Manual Pract Bioquimica

Manual de Prcticas de Bioqumica
Dr. Claudio Arzola M.C. Celia Holgun Licn Responsables de la elaboracin Del manual de Bioqumica
Mauricio Ramrez Ruano, D.I. Coordinador de la elaboracin de Manuales de Prcticas
MC. Javier Martnez Nevarez Presidente del H. Consejo Tcnico
Directorio
C.P. Ral Chvez Espinoza.
Rector de la Universidad Autnoma de Chihuahua
Ing. Heriberto Altes Mdina

Secretario General de la Universidad Autnoma de Chihuahua
Dr. Alfredo de la Torre Hernndez.

Director Secretario Acadmico de la Universidad Autnoma de Chihuahua
M.C. Javier Martnez Nevarez

Director de la Facultad de Zootecnia
M.C. Josefina Domnguez Holgun

Secretaria Acadmica de la Facultad de Zootecnia
Ph.D. Claudio Arzola, M.C. Celia Holgun Licn

Catedraticos de la Materia de Bioqumica
ii
Tabla de contenido
INTRODUCCIN ....................................................................................1 ENCUADRE DEL SISTEMA DE PRCTICAS .............................................2 Introduccin ..................................................................................... 2 Competencias a las que contribuye, y su ubicacin dentro del mapa curricular vigente. ................................................................................4 Niveles de Desempeo ...................................................................... 4 Programa del sistema de prcticas ......................................................6 Tema ....................................................................................................6 Prctica o prcticas programadas ........................................................6 Contenido de cada Prctica en particular ............................................9 1.1. Difusin ...................................................................................... 9 1.2. smosis y presin osmtica ...................................................... 13 1.3. Disociacin electroltica ........................................................... 15 1.4 Determinacin de la acidez general de las disoluciones .......... 17 1.5 Determinacin del pH ............................................................... 18 1.6 Preparacin de las disoluciones amortiguadoras ..................... 21 2. Carbohidratos ........................................................................... 24 2.1. Reacciones de reconocimiento de los hidratos de carbono .... 26 2.2. Prueba con naftorresorcina...................................................... 26 2.3. Monosacridos ......................................................................... 27 Aldohexosas .................................................................................... 28 2.4. Reacciones de reconocimiento le los hidratos de carbono reductores....................................................................................... 28 Prueba con el hidrxido cprico (II), reaccin de Trommer........ 28 2.5. Reaccin con el licor de Fehling .............................................. 29 2.6. Reaccin con las sales de bismuto.......................................... 30 2.7. Reaccin con fenilhidrazina ..................................................... 31 2.8. Reaccin de reconocimiento de la sacarosa .......................... 32 2.9. Reacciones de fermentacin de los hidratos de carbono ..... 33 2.10. Reacciones coloreadas del almidn ....................................... 34 2.11 Hidrlisis acida escalonada del almidn ................................ 35
Pgina iii
2.12. Hidrlisis enzimtica del almidn .......................................... 37 2.13 Reaccin del glicgeno con el iodo........................................ 38 Reconocimiento del glicgeno en los tejidos animales .................. 38 3. Los lpidos y su metabolismo.................................................... 41 Los lpidos y sus metabolitos .............................................................. 42 Glicridos (grasas) .......................................................................... 42 Reacciones de reconocimiento de las grasas.................................... 43 3.1. Reaccin de la grasa y el aceite con el Sudn III ..................... 43 3.2. Determinacin de la glicerina en las grasas............................. 44 3.4. Solubilidad de las grasas ......................................................... 44 3.5. Determinacin de la temperatura de fusin ............................. 45 3.6. Determinacin del nmero acdico .......................................... 46 3.7. Determinacin del ndice de iodo ............................................ 47 3.8. Determinacin del nmero (ndice) de saponificacin .............. 48 3.9. Determinacin cuantitativa de la grasa en el hgado ........... 49 4. Enzimas......................................................................................... 52 4.1 La labilidad trmica de las enzimas ......................................... 55 4.2 Influencia del pH sobre la actividad de las enzimas................. 56 4.3 Especificidad de las enzimas.................................................... 57 4.4 Influencia de los activadores e inhibidores ............................. 58 4.5 Determinacin de la actividad de la dehidrogenasa de cido succnico ........................................................................................ 59 BIBLIOGRAFIA .................................................................................... 61 ANEXOS .............................................................................................. 62 NORMAS GENERALES DE SEGURIDAD E HIGIENE........................... 62
iv
INTRODUCCIN
Este manual esta diseado para estudiantes de zootecnia y veterinaria, pudiendo tambin ser usado por otros tcnicos. Esta destinado a servir de complemento a la materia de bioqumica de la carrera de Ingeniero Zootecnista en Sistemas de Produccin de la Facultad de Zootecnia de la Universidad de Chihuahua, pero podr, mediante adaptaciones y modificaciones leves, ser usado en cualquier carrera afn.
Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holgun Licn Facultad de Zootecnia Universidad Autnoma de Chihuahua Pagina 1
ENCUADRE DEL SISTEMA DE PRCTICAS

Introduccin
Como estudiante de zootecnia, seguramente debes de tener en cuenta que la produccin pecuaria en Mxico tiene que ser competitiva y sustentable. Junto con otras cosas, es necesario que los zootecnistas tengan una mayor especializacin en relacin a otras carreras que usan la bioqumica. Lo anterior seguramente propiciar una educacin de profesionistas que puedan resolver problemas, por las competencias que sta promueva en los estudiantes. Tambin es necesario tener en cuenta que las unidades de produccin cuentan con laboratorios cada vez mas equipados. Es sabido que el incremento de la produccin pecuaria solo puede ser basado en prcticas de produccin intensiva, con miras a lograr una mayor productividad por cabeza con aplicacin econmica de insumos. Generalmente esto solo puede ser logrado mediante el incremento del nmero de cabezas, mejor gentica o seleccin, uso de mayor mecanizacin y sobre todo, la introduccin de tecnologa moderna. Por lo tanto, este manual se dirige a estudiantes de zootecnia y veterinaria, los cuales tienen en su curricula la materia de bioqumica. Existen numerosos manuales de laboratorio para esta materia, pero por lo general estn dirigidos a profesionales de la qumica. Por lo general, se enfatiza en la enseanza y prctica de mediciones cuantitativas, aislamiento y separacin de protenas, ensayo de reacciones enzimticas, manipulacin de ADN recombinante, y el uso de PCR en el campo forense. La experiencia de muchos aos en la docencia de la bioqumica en la Facultad de Zootecnia de la Universidad Autnoma de Chihuahua me ha demostrado que dicho enfoque no es el ptimo para un profesional de la zootecnia. Dado que en lo general el conocimiento de la bioqumica prepara al estudiante para tener competencias en el rea de la alimentacin animal, es necesario que adquieras una proeficiencia en el uso de los conceptos bioqumicos que soportan los trabajos terico-prcticos de esta disciplina.
Manual del laboratorio de Bioquimica Encuadre.
Pagina 3
Sin embargo, existe una tendencia a enmarcar dichos conocimientos solamente en aspectos solamente en aspectos tales como el anlisis de alimentos, determinacin de txicos y conocimientos afines, dejando vacos en campos emergentes de la bioqumica como lo es la biotecnologa. Es por eso que el presente manual se ha diseado con el propsito de fomentar no solo el conocimiento inherente al quehacer de la bioqumica, sino que tambin puede usarse en labores de investigacin en asignaturas diferentes a la bioqumica, y te da herramientas docentes, amen de prepararte para eventuales empleos en laboratorios comerciales o de certificacin o trazabilidad de productos pecuarios. Otra de las variantes es que contiene materiales relativos a fsico-qumica y qumica coloidal, lo cual esta ausente en este tipo de publicaciones. El plan general del manual contempla la referencia a los fundamentos tericos de la qumica y metabolismo de las sustancias en estudio. Dado que el estudiante deber presentar un protocolo y un informe para cada prctica, se describe el anlisis en una manera lo ms completa posible, con el nimo de que el estudiante tenga un margen amplio de independencia, y facilitar el desarrollo de competencias en el mismo. Se da un enfoque acerca de la finalidad del anlisis, con lo que se pretende reforzar la enseanza de la materia.
Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holgun Licn Facultad de Zootecnia Universidad Autnoma de Chihuahua
Competencias a las que contribuye, y su ubicacin dentro del mapa curricular vigente.
Niveles de Desempeo
El conjunto de prcticas del presente manual te permitir llegar a un desempeo de nivel 4 de acuerdo la clasificacin de CONOCER, a saber Nivel 4.- Se desarrollan un conjunto de actividades de naturaleza diversa, en las que se tiene que mostrar creatividad y recursos para conciliar intereses. Se debe tener habilidad para motivar y dirigir grupos de trabajo. Las razones por las que asumimos que obtendrs un nivel de desempeo tan alto son: 1. La realizacin de las prcticas en forma y tiempo presupone el dominio de diferentes habilidades y conocimientos. 2. La elaboracin de un protocolo y un informe por prctica requiere de disciplina y laboriosidad, as como la utilizacin de herramientas computacionales. 3. Las prcticas debern ser realizadas en equipo, lo que requiere de la participacin armnica de los elementos. La capacidad de liderazgo deber ser usada en forma ptima para realizar los diversos pasos de la prctica.
SOCIEDAD Y CULTURA 3-2-0 5 CREDITOS 203
UNIVERSIDAD Y CONOCIMIENTO 3-2-0 5 CREDITOS 210
SOCIOLOGIA Y DESARROLLO 2-2-0 4 CREDITOS
SEMINARIO DE INVESTIGACION 3-2-0 5 CREDITOS 457
FORMACION DE EMPRENDEDORES 3-2-0 5 CREDITOS 303
FORMULACION Y EVALUACION DE PROYECTOS 2-2-0 4 CREDITOS 856
PRACTICAS PROFESIONALES 10 CREDITOS
SERVICIO SOCIAL 30 CREDITOS
ECONOMIA AGROPECUARIA 4-0-0 4CREDITOS 266 MATEMATICAS 3-2-0 5 CREDITOS 101
LENGUAJE Y COMUNICACIN 3-2-0 5 CREDITOS 209
CONTABILIDAD AGROPECUARIA 3-1-0 4 CREDITOS 332 TECNICAS DE MUESTREO 4-1-0 5 CREDITOS 502
ADMINISTRACIN DE EMPRESAS AGROPECUARIAS 3-2-0 5 CREDITOS 433
ADMINISTRACION ESTRATEGICA 3-1-0 4 CREDITOS 503
MERCADEO DE PRODUCTOS PECUARIOS 3-2-0 5 CREDITOS 633
DIRECCION DE AGRONEGOCIOS 3-3-0 6 CREDITOS 802
ESTADISTICA 3-0-1 4 CREDITOS 201
TECNOLOGIAS Y MANEJO DE LA INFORMACION 3-2-0 5 CREDITOS 136 ANATOMIA FUNCIONAL 4-0-2 6 CREDITOS 106
MANEJO DE BASE DE DATOS 0-4-0 4 CREDITOS 206
CONTROL DE CALIDAD 2-2-0 4 CREDITOS 607
REPRODUCCION ANIMAL 3-3-0 6 CREDITOS 501
GENETICA GENERAL 3-1-0 4 CREDITOS 556
ADMINISTRACION DE RECURSOS HUMANOS 3-1-0 4 CREDITOS 702
MEJORAMIENTO ANIMAL 3-2-0 5 CREDITOS 431
SISTEMAS DE PRODUCCION OVI-CAPRINO 3-3-0 6 CREDITOS 614 SISTEMAS DE PRODUCCION DE BOVINOS DE CARNE I 3-3-0 6 CREDITOS 603 SISTEMAS DE PRODUCCION DE ESPECIES MENORES 3-3-0 6 CREDITOS 605 SISTEMAS DE PRODUCCION DE BOVINOS DE LECHE I 3-3-0 6 CREDITOS 631
SISTEMA DE PRODUCCION AVICOLA 3-3-0 6 CREDITOS 801
FISIOGIA DE LOS PROCESOS PRODUCTIVOS 4-0-2 6 CREDITOS 235
FISIOLOGIA DE LA REPRODUCCION 3-3-0 6 CREDITOS 356 INGENIERIA EN SISTEMAS DE PRODUCCION 3-3-0 6 CREDITOS 507
SISTEMA DE PRODUCCION DE PORCINOS 3-3-0 6 CREDITOS 805 SISTEMAS DE PRODUCCION DE BOVINOS DE CARNE II 3-3-0 6 CREDITOS 733 SISTEMAS DE PRODUCCION DE BOVINOS DE LECHE II 3-3-0 6 CREDITOS 701
INTRODUCCION A LOS SISTEMAS DE PRODUCCION 2-3-0 5 CREDITOS 104
MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA 4-2-0 6 CREDITOS 335
SANIDAD ANIMAL 3-3-0 6 CREDITOS 465
SISTEMAS DE PRODUCCION EQUINA 3-1-0 4 CREDITOS 735
QUIMICA ORGANICA 4-0-2 6 CREDITOS 234
BIOQUIMICA 4-0-2 6 CREDITOS 334

ECOLOGIA VEGETAL 3-3-0 4 CREDITOS 225
NUTRICION ANIMAL 3-3-0 6 CREDITOS 506
ALIMENTACION DE NO RUMIANTES 3-2-0 5 CREDITOS 544
ALIMENTACION DE RUMIANTES 3-2-0 5 CREDITOS 634
ECOLOGIA BASICA 3-1-0 4 CREDITOS 105
ECOLOGIA ANIMAL 3-3-0 6 CREDITOS 305
TOPOGRAFIA 3-3-0 6 CREDITOS 461
MANEJO DE PASTIZALES 3-3-0 6 CREDITOS 434
HIDRAULICA APLICADA A LA PRODUCCION 3-2-0 5 CREDITOS 661
MANEJO DE FAUNA SILVESTRE 3-3-0 6 CREDITOS 834
CLIMA Y AMBIENTE 4-2-0 6 CREDITOS 223
BOTANICA SISTEMATICA 3-3-0 6 CREEDITOS 126
AGROSTOLOGIA 3-3-0 6 CREDITOS 302
CONSERVACION DE SUELO Y AGUA 3-3-0 6 CREDITOS 452
PERCEPCION REMOTA Y CARTOGRAFIA 3-3-0 6 CREDITOS 325
MANEJO DE RECURSOS FORRAJEROS 3-3-0 6 CREDITOS 652
TECNOLOGIA Y PROCESADO DE LA CARNE 3-3-0 6 CREDITOS 753 ANALISIS SENSORIAL 3-3-0 6 CREDITOS 709
VALORES DEL EJERCICIO PROFECIONAL 4-0-0 4 CREDITOS 806
ORIGEN Y CRECIMIENTO DE ANIMALES DOMESTICOS

