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ESCUELA POLITCNICA DEL EJRCITO

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA CARRERA DE INGENIERIA EN CIENCIAS AGROPECUARIAS SANTO DOMINGO DE LOS TSCHILAS

TEMA

EVALUACIN DEL EFECTO DE UN PROBITICO NATIVO ELABORADO EN BASE A Lactobacillus acidophilus y Bacillus subtilis EN POLLOS BROILER ROSS-308 EN SANTO DOMINGO DE LOS TSCHILAS.

AUTORES

JUAN CARLOS AGUAVIL ENRIQUEZ SANTIAGO ADRIAN ENRIQUEZ GUANGA

INFORME TCNICO DEL PROYECTO DE INVESTIGACIN

2011

II

ESCUELA POLITCNICA DEL EJRCITO DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA CARRERA DE INGENIERIA EN CIENCIAS AGROPECUARIAS SANTO DOMINGO DE LOS TSCHILAS

EVALUACIN DEL EFECTO DE UN PROBITICO NATIVO ELABORADO EN BASE A Lactobacillus acidophilus y Bacillus subtilis EN POLLOS BROILER ROSS-308 EN SANTO DOMINGO DE LOS TSCHILAS.

AUTORES

JUAN CARLOS AGUAVIL ENRIQUEZ SANTIAGO ADRIAN ENRIQUEZ GUANGA

INFORME TCNICO DEL PROYECTO DE INVESTIGACIN PRESENTADO COMO REQUISITO PARCIAL PARA OPTAR AL TITULO DE INGENIERO AGROPECUARIO

SANTO DOMINGO - ECUADOR 2011

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EVALUACIN DEL EFECTO DE UN PROBITICO NATIVO ELABORADO EN BASE A Lactobacillus acidophilus y Bacillus subtilis EN POLLOS BROILER ROSS-308 EN SANTO DOMINGO DE LOS TSCHILAS.

JUAN CARLOS AGUAVIL ENRIQUEZ SANTIAGO ADRIAN ENRIQUEZ GUANGA

REVISADO Y APROBADO

ING. VICENTE ANZULES DIRECTOR DE CARRERA CARRERA DE INGENIERIA EN CIENCIAS AGROPECUARIAS

... BLGO. NESTOR SALTOS DIRECTOR

... ING. MSc. GUSTAVO NUEZ CODIRECTOR

. ING. VINICIO UDAY BIOMETRISTA

CERTIFICO QUE ESTE TRABAJO FUE PRESENTADO EN ORIGINAL (EN MEDIO MAGNTICO) E IMPRESO EN DOS EJEMPLARES. UNIDAD DE ADMISIN Y REGISTRO

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EVALUACIN DEL EFECTO DE UN PROBITICO NATIVO ELABORADO EN BASE A Lactobacillus acidophilus y Bacillus subtilis EN POLLOS BROILER ROSS-308 EN SANTO DOMINGO DE LOS TSCHILAS.

JUAN CARLOS AGUAVIL ENRIQUEZ SANTIAGO ADRIAN ENRIQUEZ GUANGA

APROBADO POR LOS SEORES MIEMBROS DEL TRIBUNAL DE CALIFICACIN DEL INFORME TCNICO

CALIFICACIN

FECHA

BLGO. NESTOR SALTOS DIRECTOR

ING. MSc. GUSTAVO NUEZ CODIRECTOR

CERTIFICO QUE ESTAS CALIFICACIONES FUERON PRESENTADAS EN ESTA SECRETARIA UNIDAD DE ADMISIN Y REGISTRO

DEDICATORIA

Al culminar una importante etapa de mi vida, dedico mi esfuerzo y dedicacin, reflejado en esta tesis a: Dios por darme la vida e iluminarme da a da en aquellos momentos difciles siendo mi gua. A mis queridos padres Celso y Carmen, por brindarme todo su apoyo. A mis hermanas Isabel y Anglica, quienes fueron pilar importante durante todo este tiempo, donde compartimos muchas vivencias y alegras. A mis amigos por ofrecerme momentos de entretenimiento los cuales fueron de mucho agrado. Juan Carlos

