MECANISMOS DE TRANSFERENCIA DE GENES EN BACTERIAS

GENOMA BACTERIANO
CROMOSOMA PUEDE CONTENER: Plsmidos Profagos Elementos mviles: IS, Tn (en cromosoma o plsmidos)

TRANSFERENCIA DE GENES

HORIZONTAL

VERTICAL

Transferencia Horizontal

DADOR

RECEPTOR

TRANSFORMACION CONJUGACION

TRANSDUCCION

TRANSFORMACION
Captacin de ADN desnudo por parte de una clula receptora

DADOR ADN desnudo Cromosomal Plasmdico Viral (transfeccin)

RECEPTOR Estado de competencia

Experimento de Griffith (1928)

Primera evidencia de transformacin bacteriana

2 cepas de Streptococcus pneumoniae (Diplococcus pneumoniae)

Serotipo II R III S Morfologa colonia rugosa (R ) lisa (S) Cpsula Ausencia Presencia Virulencia Avirulenta Virulenta

Experimento de Griffith

Suceso gentico

Avery, McCarty and MacLeod (1944)

Explicacin molecular: material era ADN

Mecanismo de Transformacin
1. Estado de competencia 2. Unin del ADN
a) Reversible b) Irreversible

Mecanismo de Transformacin
1. Estado de competencia 2. Unin del ADN 3. Incorporacin del ADN
Gram +: ADNss y la cadena complementaria se degrada simultneamente (Streptococcus, Bacillus)
SSB

Gram -: - ADNdc (Haemophilus y Neisseria spp.) - Transformasomas

Gram +

Mecanismo de Transformacin
1. Estado de competencia 2. Unin del ADN 3. Incorporacin del ADN 4. Integracin del ADN (recombinacin) o replicn autnomo
fgranea

Exogenote: DNA desnudo cromosomal

Destino del exogenote 1. Recombinacin homloga (RecA) Transformacin exitosa 2. Degradacin por enzimas de restriccin Transformacin no exitosa

RECOMBINACION GENERALIZADA U HOMLOGA

Recombinacin por Sustitucin RecA: recombinasa Requiere alto % de homologa Ej. Recombinacin entre genes cromosomales de la dadora y la receptora

ADN dador
Endonucleasa Corte SSB

Unin de la protena SSB

ADN dador ADN receptor

Recombinacin homloga

RecA

Invasin de cadena

Intercambio de cadenas

Resolucin de las cadenas de ADN recombinante

Exogenote: DNA desnudo plasmdico

Destino del exogenote 1.Replicacin autnoma 2. Algunos plsmidos pueden integrarse en el cromosoma de la receptora por recombinacin. Se denominan episomas. Transformacin exitosa 3. Degradacin por enzimas de restriccin Transformacin no exitosa

 Natural Bacteria dadora en estado de competencia

Ej. Streptococcus pneumoniae

TRANSFORMACION

Artificial *Tratamiento con cloruro de calcio *Electroporacin

Ej. Escherichia coli

Importancia de la Transformacin
Ocurre en la naturaleza y puede aumentar la patogenicidad de las bacterias Es ampliamente usada en tecnologas de ADN recombinante

CONJUGACION

DADOR

RECEPTOR

Cel. Masculina Factor F (F+)

Cel. Femenina Sin Factor F (F-)

Transferencia de genes de una clula dadora a una receptora mediante contacto fsico entre ellas

Factor F / Factor de fertilidad/ Factor sexual

Plsmido conjugativo (episoma) Segmento de ADN circular que puede replicar en forma autnoma Genes para replicacin y transferencia del ADN al receptor (tra) Pili F/ Pili sexual
94.5 kb

Denominacin de las Bacterias Dadoras segn el estado del plsmido o factor F

Bacteria F+ Factor F como plsmido de replicacin autnoma

Bacteria Hfr: Plsmido F integrado en el cromosoma bacteriano (puede transferir genes cromosomales)

Bacteria F: Factor F como plsmido de replicacin autnoma pero lleva algn gen bacteriano

Todas las clulas dadoras (macho) poseen pili sexual codificado por el plsmido F

Caractersticas de las bacterias segn el estados del Factor F

Clula F+: plsmido F no integrado (episoma de duplicacin autnoma) Clula Hfr (High Frequency of recombination): plsmido F integrado - alta frecuencia de transferencia de
ciertos genes cromosmicos de la clula dadora