3-3-0
6 CREDITOS 208
BIOQUIMICA DE LOS ALIMENTOS DE ORIGEN ANIMAL 3-3-0 6 CREDITOS 308
MICROBIOLOGIA Y DETERIORO DE PRODUC. DE ORIGEN ANIMAL

3-3-0
SEGURIDAD E HIGIENE INDUSTRIAL 3-3-0 6 CREDITOS 726
TECNOLOGIA DE SUBPRODUCTOS DE ORIGEN ANIMAL 3-3-0 6 CREDITOS 437 IMPACTO AMBIENTAL Y RESIDUOS 3-3-0 6 CREDITOS 627
6 CREDITOS 508
TECNOLOGA Y PROCESADO DE LA LECHE 3-3-0 6 CREDITOS 831
ACREDITACION DEL IDIOMA INGLES I 3 CREDITOS
ACREDITACION DEL IDIOMA INGLES II 4 CREDITOS
ACREDITACION DEL IDIOMA INGLES III 4 CREDITOS
ACREDITACION DEL IDIOMA INGLES IV 4 CREDITOS
SISTEMAS DE CONTROL SANITARIO 3-2-0 5 CREDITOS 512
DISEO HIGIENICO Y NORMATIVIDAD DE PLANTAS 2-3-0 5 CREDITOS 710
ANALISIS DE RIESGO 3-3-0 6 CREDITOS 725
Programa del sistema de prcticas

Tema Prctica o prcticas programadas mbitos de desarrollo Duracin en horas para cada prctica, y semana del semestre en que se realizar
1.1. Difusin 1.2. smosis y presin osmtica 1.3. Resistividad osmtica de eritrocitos 1. Introduccin y agua 1.4. Disociacin electroltica 1.5. Determinacin de la acidez general 1.5. Determinacin del pH 1.6. Preparacin de soluciones amortiguadoras 2. Carbohidratos 2.1. Reconocimiento de carbohidratos 2.2. Carbohidratos reductores 2.3. Reconocimiento de la sacarosa 2.4. Fermentacin 2.5. Hidrlisis del almidn 2.6. reconocimiento de glucgeno en tejidos Laboratorio Laboratorio
6 horas 1-3 semana
6 horas 4-6 semana
Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holgun Licn Facultad de Zootecnia Universidad Autnoma de Chihuahua Pgina 6
Manual del laboratorio de Bioquimica 3. Lpidos 3.1. Reconocimiento de grasas 3.2. Determinacin de glicerina 3.3. Constantes de las grasas 3.4. Cuantificacin de las grasas 3.5. Reacciones del colesterol 4. Enzimas 4.1 La labilidad trmica de las enzimas 4.2 Influencia del pH sobre la actividad de las enzimas 4.3 Especificidad de las enzimas 4.4 Influencia de los activadores e inhibidores Determinacin de la actividad de las enzimas Oxidorreductasas 4.5 Determinacin de la actividad de la dehidrogenasa de cido succnico
Prcticas
Pagina 7 6 horas 7-9 semana
6 horas 10-11 semana
Serie de Prcticas 1 Qumica Fsica
C. Arzola, C. Holgun
Facultad de Zootecnia, UACh 8
Febrero 2006
Contenido de cada Prctica en particular

1.1. Difusin
Facultad de Zootecnia, Universidad Autnoma de Chihuahua Responsable: Dr. Claudio Arzola lvarez Nmero de alumnos por prctica: Tres Propsito de la prctica: Al terminar esta prctica, sers capaz de entender el concepto de difusin qumica, y relacionarlo con los diversos aspectos de la prctica profesional de la zootecnia. Este concepto es fundamental para entender los principios del movimiento de las molculas en disolucin, lo que te permitir tener una visin integradora y real de las caractersticas funcionales de las mezclas. Al mismo tiempo, tendrs la habilidad de elaborar un protocolo para emprender el estudio sistemtico de un fenmeno complejo, lo que te capacitar para planear adecuadamente dicho tipo de acciones, adems de ser un instrumento de comunicacin adecuada con colaboradores y colegas, puesto que la prctica se llevar a cabo en grupo. Sin embargo, el protocolo deber ser entregado en forma individual para su evaluacin. Al terminar, debers entregar un informe del desarrollo y resultados de la prctica, el cual deber ser individual. En caso de presentarse duplicidad del informe con otros del grupo o de otros grupos, obtendrs menor calificacin. Puesto que el desarrollo de esta prctica se considera una actividad integradora, debers de observar una conducta adecuada durante la misma, con actitudes de respeto a tus compaeros y maestros. La pulcritud y el orden ser un factor que te permita desarrollar la habilidad requerida para el desarrollo de este tipo de actividades, con miras a que tu posterior desempeo profesional sea de alto nivel.
Manual del laboratorio de Bioquimica Qumica fsica
Quimica Fisica
Pagina 10
Propiedades cintico-moleculares de las disoluciones diluidas Difusin1 Las disoluciones diluidas poseen capacidad de nivelar la concentracin en todo su volumen. Este proceso se realiza a travs del movimiento trmico de las molculas de sustancia disuelta y de disolvente, que conduce a la penetracin mutua de las molculas. Tal fenmeno obtuvo el nombre de difusin. Ella puede observarse si sumergimos cristales de sustancias coloreadas en un disolvente puro. Instrumentos: Cilindros de vidrio incoloro de 250 ml. Pinzas. Reactivos: Cristales grandes de permanganato potsico, bicromato potsico, cristal violeta o de otras sustancias coloreadas. Vidrio soluble. Marcha d los trabajos. Un cristal de sustancia coloreada se sumerge y se mantiene durante varios segundos en vidrio soluble, luego se traslada a un cilindro con agua. A medida que el vidrio soluble se disuelve, las partculas de la sustancia se difunden paulatinamente en el cilindro por todo el volumen del disolvente, coloreando uniformemente la disolucin del color correspondiente. La velocidad de difusin en este proceso es inversamente proporcional a las dimensiones sustancia disuelta. Influencia de la temperatura sobre la velocidad de difusin La causa de la difusin es el movimiento trmico de las molculas. Con el crecimiento de la temperatura de la disolucin, la velocidad de difusin, por lo comn, aumenta. Instrumentos. Hornillo elctrico. Vasos qumicos de 250 500 ml. Soporte con sujetadores. Tubos do vidrio con dimetro de 3 a 5 mm y longitud de 30 a 40 mm. Soportes blancos para los vasos. Reactivos. Cristales de permanganato potsico u otra sustancia coloreada. Marcha de los trabajos. En dos vasos se vierten de 250 a 300 ml de agua en cada uno. Un vaso se coloca sobre hornillo elctrico y se calienta hasta la ebullicin. Luego ambos vasos, colocados sobre soportes blancos, se introducen los tubos de de la molcula de la
Adaptado de PRACTICAS DE BIOQUMICA DEL GANADO Y AVES DE CORRAL, 1984. A.V. CHECHETKIN et. al. Editorial MIR, Mosc.
1
Manual del laboratorio de Bioquimica
Quimica Fisica
Pagina 11
vidrio de tal modo que stos se siten en centro del vaso sin llegar al fondo en unos 10 12 mm. Los tubos se sujetan en el soporte y a travs de ellos se dejan caer simultneamente en cada vaso (con agua caliente y fra) los cristales de KMnO4. En el vaso con agua caliente KMnO4 se disuelve, formando muy rpidamente una disolucin uniformemente coloreada. En el vaso con agua fra la difusin transcurre lentamente. El experimento sirve de prueba del movimiento trmico de las molculas en que se basa la difusin e ilustra claramente que la velocidad de movimiento de las molculas crece considerablemente con el aumento de la temperatura de disolucin, lo que hace la difusin ms pronunciada. muy
Sistema de evaluacin
Al final de cada prctica, se revisar tu desempeo mediante la revisin de los siguientes puntos:
Actividad Trajiste el protocolo de tu prctica en forma completa? Utilizaste material de proteccin, lentes, guantes de asbesto, bata? Preparaste los reactivos en forma anticipada? Limpiaste el equipo y material una vez finalizada la prctica? Dispusiste de los desechos de cmo indica el manual? Entregaste el reporte de la prctica pasada? Evaluacin alumno Evaluacin instructor Final Observaciones
Quimica Fisica
Pagina 12
Reporte escrito. En cada prctica se deber elaborar un reporte escrito, el cual deber entregarse a la fecha siguiente de la prctica. El informe deber ser elaborado en forma individual y presentado en forma impreso y digital. Mtodo de asignacin de calificaciones. Tu calificacin ser resultado de los siguientes factores:
1. Protocolo 2. Reporte 3. Desempeo en el laboratorio Total 30% 30% 40% 100%
Para aprobar la asignatura, el alumno deber presentar cuando menos el 80% de las prcticas realizadas. Sin embargo, para el clculo de la calificacin final se tomar en cuenta el total de las prcticas.
Quimica Fisica
Pagina 13
1.2. smosis y presin osmtica

La difusin en las disoluciones puede ser directa o indirecta. En el caso de la difusin indirecta las partculas de soluto y del disolvente encuentran un tabique orgnico permeable (por ejemplo, de colodin) y lo atraviesan libremente. Sin embargo, si entre el disolvente puro y la disolucin est puesto el as llamado tabique semipermeable, entonces a travs de este ltimo pueden penetrar slo las molculas del disolvente. La difusin unilateral del disolvente a travs del tabique semipermeable se denomina osmosis. En su movimiento, las molculas del disolvente al encontrar un tabique semipermeable, lo atraviesan libremente, mientras que las molculas del soluto encontrndose en estado de movimiento trmico, dan contra el tabique semipermeable, chocan contra l, creando as cierta presin. Tal presin se denomina osmtica. La presin osmtica se combina como la suma de los choques que le tocan a una superficie determinada del tabique semipermeable en la unidad de tiempo. La magnitud de la presin osmtica se expresa en pascales (Pa) *). La presin osmtica juega un papel importante en los procesos fisiolgicos de los organismos vegetales y animales. Slo en las condiciones de isotona en la sangre, los lquidos intertisulares y las clulas pueden verificarse normalmente los procesos bioqumicos y fisiolgicos. La elevacin de la presin osmtica en los tejidos conduce a los edemas, la disminucin de la presin osmtica en la sangre trae como resultado la hemlisis de los eritrocitos. Muchas enfermedades de los rganos internos (los riones, el corazn, los pulmones) estn acompaadas por el aumento de la presin osmtica en la sangre. Al crecer la presin osmtica en las aguas del suelo, se empeora considerablemente el suministro de agua a las plantas y stas se secan rpidamente y perecen. Determinacin de la resistividad osmtica de eritrocitos (ROE) Por resistividad osmtica de los eritrocitos so entiende la estabilidad de los eritrocitos contra la hemlisis bajo la accin de disoluciones hipotnicas de cloruro sdico. Es conocido que en la formacin de la envoltura de los eritrocitos participan, junto con otras sustancias, la lecitina y el colesterol. En la envoltura de los eritrocitos jvenes prevalece la lecitina, mientras que en la envoltura de los eritrocitos viejos, el Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holgun Licn Facultad de Zootecnia Universidad Autnoma de Chihuahua
Quimica Fisica
Pagina 14
colesterol. Por lo tanto los eritrocitos jvenes son ms propensos a la hemlisis que los viejos. Si los procesos de formacin de la sangre transcurren en el organismo normalmente y los eritrocitos no se destruyen prematuramente, entonces en la determinacin de la ROE de la sangre de tal organismo el inicio y el final de la hemlisis son muy extendidos. Cuando la formacin de la sangre est perturbada y los eritrocitos jvenes no se suministran a la sangre, entonces la hemlisis de tal sangre empieza con concentraciones de las disoluciones de cloruro sdico relativamente bajas. Si los eritrocitos en el organismo por alguna razn se destruyen rpidamente, es decir, la sangre contiene solamente eritrocitos jvenes, la hemlisis de tal sangre empieza y termina a concentraciones relativamente altas de cloruro sdico en la disolucin 0,7 a 0,6%). Instrumentos. Centrfuga. Probetas de centrfuga. Pipeta graduada de 1 ml. Pipeta de 5 ml. Reactivos. Disolucin de cloruro sdico al 1%. Sangro tratada con citrato. Marcha de los trabajos. Se preparan previamente disoluciones de cloruro sdico de distintas concentraciones. En probetas de centrfuga, numeradas de antemano se mezcla una disolucin de cloruro sdico al 1% con agua segn el esquema siguiente: (de
Luego en cada probeta se agrega 0.2 ml de sangre. Las probetas se agitan y se dejan durante 10 min en el soporte, luego se centrifugan durante un tiempo de 5 a 10 min a 15 mil r.p.m. Al terminar la centrifugacin, se detectan las probetas en las cuales la hemlisis acaba de iniciarse, y aquellas donde sta se realiz hasta el final. De indicador del inicio de la hemlisis sirve la coloracin roja del lquido sobre el precipitado en presencia de un sedimento de eritrocitos no hemolizados. La hemlisis completa se
Quimica Fisica
Pagina 15
detecta en las probetas donde el lquido est coloreado de un color rojo en ausencia del sedimento de eritrocitos.
1.3. Disociacin electroltica

La disociacin electroltica es la descomposicin espontnea del electrolito en la disolucin, en partculas con cargas elctricas (iones). La disociacin electroltica se expresa de una manera ms pronunciada en aquella disolucin en que el disolvente posee la mayor constante dielctrica, es decir, el disolvente puede disminuir con la mayor fuerza la interaccin entre las partculas de cargas opuestas (iones). El agua es tal disolvente. En consecuencia, en el agua la disociacin electroltica se verifica en el mayor grado. Por grado de disociacin electroltica se entiende la proporcin entre las molculas disociadas y no disociadas. El grado de disociacin depende de la naturaleza del disolvente y del soluto, de la concentracin de la disolucin, temperatura, presencia en la disolucin de otros electrlitos con ion anlogo. Los iones que se forman en el proceso de disociacin electroltica aumentan la concentracin general de las partculas del soluto y con esto elevan el efecto osmtico de las disoluciones. Adems, los iones comunican a las disoluciones una actividad qumica ms alta y las dotan de una actividad biolgica, es decir, las disoluciones de los Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holgun Licn Facultad de Zootecnia Universidad Autnoma de Chihuahua
Quimica Fisica
Pagina 16
electrlitos al actuar sobre las clulas, rganos y organismos enteros, pueden elevar o disminuir su actividad fisiolgica. La accin aislada de ciertos iones sobre los organismos unicelulares tiene comnmente como resultado la muerte rpida de los ltimos debido a su hiperexcitacin o depresin excesiva. As, los iones formados durante la disociacin de las sales potsicas y sdicas causan una fuerte excitacin de las clulas y su muerte posterior a consecuencia de la hiperexcitacin; los iones surgidos en la disociacin de las sales de calcio y magnesio opresan las funciones de las clulas y en el caso de accin prolongada, causan su muerte. La mezcla de iones monovalentes y bivalentes tomados en una proporcin estrictamente determinada no provoca desviaciones en el estado fisiolgico de la clula. En tal mezcla tiene lugar la supresin mutua de la accin txica de los iones debido al antagonismo inico. Disoluciones isotnicas que contienen sales de metales mono y bivalentes tomadas en una proporcin determinada y que no poseen accin txica sobre el organismo obtuvieron el nombre de disoluciones equilibradas o fisiolgicas. Como ejemplo de tales disoluciones puede servir la disolucin de Ringer, de RingerLokk o de Ringer Tirrode (tabla 2). Las disoluciones fisiolgicas se utilizan en los experimentos con los cultivos de rganos y tejidos para el estudio de los procesos bioqumicos y fisiolgicos en estos cultivos, como tambin para la preparacin de los medios nutritivos en la prctica bacteriolgica y para las inyecciones intravenosas.
Quimica Fisica
Pagina 17
1.4 Determinacin de la acidez general de las disoluciones

La acidez general de una disolucin se expresa por el nmero de equivalentes gramo de lcali consumidos para la valoracin de un litro de disolucin a investigar. Ella indica la cantidad sumaria de sustancias que reaccionan como cidos presentes en la disolucin, y no depende del grado de su disociacin. Las disoluciones de cualesquiera cidos, equivalentes en concentracin, tienen la misma acidez general. Instrumentos. Pipetas de 5 y 10 ml. Matraces de 50 100 ml. Bureta Reactivos. Acido clorhdrico, 0.1 N. Acido actico, 0.1 N. Hidrxido sdico, 0.1 N. Fenolftaleina. Marcha de los trabajos. Se miden exactamente 5 10 ml de cido clorhdrico, se vierten en un matraz, se aaden 2 3 gotas de fenolftalena y la disolucin se valora de una bureta graduada, con una disolucin de lcali hasta la aparicin de una coloracin rosa. La valoracin se repite y, para el clculo, se toma el valor promedio Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holgun Licn Facultad de Zootecnia Universidad Autnoma de Chihuahua
Quimica Fisica
Pagina 18
aritmtico. Las diferencias entre los resultados de la valoracin no deben sobrepasar 0.1 ml. De la misma manera se determina la acidez general de la disolucin del cido actico. El clculo de la acidez general se realiza segn la frmula x = Nalc*Valc/Va partiendo de la ecuacin Nalc*Valc = Na*Va, en equivalentes gramo, Va es el volumen del cido. En el curso de determinacin de la acidez general de dos disoluciones con concentraciones equivalentes, una de cido fuerte y otra de cido dbil, se cercioran de que la acidez general no depende de la naturaleza del cido sino de su concentracin en la disolucin. La acidez general se determina corrientemente junto con la determinacin de la acidez activa de una disolucin. donde Nalc es el nmero de
equivalentes gramo de lcali, Valc es el volumen del lcali, Na es la cantidad de cido
1.5
Determinacin del pH
Por acidez activa se entiende la acidez condicionada por la concentracin de
iones hidrgeno libre en la disolucin. La acidez activa depende del grado de disociacin de los cidos presentes en la disolucin u otras sustancias que reaccionan como cidos y se caracteriza por la magnitud del pH. Para los procesos fisiolgicos tiene importancia, en primer trmino, la acidez activa del medio en que se verifican unos u otros procesos bioqumicos, es decir, de la sangre, del lquido tisular, contenido del protoplasma celular y, para los organismos protozoarios, el medio ambiente que los rodea. La acidez activa se determina por dos mtodos (que pueden tener variaciones), el colorimtrico y potenciomtrico. Determinacin potenciomtrica del pH de las disoluciones El mtodo potenciomtrico de determinacin del pH se basa en la medicin de las fuerzas electromotrices de las pilas voltaicas, preparadas a partir de las disoluciones
Quimica Fisica
Pagina 19
a investigar y de electrodos especiales. El mtodo se caracteriza por una gran precisin en la determinacin del pH de cualesquiera lquidos. Se denomina pila voltaica el aparato en que la energa qumica se convierte en elctrica. Una condicin necesaria para los electrodos de la pila voltaica es la posibilidad de verificarse en su superficie el proceso de oxido-reduccin. Se denomina fuerza electromotriz (f.e.m.) la mxima diferencia de potenciales entre los electrodos de una pila voltaica en las condiciones reversibles de su trabajo. Para la determinacin de los potenciales de electrodo o la concentracin de iones en la disolucin se emplean los electrodos estndar con una magnitud conocida del potencial de electrodo. En funcin de tales electrodos de referencia se usan los electrodos de hidrgeno, de calomelano y de quinhidrona. Electrodo de hidrgeno. El electrodo de hidrgeno consta de una placa de platino saturada de hidrgeno molecular y sumergida en una disolucin que contiene iones de hidrogeno: (Pt) H2/h+. En este sistema el platino desempea el papel de conductor de electrones y de portador del hidrgeno. Una parte de las molculas de hidrgeno que se encuentran en la placa de platino, se disocia en la disolucin suministrndola cationes hidrgeno. Si la concentracin de iones hidrgeno en la disolucin es igual a 1 in-g/1 y la presin del hidrgeno molecular es igual 0,101 MPa, entonces tal electrodo de hidrgeno se denomina normal. El potencial de un electrodo normal de hidrgeno es igual a cero.
Disoluciones amortiguadoras Las disoluciones capaces de mantener firmemente la estabilidad de la concentracin de los iones hidrgeno (pH) cuando sobre ellas actan cantidades relativamente pequeas de cido o lcali fuertes, como tambin durante la dilucin, se denominan disoluciones amortiguadoras. Esta capacidad las disoluciones la adquieren gracias a la presencia en su composicin de sustancias amortiguadoras, cuyo papel puede ser desempeado por las mezclas que constan de: 1) cidos dbiles y sales muy disociables de estos cidos; ejemplo, amortiguador de Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holgun Licn Facultad de Zootecnia Universidad Autnoma de Chihuahua el acetato es cido actico/ acetato sdico; el amortiguador de
Quimica Fisica
Pagina 20
bicarbonato es cido careo/bicarbonato sdico; el amortiguador de borato es cido brico/borato sdico. 2) bases dbiles y sales muy disociables de estas bases; ejemplo, el amortiguador amnico es hidrxido amni-oriiro amnico; 3) sales mono y bisustituidas de cidos polibsicos; por ejemplo el amortiguador de fosfato es NaH2PO4/Na2HPO4. La capacidad amortiguadora la poseen tambin los electrolitos anfteros, por ejemplo, los aminocidos, protenas y algunas otras sustancias. El pH de las disoluciones amortiguadoras depende de la proporcin en stas entre cido y sal, y a una proporcin dada siempre invariable. De aqu que, cuando se preparan las disoluciones amortiguadoras se puede calcular tericamente segn frmula e (-'cido es la concentracin del cido, Csal es la concentracin de la sal, CbasP es la concentracin de la base, K K es la constante de disociacin electroltica del cido (base). De la frmula citada se deduce que cambiando la proporcin entre las concentraciones de los componentes de la mezcla amortiguadora, es posible preparar disoluciones con diferentes pH dentro de los lmites determinados por la constante de disociacin de los cidos (bases). La dilucin do las disoluciones amortiguadoras no trae consigo la variacin de su pH, ya que la proporcin do los componentes que constituyen la mezcla amortiguadora se queda en este caso invariable. Cada disolucin amortiguadora se caracteriza por una capacidad amortiguadora determinada. Esta capacidad es la medida de la accin amortiguadora de la disolucin y se esa por el nmero de equivalentes gramo de cido o de base que. deben ser agregados a 1 l de disolucin amortiguadora para desplazar su pH en una unidad. La calidad amortiguadora de las disoluciones depende de su concentracin absoluta y con la dilucin disminuye de una manera directamente proporcional al dilucin. grado de la
Quimica Fisica
Pagina 21
1.6 Preparacin de las disoluciones amortiguadoras

Anteriormente fue indicado que el pll de las disolucin amortiguadoras depende de la naturaleza de las sustanci qumicas que constituyen la mezcla amortiguadora y de proporcin entre estas sustancias en la disolucin. Partiendo de estos hechos, puede ser preparada una serie de disolucin amortiguadoras con diferentes, pero conocidos pH. Instrumentos. Soporte con tubos de ensayo. Pipetas graduadas 10 ml. cuentagotas. Reactivos. Fosfato potsico monosustituido, disolucin 0.15 N. fosfato sdico disustituido, disolucin 0.15 M; cido actico 0.1 acetato sdico, disolucin 0.1 N. Indicador universal. Marcha de los trabajos. 1. En seis tubos de ensayo previamente numerados se vierten las disoluciones de cido actico y acetato sdico en las siguientes proporciones: Pipeta
A las mezclas preparadas se aaden 2 gotas de indicador universal y por el carcter de la coloracin se determina pH de cada mezcla. En caso de disponer de un potencimetro, se determina el pH de las mezclas preparadas por el mtodo potenciometrico. 2. Se numeran ocho tubos de ensayo y se vierten en ca uno de ellos disoluciones 0.15 M de KH2P04 en las siguientes proporciones Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holgun Licn Facultad de Zootecnia Universidad Autnoma de Chihuahua
Quimica Fisica
Pagina 22
El contenido de cada tubo de ensayo se mezcla cuidadosamente. En otros ocho tubos de ensayo numerados previamente se vierten G ml de disoluciones amortiguadoras respectivamente preparadas. Las disoluciones que se quedan en los tubos de ensayo 1 y cS se utilizan para la determinacin aproximada del p 11 con ayuda de mi indicador universal y a base de esta determinacin se selecciona un indicador unicolor apropiado del grupo de nitrofenoles, para la determinacin exacta del pH de las disoi liciones amortiguadoras preparadas. Se aade 1 ml de indicador en cada uno de los ocho tubos de ensayo que contienen 6 mi do mezclas amortiguadoras preparadas. El contenido de los tubos de ensayo se mezcla cuidadosamente y, partiendo del color que se desarrolla en el lquido, so determina el pH de cada disolucin amortiguadora, utilizando para ello los patrones estndar con los mismos indicadores. Los resultados de la determinacin del pH se anotan en la tabla indicada ms arriba.
Serie de Prcticas 2 Carbohidratos
Facultad de Zootecnia, UACh
febrero 2006
2.
Carbohidratos
Facultad de Zootecnia, Universidad Autnoma de Chihuahua Responsable: Dr. Claudio Arzola Alvarez Nmero de alumnos por prctica: Tres Propsito de la prctica: Al terminar esta prctica, sers capaz de entender la
naturaleza de los carbohidratos y la importancia prctica del conocimiento de los mismos, incluyendo la determinacin cualitativa y cuantitativa de algunos de los mas importantes. Al mismo tiempo, tendrs la habilidad de elaborar un protocolo para emprender el estudio sistemtico de un grupo de sustancias que constituyen la mayor parte de la dieta de los rumiantes, siendo dicho protocolo adems un instrumento de comunicacin adecuada con colaboradores y colegas, puesto que la prctica se llevar a cabo en grupo. Sin embargo, el protocolo deber ser entregado en forma individual para su evaluacin. Al terminar, debers entregar un informe del desarrollo y resultados de la prctica, el cual deber ser individual. En caso de presentarse duplicidad del informe con otros del grupo o de otros grupos, obtendrs menor calificacin. Puesto que el desarrollo de esta prctica se considera una actividad integradora, debers de observar una conducta adecuada durante la misma, con actitudes de respeto a tus compaeros y maestros. La pulcritud y el orden ser un factor que te permita desarrollar la habilidad requerida para el desarrollo de este tipo de actividades, con miras a que tu posterior desempeo profesional sea de alto nivel.
Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holgun Licn Facultad de Zootecnia Universidad Autnoma de Chihuahua Pgina 24
Carbohidratos
Pagina 25
Carbohidratos2
Los hidratos de carbono pertenecen a los compuestos poli-funcionales que contienen grupos carbonilo (aldehilico o cetnico) y grupos hidroxilo alcohlicos. Por lo tanto, ellos poseen simultneamente propiedades de aldehidos o catonas y de alcoholes polihidroxlicos. Los hidratos de carbono comprenden un grupo amplio de compuestos naturales que se dividen en monosacridos, oligosacridos y polisacridos. Los monosacridos, segn el nmero de tomos de carbono en la molcula, se clasifican en triosas, tetrosas, pentosas, hexosas, heptosas, etc. La frmula genrica de los monosacridos es CnH2nOn. Todos los monosacridos naturales, teniendo en sus molculas tomos de carbono asimtricos, son pticamente activos y giran el plano de la luz polarizada. Los oligosacridos y polisacridos son hidratos de carbono complejos y al ser calentados con cidos diluidos o hidrolizados por enzimas, se desintegran en monosacridos. Entonces, los oligosacridos se desintegran formando varias molculas de monosacridos (dos, en el caso de disacridos; tres, en el caso de trisacridos, cuatro, para los tetrasacridos, etc.). Los polisacridos forman mediante la hidrlisis un gran nmero de molculas de monosacridos. Ellos poseen una masa molecular muy elevada, son insolubles en agua o forman disoluciones coloidales. Los hidratos de carbono estn muy difundidos en la naturaleza, sobre todo en el reino vegetal. Ellos constituyen los productos finales de la sntesis fotoqumica en las plantas verdes. Los animales, no aptos a tal acumulacin de energa solar, aprovechan las sustancias acumuladas por las plantas. Los hidratos de carbono participan en la construccin de las estructuras del organismo vivo, sirven de material para la biosntesis de los compuestos de otras clases y juegan un papel importante en la bioenergtica de la clula. Los hidratos de carbono entran en la composicin de los cidos nucleicos, las glicoprotenas, los glicolpidos y en algunas vitaminas y coenzimas.
2
Carbohidratos
Pagina 26
Como componentes integrantes de las glicoprotenas, los hidratos de carbono participan en la formacin de la capa exterior adyacente a la membrana, que desempea un papel importante en la proteccin de las clulas contra la penetracin en ellas de microorganismos y virus. Con tales hidratos de carbono estn relacionadas las propiedades inmunoqumicas de los tejidos.
2.1. Reacciones de reconocimiento de los hidratos de carbono