VI

Al finalizar una importante fase de mi vida estudiantil agradezco primeramente a Dios por darme la vida e iluminarme todo este tiempo y fortalecerme con dedicacin y mucho esfuerzo. A mis apreciados padres Carlos y Blanca, por darme todo su apoyo y proteccin en mi vida universitaria. A mis hermanos, Cesar, Jean Carlos y Nicol, quienes formaron una pieza importante para culminar esta etapa de mi vida donde compartimos muchas ancdotas y alegras. A mis amigos por compartir momentos de distraccin que sirvieron de mucho agrado durante todo este tiempo. Adrian Santiago

VII

AGRADECIMIENTO A la ESPE, su Carrera de Ingeniera en Ciencias Agropecuarias, por participar de nuestra formacin moral e intelectual. Al Director Blgo. Nstor Saltos, Codirector Ing. MSc. Gustavo Nez y Biometrista Ing. Vinicio Uday, por sus acertadas recomendaciones para el desarrollo de esta investigacin. A todos los docentes de la Carrera de Ingeniera en Ciencias Agropecuarias Santo Domingo, por el tiempo invertido en nuestra formacin y compartir sus conocimientos. A todas las personas que de una u otra manera colaboraron para que nuestro proyecto sea viable.

VIII

AUTORA

Las ideas expuestas en el presente trabajo de investigacin, as como los resultados, son discusin de y conclusiones exclusiva

responsabilidad de los autores.

_______________________ FIRMA

_______________________ FIRMA INDICE DE CONTENIDO CONTENIDO I. II. Pg. 1 4 4 4 5

INTRODUCCIN........................................................................................ REVISIN DE LITERATURA.................................................................... 2.1. SISTEMA DIGESTIVO DEL POLLO BROILER............................... 2.1.1. Boca............................................................................................. 2.1.2. Lengua.........................................................................................

IX

2.1.3. Esfago........................................................................................ 2.1.4. Buche........................................................................................... 2.1.5. Proventrculo............................................................................... 2.1.6. Molleja........................................................................................ 2.1.7. Intestino Delgado........................................................................ 2.1.7.1. Duodeno......................................................................... 2.1.7.2. Yeyuno........................................................................... 2.1.7.3. leon................................................................................ 2.1.8. Ciegos.......................................................................................... 2.1.9. Cloaca.......................................................................................... 2.1.10. rganos digestivos complementarios........................................ 2.1.10.1. Pncreas........................................................................ 2.1.10.2. Hgado.......................................................................... 2.1.10.3. Vescula biliar.............................................................. 2.2. INTEGRIDAD INTESTINAL............................................................. 2.3. FACTORES QUE INFLUYEN EN LA SALUD INTESTINAL....... 2.4. FLORA BACTERIANA DEL TRACTO DIGESTIVO...................... 2.5. DESARROLLO DE LA MICROFLORA INTESTINAL................... 2.6. MICROFLORA EN LOS DISTINTOS TRAMOS INTESTINALES. 2.7. FUNCIONES Y EQUILIBRIO DE LA FLORA INTESTINAL........ 2.8. DESEQUILIBRIO MICROBIANO INTESTINAL............................ 2.9. EXCLUSIN COMPETITIVA............................................................ 2.10. INTERACCION DEL SISTEMA INMUNOLGICO Y EL TRACTO INTESTINAL...................................................... 2.10.1. Propiedades del mucus del intestino y de la barrera mucosa... 2.11. LOS PROBITICOS........................................................................... 2.12. IMPORTANCIA DE LOS PROBITICOS....................................... 2.12.1. Criterios para un probitico...................................................... 2.12.2. Mecanismos de accin de los probiticos................................ 2.12.3. Beneficios de los probiticos en produccin animal................ 2.13. BACTERIAS CIDO LCTICAS..................................................... 2.13.1. Bacterias productoras de cido lctico..................................... 2.14. CARACTERISTICAS DE LAS BACTERIAS CIDO LCTICAS. 2.14.1. Caractersticas de Lactobacillus acidophilus........................... 2.14.2. Clasificacin taxonmica de Lactobacillus.............................. 2.14.3. Caractersticas de Bacillus subtilis........................................... 2.14.3 Clasificacin Taxonmica del Gnero Bacillus........................ 2.14.4. Caractersticas de Bifidobacterium........................................... 2.15. BACTERIOCINAS.............................................................................. 2.15.1. Produccin de bacteriocinas..................................................... 2.15.2. Mecanismos de accin de las bacteriocinas............................. 2.16. INTERACCION DE LOS PROBIOTICOS CON LA MATERIA III. ORGNICA Y ELIMINACIN DE MALOS OLORES................... MATERIALES Y MTODOS...................................................................... 3.1. CARACTERISTICAS DEL CAMPO EXPERIMENTAL.................. 3.1.1. Ubicacin poltica...................................................................... 3.1.2. Ubicacin geogrfica..................................................................