F+

Hfr

Integracin del Factor F por recombinacin

Bacteria dadora: Bacteria F+

Bacteria Hfr

Cromosoma de E. coli

RECOMBINACIO N ESPECFICA DE SITIO

Recombinacin

Formacin de diferentes clulas Hfr

Recombinacin : la homologa se limita a las IS IS del Factor F y diferentes IS presentes en el cromosoma de E. coli

Bacteria Dadora: Bacteria Hfr

Bacteria F
Dadora

Recombinacin Escisin aberrante

Factor F con gen cromosomal

Dadora

Caractersitcas de las bacterias segn el estados del Factor F

Clula F: episoma de duplicacin autnoma con segmentos de material gentico cromosmico
Hfr F

Mecanismo de Conjugacin
1. F+ y F2. Formacin de una pareja estable 3. Contraccin del pelo sexual y contacto clula-clula 4. Transferencia del ADN 5. Sntesis de las cadenas de ADN continua en la clula dadora y discontinua en la receptora Se obtienen dos clulas F+
fgranea

Hfr x F- = Hfr + F- que gan algn gen de la dadora

1. Formacin de una pareja estable
2. Transferencia de ADN: - Ruptura en el oriT - Transferencia polarizada - Alta transferencia de genes cromosomales 3. Duplicacin por crculo rodante 4. - Recombinacin generalizada Rec A Alta homologa entre genes cromosomales
Hfr FHfr F-

Hfr

F-

Hfr

F-

Conjugacin

Exogenote

Destino del exogenote

F+ X F-

plsmido F

Restriccin Replicacin autnoma Recombinacin (episoma) Restriccin Recombinacin

Hfr X F-

genes cromosomales

F X F-

plsmido F

Restriccin Replicacin autnoma Recombinacin

Importancia de la Conjugacin
Bacterias Gram- Principal va de transferencia de genes - Resistencia a mltiples ATB - Mapeo de genes en el cromosoma bacteriano Bacterias Gram+ -Plsmidos con resistencia a mltiples ATB

TRANSDUCCION
BACTERIOFAGO

DADOR

RECEPTOR

Transferencia de ADN de una bacteria a otra por medio de un bacterifago

Bacterifagos
*Lticos o virulentos: siempre hacen ciclos lticos. Ej. Fago T4 *Lisognicos o temperados: pueden realizar un ciclo ltico o lisognico. Ej. Fago lambda

Bacteria lisognica
El fago est integrado en el cromosoma (profago) Slo se transcribe el represor del fago (CI en el caso de lambda) La bacteria adquiere inmunidad contra fagos del mismo tipo

profago Represor CI

Integracin del fago por Recombinacin especfica de sitio

gal

bio

Int: integrasa

gal

bio g

RECOMBINACION ESPECFICA DE SITIO

Recombinacin por integracin La homologa se limita a secuencias cortas Ej. *Integracin del fago lambda en el cromosoma de E. coli. Homologa: sitios att, integrasa: recombinasa del fago *transposicin de elementos mviles (IS, Tn) transposasa: recombinasa

Induccin de un ciclo ltico

RecA activada acta como proteasa y cliva CI (represor del fago lambda)

Tipos de transduccin
1. Generalizada 2. Especializada

Transduccin generalizada
1. Fijacin del fago a la clula 2. Inyeccin del material gentico 3. Degradacin del ADN bacteriano y replicacin del ADN del fago 4. Sntesis de las cpsides y empaquetamiento del material gentico 5. Lisis celular y liberacin de la progenie viral
fgranea

Transduccin generalizada
Partculas de transduccin generalizada No contienen ADN del fago Pueden contener: Cualquier gen cromosomal de la dadora Plsmido

Destino exogenote:
Degradacin por enzimas de restriccin Recombinacin generalizada u homloga, cromosomales Replicacin autnoma (plsmido)

entre

genes

TRANSDUCCION ESPECIALIZADA
Dadora: 1rociclo lisognico, 2do ciclo ltico

Transduccin especializada
1. Clula lisognica 2. Circularizacin y escisin del ADN del fago 3. Escisin anormal, algunos genes bacterianos han sido tomados junto al ADN del fago 4. Degradacin del ADN bacteriano y replicacin del genoma viral 5. Sntesis de las cpsides y empaquetamiento del material gentico 6. Lisis celular y liberacin de la progenie viral
fgranea

