Zamorano
Carrera de Ciencia y Producción AgropecuariaLaboratorio de Cultivo de Tejidos y Micropropagación
Módulo de Biotecnología Aplicada
Cultivo de Tejidos Vegetales y Propagación in vitro
5.7Rescate de Embriones de Orquídeas
Explante:
Embriones Cigóticos
Introducción
Las semillas de orquídeas tienen requerimientos muy particulares para su germinación por lo que la germinación
in vitro
representa una alternativa viable en su producción. Medianteel cultivo de embriones
in vitro
nosotros podemos manipular las condiciones ambientales para así asegurar un alto nivel de germinación y obtener un alto número de plantas a partir de una sola cápsula.El propósito de esta práctica es proveer al estudiante con los conocimientos y habilidadesnecesarias para poder sembrar y germinar semillas de orquídeas
in vitro
.
Materiales y Métodos
1.Cápsulas2.Cultivos establecidos en etapas II/III3.Platos petri estériles4.Pinzas y bisturíes5.Solución de 70% Ethanol6.“Solución desinfectante” preparada con 2% Ca(OCl) (hipoclorito de Ca) más 2 gotasde tween 80 por cada 100 ml de solución.7.Agua destilada estéril para los enjuages8.10 frascos / estudiante conteniendo medio sólido con Knudson fórmula “C” (KC) paragerminación de embriones (Etapa I)9.10 frascos / estudiante conteniendo medio sólido para multiplicación / enraizamientode vitroplántulas de orquideas (Etapa II / Etapa III)10.Bandejas de celdas múltiples11.Macetas63
Procedimientos
1.Obtenga la(s) cápsula(s)2.Lavar las cápsulas con jabón, brocha y agua3.Cortar la punta con cuidado4.Esterilizar la cápsula con alcohol al 70% para romper las ceras durante 30 segundos a 1minuto.5.Colocar la cápsula en Ca(OCl) (hipoclorito de calcio) al 1% + 3 gotas de tween 80 por cada 100 ml. de solucion durante 15 minutos.6.Colocar la cápsula en Na(OCl) (hipochlorito de sodio) al 2% + 3 gotas de tween 80 por cada 100 ml. de solucion durante 15 minutos.7.En la
cámara de transferencias
colocar la cápsula en un plato Petri estérilconteniendo papel filtro.8.Abrir la cápsula longitudinalmente y separar las dos mitades. Raspar las paredes de lasdos mitades para extraer la semilla.9.Colocar en los tubos con medio Knudson (KC).
Medio para Iniciación de OrquídeasMedio para Embriones de Orquídeas (Etapa I)Componente1 Litro
Ca(NO
3
)
2
.4H
2
O1000 mg(NH
4
)
2
SO
4
500 mgMgSO
4
.7H
2
O250 mgKH
2
PO
4
250 mgEDTAFeNa 50 mg (5 ml de Solución madre 200x)Microelementos MS1 mL (Solución madre 1000x)Agua de Coco100 mlSacarosa20gPhytagel3.75 g pH=5.5
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