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produccion in vitro de violeta africana

produccion in vitro de violeta africana

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06/30/2013

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Zamorano
Carrera de Ciencia y Producción Agropecuaria
Laboratorio de Cultivo de Tejidos y Micropropagación
Módulo de Biotecnología Aplicada
Cultivo de Tejidos Vegetales y Propagación in vitro
5.5Organogénesis Directa
Explante:
Porciones de Lámina Foliar 
Material Vegetal:
Violeta Africana
 
(
Sainpaulia ionantha)
Introducción
En la micropropagación de violeta africana (
Saintpaulia ionantha
) y otras gesneriáceas(
 Episcia, Ajuga
) dos tipos de explante han dado buenos resultados: tejido de pecíolo y dehojas.El propósito de esta práctica de laboratorio es familiarizar a los estudiantes con los procedimientos de extracción, esterilización, y establecimiento
in vitro
de explantes devioleta africana.
Materiales y Métodos
1.Hojas maduras de violeta africana (para la práctica de establecimiento)2.Material establecido
in vitro
en etapas II ó III (para las prácticas de multiplicación y/oenraizamiento)3.Material en etapa III, listo para salir al invernadero4.Platos Petri estériles5.Pinzas y bisturíes No. 116.Solución de 70% Ethanol7.“Solución desinfectante” preparada con 2% Ca(OCl) (hipoclorito de Ca) más 2 gotasde tween 80 por cada 100 ml de solución.8.Agua destilada estéril para los enjuages9.10 frascos / estudiante conteniendo medio para establecimiento de violeta (Etapa I)10.10 frascos / estudiante conteniendo medio para multiplicación / enraizamiento devioleta africana (Etapas II y III)11.Bandejas multiceldas y microinvernaderos para la práctica de aclimatación (Etapa IV)12.Macetas para la transferencia a contenedores individuales56
 
Procedimientos
1.Obtenga varias hojas maduras de violeta africana con aproximadamente 2 a 3 cm. de pecíolo.2.Coloque las hojitas en un beaker, cubra con gasa y ajuste con una banda.3.Remueva las partículas superficiales de polvo y rastros de suelo poniendo el beaker con los segmentos directamente bajo el chorro de agua de la llave durante 15 min.(usar agua fría).4.Limpie la cámara de flujo laminar y el espacio donde va a trabajar con 70% ethanol.5.Luego del enjuage bajo el agua de la llave, manipule las hojas solamente con las pinzas, no con las manos. Separe los pecíolos de las láminas y coloquelos en un beaker  para proceder a su desinfección.6.Coloque los explantes en una solución de 70% ethanol durante 15 segundos.7.Transfiera los explantes a la “solución desinfectante” y mantenga los dos tipos deexplante en esta solución durante15 minutos.8.Transfiera el beaker con las hojas y los pecíolos en la “solución desinfectante” a la
cámara de flujo laminar.
Vacíe la solución desinfectante en otro recipiente.9.Enjuague las hojas tres veces con agua destilada estéril.10.Luego del último enjuage en agua destilada estéril, coloque las hojas en un plato petriestéril conteniendo papel filtro.11.Con la ayuda de pinzas y bisturí proceda a cortar los explantes según demostración delinstructor.12.Coloque uno de los explantes de hoja en un tubo con medio. Repita para los otrostubos provistos.13.Coloque uno de los explantes de pecíolo en un tubo con medio. Repita para los otrostubos provistos.14.Sellar los tubos con parafilm y anotar la fecha y el nombre según instrucciones.15.Colocar los cultivos en el cuarto de crecimiento (16 horas luz; 25
o
C).57
 
Violeta AfricanaEtapa I (Secciones de Hoja y Peciolo)
Componente1 Litro
½ Macroelementos MS50 ml (Solución madre 10x)EDTAFeNa50 mg (5 ml de Solución madre 200x)Microelementos MS1 ml (Solución madre 1000x)Inositol100 mgAcido nicotinico0.25 mgGlicina1.0 mgTiamina0.05 mgBAP0.5 mgSacarosa30 gPhytagel3.75 g pH = 5.8
Referencia: protocolo desarrollado en el Laboratorio deCultivo de Tejidos y Micropropagación, Zamorano
Etapa II (Secciones de Hoja y Peciolo)
Componente1 Litro
½ Macroelementos MS50 ml (Solución madre 10x)EDTAFeNa50 mg (5 ml de Solución madre 200x)Microelementos MS1 ml (Solución madre 1000x)Inositol100 mgTiamina0.4 mgAIA1.0 mgSacarosa15 gPhytagel3.75 g pH = 5.8
Referencia: protocolo desarrollado en el Laboratorio deCultivo de Tejidos y Micropropagación, Zamorano
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