Reaccin con -naftol Esta reaccin es general para los hidratos de carbono y se aplica para detectar la presencia de stos en los materiales biolgicos. El quimismo de la reaccin se reduce al hecho de que mediante la accin del cido sulfrico concentrado se forma furfural a partir de las pentosas; 5-hidro-ximetilfurfural hexosas; a partir de las
Instrumentos. Soporte con tubos de ensayo. Reactivos, a- Naftol, disolucin al 0.2%. Timol, disolucin al 1% en alcohol etlico. Acido sulfrico concentrado. Sacarosa, disolucin al 1%. Marcha de los trabajos. En dos tubos de ensayo se vierten 2 ml de disolucin de sacarosa en cada uno. En el primer tubo de ensayo se aaden de 4 a 6 gotas de disolucin de -nftol y en otro, igual cantidad de disolucin de timol. En ambos tubos de ensayo se vierten con cuidado, por la pared, 1 2 ml de cido sulfrico concentrado sin mezclarlo con la capa acuosa. En el contacto de las capas aparece una coloracin violeta (en el caso de a-naftol) y roja (en el caso de timol).
2.2. Prueba con naftorresorcina

La reaccin se basa en la capacidad de los hidratos de carbono de condensarse con los sistemas aromticos, formando sustancias coloreadas. As, el cido Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holgun Licn Facultad de Zootecnia Universidad Autnoma de Chihuahua
Carbohidratos
Pagina 27
glucurnico al condensarse con naftorresorcina, forma derivados de dinaftil-metano o xantina:
Instrumentos. Soporte con tubos de ensayo. Reactivos. Glucosa, disolucin al 5%. Naftorresorcina, disolucin alcohlica al 1%. Benceno. Marcha de los trabajos. En un tubo de ensayo se vierten de 5 a 6 mi de disolucin de glucosa, se aade 1 mi de disolucin de naftorresorcina y 1 mi de cido clorhdrico concentrado. La mezcla se calienta con cuidado y se hierve durante 1 min. Luego se enfra, se le aade de 1 a 2 mi de ter o benceno y agita. La capa etrica (bencnica) se tie de color verde azulado. Igual coloracin dan la galactosa y la maosa, mientras que la xilosa y la arabinosa proporcionan una coloracin azul oscura y los cidos urnicos, una coloracin violeta. cido clorhdrico concentrado. ter.
2.3. Monosacridos
Los monosacridos en disoluciones acuosas, se encuentran en diferentes formas tautomricas, entre las cuales se establece un equilibrio dinmico:
Carbohidratos
Pagina 28
Aldohexosas
En los organismos de los animales y del hombre la glucosa la galactosa se encuentran con mayor frecuencia.
2.4. Reacciones de reconocimiento le los hidratos de carbono reductores

Los hidratos de carbono cuya molcula contiene un grupo carbonilo libre, se denominan reductores. Estos azcares en medio alcalino tienen la capacidad de oxidarse, reduciendo a su vez las sales de xido cprico (valencia +2) a sales de xido cuproso (valencia +1) a sales de plata, hasta plata metlica; las sales de xido de bismuto, hasta bismuto metlico.
Prueba con el hidrxido cprico (II), reaccin de Trommer

En disolucin alcalina los mono y disacridos reductores reducen el hidrxido cprico (II) a xido cuproso (I):
Carbohidratos
Pagina 29
Instrumentos. Soporte con tubos de ensayo. Reactivos.
Glucosa, disolucin al 1%.
Hidrxido sdico, disolucin al 10%. Sulfato cprico, disolucin al 1%. Marcha de los trabajos. En un tubo de ensayo se vierten de 1 a 2 ml de disolucin de glucosa, un volumen igual de disolucin de hidrxido sdico y, agitndolo, se aade, gota a gota, la disolucin de sulfato cprico. En presencia de la glucosa, el precipitado de hidroxido cprico (II) formado se disuelve, coloreando el lquido de color azul claro. La capa superior del lquido se calienta hasta la ebullicin. La aparicin de un precipitado amarillo (hidrxido cuproso (I)) y luego rojo (xido cuproso) indica que la reaccin de Trommer es positiva. En otro tubo de ensayo se mezclan 2 3 ml de disolucin de hidrxido sdico con varias gotas de disolucin de sulfato cprico. Disolucin de glucosa no se aade. Se forma un precipitado de hidrxido cprico de color azul claro. Al calentar esta disolucin, se forma un precipitado negro de xido cprico. Por lo tanto, en la reaccin de Trommer debe evitarse el exceso de sulfato cprico, ya que la reaccin entre el hidrato de carbono reductor y el hidrxido cprico transcurre cuantitativamente. El exceso del ltimo durante el calentamiento pierde agua y se transforma en xido cprico negro, lo que oscurece la reaccin principal y constituye un defecto del mtodo: Cu (OH)2 CuO + H2O.
2.5. Reaccin con el licor de Fehling

La reaccin con el licor o reactivo de Fehling se basa en mismo principio que la reaccin de Trommer. La diferencia consiste en que en las reacciones no se emplea hidrxido cprico libre. Este ltimo se encuentra en estado combinado y forma parte del reactivo de Fehling. El licor de fehling representa un compuesto complejo de cobre con tartrato de sodio y potasio de color azul. En su composicin ion cobre en estado de oxidacin + 2 se encuentra forma de un compuesto complejo con Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holgun Licn Facultad de Zootecnia Universidad Autnoma de Chihuahua
Carbohidratos
Pagina 30
tartratos. Por eso durante el calentamiento, incluso con exceso del reactivo dado, no se forma el precipitado negro de CuO y no oscurece la reaccin con pequeas cantidades de glucosa. Instrumentos. Soporte con tubos de ensayo. Reactivos. Glucosa, disolucin al 1%. Reactivo de Fehling (preparacin: disolucin 1. En un matraz de 500 ml se disuelven 34.65 g de cristales no aireados de vitriolo azul (CuSO4.5H2O), primero en una pequea cantidad de agua destilada y al disolverse los cristales, el volumen se lleva hasta la raya de enrase. Disolucin 2. En un matraz de 500 ml se disuelven, en pequea cantidad de agua destilada, 173 g sal de Rochelle (tartrato sodico-potsico), se aaden 62.5 g de sosa castica disuelta en 100 ml de agua destilada, se mezcla bien y el volumen se lleva hasta la raya de enrase. Antes de utilizarse las disoluciones 1 y 2 se mezclan en proporciones iguales). Marcha de los trabajos. A 1 2 ml de disolucin de glucosa se aade igual volumen de reactivo de Fehling y se agita. La capa superior del lquido se calienta hasta la ebullicin. Aparece, al igual que en la reaccin de Trommr, un precipitado amarillo de hidrxido cuproso CuOH o bien precipitado rojo de xido cuproso Cu2O.
2.6. Reaccin con las sales de bismuto

Para detectar los azcares reductores se emplean frecentemente las sales de bismuto. En la composicin del reactivo Nylander, anlogo al de Fehling, entra nitrato dibsico de bismuto que, en presencia de hidrxido sdico, forma hidrodrxido de bismuto. Este ltimo se encuentra en estado combinado con el tartrato sodo-potsico. Al reaccionar con la glucosa, el hidrxido de bismuto se reduce a bismuto metlico y el lquido adquiere color negro. Instrumentos. Soporte con tubos de ensayo. Reactivos. Glucosa, disolucin al 1%. Reactivo de Nylander (preparacin: 2 g de nitrato dibsico de bismuto y 4 g de tartrato sodo-potsico (sal de Rochelle) se disuelven en 100 ml de sosa custica al 10% y se hierven hasta disolverse la mayor parte de la sal de bismuto. El precipitado formado se enfra y se separa por filtracin). Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holgun Licn Facultad de Zootecnia Universidad Autnoma de Chihuahua
Carbohidratos
Pagina 31
Marcha de los trabajos. A 2 ml de disolucin de glucosa se aade 1 ml de reactivo de Nylander y se hierve durante 2 3 min. El lquido oscurece debido a la formacin de un precipitado negro de bismuto metlico.
2.7. Reaccin con fenilhidrazina

Una particularidad importante de los monosacridos consiste en su capacidad de entrar en reaccin con la fenilhidrazina y formar fenilhidrazonas y osazonas. La reaccin de formacin de osazonas transcurre en tres etapas. Al reaccionar los monosacridos con la fenilhidrazina, en la primera etapa se forman fenilhidrazonas solubles en agua (reaccin de sustitucin). En la segunda etapa, con la fenilhidrazonas solubles en agua (reaccin de sustitucin). En la segunda etapa, con la fenilhidrazona formada reacciona otra molcula de fenilhidrazina y, oxidndola, transforma el grupo hidroxilo en grupo carbonilo. La tercera molcula de fenilhidrazina entra en reaccin de sustitucin con el grupo carbonilo recin formado, lo que conduce a la formacin de compuestos poco solubles en agua: osazonas, que producen cristales de color amarillo, de forma caracterstica. La forma de los cristales de osazonas es variable y depende de la estructura de los monosacridos, de los cuales se forman las osazonas. Las osazonas de diferentes monosacridos se distinguen por la forma de los cristales, punto de fusin, solubilidad y actividad ptica. Por eso, estas propiedades se utilizan para aislar los monosacridos de la disolucin, como tambin para distinguir unos azcares de otros (fig. 10).
Carbohidratos
Pagina 32
2.8. Reaccin de reconocimiento de la sacarosa

La sacarosa es un disacrido no reductor y durante la hidrlisis (por cido o enzimticos) su molcula se descompone en glucosa y fructosa:
Sacarosa Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holgun Licn Facultad de Zootecnia Universidad Autnoma de Chihuahua
Carbohidratos
Pagina 33
La sacarosa da con el sulfato de cobalto en un medio alcalino un complejo de color violeta. Instrumentos. Soporte con tubos de ensayo. Reactivos. Sacarosa, disolucin al 1%. Sulfato de cobalto, disolucin al 2%. Hidrxido sdico, disolucin al 10%. Marcha de los trabajos. En un tubo de ensayo se vierten de 2 a 3 ml de disolucin de sacarosa, se aaden varias gotas de disolucin de sulfato de cobalto. Al aadir exceso de hidrxido sdico (1 mi) el lquido adquiere un color violeta.
2.9. Reacciones de fermentacin de los hidratos de carbono

La fermentacin es un proceso complejo de descomposicin de los hidratos de carbono bajo la accin de las enzimas producidas por diferentes microorganismos. En la mayora de los casos este proceso va acompaado con el desprendimiento de productos gaseosos (CO2, H2, etc.)- La fermentacin conduce, al fin y al cabo, a la formacin de productos tales como alcohol etlico, cido lctico, etc. Segn los tipos de microorganismos y de los productos finales se distinguen varias formas de fermentacin. La fermentacin alcohlica se utiliza en la industria con el fin de obtener alcohol etlico; la fermentacin lctica, en la industria alimenticia para la obtencin de diferentes productos lcteos y en la ganadera en el proceso de ensilje. La fermentacin actica, propinica, butrica, lctica tienen lugar en el rumen de los rumiantes. La fermentacin metnica produce la timpanitis (distensin) en los rumiantes. A la fermentacin alcohlica se someten solamente las hexosas a diferencia de otros monosacridos, por ejemplo, de las pentosas. Esto se aprovecha para distinguir las hexosas de las pentosas. La maltosa y la sacarosa se fermentan fcilmente con las levaduras, mientras que la lactosa no se fermenta. En las levaduras estn presentes las enzimas maltasa y sacarasa, pero no tienen la enzima lactasa. La lactosa bajo la accin de las bacterias que la desdoblan, puede someterse a la fermentacin alcohlica, lctica y butrica. Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holgun Licn Facultad de Zootecnia Universidad Autnoma de Chihuahua
Carbohidratos
Pagina 34
Polisacridos
stos son hidratos de carbono de elevado peso molecular e mediante la hidrlisis se desdoblan en gran nmero restos de monosacridos. Cada resto del monosacrido unido con los restos vecinos por enlaces glicosdicos. Por lo tanto, los polisacridos pueden considerarse como glicosdicos. Las cadenas poliglicosdicas que forman las molculas de los polisacridos pueden ser no ramificadas celulosa) o ramificadas (glicgeno). Las unidades de los inosacridos que forman parte de la composicin de la molcula del polisacrido pueden ser iguales (homopoliscrdos) diferentes (heteropolisacridos). La celulosa, el almidn y el glicgeno son homopolisacridos tpicos.
Almidn
El almidn es el producto final de la sntesis fotoqumica que se verifica en las hojas verdes, un polisacrido de reserva. Para el organismo de los animales el almidn constituye una sustancia nutritiva importante. El almidn es una sustancia heterognea. Est compuesto de dos fracciones: la amilosa (de 10 a 20%) y la amilopectina (de 80 a 90%). La amilosa incluye de 1000 a 6000 unidades de a-D-glocosa unidas por enlaces glucosdicos 1-4. Ella tiene forma de molcula alargada lineal no ramificada, es soluble en agua. La amilopectina tambin est compuesta de un gran nmero de unidades de a-Dglucosa unidas, como en la amilosa, por enlaces glucosdicos 1-4. Sin embargo, las cadenas de amilopectina son muy ramificadas y tienen en los puntos de ramificacin enlaces glucosdicos 1-6. En el agua la amilopectina se hincha y produce un engrudo.
2.10. Reacciones coloreadas del almidn

Una reaccin caracterstica para reconocer el almidn es la aparicin de una coloracin azul al combinarse con la disolucin de iodo en ioduro potsico. La reaccin de los polisacridos, en particular del almidn, con iodo es un proceso complejo. La coloracin que aparece depende de la estructura de polisacrido. En el curso de la reaccin se forma un complejo del polisacrido con iodo. Este proceso Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holgun Licn Facultad de Zootecnia Universidad Autnoma de Chihuahua
Carbohidratos
Pagina 35
es bien expresado en el caso de la amilosa. En el caso de los polisacridos de cadenas ramificadas, por ejemplo, la amilopectina y el glicgeno, junto con el proceso de formacin del complejo, tiene gran importancia tambin el proceso de adsorcin de iodo sobre la superficie de las molculas ramificadas. Se ha demostrado la relacin entre la longitud de las cadenas laterales y la coloracin resultante de la reaccin con yodo. Instrumentos. Soporte con tubos de ensayo. Reactivos. Almidn, disolucin al 1 %. Disolucin de Lugol (preparacin: en 100 ml de agua se disuelven 20 g de ioduro potsico y 10 g de iodo. Para la reaccin con el almidn la disolucin obtenida s diluye con agua destilada en proporcin 1:5). Hidrxido sdico, disolucin al 10% Alcohol etlico. Marcha de los trabajos. En un tubo de ensayo se vierten 2 3 ml de disolucin de almidn y se aade 1 gota de disolucin de Lugol. El lquido se colorea de azul. El contenido del tubo de ensay se divide en tres partes: a la primera parte se le aade 1 2 ml de disolucin de hidrxido sdico, a la segunda, 2 3 ml de alcohol etlico, la tercera parte se calienta. La coloracin desaparece siempre. En la tercera muestra la coloracin vuelve a aparecer despus del enfriamiento. Esto indica que la prueba con iodo debe realizarse slo con disolucin de almidn fra. Debido a la inestabilidad del complejo de adsorcin entre iodo y almidn, esta reaccin es sensible a la presencia de alcohol, al calentamiento y a la accin de los lcalis con los cuales el iodo forma hipoioditos.
2.11 Hidrlisis acida escalonada del almidn

En el curso del calentamiento del almidn con cido clorhdrico diluido, l se descompone con la formacin de los fragmentos de diferente tamao llamados dextrinas. stas se distinguen entre s en cuanto a la masa molecular y al carcter de la coloracin que surge al tratarlas con la disolucin de iodo. Ms abajo se da el esquema de la hidrlisis acida del almidn:
Carbohidratos
Pagina 36
Instrumentos. Soporte con tubos de ensayo. Pipetas. Reactivos. Almidn, disolucin al 1%. cido clorhdrico concentrado. Disolucin de Lugol. Papel de tornasol. Hidrxido sdico, disolucin al 10%. Licor de Fehling. Marcha de los trabajos. En un tubo de ensayo se vierten de 3 a 5 ml de disolucin de almidn y se aaden varias gotas de cido clorhdrico concentrado. Se mezcla cuidadosamente y se hierve a fuego abierto. Luego de 1 2 min iniciada la ebullicin se toma una muestra para la reaccin con iodo. Para esto se extraen varias gotas de disolucin una pipeta y se vierten en un tubo de ensayo que contenga 5 6 ml de agua destilada, se aaden 1 2 gotas de disolucin de Lugol. La coloracin violeta azul aparecida indica presencia de las amilodextrinas en disolucin. El tubo de ensayo con la disolucin de almidn se hierve 1 2 min mas y se repite la misma prueba con iodo; aparece una coloracin rojiparda condicionada Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holgun Licn Facultad de Zootecnia Universidad Autnoma de Chihuahua
Carbohidratos
Pagina 37
por la presencia de las en dextrinas. Se hierve nuevamente la disolucin y pasados 2 3 min se repiten las pruebas con iodo. El almidn se desintegra al final hasta la glucosa, produciendo como productos intermedios acrodextrinas, maltodextrinas y maltosa. La reaccin con iodo ser negativa: el lquido adquiere un color amarillo a cuenta de la coloracin de la disolucin de Lugol. El hidrolizado de almidn se neutraliza, segn un papel de tornasol, con disolucin de hidrxido sdico, se aade licor de Fehling y se calienta. Se forma un precipitado amarillo de hidrxido cuproso, o rojo, de xido cuproso que indica la presencia en la disolucin de productos de la hidrlisis que poseen propiedades reductoras.
2.12. Hidrlisis enzimtica del almidn

Bajo la influencia de la enzima amilasa el almidn se desdobla con la formacin de un disacrido, la maltosa, luego se descompone por la maltasa hasta la glucosa. Instrumentos. termmetro. Reactivos. Preparado de saliva (1 2 ml de saliva se coloca en un vaso y se diluyen 5 veces con agua destilada, se mezclan cuidadosamente). Los dems reactivos son los mismos que en el experimento anterior. Marcha de los trabajos. En un tubo de ensayo se vierten 3 a 5 ml de disolucin de almidn y se aaden 0.5 1 ml de saliva, se mezcla cuidadosamente y se pone en ei bao mara durante 10 15 min a una temperatura de 37 a 40 C. Se hacen repetidamente las pruebas con iodo; la ausencia de coloracin caracterstica demuestra que la hidrlisis ha finalizado. La presencia de la glucosa se confirma por la reaccin positiva con el licor de Fehling. Soporte con tubos de ensayo. Pipetas. Bao mara con
Glicgeno
El glicgeno sirve de reserva principal de hidratos de rbono en el organismo de los animales. l se deposita casi en todos los rganos y tejidos. El depsito principal Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holgun Licn Facultad de Zootecnia Universidad Autnoma de Chihuahua
Carbohidratos
Pagina 38
de glicgeno son el hgado (de 2 a 5%) y los msculos (de 0.5 a 2%) en los cuales esta acumulado hasta 60% de su contenido en el organismo. El glicgeno es un polmero de a-D-glucosa en que las unidades de glucosa estn unidas entre s por los enlaces glicosdicos 1-4 y 1-6; por su constitucin qumica el glicgeno se asemeja a la amilopectina. Igual que el almidn, en el curso de la hidrlisis el glicgeno da una serie de productos intermedios, las dextrinas, luego el disacrido la maltosa y, finalmente, el monosacrido la glucosa. Al aadir iodo, la disolucin de glicgeno adquiere una coloracin rojiparda de diferentes intensidades y matices, lo que depende de la estructura del glicgeno que difiere para distintas especies de animales y se determina segn al grado de ramificacin de la macromolcula.
2.13 Reaccin del glicgeno con el iodo

Instrumentos. Soporte con tubos de ensayo. Reactivos. Glicgeno, disolucin al 1%. Disolucin de Lugol. Cloruro sdico cristalino. Hidrxido sdico, disolucin al 10%.
Reconocimiento del glicgeno en los tejidos animales

Instrumentos. Soporte con probetas de centrfuga y tubos de ensayo corrientes. Pipetas. Varillas de vidrio. Vaso con hielo. Centrfuga. Bao Mara. Reactivos. Hidrxido potsico, disoluciones al 15% y al 60%. Muestra pesada de hgado (de 1.5 a 2 g). Etanol. cido clorhdrico, disolucin al 2,5%. Hidrxido sdico, disolucin al 10%. Licor de Fehling. Marcha de los trabajos. En una probeta centrfuga se ponen 1,5 2 g de hgado y se vierten 2 ml de disolucin de hidrxido potsico al 60%. La probeta se coloca en el bao mara hirviendo, el contenido de la probeta se remueve frecuentemente con una varilla de vidrio. Luego la probeta se quita del bao, se enfra y se le aaden de 8 a 10 ml de etanol. La probeta se pone en el vaso con hielo donde se mantiene durante 20 30 min. Se sedimenta el precipitado del glicgeno. ste se separa mediante la centrifugacin durante 5 10 min a 3000 r.p.m. Se extrae el lquido, que se encuentra encima del precipitado, el precipitado se disuelve en 2 ml de Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holgun Licn Facultad de Zootecnia Universidad Autnoma de Chihuahua
Carbohidratos
Pagina 39
disolucin de hidrxido potsico al 15%, se aaden 8 10 ml de etanol y la mezcla obtenida se enfra. El precipitado formado del glicgeno se separa mediante la centrifugacin. Luego el precipitado del glicgeno se hidroliza y se demuestra la presencia de la glucosa en su composicin. Para ello se aaden al precipitado 3 4 ml de disolucin de cido clorhdrico y se hierve durante 15 20 min en el bao de Mara. Acto seguido, el contenido se enfra, se neutraliza con la disolucin de hidrxido sdico, se le aade igual volumen de licor de Fehling y la mezcla se hierve. Se forma un precipitado rojo de xido cuproso .
Serie de Prcticas 3 Lpidos
febrero 2006
3.
Los lpidos y su metabolismo

Facultad de Zootecnia, Universidad Autnoma de Chihuahua Responsable: Dr. Claudio Arzola Alvarez Nmero de alumnos por prctica: Tres Propsito de la prctica: Al terminar esta prctica, sers capaz de manejar con
propiedad el anlisis de los lpidos y sustancias afines. Podras constatar algunos fenmenos de importancia en cuanto a la respuesta fsica de los lpidos y relacionar esta con fenmenos de produccin agropecuaria. Al mismo tiempo, tendrs la habilidad de elaborar un protocolo para emprender el estudio sistemtico del grupo de sustancias alimenticias que contribuyen significativamente con la aportacin energtica de las dietas de los animales con lo que logrars una eficiente comunicacin con colaboradores y colegas, puesto que la prctica se llevar a cabo en grupo. Sin embargo, el protocolo deber ser entregado en forma individual para su evaluacin. Al terminar, debers entregar un informe del desarrollo y resultados de la prctica, el cual deber ser individual. En caso de presentarse duplicidad del informe con otros del grupo o de otros grupos, obtendrs menor calificacin. Puesto que el desarrollo de esta prctica se considera una actividad integradora, debers de observar una conducta adecuada durante la misma, con actitudes de respeto a tus compaeros y maestros. La pulcritud y el orden ser un factor que te permita desarrollar la habilidad requerida para el desarrollo de este tipo de actividades, con miras a que tu posterior desempeo profesional sea de alto nivel.
Lpidos
Pagina 42
Los lpidos y sus metabolitos

Glicridos (grasas)3
Se denomina lpidos un grupo numeroso de sustancias constituidas como los esteres y caracterizadas por su solubilidad en disolventes orgnicos y por su insolubilidad en agua. A ellos pertenecen los glicridos (grasas), las ceras, los esterles (estearinas), fosfolpidos y glicolpidos (cerebrosidos, ganglisidos). Los lpidos desempean un papel muy importante en calidad de componentes estructurales de las membranas celulares, como fuente de energa, disolvente para las sustancias orgnicas y como precursores de otros componentes de la clula (vitaminas del grupo D, cidos biliares y hormonas de naturaleza de esteroides). En el organismo de los animales casi todos los lpidos se encuentran en complejo con las protenas, los hidratos de carbono y otras sustancias. A los complejos se les atribuye una gran significacin en el cumplimiento de una serie de funciones importantes. As, son ricas en lipoprotenas las mitocondrias, que son elementos estructurales de las clulas, en los cuales se verifican los procesos de oxidacin libre y conjugada con la fosforilacin, como tambin una parte considerable de los procesos de metabolismo intermedio. Las grasas son esteres de un alcohol trivalente (la glicerina y los restos de cidos grasos de cadena larga que tienen la estructura general siguiente:
3
Manual del laboratorio de Bioquimica En la composicin de la molcula
Lpidos de una grasa
Pagina 43 natural entran,
corrientemente, los restos de cidos grasos saturados y no saturados (palmtico, esterico, oleico, linoleico, etc. En el organismo de los animales los glicridos son en su mayora mixtos, y slo un 2 3% de ellos son glicridos simples (tripalmitato, triestearato, trioleato). Como regla, todas las grasas naturales (el sebo de res, la manteca de cerdo, los aceites, etc.) constituyen una mezcla compleja de varios glicridos, protenas, cidos grasos libres, vitaminas, carotinoides y pigmentos. Las grasas tienen gran importancia para el organismo como una de las fuentes de energa (grasa de reserva). A ms, ellas sirven de componentes estructurales del protoplasma celular (grasa estructural), participan en la termorregulacin del organismo, protegen los rganos, nervios y vasos los deterioros mecnicos, favorecen la asimilacin de vitaminas liposolubles A, D, E y K, y de otras sustancias biolgicamente activas. Los cidos grasos no saturados presentes en las grasas linoleico, linolnico, araquidnico, son necesarios par regulacin de los procesos de oxidacin-reducin en las clulas, como tambin para la biosntesis de las prostaglandinas que constituyen un gran grupo de hormonas de gran actividad biolgica.
Reacciones de reconocimiento de las grasas. 3.1. Reaccin de la grasa y el aceite con el Sudn III
Instrumentos. Vidrio de reloj o placas de vidrio. Reactivos. Sudn III, disolucin al 0.2% (preparacin: en 200 mg de Sudn III se aaden 100 ml de alcohol etlico al 70% calentado en un bao mara, se mezcla y se deja en reposo durante 24 h por lo menos). Aceite vegetal. Marcha de los trabajos. Sobre el vidrio de reloj se aplica una gota de aceite, se aade una gota de Sudn III y se mezcla. Se observa la aparicin de una coloracin naranja de la mezcla. El colorante Sudan III se aplica en las investigaciones histolgicas para localizar las grasas en los tejidos.
Lpidos
Pagina 44
3.2. Determinacin de la glicerina en las grasas

