solventes orgánicos como el CHCl 3- éter etílico. Para un mejor rendimiento en la
extracción se recomienda, después de la alcalinización y adición del solvente que, además de
agitar, se debe calentar la muestra, esto ayuda a extraer los alcaloides presentes. (Maldoni B. 1991).
Ya con los alcaloides en su estado base, el siguiente paso fue, pasarlos a sales, agregando H 2SO4.
De esta manera nuestros alcaloides quedaron, ahora en la fase acuosa.

La tabla 1. Muestra los resultados de la identificación de los alcaloides realizada para los extractos
de C. americana y de la muestra control Brugmansia sp. se realizaron pruebas de precipitación,
basadas en la capacidad que tienen sustancias nitrogenadas como los alcaloides, en estado de
sal (extractos ácidos) para combinarse con el yodo y metales pesados como bismuto,
mercurio, tugsteno y otros , formando precipitados, estos precipitados, son sales complejas
(Arango GJ. 2008). La adición de ácido HCl, tenía como objetivo disolver los alcaloides en una
solución acuosa ácida (HCl 5%) para que con la adición de sales de metales pesados pudiera
formarse los precipitados.

Los resultados obtenidos para las siete pruebas de identificación realizadas fueron negativos, no
hubo formación de precipitado con ninguno de los reactivos usados. Se usaron reactivos yodados
en dónde los alcaloides froman complejos con los metales como: mercurio tetrayoduro de potasio
(reactivo de Mayer), tetrayodo bismuto de potasio (reactivo de Dragendorff), reactivo de
valser, y el reactivo de bouchardat. Así como también se usaron pruebas con reactivos que generan
precipitados cristalinos como la solución de ácido pícrico (reactivo de Hager) y otros reactivos
como el ácido tánico, y Reineckato de amonio para detectar presencia de de alcaloides de amonio
cuaternario y N-óxido.

Sin embargo, es necesario tener en cuenta que estas reacciones, no son específicas y pueden darse
falsos positivos debido a la contaminación con proteínas, camarinas, alfa-benzopironas y otros
compuestos nitrogenados que dan positivo con estos reactivos; así como falsos negativos porque
algunos alcaloides forman complejos que no precipitan (Martínez A. 1997)

Para la extracción realizada con flores de Brugmansia sp. todos los resultados fueron negativos.
Sin embargo Brugmansia es una planta que se caracteriza por su alto contenido de Alcaloides
derivados del tropano, que se encuentran distribuidos en varios órganos de la planta en
diferentes proporciones, las flores son, según (Arteaga et al, 1993) (ver anexo1. tabla 2.) el órgano
de la planta en donde hay un mayor contenido de alcaloides, principalmente de escopolamina y de
atropina, encontrándose también apoescopolamina y 6β hidroxi 3α tigloiloxitropano. Lo reportado
en la bibliografía contrasta totalmente con los resultados negativos obtenidos, de nuestra
extracción, por lo tanto lo más probable, es que se haya cometido algún error durante el
procedimiento; el calentamiento de la muestra después de agregar la base y el solvente orgánico así
como la separación de las fases, orgánica y acuosa son dos pasos críticos y dónde se corre un alto
riesgo de equivocarse (Maldoni B. 1991). En nuestra extracción, no calentamos la muestra patrón, y
es también posible que hayamos descartado la fase acuosa, después de la adición del ácido. Esto
explicaría, por qué, no se logró una extracción exitosa.