5 5 5 5 6 6 6 6 6 6 7 7 7 7 7 9 11 12 12 14 14 15

GASTRO 16 17 17 18 19 19 20 22 22 22 22 24 24 25 25 25 26 27 27 29 29 29 29

3.1.3. Ubicacin ecolgica................................................................... 29 3.2. 30 MATERIALES..................................................................................... 3.2.1. Insumos...................................................................................... 3.2.2. Equipos....................................................................................... 3.2.3. Instrumentos............................................................................... 3.2.4. Herramientas.............................................................................. 3.2.5. Materiales y equipos de laboratorio........................................... 3.3. METODOLOGIA................................................................................ 3.3.1. Fase de laboratorio..................................................................... 3.3.1.1. Recoleccin de muestras............................................... 3.3.1.2. Siembra en los medios de cultivo.................................. 3.3.1.3. Purificacin de colonias................................................ 3.3.1.4. Identificacin de cepas nativas...................................... 3.3.1.5. Caracterizacin de concentracin de bacterias.............. 3.3.1.6. Formulacin del probitico........................................... 3.3.2. Diseo experimental................................................................... 3.3.2.1. Factores a probar........................................................... 3.3.2.2. Tratamientos a comparar............................................... 3.3.2.3. Tipo de diseo............................................................... 3.3.2.4. Observaciones............................................................... 3.3.2.5. Caractersticas de la UE................................................ 3.3.3. Anlisis estadstico..................................................................... 3.3.3.1. Esquema del anlisis de varianza.................................. 3.3.3.2. Anlisis funcional.......................................................... 3.3.4. Datos tomados y mtodos de evaluacin................................... 3.3.4.1. Peso............................................................................... 3.3.4.2. Mortalidad..................................................................... 3.3.4.3. Conversin alimenticia.................................................. 3.3.4.4. Anlisis bacteriolgico.................................................. 3.3.5. Mtodos especficos de manejo del experimento....................... 3.3.5.1. Limpieza y desinfeccin del galpn.............................. 3.3.5.2. Preparacin antes de la recepcin de los pollitos.......... 3.3.5.3. Recepcin de los pollitos............................................... 3.3.5.4. Programa de vacunacin............................................... 3.3.5.5. Manejo........................................................................... 3.3.5.6. Protocolo del probitico................................................ IV. RESULTADOS Y DISCUCION................................................................... 4.1. FASE DE LABORATORIO................................................................ 4.1.1. Identificacin de los aislamientos bacterianos........................... 4.1.2. Identificacin molecular de las cepas nativas............................ 4.1.3. Control de colonias viables de las cepas para la formulacin
del probitico.............................................................................

30 30 31 31 31 32 32 32 32 32 33 33 33 33 33 34 34 34 34 35 35 35 35 35 36 36 36 36 36 37 37 37 38 38 39 39 39 39 40 40 40 40 44 48

4.1.4. Recuento de aerobios................................................................. 4.2. FASE DE CAMPO.............................................................................. 4.2.1. Ganancia de peso........................................................................ 4.2.2. Conversin alimenticia............................................................... 4.2.3. Mortalidad..................................................................................

XI

4.2.4. Anlisis bacteriolgico............................................................... 4.2.5. Anlisis econmico.................................................................... V. CONCLUSIONES........................................................................................ VI. RECOMENDACIONES................................................................................ VII. RESUMEN.................................................................................................... VIII. SUMARY...................................................................................................... IX. BIBLIOGRAFA............................................................................................ X. ANEXOS.......................................................................................................

53 54 57 59 60 61 62 69

NDICE DE CUADROS CUADRO N en funsion de la variacion del pH y el tiempo medio de retencin en minutos (TMR) de la digesta en la fase solida..................................... 13 Cuadro 2. Tabla de bacterias acido lcticas usadas como probiticos................... 21 Cuadro 3. Tabla de la clasificacin taxonmica del genero Bacillus..................... 25 Pg.

