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O DNA Como (nica) Testemunha em Determinao de Paternidade

PROF. DR. Srgio D.J. Pena
Pres. do Ncleo de Gentica Mdica de MG (GENE) e Prof. Titular do Dep. de
Bioqumica do Instituto de Cincias Biolgicas da UFMG, Belo Horizonte, MG
A necessidade de se estabelecer relaes de paternidade
frequentemente surge em contextos legais, sociais ou mdicos.
Como a concepo ocorre no interior do corpo da mulher e no
admite testemunhas, a nica maneira de resolver efetivamente o
problema atravs de testes genticos. Em especial, os testes em
DNA nos permitem resolver disputas de paternidade com certeza
em praticamente todos os casos - o que pode ser conseguido
atravs do uso apropriado de sondas multilocais de minissatlites,
baterias de sondas unilocais ou testes por PCR em locos de
minissatlites e microssatlites. As diferenas de eficincia dessas
diferentes tcnicas podem ser compensadas mediante o ajuste do
nmero de testes realizados. Neste artigo, fazemos uma breve
reviso discutindo as vantagens e desvantagens de cada uma das
trs metodologias mais utilizadas para a determinao de
paternidade pelo DNA. Nesta base, propomos critrios que podem
ser empregados para avaliar a confiabilidade de laboratrios de
determinao de paternidade. Finalmente, enfatizamos que a
percia de determinao de paternidade inalienavelmente um ato
mdico, alicerado tanto em capacitao tica quanto tcnica - na
qual a atuao desavisada de profissionais inadequadamente
formados nos aspectos ticos e mdico-legais da determinao de
paternidade pode levar a resultados desastrosos.
UNITERMOS - Paternidade, DNA, minissatlites, microssatlites,
polimorfismos.

O Problema
A incerteza da paternidade to antiga quanto a humanidade.
A concepo ocorre no interior do corpo da mulher e assim no admite
testemunhas. Em conseqncia, embora a mulher esteja sempre 100% certa que
as suas crianas so biologicamente suas (com exceo da possibilidade de
trocas no berrio, que so um fenmeno novo na histria da humanidade, j que
no passado virtualmente todos os partos eram domsticos) o homem tem muitas
vezes de lidar com a incerteza da paternidade (esta incerteza no consciente na
grande maioria dos casos). Como reza o dito popular: os filhos de minhas filhas
meus netos so; os filhos de meus filhos, sero ou no?.
Alguns autores acreditam que a incerteza a paternidade um
dos fatores que evolucionariamente contribuiu para moldar padres de conduta
masculinos na sociedade, j que adaptativamente os homens no passado
assumiam condutas que maximizassem a probabilidade de sua paternidade e
minimizassem a chance deles investirem recursos em crianas que fossem filhos
biolgicos de outros homens. Por exemplo, estudos multi-culturais em 186 grupos
tnicos diferentes mostraram que o adultrio feminino, junto com a esterilidade
conjugal, a causa mais comum de dissoluo de casamentos. Outras evidncias
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vem dos estudos sobre os cimes maritais, que so despertados no homem
principalmente pela suspeita, observao ou descoberta de infidelidade sexual da
mulher (eventos que comprometem a certeza de paternidade), enquanto na
mulher so evocados preponderantemente por infidelidade emocional.
De qualquer maneira, h evidncias claras que apontam para
uma incidncia significativa de no-paternidade intra-marital nas sociedades
humanas. Uma taxa de 10% freqentemente citada em tratados de gentica.
Recentemente, uma meta-anlise do tpico foi realizada por Macintyre e Sooman
que encontraram estudos na literatura com taxas de no-paternidade intra-marital
variando de 2% at 30% e enfatizaram o fato de que, como a maioria das
estimativas eram indiretas, tornava-se impossvel aceitar ou refutar a taxa
freqentemente citada de 10%. Baker e Bellis

tambm citam estudos com uma
faixa de 9-30%. Por outro lado, autores diferentes sugerem que 10% um
exagero e que as verdadeiras taxas esto ao redor de 2-4%. A verdade que
ningum sabe exatamente, nem mesmo as prprias mes. A experincia do
Ncleo de Gentica Mdica (GENE) com milhares de casos e tambm a de
praticamente todos os laboratrios que fazem testes de paternidade nos Estados
Unidos e Europa que em aproximadamente 25% dos casos, o indigitado
possvel pai excludo da paternidade. Isto quer dizer que as prprias mes se
enganaram.
Porque tantas incertezas? Na verdade, embora saibamos que a
concepo s pode ocorrer na poca da ovulao, o nmero de dias frteis antes
ou depois da ovulao incerto. Um estudo recente, com metodologia
cientificamente confivel, mostrou que praticamente todas as gravidezes podiam
ser atribudas a relaes sexuais que ocorriam nos seis dias que precediam a
ovulao, um perodo relativamente grande. Neste aspecto, um fenmeno
interessante o da superfecundao, ou seja, a produo de gmeos por
fertilizao de dois vulos em coitos diferentes. Estima-se que este fenmeno
ocorra em quase 10% dos gmeos dizigticos. Mais peculiar ainda o fenmeno
de superfecundao heteropaternal, que gera gmeos com pais diferentes. A
estimativa que 0,25% dos gmeos dizigticos nascidos de mulheres brancas nos
Estados Unidos tenham pais diferentes. Entre gmeos dizigticos envolvidos em
percias judiciais de paternidade, 2,4% tinham pais diferentes. Alie-se a estas
incertezas, o fato de que, embora a ovulao acontea mais freqentemente no
meio do ciclo menstrual, ela pode eventualmente ocorrer durante qualquer outra
parte do mesmo. Em ltima anlise, nenhuma mulher que tenha tido relaes
sexuais com mais de um homem durante o ciclo menstrual em que ela engravidou
(ou mesmo, considerando as freqentes incertezas sobre a idade gestacional
exata, em ciclos adjacentes) pode ter certeza absoluta de quem pai da criana.
A posio da lei
No Brasil, o problema de paternidade muito srio pois
representa um enorme nus econmico, social e emocional. Segundo a Estatstica
do Registro Civil de 1988, publicada pelo IBGE, 31,1% das crianas nascidas em
1988 e registradas naquele ano eram filhos de me solteira. Se considerarmos
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que no Brasil nascem em cada 12 meses pelo menos 3 milhes de crianas,
temos no mnimo 1 milho de nascimentos ilegtimos por ano. Entretanto, no
dispomos da informao de quantos destes casos tornam-se disputas jurdicas de
paternidade. Nos Estados Unidos, sabemos que mais de 120.000 testes judiciais
de paternidade foram realizados em 1990, e esse nmero tem rapidamente
aumentado.
A necessidade de se estabelecer relaes de paternidade
freqentemente acaba na Justia. No Brasil, as "prescries jurdicas para lidar
com o problema esto definidas no Cdigo Civil (datado de 1916) e no Cdigo de
Processo Civil. 0 que dizem eles? Vamos citar somente alguns artigos mais
relevantes: Cdigo Civil (Lei n3.071 de 1de janeiro de I 916) - Captulo IV - DO
RECONHECIMENTO DOS FILHOS ILEGTIMOS - Artigo 363
Os filhos ilegtimos de pessoas que no caibam no art. 183,
incisos I e IV, tm ao contra os pais, ou seus herdeiros, para demandar o
reconhecimento da filiao:
I - se ao tempo da concepo a me estava concubinada com o
pretendido pai;
II - se a concepo do filho realmente coincidir com o rapto da
me pelo suposto pai; ou as relaes sexuais com ela;
III - se existir escrito daquele a quem se atribui a paternidade,
reconhecendo-a expressamente.
Segundo Alem, a enumerao deste artigo taxativa, e no
exemplificativa, no admitindo, portanto, aplicao analgica ou interpretao
extensiva.
O Cdigo de Processo Civil rege todo o ritual da Ao de
Paternidade. A petio inicial feita de acordo com os requisitos estampados nos
arts. 282 e 283 (que no vamos transcrever aqui). Proposta a ao, o ru pode
apresentar nos prazos legais uma contestao de acordo com os arts. 297/302.
Neste estgio, dois argumentos so freqentemente invocados e vale a pena
serem mencionados. O primeiro, muito utilizado, a exceptio plurium
concubentium, ou seja, a argumentao de que a me era sexualmente promscua
na poca da concepo, no podendo ento atribuir ao ru, com certeza, a
paternidade. Essa argumentao, embora cientificamente correta, tem
freqentemente o efeito de transformar o processo de Investigao de
Paternidade em um julgamento moral da me (essa linha de argumentao,
felizmente, tomou-se inadequada frente certeza apresentada pelas provas
periciais dos testes em DNA; ver abaixo). O segundo, de impossibilidade de
paternidade por impotncia sexual, que em teoria pode ser instrumental (por falta
de ereo, ditacoeundi) ou esterilidade (impotncia generandi). Com relao a
esse ltimo tpico, do ponto de vista mdico, mesmo a comprovao de
azoospermia ou oligospermia severa no podem ser consideradas absolutas, j
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que h relatos de concepo comprovada mesmo nessas situaes teoricamente
impossveis. Vencidas essas etapas o juiz passa, ento, coleta das provas
testemunhais e periciais que vo dar-lhe os subsdios necessrios para prolatar
uma sentena.
