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Momento de La Ovulacion e Ins. Arti. a Tiempo Fijo en Donante de Embriones

Momento de La Ovulacion e Ins. Arti. a Tiempo Fijo en Donante de Embriones

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Jornadas de Actualización en Biotecnologías de la Reproducción en Bovinos - IRAC- 2006
1
DINÁMICA FOLICULAR, MOMENTO DE LA OVULACIÓN E INSEMINACIONARTIFICIAL A TIEMPO FIJO EN DONANTES DE DE EMBRIONES
G.A. Bó
1
, P.S. Baruselli
2
y P Chesta
11
Instituto de Reproducción Animal Córdoba (IRAC), J.L. de Cabrera 106, X5000GVDCórdoba, Argentina;
2
Departamento de Reprodução Animal, FMVZ-USP, São Paulo,Brazil, 05508-000
Introducción
Reproducir los animales de mayor valor comercial ha llevado a desarrollar distintas biotecnologías que permitan obtener la mayor cantidad de descendientes en el menor tiempo posible. Para lograr esto se pueden utilizar técnicas como la transferencia deembriones. El éxito de un programa de transferencia de embriones se mide por el númerode terneros que nacen vivos por hembra donante en un determinado lapso de tiempo. Estoestá influenciado por los factores relacionados con el número de ovulaciones, lafertilización y la viabilidad de los embriones (Armstrong, 1993). Sin embargo, uno de loscostos mayores de la transferencia de embriones es la variabilidad de la respuesta a lostratamientos superovulatorios. Sobre todo considerando que un 25-30 % de las vacas no producen ningún embrión de buena calidad (Looney et al., 1984; Armstrong, 1993). Se hademostrado que, además del tipo y pureza de la gonadotropina utilizada y de lascaracterísticas del tratamiento superovulatorio (Elsden et al., 1978; García et al., 1982;Monniaux et al., 1983; Murphy et al., 1984; Pawlyshyn et al.,1986; Boland et al., 1991; Bóet al., 1994b), la respuesta superovulatoria de una donante puede estar afectada por elestadio o viabilidad de los folículos en el momento en que los tratamientos son iniciados(Monniaux et al., 1983; Adams et al., 1993b; Armstrong 1993; Bungarts y Niemann, 1994;Mapletoft et al., 1994).Durante los últimos años se han llevado a cabo numerosas investigaciones con elobjetivo de aumentar la cantidad de embriones transferibles. En base a los resultados deexperiencias realizadas en varios laboratorios se puede afirmar que las respuestassuperovulatorias pueden ser aumentadas significativamente si se comienzan lostratamientos con gonadotropinas en el momento de comienzo de la onda folicular, antes dela selección del folículo dominante (Bungarts y Niemann, 1992; Huhtinen et al., 1992;Adams et al., 1993a, 1993b; Nasser et al, 1993; Adams et al., 1994; Bó et al., 1995). Parainiciar los tratamientos superestimulatorios en el inicio momento de comienzo de la onda se pueden realizar examinaciones diarias por ultrasonografía o utilizar tratamientos quesincronicen el desarrollo folicular. Existen métodos mecánicos como la aspiración de todoslos folículos > 5 mm presentes en el ovario (la superovulación debe iniciarse 1 o 2 díasdespués; Bergfelt et al., 1997) o tratamientos hormonales con progestágenos más estradiol(Bó et al., 1995). El intervalo ideal entre el tratamiento con E-17
β
o benzoato de estradiol(EB) y la superovulación es de 4 días (Bó et al., 2002). Estos tratamientossuperestimulatorios iniciados en el momento esperado de crecimiento de la onda folicular resultaron en un número de embriones transferibles similar o superior que los tratamientosrealizados de la manera más tradicional (entre los Días 8 a 12 de la observación del estro), permitiendo de esta manera independizarse del ciclo estral de las donantes.
 
