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UROCULTIVO

UROCULTIVO

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Published by: Patty Lu Alexa Intriago on Jul 24, 2011
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UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA
FACULTAD DE MEDICINADEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA
PRACTICAS DE LABORATORIOUROCULTIVO
Maye Bernal Rivera
Introducción
El cultivo de la orina “Urocultivo” se solicita para determinar el agente etiológico deinfección urinaria. El urocultivo de rutina únicamente está orientado para identificar bacterias gram negativas y gram positivas. Si sospecha etiología por 
Mycobacteriumtuberculosis
u otras bacterias decrecimiento exigente debe especificarse en la ordende solicitud ya que tanto la toma de la muestra como el procedimiento en ellaboratorio son diferentes
PRACTICA DE LABORATORIO
Objetivo
Proporcionar al estudiante el conocimiento científico y las habilidades prácticas de losmétodos y técnicas utilizados en Microbiología Médica para el aislamiento eidentificación del agente etiológico implicado en los procesos de infección urinaria
PARTE I. Siembra y lectura del sedimento urinario
Objetivos específicos
-
Conocer las diferentes metodologías para el aislamiento e identificación delagente etiológico en infección urinaria
-
Aislar el posible agente etiológico del paciente asignado
-
Realizar la lectura e interpretación del sedimento urinario
Materiales
-
Muestra: Orina del paciente (Ver anexo para instrucciones de la toma de lamuestra)
-
Medios de cultivo:
-
Técnica No. 1 - Microcultivo de Kass: Agar Cled y Mac Conkey
-
Técnica No. 2 - Hoeprich: Agar sangre y Mac Conkey
-
Tubo de centrífuga, láminas y microscopio
-
Micropipeta, asas bacteriológicas, mechero
-
Incubadora a 37ºC
Procedimiento
 
 
Técnica No. 1 Microcultivo de Kass
-
Identificar adecuadamente el cilindro que contiene la paleta con los medios decultivo
-
Mezclar la muestra de orina y destapar el frasco
-
Introducir la paleta en la orina de manera que la orina cubra completamente lasuperficie de los medios
-
Cerrar el cilindro herméticamente
-
Incubar a 37ºC por 24 horas
-
Centrifugar 10 ml de orina a 2500 rpm por 5 minutos
-
Leer el sedimento urinario en 40X y anotar los resultados
Técnica No. 2 Método del asa calibrada o Hoeprich
-
Identificar correctamente los medios de cultivo (A. sangre y Mc Conkey)
-
Mezclar la muestra de orina y destapar el frasco
-
Medir con la micropipeta 100 ul de orina y colocarlos sobre la superficie de cadauno de los medios
-
En agar sangre sembrar en cuadrícula para hacer el recuento de UFC
-
En Mac Conkey sembrar por agotamiento para aislar el microorganismo
-
Incubar a 37ºC por 24 horas
-
Centrifugar 10 ml de orina a 2500 rpm por 5 minutos
-
Leer el sedimento urinario en 40X y anotar los resultados
Actividad
1. Escriba los agentes etiológicos gram negativos urinarios más frecuentes ennuestro medio2. Escriba los agentes etiológicos gram positivos urinarios más frecuentes en nuestromedio3. Investigue que es el examen fraccionado de orina y su utilidad
 
4. Realice la orden de solicitud para el laboratorio clínico
 
PARTE II. Lectura e interpretación de los cultivos. Identificacióndel agente etiológico.
Materiales
-
Cultivos bacterianos
 
-
Reactivos y medios para las diferentes pruebas bioquímicas
 ProcedimientoTécnica No. 1 Microcultivo de Kass
-
Observar si hubo o no crecimiento en el medio de kled y si hubo crecimientodeterminar si es puro o mixto y hacer el recuento de unidades formadoras decolonias (UFC) haciendo la comparación con la tabla de lectura que trae el kit
 
-
Observar si hubo o no crecimiento en el medio de Mac Conkey y si hubocrecimiento determinar si es puro o mixto. Si el crecimiento es positivo realizar apartir de una colonia de este medio las pruebas bioquímicas para la identificacióndel germen aislado
Técnica No. 2 Método del asa calibrada o Hoeprich
-
Observar si hubo o no crecimiento en el medio de agar sangre y si hubocrecimiento determinar si es puro o mixto
-
Hacer el recuento de UFC, contando las colonias y multiplicando por cien
-
Observar si hubo o no crecimiento en el medio de Mac Conkey y si hubocrecimiento determinar si es puro o mixto. Si el crecimiento es positivo realizar apartir de una de las colonias de este medio las pruebas bioquímicas para laidentificación del germen aislado
Pruebas Bioquímicas para agentes gram negativos
OXIDASA
PrincipioMateriales
 - Cepa a estudiar - Reactivo: diclorhidrato de tetrametil para-fenilen-diamino
Procedimiento
 1. Con un palillo de madera, transferir parte del centro de una colonia a lasuperficie del papel2. Agregar una gota del reactivo y observar la formación inmediata de uncompuesto coloreado azul-morado
Resultados
 - Positiva: Una prueba positiva esta dada por la aparición de un complejo azul-morado- Negativa: la coloración queda igual a la de la colonia en estudio- Falsas Positivas: El oxígeno atmosférico y la luz oxidan el reactivo, por lo quela lectura debe hacerse ante de 30 segundos
BATERIA:
-
 
TSI
-
 
LIA
-
 
SIMONS CITRATO
-
 
UREA
-
 
SIM
-
 
MR/VP
-
 
OF GLUCOSA

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