Com relao prova testemunhal, o Cdigo de Processo Civil
bastante claro: "A prova testemunhal sempre admissvel, no dispondo a lei de
modo diverso." (Art. 400). Entretanto, como esperamos ter demonstrado pela
exposio acima, acreditamos que em determinao de paternidade a prova
testemunhal deve ser avaliada cum grano salis, j que, como anteriormente
mencionado, a concepo ocorre no interior do corpo da mulher e, assim, no
admite testemunhas. Desse modo, a nica maneira realmente eficaz de se
comprovar a paternidade atravs da percia tcnica, mais especificamente pelos
exames em DNA.
A Soluo
Nos ltimos anos, com os avanos do Projeto Genoma
Humano, foi definitivamente provado que, com exceo dos gmeos
monozigticos (univitelinos), todos os seres humanos diferem na sua constituio
gentica, que absolutamente nica
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. Em outras palavras, cada ser humano
representa um experimento evolucionrio singular jamais houve e jamais haver
um outro indivduo igual. Esta individualidade, que certamente d uma dimenso
de dignidade a cada vida humana, pode tambm ser aplicada de maneira prtica
para fazer, entre outros:
determinao de paternidade e de outros vnculos
genticos;
identificao de criminosos e vtimas;
determinao de zigosidade de gmeos;
tipagem para transplantes de rgos;
aconselhamento gentico e diagnstico pr-natal de
doenas genticas.
A individualidade gentica humana pode ser estudada ao nvel
do produto gnico (protenas e enzimas), mas pode ser caracterizada com uma
preciso infinitamente maior ao nvel do DNA. Por exemplo, se fizermos a tipagem
conjunta de grupos sangneos, HLA (locos A e B), enzimas eritrocitrias e
protenas sricas (total de aproximadamente 40 testes genticos) podemos
calcular que a probabilidade que dois indivduos escolhidos ao acaso na
populao apresentem resultados idnticos de 8X10
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(que muito menor que a
recproca da populao mundial). Em determinao de paternidade isto
corresponde a um poder de excluso de 99,97% (o poder de excluso denota a
capacidade de um sistema de testes excluir uma paternidade falsamente
imputada). Por outro lado, pelo estudo do DNA com apenas duas sondas
multilocais - F10 e DNF24, que usamos no Ncleo de Gentica Mdica (GENE) -,
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a probabilidade de identidade ao acaso cai para 8X10
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o poder de excluso
sobe consideravelmente para 99,99995%!
A variabilidade humana em nvel do DNA enorme. Dois
genomas humanos escolhidos ao acaso diferem aproximadamente em uma de
cada 500 bases do DNA (nucleotdeos). Como o genoma humano tem 3X109
bases, isto implica em 6 milhes de diferenas! Certamente, essa enorme
variao (polimorfismo) poderia ser completamente elucidada e caracterizada se
fizssemos o sequenciamento completo dos dois genomas sendo comparados,
uma tarefa impraticvel com a metodologia atual. Entretanto, isto no necessrio
porque a abundncia de variao tal que a simples amostragem de um
determinado nmero de regies variveis do DNA nos permite caracterizar
confiavelmente a individualidade humana. Nos ltimos anos foram desenvolvidas
metodologias para estudar os polimorfismos de DNA tanto em nvel de variao de
seqncia quanto de tamanho. No ltimo ano, inclusive, houve avanos enormes
no desenvolvimento e utilizao de "microchips de hibridizao de DNA",
metodologia essa que poder tornar-se de escolha no futuro. Porm, muito mais
prtico e eficiente, hoje em dia, o estudo de regies de minissatlites e
microssatlites do DNA. Estes so segmentos genmicos onde um tipo de
seqncia de DNA se repete vrias vezes, como se estivesse gaguejando (Figura
1). Se a seqncia repetitiva tem mais de 6 bases, falamos em minissatlites e se
menos de 6 bases, em microssatlites. A chave do polimorfismo nestas regies
que o nmero de repeties varia entre indivduos e pode ser estudado com
sondas de DNA ou com a chamada Reao em Cadeia da Polimerase (PCR).
Entraremos em maiores detalhes metodolgicos mais adiante. O importante, aqui,
frisar a imagem de genomas humanos imensamente variveis que podem ser
abordados metodologicamente com tipos de exames diferentes e
complementares. As vrias tcnicas que j foram desenvolvidas para estudo de
polimorfismos de DNA possuem eficincia e especializaes diferentes, formando
assim um verdadeiro cardpio, no qual os cientistas e laboratrios podem escolher
o mtodo mais adequado para solucionar o problema em mos. Por isso, a
expresso correta "testes em DNA" e no "teste de DNA".










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FIGURA 1

Fundamentos tericos dos testes de paternidade
Excluses de paternidade so logicamente incontestveis,
enquanto a prova da paternidade depende de inferncias estatsticas baseadas na
ausncia de uma excluso. O poder de excluso dos testes em DNA utilizados em
determinao de paternidade pode ser medido pela probabilidade mdia de
excluso (PE), isto , a probabilidade de se excluir um indivduo qualquer que
tenha sido falsamente acusado, atravs de uma determinada bateria de exames.