En el curso del calentamiento de una grasa en presencia de agentes deshidratantes, en particular, de hidrosulfatos de potasio o sodio se desprenden fcilmente de la glicerina dos molculas de agua, y ella se convierte en acrolena, que es un aldehido no saturado,
La reaccin de formacin de la acrolena se hace con el propsito de reconocer la glicerina libre o ligada en la molcula de grasa. Los lpidos que no contienen glicerina (ceras, esterinas, inositolfosfolpidos y esfingolpidos) dan reaccin de acrolena negativa. Instrumentos. Soporte con tubos de ensayo. Mechero de gas o infer-nilla. Ractivos. Grasa o aceite vegetal. Cera. Hidrosulfato potsico (sdico), cristalino. Marcha de los trabajos. El experimento debe realsarze en la campana de humos. En un tubo de ensayo se vierte 10 gotas de aceite, en el otro se pone de 0.3 a 0.5 g de aceite. En ambos tubos se aade aproximadamente 1 g de hidrosulfato potsico. La mezcla en los tubos de ensayo se calienta con cuidado pero fuertemente. La formacin de la acroleina en el tubo de ensayo con la grasa se reconoce por la aparicin de un olor caracterstico, acre intenso. nel otro tubo de sayo no se forma acrolena.
3.4. Solubilidad de las grasas

El trabajo se realiza con el aceite vegetal y diferentes solventes. Instrumentos. Soporte con tubos de ensayo. Reactivos. Aceito de girasol. Alcohol etlico. Benceno. Cloroformo Marcha de tos trabajos. En cuatro tubos de ensayo se vierten de 5 a 7 gotas de aceite d girasol. En el primer tubo aaden 2 ml de agua, en el segundo 2 ml de alcohol, en el tercero 2 ml de benceno y en el cuarto 2 ml de cloroformo, mezcla en los tubos de ensayo se agita enrgicamente. Se observan los siguientes cambios: en el primer tubo se forma una emulsin inestable que se separa rpidamente; en el Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holgun Licn Facultad de Zootecnia Universidad Autnoma de Chihuahua
Lpidos
Pagina 45
segundo una disolucin turbia, que indica la mala solubilidad del aceite en alcohol; en el tercero y el cuarto tubos de ensayo se forman disoluciones transparentes debido a una buena solubilidad del aceite en benceno y cloroformo.
3.5. Determinacin de la temperatura de fusin

La temperatura de fusin de una grasa es uno de los indicadores que permite, en cierta medida, juzgar sobre su asimilacin. Las grasas que funden a baja temperatura se emulsifican ms fcilmente y, en consecuencia, se asimilan con mayor facilidad. La temperatura de fusin de los glicridos es condicionada por sus cidos grasos constituyentes. Como regla, el punto de fusin de la grasa es tanto ms bajo cuanto ms alto es el contenido de los cidos de cadena corta o no saturados. A la temperatura ambiente las grasas de origen vegetal son lquidos, puesto que en su composicin la cantidad de cidos grasos no saturados alcanza un 95 97%. En la composicin de las grasas slidas poco fusibles de origen animal prevalecen los cidos grasos de cadenas de carbono largas. Las grasas naturales no poseen un punto de fusin determinado, ya que no son sustancias qumicas individuales, sino mezcla de diferentes glicridos, cidos grasos libres, pigmentos, vitaminas y otras sustancias. La temperatura de fusin de las grasas depende de la especie del animal y oscila dentro de lmites siguientes en C: ovejas 4954, venados 4852, ganado vacuno 4850, cabras 4648, camellos 36-48, cerdos37 45, caballos2832,perros2327, conejos 22- 25. Instrumentos. Capilar de vidrio de 1.5 2 mm en dimetro. Termmetro. Tubo de ensayo. Vaso qumico. Lupa. Reactivos. Grasa de origen animal (fundida y filtrada). Marcha de los trabajos. El capilar limpio y seco se llena de grasa a una altura de unos 2 cm y se mantiene durante 1 h sobre hielo o en agua corriente fra. Terminado el enfriamiento, la parte del capilar llenada de grasa se corta, dejando la columna de grasa de 0.5 cm de altura. El capilar se ajusta mediante un anillo de goma en la parte inferior del termmetro de tal manera que su punta llena de grasa Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holgun Licn Facultad de Zootecnia Universidad Autnoma de Chihuahua
Lpidos
Pagina 46
sea dirigida hacia arriba y su otro extremo libre de grasa, hacia abajo. El termmetro con capilar se mete en el tubo de ensayo donde se ajusta con ayuda de un tapn. El tubo de ensayo se sumerge en el vaso con agua y se sujeta en la patilla del soporte en posicin vertical. El nivel de agua en el vaso debe ser ms alto que el trmino superior del capilar. El agua se calienta poco a poco, removindola frecuentemente, y a travs de la lupa. Se observa el aumento de la temperatura y el estado columna de grasa en los capilares. La indicacin del termmetro en el momento cuando la grasa empiece a fluir por el capilar y en la parte superior de este ltimo se forme un espaci libre, se anota como la temperatura de fusin. Entre el inicio y el final de la transicin de la grasa desde el estado slido al lquido transcurre cierto tiempo. Por lo tanto, para evitar errores, la temperatura de fusin grasa se determina por lo menos dos veces, y el resultado se calcula como promedio.
3.6. Determinacin del nmero acdico

El nmero acdico caracteriza la presencia de cidos grasos libres en la grasa. El nmero acdico se expresa en cantidad de miligramos de hidrxido potsico necesarios para neutralizar los cidos grasos libres en 1 g de grasa. Este ndice es uno de los indicadores ms importantes la calidad de la grasa. El nmero acdico de la grasa fresca de distintos tipos no sobrepasa, comnmente, una magnitud de 1.2 a 3.5. En el curso de almacenaje de la grasa tiene lugar la hidrlisis de los glicridos y acumulacin de los cidos grasos libres. Una elevada acidez de una grasa indica la prdida de su calidad. Instrumentos. Matraz Erlenmeyer. Bureta. Pipetas de 1 y 10 ml. Reactivos. Aceite de girasol. Mezcla neutralizada de alcohol con ter (mezcla de alcohol con ter 1:2 que se neutraliza con disolucin 0.1 N de hidrxido potsico segn la fenolftaleina). Hidrxido potsico, disolucin 0.1 N. Fenolftaleina, disolucin 0.1%. Marcha de los trabajos. En el matraz Erlenmeyer se vierte 1 g de aceite de girasol, se aaden 10 ml de mezcla de alcohol con ter, el contenido se agita cuidadosamente. Se agregan 2 3 gotas de Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holgun Licn Facultad de Zootecnia Universidad Autnoma de Chihuahua
Lpidos
Pagina 47
fenolftalena, y la disolucin se valora rpidamente con la disolucin de hidrxido potsico 0,1 N, con agitacin, hasta la aparicin de una coloracin rosa que persista ms de 1 min. El nmero acdico se calcula segn la frmula
donde x es el nmero acdico, en mg; a es el volumen de disolucin de hidrxido potsico de 0.1 N consumido para la valoracin de la prueba a investigar, en ml; 5.6 es la cantidad de hidrxido potsico (mg) que se contiene en 1 ml de disolucin d hidrxido potsico 0.1 N; K es el coeficiente de correccin d la disolucin de 0.1 N de hidrxido potsico; c es la muestra pesada de aceite, en g.
3.7. Determinacin del ndice de iodo

Se denomina ndice de iodo la cantidad de gramos de iodo que pueden combinarse con 100 g de grasa. Este nmero permite evaluar el grado de insaturacin de la grasa provocado por la presencia de glicridos con cidos grasos de dobles enlaces, la capacidad de la grasa para la oxidacin, para la reduccin y otras reacciones. Cuanto mayor es el contenido de cidos grasos no saturados en la grasa, tanto mayor es su ndice de iodo. El ndice de iodo d algunas grasas y aceites oscila dentro de los siguientes lmites: de res, 2747;de carnero,3146; de cerdo, 4666;de perro, 5667; aceite de girasol, 129136; aceite de camo, 145162; aceite de linaza, 175201. El principio del mtodo. La determinacin del ndice de iodo se basa en la reaccin de adicin del iodo al lugar de ruptura de los dobles enlaces en las molculas de cidos grasos, que se verifica cuantitativamente segn el esquema:
El iodo que no ha reaccionado se valora con tiosulfato. Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holgun Licn Facultad de Zootecnia Universidad Autnoma de Chihuahua
Lpidos
Pagina 48
Instrumentos. Matraces Erlenmeyer de 50 ml con tapones. Bureta. Pipeta de 10 ml. Reactivos. Aceite de girasol. Cloroformo. Iodo, disolucin 0.1 N en alcohol (la preparacin: 12.691 g de iodo recin sublimado se disuelven en 1 l de alcohol etlico al 96%). Tiosulfato sdico, disolucin 0.1 N. Almidn, disolucin al 1%. Marcha de los trabajos. En un matraz (prueba experimental) se pone 0.1 g de aceite de girasol (se pesa en una balanza analtica), en el otro (prueba de control) 0.1 mi de agua, y se aaden de la bureta 5 ml de cloroformo en cada uno. Cuando la muestra de aceite sea disuelta, en los matraces se aaden con la pipeta 10 ml (exactamente!) de disolucin 0.1 N de iodo en alcohol, los matraces se cierran con tapones, el contenido se remueve agitndolo, y los se dejan en la oscuridad. Al cabo de 5 min las pruebas se evalan, agitando permanentemente, con disolucin de tiosulfato sdico 0.1 N, primero hasta que la coloracin se ponga amarilla clara, y luego al aadir 1 ml de disolucin de almidn al 1% desaparicin de la coloracin azul. El ndice de iodo (x,g) se calcula segn la frmula: donde b es el volumen de disolucin de tiosulfato sdico 0.1 N, consumido en la valoracin de l prueba de control en ml; a es el volumen de la disolucin de tiosulfato sdico 0.1 N consumido en la valoracin de la prueba experimental, en ml; K es el coeficiente de correccin del ttulo de la disolucin 0.1 N de tiosulfato sdico; 0.01269 es la cantidad de iodo (g) equivalente a 1 ml de disolucin de tiosulfato sdico 0.1 N; 100 es el coeficiente de recuento para los 100 g de grasa; c es la muestra pesada de grasa, g.
3.8. Determinacin del nmero (ndice) de saponificacin

Nmero de saponificacin se denomina el nnero de miligramos de hidrxido potsico que se necesitan para neutralizar todos los cidos grasos (libres y ligados en forma de glicridos) que se contienen en 1 g de grasa. El nmero de saponificacin de algunos aceite de buena calidad tiene los valores siguientes: grasa de res, 190200; grasa de carnero, 192198; manteca de cerdo, 200; manteca de vaca, 212247; aceite de linaza, 187-195. Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holgun Licn Facultad de Zootecnia Universidad Autnoma de Chihuahua
Lpidos
Pagina 49
Instrumentos. Bao de mara. Matraces Erlenmeyer refrigerantes de reflujo. Bureta. Pipetas graduadas de 1 ml. Reactivos. Aceite de girasol. Hidrxido potsico alcohlica 0.5 N (la preparacin: 30 g de hidrxido de potasio quimicamente puro se disuelven en 30 ml de agua destilada, y el volumen se lleva a 1l con alcohol etlico al 96%; al cabo de 24 h se filtra). cido clorhdrico, disolucin 0.5 N. Fenolftalena, disolucin al 0.1%.
3.9. Determinacin cuantitativa de la grasa en el hgado y los msculos

El contenido de la grasa se determina mediante la extraccin de una muestra pesada de los tejidos a investigar en el aparato Soxhlet. El aparato consiste de tres partes: matra (7), extractor (2) y refrigerante de reflujo (3) unidos ajuste damente mediante conexiones esmeriladas (fig. 11). Principio del mtodo. El mtodo se basa en la determinacin de la masa de los tejidos antes y despus de la extraccin de las grasas con disolvente. Instrumentos. Aparato Soxhlet. Balanza analtica. Estufa, a 106 C. Bao mara. Cartuchitos para extraccin hechos d papel de filtro denso desgrasado (los cartuchitos se secan, se pesa y se guardan en el desecador). Tijeras curvas. Mortero de porcelans Vidrios de reloj. Pesafiltros. Reactivos. Hgado y msculos frescos. ter dietlico. Marcha de los trabajos. Se toman muestras pesadas de hgado y msculos (hasta 3 g de cada tejido), se desmenuzan con tijeras sobre un vidrio de reloj, se ponen en los pesafiltros se secan en el armario secador a una temperatura de 102 106 C hasta una masa constante. Las muestras secadas se trituran en el mortero y se trasladan en cartuchitos de papel de filtro. Los cartuchitos con el material a investigar se pesan y se meten en el extractor del aparato Soxhlet. Todas las partes del aparato se unen hermticamente, ste se coloca en el bao mara. A travs de la boca superior del refrigerante el extractor y el matraz se llenan de ter en una cantidad igual a dos volmenes del extractor. Se deja pasar el agua por
el refrigerante, y el matraz se calienta en el bao de Mara.
Lpidos
Pagina 50
Durante la extraccin se observa que la cantidad del disolvente en el matraz no sobrepase 2/3 de su capacidad y que
Aparato Soxhlet
el disolvente que se condensa no suba demasiado en el refrigerante. La extraccin se prolonga durante 5 6 h. La plenitud de la extraccin de la grasa desde los tejidos se establece por la ausencia de manchas grasosas sobr papel de filtro tras la evaporacin de varias gotas de ter tomado del extractor. Despus de la extraccin los cartuchitos con el material se quitan del aparto Soxhlet y se secan primero en la campana de humos y, al vaporizarse el ter, en el armario secador a una tempetarura de 102 a 106 C durante 4 5 h hasta la masa constante. Los cartuchitos se pesan en la balanza analtica y a partir de la diferencia entre la masa del cartuchito antes y despus de la extraccin se determina la cantidad de la grasa en las muestras pesadas. La cantidad de la grasa x (en se calcula segn la frmula %)
Lpidos
Pagina 51
donde a es la masa del cartuchito con la muestra antes de la extraccin, en g; b es la masa del cartuchito con la muestra despus de la extraccin, en g; c es la muestra pesada del material a investigar, en g; 100 es el coeficiente porcentual de recuento.
Serie de Prcticas 5 Enzimas
febrero 2006
4. Enzimas4
Facultad de Zootecnia, Universidad Autnoma de Chihuahua Responsable: Dr. Claudio Arzola Alvarez Nmero de alumnos por prctica: Tres Propsito de la prctica: Al terminar esta prctica, sers capaz de manejar con propiedad las enzimas. Podrs constatar algunos fenmenos de importancia en cuanto a la respuesta fsica de las enzimas y relacionar esta con fenmenos de produccin agropecuaria. Al mismo tiempo, tendrs la habilidad de elaborar un protocolo para emprender el estudio sistemtico del grupo de molculas mas represenativas de la bioqumica, con lo que logrars una eficiente comunicacin con colaboradores y colegas, puesto que la prctica se llevar a cabo en grupo. Sin embargo, el protocolo deber ser entregado en forma individual para su evaluacin. Al terminar, debers entregar un informe del desarrollo y resultados de la prctica, el cual deber ser individual. En caso de presentarse duplicidad del informe con otros del grupo o de otros grupos, obtendrs menor calificacin. Puesto que el desarrollo de esta prctica se considera una actividad integradora, debers de observar una conducta adecuada durante la misma, con actitudes de respeto a tus compaeros y maestros. La pulcritud y el orden ser un factor que te permita desarrollar la habilidad requerida para el desarrollo de este tipo de actividades, con miras a que tu posterior desempeo profesional sea de alto nivel.
4
Enzimas
Pagina 54
Se llaman enzimas las protenas especficas que poseen funcin cataltica. Con participacin de las enzimas se verifican numerosos procesos qumicos, el conjunto de los cuales constituye la esencia del metabolismo. Influyendo en la velocidad de las reacciones metablicas, las enzimas son capaces de regular efectivamente los procesos de vitalidad. Semejantemente a los catalizadores inorgnicos, las enzimas aumentan la velocidad de las reacciones qumicas a cuenta de la disminucin de la energa de activacin. Sin embargo, los catalizadores biolgicos poseen una eficiencia mayor en la disminucin de la energa de activacin y, como regla general, desempean su funcin a una temperatura moderada, presin baja y unos valores de pH cercanos al neutro. Al mismo tiempo, las enzimas son sensibles a las variaciones de las condiciones del medio en que estn funcionando y tienen una serie de particularidades relacionadas a su naturaleza protenica.
Propiedades generales de las enzimas