Jornadas de Actualización en Biotecnologías de la Reproducción en Bovinos - IRAC- 2006
2
 Momento de la ovulación y producción de embriones
 La sincronía de la ovulación también es uno de los problemas reportados comocausa de pobre respuesta superovulatoria. En las vacas superovuladas, el intervalo desde laadministración de PGF hasta el pico de LH varía en un rango de 38 a 42 h (Greve et al., 1983;Callesen et al. 1986) y se ha observado una correlación inversa entre la tasa ovulatoria y elintervalo comprendido entre administración de PGF y el pico de LH. Aunque se han publicado varios y controvertidos trabajos sobre el uso de GnRH, LH, hCG durante el estro para "asegurar" la presencia de un pico preovulatorio de LH en vacas superestimuladas(Wubishet et al., 1986; Savage et al, 1987; Mapletoft et al., 2000, Barros y Nogueira, 2001)no existen trabajos donde se haya evaluado críticamente el efecto de los inductores de laovulación sobre la sincronía de las ovulaciones.Recientemente se han reportado experimentos tendientes a programar y sincronizar la ovulación de vaquillonas superestimuladas utilizando un agonista de la GnRH llamadodeslorelina. El tratamiento con este agonista de la GnRH produce la saturación(“downregulation”) de los receptores de GnRH y de esta forma las vacas tratadas tieneninhibida la secreción pulsátil y el pico preovulatorio de LH. Los resultados de losexperimentos preliminares demostraron que si se aplican dos implantes sc de deslorelina(liberan 50
µ
g/día) en vaquillonas Brahman superestimuladas, se inhibe la ovulación.Además, se comprobó que era posible inducir la ovulación mediante la administraciónexógena de LH porcina (pLH, Lutropin-V, Bioniche Animal Health, Canadá), que se produjo entre 24 y 40 h (media 32 h) pos inyección de pLH. Luego se diseñó unexperimento para evaluar la utilización de este protocolo en la sincronización de laovulación de vaquillonas superestimuladas (D’Occhio et al, 1997; 1999). A pesar de que lasdiferencias no fueron significativas, las vaquillonas tratadas con deslorelina tuvieron unnúmero mayor de embriones transferibles. Este esquema plantea además dos alternativas prácticas interesantes: 1. La posibilidad de utilizar un tratamiento de este tipo cuandousamos semen congelado de muy alto valor y 2. La utilización de este protocolo endonantes
 Bos Indicus
donde el estrés podría afectar la respuesta superovulatoria, principalmente debido a alteraciones en la ovulación (D’Occhio et al, 1997; 1999).Lamentablemente los implantes de deslorelina no están disponibles en el mercadointernacional y solo tienen una precaria autorización de uso en Australia.También se han realizado trabajos para evaluar, en protocolos de superovulacióncon progestágenos y estradiol, la respuesta superovulatoria en vacas Nelore a las cuales seles retiró el dispositivo con progesterona en el momento de la anteúltima (Día 7 AM) oúltima (Día 7 PM) de la aplicación de FSH (Zanenga et al, 2004). No se encontrarondiferencias entre los tratamientos (Día 7 AM o Día 7 PM). Barros y Nogueira (2005)nombraron a estos tratamientos de acuerdo al tiempo transcurrido desde la aplicación de la primera PGF a la remoción del dispositivo. De esta manera cuando se saca el dispositivo enel Día 7 lo llamaron P24 y cuando se saca en el Día 7 PM (o Día 7.5), lo llamaron P36(Barros y Nogueira, 2005).Se realizó un experimento preliminar con el objetivo de determinar el momento y ladistribución de las ovulaciones en vacas tratadas con Folltropin-V (Chesta et al., 2003).
 
Jornadas de Actualización en Biotecnologías de la Reproducción en Bovinos - IRAC- 2006
3Para este experimento se utilizaron 18 vacas secas (Angus y Hereford), de 3 a 6 años deedad, con una condición corporal entre 2,5 y 4 (escala 1–5). En el Día 0, todas las vacasrecibieron un DIB (Syntex S.A., Argentina) más 2,5 mg de estradiol-17
β
y 50 mg de progesterona im (Laboratorio Río de Janeiro, Argentina). En el Día 4 todos los animalesrecibieron 400 mg NIH-FSH-P1 de Folltropin-V (Bioniche Animal Health Inc., Canadá).En el Día 6, las vacas fueron divididas al azar en dos grupos: las que se les retiró el DIB esedía por la tarde (Día 6.5 o P12 según Barros y Nogueira, 2005) y las que se les retiró el DIBen el Día 7 por la tarde (Día 7.5 o P24). Las vacas de ambos grupos recibieron 150
µ
g de D(+) cloprostenol (PGF, Celar, Zoovet, Argentina) 12 h antes de retirado el DIB y cuando seretiró el DIB. Las vacas fueron examinadas por ultrasonografía cada 12 h y por 5 días desdeel momento de la primera PGF (Hora 0). Se definió la ovulación como la desaparición delos folículos
10 mm presentes en el Día 8. Se evaluó la distribución del tiempo deovulación por el Test de Bartlett y se comparó el número de ovulaciones totales y elmomento promedio de ovulación por el test T de Student. No hubo diferencias en elmomento y la distribución de la ovulación entre las vacas del Grupo Día 6.5 (87,5
±
3,4 h)y Día 7.5 (82,3
±
3,5 h, P=0,3) y tampoco se observaron diferencias entre los grupos en lacantidad de ovulaciones (P=0,27). Sin embargo, cuando los resultados fueron analizados enfunción de la respuesta superovulatoria de cada animal (vacas con 1 o más ovulaciones,n=14), considerando como “buena” a vacas con > 4 ovulaciones y “regular” a vacas con
4ovulaciones, surgen claras diferencias (Grafico 1). Las vacas con “buena” respuestaovularon antes (79,6
±
1,8 h) que las vacas con respuesta “regular” (90,2
±
3,7; P=0,023).Además, el intervalo entre la primera y la última ovulación fue 0 a 12 h en 11/14 (78,6%)vacas, 12 a 24 h en 2/14 (14,3%) vacas y 24 a 36 h en 1/14 (7,0%) vacas.Gráfico 1. Distribución de las ovulaciones en vacas con “regular” (
4 ovulaciones) o“buena” (> 4 ovulaciones) respuesta superovulatoria.En conclusión, las vacas con una respuesta “regular” tienen un ovulación 12 h mástarde que las vacas con una respuesta “buena” y en la mayoría de los casos hay un intervalode hasta 12 h entre la primera y última ovulación. Esto indica que las IA tradicionalmenterealizadas a las 60 y 72 h de la primera PGF serían adecuadas para las vacas con “buena”respuesta superovulatoria, pero tal vez muy anticipadas para las vacas con respuesta“regular”.Teniendo en cuenta estos resultados preliminares se realizó una serie deexperimentos para evaluar y estudiar con más detalle el momento de la ovulación en vacasdonadoras de embriones y comprobar el efecto de la sincronización de la ovulación sobre la
0%20%40%60%80%4860728496108120
hs. de la 1er PGF
regular resp.buena resp.

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