Cuadro 1. Tabla de la diversidad bacteriana del tracto gastrointestinal de pollos,

XII

Cuadro 4. Tabla de equipos utilizados en laboratorio............................................ Cuadro 5. Tabla de materiales y reactivos utilizados en laboratorio..................... Cuadro 6. Esquema del anlisis de varianza para los factores en estudio............. Cuadro 7. Pruebas morfolgicas de los gneros Lactobacillus y Bacillus............. Cuadro 8 Pruebas bioqumicas de los gneros Lactobacillus y Bacillus.............. Cuadro 9.ADEVA para medir el efecto de diferentes dosis y probiticos sobre el

31 31 35 39 39

peso en pollos Broiler en Santo Domingo............................................ 41 Cuadro 10.ADEVA para medir el efecto de diferentes dosis, probiticos y pocas sobre el peso en pollos Broiler en Santo Domingo............... 41 Cuadro 11. Prueba de Tukey al 5% para los promedios de peso............................ 42 Cuadro 12.ADEVA para medir el efecto de diferentes dosis y probiticos sobre la conversin alimenticia en pollos broiler en Santo Domingo, 2010.. 45 Cuadro 13.ADEVA para medir el efecto de diferentes dosis, probiticos y pocas en conversin alimenticia en pollos Broiler en Santo Domingo, 2010. 45 Cuadro 14.Prueba de Tukey al 5% para los promedios de la conversin alimenticia............................................................................................ Cuadro 15.ADEVA para medir el efecto de diferentes dosis de probitico nativo y comercial, sobre la mortalidad en pollos broiler en Santo Domingo, 2010..................................................................................... 49 Cuadro 16.ADEVA para medir el efecto de diferentes dosis, probiticos y pocas sobre la mortalidad en pollos Broiler en Santo Domingo, 2010.. 49 Cuadro 17. Prueba de Tukey al 5% para los promedios de Raz de mortalidad..... 49 Cuadro 18.Costos variables y beneficios para los tratamientos con la adicin de probiticos a base de L. acidophilus y B. subtilis............ 54 Cuadro 19.Anlisis marginal de tratamientos no dominados.................................. 55 45

INDICE DE FIGURAS FIGURA N Pg. 4 13 29

Figura 1. pH en diferentes partes del sistema digestivo del ave.......................... Figura 2. Principales gneros de bacterias en el ciego de pollos, basados en Figura 3. secuenciacin ADNr 16S..................................................................... Croquis de ubicacin del lugar experimental.......................................

XIII

Figura 4. Figura 5. Figura 6.

Efecto de diferentes dosis de probitico nativo y comercial sobre el peso en pollos broiler a los 42 das, en Santo Domingo, 2010............ 43 Anlisis de correlacin del probitico nativo para la variable peso en pollos broiler a los 42 das, en Santo Domingo, 2010.. 43 Anlisis de correlacin del probitico comercial para la variable 44

peso en pollos broiler a los 42 das, en Santo Domingo, 2010 Figura 7. Efecto de diferentes dosis de probitico nativo y comercial sobre la Figura 8.

conversin alimenticia en pollos broiler en Santo Domingo, 2010.... 47 Anlisis de correlacin del probitico nativo para la variable conversin alimenticia en pollos broiler a los 42 das, en Santo Domingo, 2010. 47 Anlisis de correlacin del probitico comercial para la variable conversin alimenticia en pollos broiler a los 42 das, en Santo

Figura 9.

Domingo, 2010. 48 Figura 10. Efecto de diferentes dosis de probitico nativo y comercial sobre la raz de mortalidad en pollos broiler en Santo Domingo, 2010............ 50 Figura 11. Efecto de diferentes dosis de probitico nativo y comercial sobre la mortalidad expresada en porcentaje en pollos broiler en Santo Domingo, 2010..................................................................................... 51 Figura 12. Anlisis de correlacin del probitico nativo para la variable mortalidad en pollos broiler a los 42 das, en Santo Domingo, 2010. 52 Figura 13. Anlisis de correlacin del probitico comercial para la variable mortalidad en pollos broiler a los 42 das, en Santo Domingo, 2010. Figura 14. Curva de beneficios netos..................................................................... 52 55

XIV

I.

INTRODUCCIN

La Industria Avcola Ecuatoriana en los ltimos ocho aos ha incrementado su produccin a diferencia de otros tipos de carne, en nuestro pas el aumento en el consumo de carne de pollo ha sido muy significativo, es as como entre el 2004 y el 2008 se observ un incremento del 23% al pasar de 21,6 a 26,6 kg/hab/ao el consumo pr-cpita, debindose a la gran oferta de este producto (Villamizar, 2008). El Censo Avcola Nacional 2008 realizado por el MAG, SESA, CONAVE y AMEVEA, da a conocer que la produccin fue de 215 096 millones de aves, siendo 198 450 millones la lnea de broilers, 9 130 millones de postura, 5 580 millones machos que corresponden a los nacimientos de la lnea postura, 1 800 millones reproductoras pesadas y 136 millones de reproductoras livianas (Guzmn 2008). Para el Economista Esteban Zambrano Gerente Regional de PRONACA Santo Domingo, menciona que el consumo de pollos y sus derivados crece sostenidamente en el mercado ecuatoriano y se ha convertido en la fuente de protena ms barata. Para satisfacer este mercado empresas como Pronaca quien con ms del 45 % de participacin en el mercado, lidera la produccin procesando un total de 4 650,19 Ton de carne de pollo/ao incluyendo avcolas propias e integradas concentradas en la zona de Santo Domingo. Debido a los mtodos de manejo intensivos actuales los animales de granja, fundamentalmente las aves, son muy susceptibles a desbalances bacterianos entricos que llevan a una insuficiente conversin de los alimentos y a una disminucin en la respuesta zootcnica. Para atenuar estas dificultades, las dietas son suplementadas con antibiticos, los cuales han mostrado ser efectivos en la disminucin de los trastornos diarreicos y en la promocin del crecimiento animal (Milian, 2005). La biotecnologa est aportando a los nutricionistas una nueva generacin de productos que son alternativas viables a los antibiticos promotores de crecimiento y que pueden ser promocionados como naturales y seguros para el animal, el

consumidor y el medio ambiente como son los mananoligosacaridos, el selenio orgnico, probiticos, inulina y fructuoligosacarido, condroitin sulfato y glucosamina, antioxidantes y cidos orgnicos. Los probiticos son definidos como un suplemento alimenticio que beneficia la salud del hospedero. Generalmente es considerado que estos llevan acabo un Sin embargo cada vez es ms claro el mejoramiento en el balance microbial.

beneficio que estos tienen en la salud va inmunidad. El tracto gastrointestinal cumple varas funciones tales como la absorcin y digestin de nutrientes. Una de estas es que el intestino es hospedero de una compleja mezcla de microbios, estos son parte de nuestra microflora los cuales juegan un papel importante en la salud. Bifidobacterium y Lactobacillus son una fuerte asociacin que mantienen el balance microbial de los intestinos (Salvador y Cruz, 2009). Gran parte del sistema inmune est dedicado a proteger el tracto gastrointestinal, por eso existen sistemas adicionales que protegen el sistema digestivo. Un elemento clave en la defensa del sistema digestivo es la microflora endgena. Las bacterias benficas compiten con los patgenos por los sitios de adhesin y por nutrientes, es por ello que se necesita de nuevos enfoques para limitar la concentracin de patgenos en el tracto gastrointestinal (Spring 2004). Barrera (2008), sostiene que la produccin avcola cada da debe ser ms competitiva y sus resultados deben ser excelentes, una alternativa para mejorar la produccin son los llamados productos probiticos que contienen microorganismos vivos y activos que colonizan el tracto digestivo. Segn Moreno (1999), cuando nacen los polluelos su intestino prcticamente est estril, desarrollndose su flora intestinal durante las primeras semanas de vida, donde predominan bacterias del gnero Lactobacillus, Enterococcus y Bacillus, esta flora autctona es especfica y est determinada por las condiciones fsicas y qumicas existentes en su aparato digestivo. Por esta razn es importante el uso de probiticos para desarrollar en el ave una colonizacin microbiolgica efectiva del tracto digestivo.

El desconocimiento de los beneficios de las bacterias probiticas en la productividad hace que estas no sean utilizadas por parte de los avicultores. La poblacin que se beneficiar, sern todos los productores avcolas de la zona y tcnicos dedicados a esta rea, indirectamente se espera llegar a otros avicultores dedicados a la produccin de gallinas de postura para que hagan uso de las bacterias acido lcticas y observen los beneficios. