REPLICACIN DEL DNA

Doctorado en Ciencias mencin Biologa Celular y Molecular Aplicada Abril 2011

Ren Hoffstetter Gajardo

Introduccin

Replicacin
Es el proceso por el cual el DNA madre se copia y resultan dos molculas de DNA hijas exactamente iguales. Este proceso ocurre en la fase S (Sntesis) del ciclo celular

Caractersticas

Caractersticas de la replicacin
Carcter semi-conservador Realizacin simultnea en ambas hebras, de forma secuencial y bidireccional. Origen monofocal o multifocal. Carcter semidiscontinuo

Carcter semi-conservador
Molcula de DNA progenitora
Nuevos nucletidos

La replicacin semiconservadora es coherente con el modelo de doble hlice

Hebra nueva

Conservadores

Dispersante

Semiconservadora

Hebra nueva

Hebra hija

Hebra paterna

Hebra paterna

Hebra hija

Sntesis simultnea, secuencial y bidireccional.

(Luque et al., 2006)

Requerimientos bsicos
Cebador (primer) fragmento pequeo con un extremo 3-OH libre, comnmente RNA, que se une al DNA molde de forma complementaria y antiparalela. dNTPs, de los cuatro tipos de nucletidos. Cofactores (mg+2) Molde o plantilla

Replicacin

Replicacin semi-discontinua

Protenas que participan

Protenas mas importantes

Helicasa

Protenas SSB

Primasas

DNA polimerasa

Exonucleasa

Ligasa

Helicasa
Rompe los puentes de hidrgeno que unen las nitrogenadas. 1000 pb/seg bases

Protenas SSB (Single Strand DNA Binding protein) o RPA

Conjunto de protenas encargadas de la estabilizacin del ADN monocatenario, impide que el DNA se renaturice o forme estructuras secundarias (hairpin).

Primasas
Es una enzima que sintetiza pequeos fragmentos de RNA, de unos 5 a 10 nucletidos, conocidos como cebadores, complementarios a la hebra de ADN que se copia durante la replicacin. Sntesis de novo

Ligasas
Es una enzima capaz de catalizar la unin entre dos molculas, dando lugar a un nuevo enlace qumico.

Topoisomerasa
Esta protena endereza la molcula de ADN evitando el superenrollamiento. Topiosomerasa I corta una hebra de ADN y luego la une. Topoisomerasa II corta ambas hebras de ADN. Ambas enzimas actan como nucleasas y ligasas

Topoisomerasa

DNA polimerasa
DNA polimerasas en procariotas:

DNA polimerasa I : eliminacin del cebador de ARN. Reparacin del ADN. DNA polimerasa II : reparacin del ADN. DNA polimerasa III : duplicacin cromosmica.

DNA polimerasas en eucariontes:

DNA polimerasa DNA polimerasa DNA polimerasa DNA polimerasa

: polimerasa y primasa. : polimerasa y exonucleasa y : reparacin del DNA : sntesis de DNA mitocondrial y exonucleasa.

DNA polimerasa

Protena PCNA (clamp)

Se une a la DNA polimerasa y permite su desplazamiento a travs del ADN sin que esta se desligue de este.

Etapas de la replicacin
Iniciacin -Elongacin -Terminacin
-

Iniciacin
Reconocimiento de orgenes de replicacin.
   

Secuencia de ADN rica en A-T En procariontes existe un nico origen de replicacin: Ori C En eucariontes existen numerosos orgenes de replicacin. Se inician dos horquillas de replicacin de cada origen (bidireccional).

Separacin de las hebras Posicionamiento de la maquinaria para la replicacin.

Iniciacin

Elongacin
Crecimiento bidireccional de las horquillas de replicacin. Replicacin semiconservativa, semidiscontinua, coordinada. Polimerasas: solo pueden elongar una hebra preexistente inicio de la elongacin requiere un cebador.

Elongacin
3 3 5 3 5 3 5 5

Elongacin
3 3 5 3 5 3 5 5

La DNA pol sintetiza DNA en cadena continua, mientras que en la cadena retardada la DNA pol sintetiza los fragmentos de Okazaki iniciando desde el extremo 3 del cebador.

Elongacin
3 3 5 3 5 3 5 Okazaki fragment 3 5 5

Elongacin

Terminacin
Reconocimiento de terminales de replicacin. Desensamble del replisoma.

Terminacin
Proceso complejo menos conocido que los anteriores:

3 3 5 3 5 35 35 3 5 5

La actividad de exonucleasa de la polimerasa I remueve los primers de (ARN ADN pol, en eucariontes)

3 3 5 3 5 35 3 5

La DNA Polimerasa I rellena el lugar ocupado por el cebador e inserta bases correspondientes. Una ligasa une los extremos de cada fragmento mediante enlace fosfodiester.

Replicacin
Procariontes

Eucariontes