Las particularidades caractersticas de las enzimas, su especificidad, sensibilidad al cambio de la temperatura y el pH del medio as como tambin a la presencia de los activadores e inhibidores, son condicionadas por la naturaleza protenica de los catalizadores biolgicos. La actividad cataltica de la enzima est relacionada con a presencia en su molcula de unas regiones especiales responsables de la fijacin y la activacin del sustrato: el centro de sustrato y el centro activo. Ellos consisten en una combinacin nica do los restos de aminocidos situados en la cadena polipptida a larga distancia uno del otro.
Enzimas
Pagina 55
Acercndose, ellos dan lugar a un centro cataltico, al formarse una estructura terciaria de la molcula. En cuanto a las enzimas, que son protenas conjugadas, en la formacin del centro cataltico participan tambin los componentes no protenicos directamente afines a la regin activa del glbulo. Cualquier influencia exterior que altera la conformacin nativa de la molcula protenica conduce a la inactivacin de la enzima.
4.1 La labilidad trmica de las enzimas

La temperatura del medio influye mucho en la actividad de las enzimas. La temperatura ptima para la accin de enzimas es Ja temperatura de cuerpo de los animales que oscila en el intervalo de 36 a 41 C. Con cierto aumento de la temperatura del medio ocurre aceleracin de la reaccin a consecuencia de la activacin de las molculas de sustrato. A la vez, incluso un aumento pequeo de la temperatura conduce al debilitamiento de los enlaces que mantienen la conformacin de la molcula de enzima, necesaria para la manifestacin de su actividad cataltica. Empieza, gradualmente, la desnaturalizacin de la enzima que se acelera bruscamente a la temperatura que sobrepase 50C. La inactivacin de la enzima con aumento de la temperatura del medio es irreversible. Al bajar la temperatura la enzima disminuye su actividad tambin. El mecanismo de este proceso no est claro. Sin embargo, el enfriamiento no causa desnaturalizacin de la enzima y por lo tanto su inactivacin puede ser reversible. Principio del mtodo. Se investiga la influencia del camino de Ja temperatura del medio exterior sobre la actividad de la enzima amilasa de la saliva. Instrumentos. Soporte con tubos de ensayo. Vaso do 50 ml. Infernilla. Termostato (37 C). Vaso con hielo. Reactivos. Saliva diluida (se enjuaga la boca con agua destilada y luego, al tomar en la boca de 20 a 25 ml de agua, la colectan en un vasito). Cloruro sdico, disolucin al 0.3%. Almidn, disolucin al 1% en disolucin do cloruro sdico al 0,3%. Reactivo do Lugol. Marcha de los trabajos. En tres tubos de ensayo se vierten de 2 a 3 ml de saliva diluida (amilasa) en cada uno; La saliva en el tubo de ensayo 1 se hierve durante 1 min. Luego en todos los tubos de ensayo se aaden 4 ml de disolucin Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holgun Licn Facultad de Zootecnia Universidad Autnoma de Chihuahua
Enzimas
Pagina 56
de almidn. Los tubos de ensayo 1 y 2 si colocan en el termostato (37 DC), donde se mantienen 10 mn. El tubo de ensayo 3 se sumerge en hielo y se tiene durante 10 min. Al transcurrir este tiempo, en el tubo de ensayo se aade 1 gota de reactivo de Lugo. Los resultados del experimento se anotan en la tabla de lab] trmica de las enzimas y se sacan conclusiones:
Nmero Enzima del tubo de ensayo j 1 Condiciones del experimento Coloracion con iodo
Sustrato
Incubacin;
2 3
Amilas Enzima desnaturalizada a Amilasa Enzima Amilas nativa Enzima a ti Conclusiones:
Almid n Almid n Almid
10 miB, 37 la min, 37C-10 min, 0C
4.2 Influencia del pH sobre la actividad de las enzimas

Para cada enzima existe un ptimo del pH a que crean las condiciones ms favorables para el mantenimienato de la conformacin funcionalmente activa de la molcula. Los grupos amino y carboxilo de los restos de aminocidos ionizados a una magnitud de pH determinada, participan en el mantenimiento de la conformacin de la molcula protenica necesaria para la formacin de los centros catalticos de enzima y favorecen tambin a su ligacin con el sustrato. A una magnitud de pH distinta se altera la ionizacin de los grupos correspondientes, y como resultado sse rompen los enlaces que aseguran la formacin de los centro catalticos, y la enzima se inactiva. A los valores de pH muy altos o muy bajos las enzimas se desnaturalizan. Principio del mtodo. Se investiga la actividad diferentes magnitudes de pH del medio. Instrumentos. Soporte con tubos de ensayo. Pipetas. Termostato (37 C). Reactivos. Forsfato sdico disustituido, disolucin 0.2 M (A). Acido ctrico (CeH8O7H2O), disolucin 0.1 M (B). Disoluciones amortiguadoras (pH 5.0; se mezclan 515 ml de disolucin A con 485 ml de disolucin B; pH 6.8: se mezclan 772.5 ml de disolucin A con Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holgun Licn Facultad de Zootecnia Universidad Autnoma de Chihuahua de la amilasa de la saliva a
Enzimas
Pagina 57
227.5 ml de disolucin B; pH 8.0, se mezclan 972.5 mi de disolucin A con 27.5 ml de disolucin B). Saliva diluida. Almidn, disolucin al 1%. Reactivo de Lugol. Marcha de los trabajos. En tres tubos de ensayo se vierten de 2 a 3 ml de disoluciones amortiguadoras de distintos pH (5.0; 6.8; 8.0). En todos los tubos de ensayo se aaden de 2 a 3 ml de saliva diluida (amilasa) y de 4 a 5 ml de disolucin de almidn, se mezcla y se incuba durante 10 min en el termostato (37C). Luego, en cada tubo de ensayo se aade 1 gota de reactivo de Lugol. Los resultados de la observacin se anotan en una tabla que indica la influencia del pH sobre la actividad de la amilasa de la saliva:
Nmero de tubo de ensayo 1 Enzima pH del medio Sustrato Incubaci n Coloraci n con iodo
Amilasa 2 Amilasa 3 Amilasa Conclusiones:
5,0 6,8 8,0
Almid Almid Almid
10 1 10
min min min
37 C 37 C 37 C
4.3 Especificidad de las enzimas

Las enzimas se distinguen
de los catalizadores inorgnicos por su especificidad excepcionalmente alta. La etapa inicial del acto cataltico consiste en la formacin del complejo enzima-sustrato, es decir, la ligacin del sustrato con el centro cataltico de la enzima. La conformacin espacial del centro de sustrato debe estar en la correspondencia geomtrica exacta con la estructura de la molcula de sustrato. Solamente en este caso es posible la formacin del complejo enzima-sustrato y el cumplimiento de la funcin cataltica de la enzima. Do tal modo, la esencia de la especificidad de enzimas consiste en el hecho de que el sustrato le corresponde a la enzima, como una llave a cerradura. Principio del mtodo. Se investiga la influencia de enzimas amilasa y sacarasa sobre diferentes sustratos: el almidn y la sacarosa. Instrumentos. Soporte con tubos de ensayo. Pipetas. Termos (37 C). Infemilla. Reactivos. Almidn, disolucin al 1%. Sacarosa, disolucion al 2%. Lugol. Reactivo de Fehling. Saliva diluida. Sacarasa, disolucin (10 g levadura se homogeneiza en 100 ml de agua). Reactivo de
Enzimas
Pagina 58
Marcha de los trabajos. En los tubos de ensayo 1 y 2 vierten de 4 a 5 ml de disolucin de almidn, en tubos ensayo 3 y 4, de 4 a 5 ml de disolucin de sacarosa. En tubos de ensayo 1 y 3 se aaden de 2 a 3 ml de saliva diluda (amilasa), y en los tubos de ensayo 2 y 4, de 2 a 3 ml de disolucin de sacarasa. El contenido de los tubos de ensayo mezcla y se incuba durante 10 min en el termostato (37( Luego en los tubos de ensayo 1 y 2 se aade 1 gota de reactivo de Lugol, en cada una y en los tubos de ensayo 3 y 4, de 1 a 2 ml de reactivo de Fehling y se calienta. Las observacin se anotan en la tabla de especificidad de las enzimas amila y sacarasa:
Nmero Enzima del tubo de ensayo j 1 Condiciones del experimento Coloracion con yodo
Sustrato
Incubacin;
2 3
Amilas Enzima desnaturalizada a Amilasa Enzima Amilas nativa Enzima a ti Conclusiones:
Almid n Almid n Almid
10 miB, 37 la min, 37C-10 min, 0C
4.4 Influencia de los activadores e inhibidores

La regulacin de la actividad de las enzimas se realiza tanto en la clula como fuera de ella, mediante la fijacin sobre la molcula de enzima de una serie de sustancias d bajo peso molecular. Tales sustancias pueden causar efecto
Determinacin de la actividad de las enzimas

Segn la clasificacin elaborada por la Comisin Internacional de Enzimas, todas las enzimas se subdividen en seis clases principales en correspondencia con el carcter de la reaccin catalizada por ellas: oxidorreductasas, trans-ferasas, hidrolasas, liasas, isomerasas y ligasas (sintetasas).
Oxidorreductasas
Las oxidorreductasas son una clase de enzimas que catalizan las reacciones de oxidacin-reduccin.
Enzimas
Pagina 59
4.5 Determinacin de la actividad de la dehidrogenasa de cido succnico

La dehidrogenasa de cido succnico (succinato dehidrogenasa) es una enzima que cataliza la oxidacin del cido succnico. De coenzima sirve el dinucletido de flavina-adenina (FAD). En las clulas la enzima est unida establemente con la membrana de mitocondrias. La enzima redunda devuelve fcilmente el hidrgeno cuyo aceptor pueden ser los colorantes aptos para la reduccin. Principio del mtodo. El hidrgeno que se desprende del cido succnico bajo la influencia de la enzima dehidro-fenasa, reduce el azul de metileno (AM) transformndolo en un compuesto incoloro (AMH 2).
Instrumentos. Mortero con machaca. Arena de vidrio. Soporte con tubos de ensayo. Pipetas. Bao de Mara (50 C). Termmetro. Reactivos. Msculo fresco (desmenuzado en picadora de carne). Hidrxido sdico, disolucin al 10%. Acido succnico, disolucin al 3% (3 g de cido succnico se disuelven en 97 ml de agua y se neutraliza con disolucin de hidrxido sdico al 10% hasta el pH 7.4 segn el papel indicador). Azul de metileno, disolucin acuosa al 0.001%. Aceite de vaselina o vegetal. Acido tricloroactico, disolucin al 20%. Marcha de los trabajos. En el mortero se tritura cuidadosamente, con la arena de vidrio, aproximadamente 1 g de tejido de msculo desmenuzado, aadiendo de 3 a 4 ml de disolucin de cido succnico. La masa homogeneizada obtenida se reparte en dos porciones iguales que se ponen en dos tubos de Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holgun Licn Facultad de Zootecnia Universidad Autnoma de Chihuahua
Enzimas
Pagina 60
ensayo. En el tubo de ensayo 1 (de control) se aade 1 ml de disolucin de cido tricloroactico para destruir la enzima. En el tubo de ensayo 2 (experimental) la enzima es activa. En ambos tubos de ensayo se aade 1 2 gotas de disolucin de azul de metileno, se mezcla, y sobre la superficie de lquido se vierte de 0.5 a 1 ml de aceite para aislar del oxgeno de aire. Ambos tubos de ensayo se incuban en el bao mara (50C) durante 10 min. Al pasar este tiempo, en el tubo de ensayo 2 se observa la descoloracin del azul de metileno.
BIBLIOGRAFIA
BIOQUIMICA H.R. HORTON et al DE. PRENTICE HALL HISPANOAMERICANA, S.A. 1993 BIOQUIMICA. J. DAVID RAWN AD. INTERAMERICANA Mc. GRAW - HILL 1989 BIOQUIMICA LUBERT STRYER AD. REVERTE, S.A. 3a. DE. EN ESPAOL 1993 BIOQUIMICA DE HARPER ROBERT K MURRAY AD. MANUAL MODERNO, S.A. DE C.V. 1994 BIOQUIMICA: LAS BASES MOLECULARES DE LA ESTRUCTURA Y FUNCION CELULAR. ALBERT LEHNINGER EDICIONES OMEGA, S.A. 7a. REIMPRESION 1983 PRINCIPLES OF BIOCHEMISTRY ALBERT LEHNINGER AD. WORTH PUBLISHERS, INC. 1980.
ANEXOS
NORMAS GENERALES DE SEGURIDAD E HIGIENE
1. El uso de bata es obligatorio. 2. Antes de empezar el trabajo en el laboratorio tienes que familiarizarte con los elementos de seguridad disponibles. 3. Es necesario localizar las salidas principales y de emergencia por si se diese el caso de una evacuacin por fuego o por cualquier otro incidente, as como conocer la localizacin exacta de extintores, duchas de seguridad y duchas de ojos. 4. Es obligatorio usar gafas de seguridad siempre que se est en el laboratorio. 5. No usar lentes de contacto en el laboratorio, ya que en caso de accidente las salpicaduras de productos qumicos o sus vapores pueden pasar detrs de las lentes y provocar lesiones en los ojos antes de poder retirar las lentes. En estos casos es recomendable el uso de gafas graduadas o de gafas de seguridad cerradas. 6. S un producto qumico te salpica los ojos, utiliza inmediatamente una ducha de ojos y lava completamente el ojo afectado durante 15 minutos sin interrupcin. Acta siempre con urgencia, en menos de 10 segundos. No dirijas una corriente de alta presin de agua de un grifo directamente al ojo porque podras lesionarlo. Informa al encargado del laboratorio de lo que ha sucedido y si es necesario pide asistencia mdica. 7. El uso de bata (preferentemente de algodn) es obligatorio, ya que por mucho cuidado que se tenga al trabajar, las salpicaduras de productos qumicos son inevitables. 8. As mismo se recomienda llevar zapatos cerrados y no sandalias. 9. No comer ni beber en el laboratorio, ya que hay la posibilidad de que los alimentos o bebidas se hayan contaminado con productos qumicos.
Seguridad
Pagina 63
10. Los recipientes del laboratorio nunca deben utilizarse para el consumo y conservacin de alimentos y bebidas; tampoco las neveras u otras instalaciones destinadas al empleo en los laboratorios. 11. Lavarse siempre las manos despus de hacer cualquier anlisis y antes de salir del laboratorio. 12. Procure quitarse la bata hasta que salga del laboratorio. 13. Est prohibido fumar en el laboratorio por razones higinicas y de seguridad. 14. No inhales, pruebes o huelas productos qumicos si no ests debidamente informado. 15. Cerrar hermticamente los frascos de productos qumicos despus de utilizarlos. 16. Para pipetear los lquidos utilice siempre una bombilla pipeteadora, no absorber directamente con la boca. 17. Cuando caliente tubos de ensaye hgalo siempre en la parte superior del lquido y con agitacin suave, nunca por el fondo del tubo, y debe estar inclinado y no apuntar hacia ninguna persona. 18. No deben transportarse innecesariamente los reactivos de un sitio para otro del laboratorio. S tuviese que hacerlo, tenga cuidado con las botellas, las cuales deben ser siempre transportadas cogindolas por el fondo, nunca por la boca de la botella. 19. El rea de trabajo tiene que mantenerse siempre limpia y ordenada, sin libros, abrigos, bolsas, productos qumicos vertidos. 20. La conducta en el laboratorio debe ser seria, sin bromas, sin correr, jugar, empujar, gritar, etc. 21. No se puede hacer ningn experimento no autorizado. 22. No utilices nunca un equipo o aparato sin conocer perfectamente su funcionamiento. 23. No utilices material de cristal en mal estado ya que aumenta el riesgo de accidentes. 24. El material y los aparatos utilizados tienen que dejarse siempre limpios y en perfecto estado de uso. 25. Todos los productos qumicos tienen que ser manejados con mucho cuidado de acuerdo con las Hojas de Seguridad de cada una de las sustancias. Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holgun Licn Facultad de Zootecnia Universidad Autnoma de Chihuahua
Seguridad
Pagina 64
26. No inhales los vapores de productos qumicos y trabaja siempre en vitrinas extractoras, especialmente cuando manipules productos txicos, irritantes, corrosivos o lacrimgenos.
MEDIDAS GENERALES EN CASO DE ACCIDENTE PLAN GENERAL DE EMERGENCIA: Dar la alarma. Ponerse a salvo. Ayudar a las personas. Luchar contra el fuego. Avisar al responsable del departamento. Evacuacin del edificio en caso necesario. Avisar a ambulancias, bomberos. FUEGO EN EL LABORATORIO: Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holgun Licn Facultad de Zootecnia Universidad Autnoma de Chihuahua
Seguridad
Pagina 65
Evacuar el laboratorio, por pequeo que sea el fuego, por la salida principal o por la salida de emergencia, s la principal est bloqueada. Avisar a todos los compaeros de trabajo sin que se extienda el pnico y conservando siempre la calma. S el fuego es pequeo y localizado, apagarlo utilizando un extintor adecuado, arena o cubriendo el fuego con un recipiente de tamao adecuado que lo ahogue. Retirar los productos qumicos inflamables que estn cerca del fuego. No utilices nunca agua para extinguir un fuego provocado por la inflamacin de un disolvente. Para fuegos grandes aislar el fuego, utilizar los extintores adecuados, s el fuego no se puede controlar rpidamente accionar la alarma de fuego, avisar al servicio de extincin de incendios y evacuar el edificio. FUEGO EN EL CUERPO: S se te incendia la ropa, pide inmediatamente ayuda. Estrate en el suelo y rueda sobre ti mismo para apagar las llamas. No corras ni intentes llegar a la ducha de seguridad si no es que est muy cerca de ti. Es tu responsabilidad ayudar a alguien que se est quemando, cbrele con una manta antifuego, condcele hasta la ducha de seguridad, si est cerca, hazle rodar por el suelo, no utilices nunca un extintor sobre una persona. Una vez apagado el fuego, mantn a la persona tendida, procurando que no coja fro y proporcinale asistencia mdica. QUEMADURAS: Las pequeas quemaduras producidas por material caliente, baos, placas, etc., se tratarn lavando la zona afectada con agua fra durante 10-15 minutos. Las quemaduras ms graves requieren atencin mdica inmediata. No utilices cremas y pomadas grasas en las quemaduras graves.
Manual del laboratorio de Bioquimica CORTES:
Seguridad
Pagina 66
Los cortes producidos por la rotura de material de cristal son un riesgo comn en el laboratorio. Las cortadas se tienen que lavar bien, con abundante agua corriente, durante 10 minutos como mnimo. S la cortada es pequea y deja de sangrar en poco tiempo, lvala con agua y jabn y tpala con una venda. S la cortada es grande y no deja de sangrar, requiere de asistencia mdica inmediata. DERRAME DE PRODUCTOS QUMICOS SOBRE LA PIEL: Los productos qumicos que se hayan vertido sobre la piel han de ser lavados inmediatamente con agua corriente abundantemente, como mnimo durante 15 minutos. Las duchas de seguridad instaladas en los laboratorios sern utilizadas en aquellos casos en que la zona afectada del cuerpo sea grande y no sea suficiente el lavado en una pila. Es necesario sacar toda la ropa contaminada de la persona afectada lo antes posible mientras est bajo la ducha. Recuerda que la rapidez en el lavado es muy importante para reducir la gravedad y la extensin de la herida. Proporcionar asistencia mdica a la persona afectada. CORROSIONES EN LA PIEL POR CIDOS Y LCALIS: Cuando ocurre una corrosin por cidos, corta lo ms rpidamente posible la ropa, lave con agua abundantemente la zona afectada, neutralice la acidez con bicarbonato de sodio durante 15-20 minutos, sacar el exceso de pasta formada, seca y cubra la parte afectada con linimento leo-calcreo o parecido.
Seguridad
Pagina 67
Cuando se produce una corrosin por lcalis, lave la zona afectada abundantemente con agua corriente y aclrala con una disolucin de cido actico al 1%, seca y cubre la zona afectada con una pomada de cido tnico. CORROSIONES EN LOS OJOS: En este caso el tiempo es esencial (menos de 10 segundos), cuanto antes se lave el ojo, menos grave ser el dao producido. Lava los dos ojos con agua corriente abundantemente durante 15 minutos como mnimo en una ducha de ojos, y, si no hay, con un frasco de lavar los ojos. Es necesario mantener los ojos abiertos con la ayuda de los dedos para facilitar el lavado debajo de los prpados. Es necesario recibir asistencia mdica, por pequea que parezca la lesin. INGESTIN DE PRODUCTOS QUMICOS: Antes de cualquier actuacin pide asistencia mdica. S el paciente est inconsciente, ponerlo en posicin lateral de seguridad, con la cabeza de lado, y estirarle la lengua hacia fuera.

Manual Pract Bioquimica

Uploaded by

Document Information

Copyright

Available Formats

Share this document

Share or Embed Document

Sharing Options

Did you find this document useful?

Is this content inappropriate?

Copyright:

Available Formats

Manual Pract Bioquimica

Uploaded by

Copyright:

Available Formats

Manual de Prcticas de Bioqumica

Mauricio Ramrez Ruano, D.I. Coordinador de la elaboracin de Manuales de Prcticas

MC. Javier Martnez Nevarez Presidente del H. Consejo Tcnico

Ing. Heriberto Altes Mdina

Dr. Alfredo de la Torre Hernndez.

M.C. Javier Martnez Nevarez

M.C. Josefina Domnguez Holgun

Ph.D. Claudio Arzola, M.C. Celia Holgun Licn

ENCUADRE DEL SISTEMA DE PRCTICAS

Manual del laboratorio de Bioquimica Encuadre.

SOCIEDAD Y CULTURA 3-2-0 5 CREDITOS 203

UNIVERSIDAD Y CONOCIMIENTO 3-2-0 5 CREDITOS 210

SOCIOLOGIA Y DESARROLLO 2-2-0 4 CREDITOS

SEMINARIO DE INVESTIGACION 3-2-0 5 CREDITOS 457

FORMACION DE EMPRENDEDORES 3-2-0 5 CREDITOS 303

FORMULACION Y EVALUACION DE PROYECTOS 2-2-0 4 CREDITOS 856

PRACTICAS PROFESIONALES 10 CREDITOS

SERVICIO SOCIAL 30 CREDITOS

ECONOMIA AGROPECUARIA 4-0-0 4CREDITOS 266 MATEMATICAS 3-2-0 5 CREDITOS 101

LENGUAJE Y COMUNICACIN 3-2-0 5 CREDITOS 209

ADMINISTRACIN DE EMPRESAS AGROPECUARIAS 3-2-0 5 CREDITOS 433

ADMINISTRACION ESTRATEGICA 3-1-0 4 CREDITOS 503

MERCADEO DE PRODUCTOS PECUARIOS 3-2-0 5 CREDITOS 633

DIRECCION DE AGRONEGOCIOS 3-3-0 6 CREDITOS 802

ESTADISTICA 3-0-1 4 CREDITOS 201

MANEJO DE BASE DE DATOS 0-4-0 4 CREDITOS 206

CONTROL DE CALIDAD 2-2-0 4 CREDITOS 607

REPRODUCCION ANIMAL 3-3-0 6 CREDITOS 501

GENETICA GENERAL 3-1-0 4 CREDITOS 556

ADMINISTRACION DE RECURSOS HUMANOS 3-1-0 4 CREDITOS 702

MEJORAMIENTO ANIMAL 3-2-0 5 CREDITOS 431

SISTEMA DE PRODUCCION AVICOLA 3-3-0 6 CREDITOS 801

FISIOGIA DE LOS PROCESOS PRODUCTIVOS 4-0-2 6 CREDITOS 235

INTRODUCCION A LOS SISTEMAS DE PRODUCCION 2-3-0 5 CREDITOS 104

MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA 4-2-0 6 CREDITOS 335

SANIDAD ANIMAL 3-3-0 6 CREDITOS 465

SISTEMAS DE PRODUCCION EQUINA 3-1-0 4 CREDITOS 735

QUIMICA ORGANICA 4-0-2 6 CREDITOS 234

BIOQUIMICA 4-0-2 6 CREDITOS 334

NUTRICION ANIMAL 3-3-0 6 CREDITOS 506

ALIMENTACION DE NO RUMIANTES 3-2-0 5 CREDITOS 544

ALIMENTACION DE RUMIANTES 3-2-0 5 CREDITOS 634

ECOLOGIA BASICA 3-1-0 4 CREDITOS 105

ECOLOGIA ANIMAL 3-3-0 6 CREDITOS 305

TOPOGRAFIA 3-3-0 6 CREDITOS 461

MANEJO DE PASTIZALES 3-3-0 6 CREDITOS 434

HIDRAULICA APLICADA A LA PRODUCCION 3-2-0 5 CREDITOS 661

MANEJO DE FAUNA SILVESTRE 3-3-0 6 CREDITOS 834

CLIMA Y AMBIENTE 4-2-0 6 CREDITOS 223

BOTANICA SISTEMATICA 3-3-0 6 CREEDITOS 126

AGROSTOLOGIA 3-3-0 6 CREDITOS 302

CONSERVACION DE SUELO Y AGUA 3-3-0 6 CREDITOS 452

PERCEPCION REMOTA Y CARTOGRAFIA 3-3-0 6 CREDITOS 325

MANEJO DE RECURSOS FORRAJEROS 3-3-0 6 CREDITOS 652

VALORES DEL EJERCICIO PROFECIONAL 4-0-0 4 CREDITOS 806

ORIGEN Y CRECIMIENTO DE ANIMALES DOMESTICOS

BIOQUIMICA DE LOS ALIMENTOS DE ORIGEN ANIMAL 3-3-0 6 CREDITOS 308

MICROBIOLOGIA Y DETERIORO DE PRODUC. DE ORIGEN ANIMAL

SEGURIDAD E HIGIENE INDUSTRIAL 3-3-0 6 CREDITOS 726

TECNOLOGA Y PROCESADO DE LA LECHE 3-3-0 6 CREDITOS 831

ACREDITACION DEL IDIOMA INGLES I 3 CREDITOS

ACREDITACION DEL IDIOMA INGLES II 4 CREDITOS

ACREDITACION DEL IDIOMA INGLES III 4 CREDITOS

ACREDITACION DEL IDIOMA INGLES IV 4 CREDITOS