Otra de las pruebas que se realiza para la identificación y separación de los alcaloides obtenidos es
la cromatografía en capa delgada que una herramienta amplio uso para evaluar la presencia de
estos compuestos, el patrón usado fue la atropina. La fase estacionaria empleada para la separación
de alcaloides más común es la gel de sílice G. Para la fase móvile se usan solventes como el
cloroformo, acetona, acetato de etilo, para ajustar la polaridad pueden usarse alcoholes como
metanol, propanol y butanol y para la definición de bandas se usan la dietilamina o el amoniaco
(MacCalley, 2002). El patrón nos indica que sí en nuestros extractos tenemos ese compuesto, este
debería migrar a una distancia igual (RFs iguales) a la del patrón usado, cuando se hace el revelado
con dragendorff, se determina como positivo para alcaloides cuando hay la presencia de manchas
anaranjadas. Debido a que nuestra extracción no se produjo la extracción de alcaloides, no fue
posible tampoco observar la presencia de estas manchas para brugmansia sp, en dónde deberían
mostrarse la presencia de varias manchas, debido a que en esta planta se han reportado por
cromatografía la presencia de bandas a RFs correspondientes a escopolamina entre 0,40 y 0-45
(Grajales G. 2008) además de separación de otros alcaloides presentes. Con respecto a la atropina se
detectó la aparición de una mancha anaranjada, pero que no fue eluída por la fase móvil, esto
implica que la cromatografía realizada no fue efectiva, esto pudo haber sido debido a que la fase
móvil perdió sus propiedades al estar expuesta a una constante apertura de la cámara.

En relación a Curatella americana, nuestro extracto problema, no se ha reportado la presencia de

alcaloides de ningún tipo, así que nuestros resultados fueron congruentes con la bibliografía
consultada. (Alexandre et al, 1999 y El-azizi et al, 1980).
Conclusiones:

 La extracción no fue exitosa, debido a errores experimentales cometidos.

 Brugmansia sp se caracteriza por la presencia de varios alcaloides derivados del tropano
como escopolamina y de atropina, apoescopolamina y 6β hidroxi 3α tigloiloxitropano,
según lo reportado por la bibliografía.
 Curatella americana es una planta que no tiene alcaloides.
 Es necesario tener en cuenta que en pasos como el calentamiento y la separación de fases,
durante la extracción, pueden cometerse errores con mayor frecuencia.

Bibliografía:

1. Paris, M. & M. Hurabielle “Abrégé de Matière Médicale - Pharmacognosie”, tomo 1, y tomo 2.

Ed. Masson. París, 1981

10. Grajales G. (2008)elicitación de raíces normales cultivadas in vitro de Brugmansia candida

(solánaceae) con precursores de alcaloides del tropano.

11. McCalley, D.V (2002) analysis of the chinchona alkaloids BY high performance liquid
chromatogrphy A: 967: 1-19

2. Evans, W.C. “Trease and Evans -Pharmacognosy“, 15 TH ed. Ed. Saundders, Edinburgh, 2000.

3. Gabriel Jaime Arango Acosta, 2008, alcaloides y compuestos nitrogenados, Facultad de Química
Farmacéutica, universidad de Antioquia.

4. Brossi, A. (1984 1987) Alkaloids. Chemistry and Pharmacology, Vols 23: 31Orlando, Fla:
Academic Press.

5. Arteaga de G. L., M. Pera y M.T. (1993) Reguero “Brugmansia : Una especie promisoria para la
producción de alcaloides del tropano” Revista Colombiana de Ciencias Químio-Farmacéutica,
Nº 21, 36-40

6. Maldoni, B. (1991) “Alkaloids: Isolation and Purification” Journal of Chemical Education, 68,
700-703,

7. Martínez, A., “Notas del Curso de Farmacognosia y Fitoquímica, 1997”, Depto. de Farmacia,
Universidad de Antioquia, Medellín, 1997.

8. Alexandre M, Piuvezam M, Araujo C y Thomas G. (1999)Studies on the antiinflamatory and

analgesic activity of Curatella americana L., J. Etnopharmacol., 67, 171-177.

9. El-Azizi, M. M., Ateya, A. M., Svoboda, G. H., Schiff, P. L., Slatkin, D. J. and Knapp, J. E.
(1980), Chemical constituents of Curatella americana (dilleniaceae). Journal of Pharmaceutical
Sciences, 69: 360–361.
Anexo 1.
Órgano de la planta Alcaloides totales expresados
como % de atropina
Hojas 0,34
Tallos 0,15
Frutos (cápsulas) 0,16
Semillas 0,24
Flores 0,38
Tabla 2. Distribución de los alcaloides en Órganos vegetales
(Arteaga et al. 1993)