Isto forma a base para o clculo da seguinte probabilidade de paternidade: 1/(1-
PE). Esta probabilidade simples de calcular e depende somente das freqncias
allicas da populao em geral. Entretanto, para pares especficos me-filho, em
alguns casos o alelo paterno obrigatrio pode ser freqente, enquanto em outras
situaes ele pode ser raro. intuitivo entender que a ausncia de excluso na
ltima situao ser mais significativa que na primeira. Isto pode ser quantificado
dividindo-se a verossimilhana ("probabilidade") de obter os resultados
observados na hiptese do possvel pai ser realmente o pai biolgico (X) pela
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verossimilhana de obter os resultados na suposio que um outro indivduo
qualquer seja o pai verdadeiro (Y). Esta razo de verossimilhanas (X/Y),
chamada ndice de Paternidade (IP), uma maneira de quantificar a evidncia
encontrada em favor da paternidade biolgica do possvel pai. O ndice de
Paternidade pode ser convertido para uma probabilidade posterior de paternidade
com o Teorema de Bayes. Entretanto, o teorema nos fora a ter de escolher uma
probabilidade a priori, isto , um valor subjetivo da chance de paternidade anterior
ao teste, dado essencial para o clculo de acordo com as regras do teorema.
Probabilidades a priori constantes (0,5) tm sido consensualmente utilizadas em
todo o mundo. Entretanto, em funo dos altos valores obtidos rotineiramente para
ndices de Paternidade com testes em DNA (>10
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), a escolha da probabilidade a
priori torna-se irrelevante na prtica.
Testes de Paternidade com Sondas Multilocais
Os locos polimrficos mais conhecidos no genoma humano so
os minissatlites ilustrados na Figura 1. Em 1985, Jeffreys e colaboradores

foram
os primeiros a mostrar que sondas derivadas do gene da mioglobina humana
(sondas 33.6 e 33.15) eram capazes de se hibridizar simultaneamente com
diversos locos de minissatlites, produzindo padres de bandas complexos e
especficos para cada indivduo, que foram chamados de "impresses digitais de
DNA". Depois, outras sondas similares (sondas multilocais) foram descritas na
literatura mundial, incluindo a F10, DNF24 e (CA)n que so utilizadas nas percias
mdicas de determinao de paternidade do Ncleo de Gentica Mdica (GENE).
A sonda F10, originalmente desenvolvida por nosso grupo de pesquisa na UFMG
a partir de um gene do Schistosoma mansoni e, em seguida, adaptada para um
procedimento no-radioativo com quimioluminescncia, detecta de 15 a 20
fragmentos variveis de DNA maiores que 4 kb por indivduo (alm de bandas
menores que por opo no so consideradas nos clculos) e sozinha permite
uma probabilidade mdia de excluso de 99,98%. A associao da F10 com duas
outras sondas multilocais [DNF24 e (CA)n] permite uma poder de excluso
superior a 99,999999%. As sondas multilocais so to eficientes em determinao
de paternidade que permitem distinguir com facilidade quem o pai biolgico em
casos em que dois irmos ou pai e filho so os indigitados possveis pais.
A anlise dos dados laboratoriais gerados por sondas
multilocais de DNA em determinao de paternidade simples e direta (Figura 2).
Aps os exames serem completados, so obtidas imagens em filmes de raio X
(autorradiografias) constitudas de vrias bandas, as quais conjuntamente formam
as impresses digitais de DNA das pessoas testadas. Fotografias destas
imagens so incorporadas aos Laudos Periciais como evidncia fsica do
resultado do exame. Deste modo, a interpretao dos dados feita pelo perito pode
ser ratificada por quem tem acesso ao Laudo Pericial.
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FIGURA 2



Nos casos em que no h excluses, a avaliao estatstica e o
clculo do ndice de paternidade baseiam-se em um nico parmetro: a proporo
x de bandas que so em mdia compartilhadas por pessoas no aparentadas.
importante salientar que estudos realizados com sondas multilocais em grupos
tnicos diferentes no mostraram nenhuma variao significativa no valor de x.
Tambm a consanguinidade no afeta a eficcia das sondas multilocais. A
frequncia de compartilhamento de bandas x permanece a mesma quando
calculada para pares marido-esposa (que, por definio, so representativos do
padro local de endogamia em uma comunidade). Assim, no h nenhuma
evidncia de que a existncia de sub-grupos de casamentos consangneos v
comprometer os resultados das percias com sondas multilocais. Isto ocorre
porque a frequncia de compartilhamento de bandas x no um parmetro
populacional apenas, sendo ditada em sua maior parte pelo nvel de resoluo
eletrofortica dos gis. Como resultado disso, muitos locos variveis diferentes
contribuem bandas para um dado intervalo de gel, oferecendo desta maneira uma
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atenuao de mudanas nas frequncias genotpicas que poderiam ser causadas
por endocruzamento. Estas valiosas propriedades, aliadas a grande
informatividade, estabilidade somtica e herana Mendeliana tornam as
Impresses Digitais de DNA obtidas especificamente com a metodologia das
sondas multilocais, os testes mais poderosos disponveis na atualidade para
percias mdico-legais de paternidade.
Sondas Unilocais
Como o prprio nome indica, cada sonda multilocal examina um
minissatlite diferente de cada vez, ao contrrio das sondas multilocais que
reconhecem vrios, simultaneamente. Existem muitas sondas unilocais
disponveis que podem ser combinadas para uso em determinao de
paternidade. Que critrios devem ser usados para a escolha das sondas
especficas? As sondas devem ser loco-especficas, de preferncia no devem
estar no mesmo brao cromossmico e devem apresentar bom equilbrio entre
variabilidade e estabilidade. Entre os locos usualmente usados, o mais varivel e
informativo o D1S7 (MS1), com mais de 99% de heterozigose. Entretanto, sua
elevada taxa de mutao (0,05 por gameta) o torna inadequado para testes de
paternidade. Por outro lado, locos com variabilidade mais baixa (<96% de
heterozigose) tendem a apresentar distribuies de freqncias allicas
irregulares, de maneira que pequenos erros na medida do tamanho dos alelos
podem resultar em desvios relativamente grandes na estimativas das freqncias.
Eles so tambm mais vulnerveis efeitos de deriva gentica e endogamia (veja
abaixo). Chakraborty e Jin

desenvolveram uma teoria estatstica que permite
estabelecer quantos locos devem ser tipadas a um dado nvel de heterozigose (H)
para permitir inferncias no-ambguas sobre relaes de parentesco. Por
exemplo, se usarmos somente locos de minissatlites com H 90% precisaremos
de estudar seis locos diferentes para distinguir sempre relaes do tipo pai-filho.
Utilizao do PCR para Anlise Unilocal
A Reao em Cadeia da Polimerase (PCR) uma alternativa s
sondas unilocais j que permite o estudo de apenas um loco polimrfico de cada
vez. possvel amplificar minissatlites e microssatlites utilizando iniciadores
elaborados partir de sequncias de DNA flanqueando as repeties em tandem.
O uso da metodologia de PCR no laboratrio tem duas vantagens distintas: 1) a
identificao dos alelos simples, facilitando consideravelmente o clculo dos
ndices de paternidade em comparao com as sondas unilocais; 2) a
sensibilidade elevada, permitindo que o exame seja feito com quantidades
mnimas de DNA genmico, mesmo em avanado estado de degradao. Assim a
metodologia da PCR tornou possvel testar a paternidade em situaes
anteriormente impossveis, como por exemplo, utilizando cabelos ou at mesmo
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material exumado (ossos, dentes) em percias aps a morte do possvel pai. A
principal desvantagem da PCR que a tcnica est limitada ao estudo de regies
genticas pequenas, ou seja microssatlites e minissatlites curtos (com poucas
repeties), os quais so relativamente pouco informativos para testes de
paternidade, j que tem baixa heterozigose, poucos alelos e distribuio irregular
de freqncias allicas, potencialmente vulnervel a deriva gentica e efeitos de
sub-estruturao em grupos tnicos. De acordo com Chakraborty e Jin o nmero
de locos necessrios para determinar com segurana relaes pai-filho sobe para
ao redor de 15 com H ### 70-80% (valor usual de diversidade para
microssatlites). Isto ocorre porque, na prtica, as populaes apresentam
considervel grau de subestruturao e o poder de excluso efetivo
consideravelmente inferior ao valor calculado teoricamente. preocupante a
observao de que alguns laboratrios de determinao de paternidade no Brasil
esto oferecendo percias a partir de resultados baseados em apenas 6-9 testes
de PCR de microssatlites, incorrendo o risco de chegarem a concluses
equivocadas.
Paradoxo Operacional
Sob o ponto de vista lgico, excluses de paternidade so
categricas, enquanto incluses so probabilsticas. Entretanto, um fato pouco
compreendido que a situao operacional dentro do laboratrio inversa. Erros
tcnicos nos procedimentos de testes de paternidade podem criar falsas
excluses, ao passo que praticamente impossvel criar uma falsa incluso.
Assim, todos os laboratrios devem obrigatoriamente ter mecanismos para
reconfirmar rotineiramente todas as excluses, para poder garantir que elas
representam "verdadeiras excluses". No Ncleo de Gentica Mdica (GENE) em
Belo Horizonte as rotinas descritas abaixo so seguidas rigorosamente em casos
de excluses, para eliminar a possibilidade de trocas de amostras na coleta ou no
laboratrio:
1) Realizao de um teste de "maternidade" que estabelece se
o compartilhamento de alelos entre a me e o filho compatvel com um
parentesco de primeiro grau. 2) Repetio da anlise dos resultados com inverso
dos dados entre me e filho. 3) Coleta de duas amostras de sangue de cada
pessoa. Uma amostra de DNA preparada a partir do primeiro tubo e testada com
a metodologia de sondas multilocais. Se houver uma excluso, a confirmao do
resultado feita com o segundo tubo de sangue (Figura 2). Para fugir de
armadilhas tcnicas tais como digesto parcial e mutaes de bandas, o GENE
executa a confirmao da excluso com um testes auxiliares usando a
metodologia da PCR.
Concluses
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Em sntese, a eficcia e confiabilidade determinao da
paternidade pelas impresses digitais multilocais do DNA humano est
amplamente fundamentada na literatura cientfica internacional com base em
dados genticos e populacionais. A tcnica das impresses digitais de DNA com
sondas multilocais combina caractersticas desejveis de elevado nvel de
informao aliado a insensibilidade flutuaes de frequncias allicas entre
diferentes populaes ou dentro delas. Resultados empricos de milhares de
famlias testadas mostraram que os testes com sondas multilocais efetivamente
resolvem todos as percias de paternidade nas quais a criana, a me e o possvel
pai esto disponveis para teste. Percias em casos ditos de deficincia (em que
a me ou o possvel pai no esto disponveis para o teste), podem ser
igualmente resolvidas, mas por razes de espao no sero discutidas aqui.
Sondas unilocais, por outro lado, tem alto grau de informao, com o problema
que a classificao de alelos prejudicada pela distribuio quasi-contnua do
tamanho dos alelos. Desde que as taxas de mutao sejam conhecidas e que as
freqncias allicas adequadas estejam estabelecidas nos principais grupos
tnicos, baterias de exames compostas por 5-6 sondas unilocais com alto nvel de
informao devem ser capazes de resolver tambm todos as percias padro de
paternidade. J a metodologia de tipagem de microssatlites e minissatlites
curtos pela PCR tem a vantagem de apresentar distribuies allicas discretas,
apesar da classificao absoluta dos alelos ainda no ser possvel devido a
variaes internas das sequncias. Entretanto, como a variabilidade da maioria
dos microssatlites e minissatlites curtos estudados pela PCR limitada, um
elevado nmero de locos (15 ou mais) precisa ser estudado de modo a fornecer
nveis aceitveis de poder de excluso. Por outro lado, os microssatlites so
muitos teis como testes adicionais s sondas multilocais e unilocais, ou como
testes de primeira linha quando as amostras a ser utilizadas so pequenas ou
esto degradadas. De qualquer forma, os laboratrios de determinao de
paternidade devem ter domnio tcnico sobre todas as trs categorias de testes
disponveis e usa-las racionalmente em cada caso. Desta maneira, devero poder
resolver todas as disputas de paternidade sem nenhuma sombra de dvida, ou
seja, com 100% de confiabilidade nas excluses e com mais de 99,9999% nas
incluses.
Como previmos j em 1991 tem ocorrido no Brasil uma grande
proliferao de laboratrios oferecendo exames de determinao de paternidade
em DNA. Assim, os prprios consumidores, e nos casos judiciais os advogados e
juzes, tem de fazer escolhas, muitas vezes entre servios que realizam percias
mdico-legais utilizando metodologias completamente diferentes em eficincia e
complexidade metodolgica. Esta heterogeneidade est frequentemente
disfarada pela utilizao publicitria da expresso teste de DNA. Como vimos
acima, na determinao de paternidade pelo DNA podem ser utilizados diferentes
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testes em DNA, ou seja, testes com sondas multilocais (Impresses Digitais de
DNA), testes com sondas unilocais e testes com a PCR. O GENE utiliza todos os
trs mtodos em combinaes variadas de acordo com o caso especfico, visando
sempre obter o mximo possvel de confiabilidade para o resultado. Entretanto,
outros laboratrios podem optar por utilizar apenas uma nica metodologia,
diminuindo assim a necessidade de desenvolvimento de metodologia de maior
complexidade como as impresses digitais de DNA pelas sondas multilocais e
minimizando os custos laboratoriais. Quais so, ento, os parmetros pelos quais
podemos comparar a qualidade de laboratrios diferentes que utilizam mtodos
diversos? Listamos abaixo alguns elementos que consideramos cruciais e que
podem ser empregados para avaliar a confiabilidade de um servio de
determinao de paternidade pelo DNA.
1) O laboratrio deve estar sob a direo de um mdico, de
preferncia com um ttulo de mestre ou doutor (Ph.D.) em gentica, biologia
molecular ou bioqumica e com comprovada competncia prtica e terica em
determinao de paternidade.