Recombinacin especfica de sitio

Partculas de transduccin especializadas

Transduccin especializada
Transferencia de un limitado grupo de genes que flanquean la regin donde se integra el fago Fagos temperados pueden insertarse en sitios especficos del genoma bacteriano Fagos de transduccin especializada surgen con una frecuencia muy baja

Fagos de transduccin
A. Fagos de Transduccin Generalizada: se forman en un cliclo
ltico cuando el ADN bacteriano es encapsidado por error en una partcula viral - Pueden contener cualquier porcin del ADN bacteriano (P22 de Salmonella typhimurium y el P1 de Escherichia coli)

B. Fagos de Transduccin Especializada: se forman cuando el

ADN fgico pasa del ciclo lisognico al ltico, escindindose del cromosoma y llevando secuencias del ADN bacteriano prximas a los sitios de insercin. Baja frecuencia. -Contienen un fragmento especfico del DNA bacteriano (ejs. o 80)

TRANSDUCCION
Bacterias Dadora y Receptora deben poseer Receptores para el fago
GENERALIZADA Dadora: ciclo ltico Cualquier gen cromosomal o plsmido ESPECIALIZADA Dadora: 1rociclo lisognico, 2do ciclo ltico Genes del fago y cromosomales adyacentes al sitio de insercin del fago Destino exogenote: Degradacin por Enzimas de restriccin Recombinacin homloga o especfica de sitio

Destino exogenote: Degradacin por Enzimas de restriccin Recombinacin homloga Replicacin autnoma (plsmido)

Importancia de la Transduccin
Frecuente en Bacterias Gram+ Conversin fgica ( transduccin especializada)
-fago temperado lisogeniza una clula y pasa a profago, confiriendo inmunidad a otra infeccin por el mismo tipo de fago -ocurre en la naturaleza y es fuente de cepas virulentas de bacterias -significacin evolutiva Ejemplos: -Salmonella anatum: la lisogenizacin por el fago 15 produce un cambio en la estructura de un PS de superficie -Corynebacterium diptheriae: la lisogenizacin por el fago produce la conversin de cepas no productoras de toxina a cepas productoras

Plsmidos Transposones IS

Plsmidos
- Molculas circulares de ADN extracromosmico que se duplican en forma autnoma -Episomas: plsmidos que pueden integrarse al cromosoma bacteriano

1. Conjugativos: genes tra

Factor de fertilidad (plsmido F) Factor de resistencia (plsmido R)

Transferencia por conjugacin, transformacin, transduccin generalizada 2. No conjugativos: no contienen genes tra Transferencia por transformacin o transduccin generalizada

Elementos genticos transponibles

Segmentos de ADN que pueden moverse de un lugar a otro
-TRANSPOSONES -SECUENCIAS DE INSERCION Caractersticas: Transposasa Repeticiones terminales invertidas Movimiento al azar No pueden autoreplicarse Transposicin ocurre por recombinacin especfica de sitio Transposicin puede estar acompaada de duplicacin

Elementos genticos transponibles Secuencias de Insercin

Segmentos cortos de ADN que slo portan los genes involucrados en la transposicin ( 1000 nt) ACTTACTGAT Nomenclatura: IS1 Transposasa TGAATGACTA Estructura: repeticiones terminales invertidas En plsmidos, cromosoma y ciertos bacterifagos. Variaciones en nmero y frecuencia Importancia:
- mutaciones - insercin de plsmidos

ATCAGTAAGT TAGTCATTCA

Elementos genticos transponibles Transposones

Segmentos ms largos de ADN que portan otros genes adems de los involucrados en la transposicin (700- 4000pb) Nomenclatura: Tn 5 Gen de resistencia Estructura: IS1 IS1 Significancia:
-Inactivar genes -Movimiento natural de genes de un cromosoma a otro - Frecuencia de transposicin es baja (10-5 a 10-7/gen) Importancia: Resistencia a ATB Ej. Resistencia a vancomicina de E. faecalis a S. aureus por Tn1546

Bibliografa:
Brock Biologa de los Microorganismos. 8va edicin revisada (1999). M.T. Madigan, J.M. Martinko, J. Parker. Prentice Hall Microbiologa. 5ta edicin (2002). L.M. Prescott, J.P. Harley, D. A Klein. Mc Graw Hill.