TECNICA DE GOTA GRUESA Y PROTIS PARA IDENTIFICAR PLASMODIUM

PRINCIPIOS GENERALES

GOTA GRUESA: es la extensin de una gota de sangre en forma cuadrangular de un dimetro aproximado de 1 a 1.5 cm. Con la gota gruesa se puede detectar la presencia de plasmodium . EL PROTIS SANGUINEO: Es la extensin de una gota de sangre de tal manera que se puede observar al microscopio tanto los eritrocitos como0 los parsitos en un solo plano. Y con el protis sanguineo se puede diferenciar claramente la especie de plasmodium.

ELABORACIN DE GOTA GRUESA Y FROTIS.

FROTIS Y GOTA GRUESA
 Es la muestra de eleccin para el diagnstico de la
malaria.

 La gota gruesa concentra de 6 a 20 veces ms sangre

que un frotis. Sin embargo el frotis da otros insumos para el diagnstico.

Gota gruesa

Frotis

Porqu son importantes las gotas gruesas?

 Por tener mayor cantidad de muestra en un espacio menor
que el frotis, el diagnstico se hace ms rpidamente.

 La distribucin parasitaria es uniforme en toda la muestra.  Permite identificar prontamente las parasitemias escasas.

Por qu es importante el frotis?


Permite determinar la especie de Plasmodium presente en la muestra dadas las caracteristicas morfolgicas del globulo rojo parasitado, ya que para cada especie estas son diferentes. Antes de realizar la tincin, el frotis se fija con metanol, esto hace que el glbulo rojo no se destruya y por lo tanto la morfologa del parsito se mantiene intacta en su interior.

Elementos necesarios para la toma de gota gruesa y frotis.

Alcohol Algodn ( 2 motitas ) Lanceta (descartable) Papelera: formulario respectivo Lmina portaobjetos Lpiz grafito

Elaboracin de la gota gruesa y el frotis

1) Escoger un dedo de la mano izquierda, limpiarlo con algodn humedecido en alcohol, luego, secarlo bien con un algodn seco .

Elaboracin de la gota gruesa y el frotis

2) Punzar el e o con lanceta escartable y eli inar la ri era gota e sangre con algo seco.

Elaboracin de la gota gruesa y el frotis

3) En un portaobjetos limpio colocar la muestra de sangre a 1.0 cm del borde.

Elaboracin de la gota gruesa y el frotis

4) Con la lmina extensora hacer la gota gruesa.

Elaboracin de la gota gruesa y el frotis

5) Se coloca una gota de sangre en una esquina de la lmina extensora y esta gota se coloca a cm de la gota gruesa. Se deja fluir la sangre por capilaridad sobre la superficie ancha del porta objeto extensor teniendo el cuidado de dejar cm a ambos lados de la lmina extensora, formando un ngulo de 45,se esparce la sangre suavemente moviendo la lmina extensora hacia delante.

Elaboracin de la gota gruesa y el frotis

6) Luego de que la lmina se seque, proceda a identificarla, en la cabeza del frotis con la clave respectiva de cada evaluador y el nmero del paciente. Realizar esta identificacin haciendo uso de un lpiz de grafito.

Recomendacin generales
Llevar las muestras al laboratorio lo ms rpido posible (mximo 7 das) pues el tiempo, el alcohol y el calor fijan la hemoglobina, afectando el proceso de deshemoglobinazcin durante la tincin. Mantener las muestras cubiertas, para protejerlas de derrames, de los insectos( pues se las comen) y adems mantenerlas alejadas de la luz solar pues las fija. Es importante anotar en la boleta, el incio de sntomas junto con los datos del paciente, para poder construir la curva epidmica.

COLORACION DE LA GOTA GRUESA Y PROTIS MATERIALES:

Probetas de 10, 50 y 100 ml. Beaker o vaso plastico de trabajo. Un agitador de vidrio. Una gradilla para portaobjetos. Un cronometro o reloj con segundero. Un frasco gotero con metanol. Colorante giemsa (solucion madre). Agua amortiguada o agua de lluvia.

PROCEDIMIENTO
METODO PARA COLOREAR DE 1 A 10 LAMINAS: 1.- En una probeta de vidrio preparar colorante de giemsa diluido al 5% con agua amortiguaga (ph 7.2)

2.- M scl r s

t c

l v rill

vi ri .

3.- i s l s l i (g t gr s ) r c sit r xi t . c l r rs l s l ci r r . 4.- t s c l r r v rific r si l s cl v s l l i c i ci . .- l r r l s l i s tr vs s v rill s vi ri .

6.-

j rr s rl sl i c lc l r t r i .

7.- L v r su v t l c l r t d l l i di d u ch rr su v d gu li i .

8.- Colocar en una gradilla las laminas con la cara de sangre teidas hacia abajo.

MORFOLOGA E IDENTIFICACIN

Por lo regular cuatro especies infectan al ser humano:

Plasmodium vivax Plasmodium ovale Plasmodium falciparum Plasmodium malarie

Trofozotos
Trofozoitos - Plasmodium falciparum: Los trofozoitos dentro del eritrocito siempre estn en forma de anillo , a dems de que slo en P. falciparum se presentan mltiples trofozoitos en una clula.

Trofozoitos - Plasmodium vivax: Los eritrocitos infectados por P. vivax son a veces ms grandes que los eritrocitos normales. Aproximadamente cabra 1.5 eritrocitos normales en uno infectado..

Trofozoitos - Plasmodium malariae: La caracterstica de los trofozoitos de P. malariae muestran la forma de anillo y una ligera tendencia de que los eritrocitos normales sean de tamao normal o ms pequeos.

Gametocito-plasmodium Falciparum, el gametocito tiene Forma de pltano

Gametocito-plasmodium ovale: El gametocito es ms grande que los eritrocitos normales. Tiene una apariencia granular parecidos a los puntos de Schuffner Gametocito, plasmodium malarie: Los gametocitos P. Malarie tiene una apariencia redonda cercana a la de los eritrocitos, tiene adems una apariencia granular

Esquizontes
Esquizonte - Plasmodium malariae: Un esquizonte tiene de 6 a 12 merozoitos, dndole una apariencia granular.

Esquizonte P. vivax. Un esquizonte muestra El gran nmero de merozotos tpicos en su especie( de 16-2 ), adems se puede notar el mayor tamao en Comparacin con los eritrocitos normales

Desarrollo del plasmodium

MUCHAS GRACIAS