2) O laboratrio deve realizar as percias com 2 sondas
multilocais, ou ento 6 sondas unilocais ou pelo menos 15 microssatlites
estudados pela PCR. O laboratrio deve dominar tecnicamente pelo menos duas
das trs metodologias existentes para testes de determinao de paternidade em
DNA.
3) O laboratrio deve ter uma rotina de trabalho que
impossibilite que erros, tais como troca de rtulos em tubos, passem
desapercebidos.
4) No caso de sondas unilocais ou estudo de microssatlites
pela PCR o laboratrio deve ter construdo um banco de dados das frequncias
populacionais dos sistemas genticos usados por ele. Este banco de dados deve
ter sido obtido com as mesmas tcnicas usadas pelo laboratrio na determinao
de paternidade e utilizando a mesma populao. Bancos de dados da populao
americana ou europia no so aplicveis no Brasil. O banco de dados deve estar
disponvel para consulta e preferencialmente ter sido publicado.
5) Nos casos em que h excluso da paternidade, o laboratrio
deve garantir que esta excluso seja comprovvel com pelo menos dois tipos de
exames genticos diferentes.
6) Nos casos em que no h excluso da paternidade, o laudo
pericial deve incluir o ndice de Paternidade para cada sistema gentico utilizado,
o ndice de Paternidade Final e a Probabilidade de Paternidade, sendo
explicitadas as probabilidades a priori utilizadas.
A tica Mdica na Determinao de Paternidade
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Defendemos a posio que a percia de determinao de
paternidade inalienavelmente um ato mdico, alicerado em capacitao
tcnica, como exposto acima, mas igualmente em uma capacitao tica. A
atuao desavisada de profissionais inadequadamente formados nos aspectos
ticos e mdico-legais pode levar a resultados desastrosos. A prtica da
determinao de paternidade deve espelhar a medicina como um todo e pautar
rigidamente o seu trabalho de acordo com cinco princpios ticos fundamentais:
autonomia, privacidade, justia, igualdade e qualidade.
De acordo com o princpio da autonomia, os testes de
paternidade devero ser estritamente voluntrios e a informao resultante deles
deve ser absolutamente pessoal. Seguindo o princpio da privacidade, os
resultados dos testes genticos de determinao de paternidade de um indivduo
no podero ser comunicados a nenhuma outra pessoa sem seu consentimento
expresso. O princpio da justia garante que o perito se manter absolutamente
imparcial na avaliao cientfica dos resultados dos exames de paternidade
realizados por ele, independente da identidade das pessoas envolvidas. O
princpio da igualdade rege que todos as percias sero tratadas com igual
seriedade, sem qualquer considerao de classe scio-econmica, origem
geogrfica, raa e religio. Finalmente, o princpio da qualidade deve assegurar
que todos os exames de paternidade sero feitos com a tecnologia mais moderna
disponvel e que os laudos de paternidade oferecidos tero confiabilidade
absoluta.

Abstract-DNA as the (only) Witness in DeterminingPaternitlr
The need to establish paternity relationships often arises legally,
socially or medically Since conception occurs inside the woman's body and thus cannot
have witnesses, the only effective way to solve this problem is through genetic testing. In
special, DNA tests allow us to resolve paternity disputes with certainty in viriually every
case. This can be achieved with multilocus minisatellite probes, batteries of single locus
probes or PCR testing of sets of minisatellite and microsatellite loci. Differences in the
efficiency of these several techniques can be compensated for by adjusting the number of
tests performed. In this article we review the advantages and drawbacks of each of the
three methodologies most commonly used to resolve paternity cases. On these bases, we
propose criteria to judge the reliability of laboratories involved in paternity testing. Finally
we stress the fact that patemity testing is a medical act, based not only on technical
competence but also on ethical qualification. Ill advised participation in paternity testing by
professionals inadequately trained in ethics and medical forensics can produce disastrous
results.
14
Referncias Bibliogrficas
1. Buss DM. Psychological sex differences: origins through sexual selection. Am Psychol 1995;
50:164-8.
2. Betzig L. Causes of conjugal dissolution: a cross-cultural study. Curr Anthropol 1989; 30:654-76.
3. Buss DM. Paternity uncertainty the complex repertoire of human mating strategies. Am Psychol
1996;51:161-2.
4. Macintyre S, Sooman A. Non-patemity prenatal genetic screening. Lancet 1991;338:869-71.
5. Baker R, Bellis M. Human sperm competition. New York: Chapman Hall, 1995.
6. Brock DJH, Shrimpton AE. Non-patemity prenatal genetic screening. Lancet 1991;338:1151.
7. LeRoux MG, Pascal MT, Herbert O, David A, Moisan JP Non-paternity and genetic counselling.
Lancet 1992;340:607.
8. Sasse G, Mller H, Chakraborty R, Ott J. Estimating the frequency of nonpaternity in Switzerland.
Hum Hered 1994;44:337-43.
9. Wilcox AJ, Weinberg CR, Baird DD. Timing of sexual intercourse in relation to ovulation: effects
on the probability of conception survival of the pregnancy sex of the baby. New Engl J Med
1995;333:1517-21.
10. James WH. The incidence of superfecundation of double patemity in the general population.
Acta Genet Med Gemellol 1993;42:257-62.
11. Lu H-L, Wang CX, Wu FQ, Li JJ. Patemity identification in twins with different fathers. J Forens
Sci 1994;39:1100-2.
12. Verma RS, Luke S, Dhawan P Twins with different fathers. Lancet 1992; 339:63-4.
13. Wenk RE, Houtz T, Brooks M, Chiafari FA. How frequent is heteropaternal superfecundation?
Acta Genet Med Gemellol 1992;41:43-7.
14. Alem JA. Investigao de paternidade: doutrina e jurisprudncia. So Paulo: EU, 1987.
15. Negro T. Cdigo de Processo Civil e legislao processual em vigor. 27 ed. So Paulo:
Saraiva, 1996.
16. Sheridan R, Llerena J, Iatkins S, Debenham P Cawood A, Bobrow M. Fertiliity in a male with
trisomy 21. J Med Genet 1989;26:294-8.
17. Sokol RZ, Sparkes R. Demonstrated paternity in spite of severe idiopathic oligospermia. Fertil
Steril 19.;47:356-8.
18. Terzoli G, Lalatta F Lobbiani A, Simoni G, Colucci G. Fertility in a 47XXY patient: assessment of
biological paternity by deoxyribonucleic acid fingerprinting. Fertil Steril 1992;58:821-2.
19. Pena SDJ, Prado VF Epplen JT DNA diagnosis of human genetic individuality. J Mol Med
1995;73:555-64.
20. Pena SDJ, Macedo AM, Braga VMM, Rumjanek FD, Simpson AJG. F10 the gene for the
glycine-rich major eggshell protein of Schistosoma mansoni recognizes a family of hypervariable
minisatellites in the human genome. Nucleic Acids Res 1990;18:7466
21. Ip NY Nicholas L, Baum H, Balazs I. Discovery of a novel multilocus DNA polymorphism
[DNF24]. Nucleic Acids Res 1989;17:4427
22. To affnity...beyond! [editorial]. Nat Genet 19%;14:367-70. 23. Pena SDJ, Jeffreys AJ. Breve
introduo s impresses digitais de DNA. Rev Bras Genet 1993;16:857-79.
24. Popper K. The logic of scientific discovery. 3rd ed. London: Hutchinson, 1972.
25. Li CC, Chakravarti A. An expository review of two methods of calculating the paternity
probability. Am J Hum Genet 1988;43:197-205.
26. Jeffreys AJ, Wilson V, Thein SL. Hypervariable "minisatellite" regions in human DNA. Nature
1985;314:67-73.
27. Jeffreys AJ, Wilson V, Thein SL. Individual-specifc "fingerprints" of human DNA. Nature
1985;316:76-9.
28. Pena SDJ, Santos PC, Campos MCBN, Macedo AM. Paternity tesfing in Brazil by DNA
fingerprinting with the multilocus probe F10. Cienc Cult 1993;45:236-40.
29. Pena SDJ, Chabraborty,R. Paternity testing in the DNA era. Trends Genet 1994;10:204-9.
30. Jeffreys AJ, Turner M, Debenham P The efficiency of multilocus DNA fingerprinting probes for
individualization and establishment of family relationships, determined from extensive casework.
Am J Hum Genet 1991;48:824-40.
31. Chakraborty R, Jin L. A unified approach to study hypervariable polymorphisms: statistical
considemtions of determining relatedness and populafion distances. In: Pena SDJ, Chakraborty R,
15
Epplen JT, Jeffreys AJ, editors. DNA fingerprinting-state of the science. Basel: Birkhuser, 1993:
153-76.
32. Pena SDJ. Pitfalls of paternity testing based solely on PCR typing of minisatellites and
microsatellites. Am J Hum Genet 1995;56:1503-4.
33. Pena SDJ. Determinao de paternidade pelo estudo direto do DNA: estado da arte no Brasil.
In: Teixeira SF editor. Direitos de famlia e do menor: inovaes e tendncias. Belo Horizonte: Del
Rey, 1991: 65-81.

Endereo para Correspondncia:
Ncleo de Gentica Mdica de Minas Gerais (GENE)
Av. Afonso Pena 3111/9
Belo Horizonte, MG 30130-909
Fone: (031) 227-3496
Fax: (031) 227-3792

(in, Biotica, Revista publicada pelo Conselho Federal de
Medicina, Simpsio: tica e Gentica, Seco: Caso Clnico, vol. 5, n 02,
1997, pgs. 231/240)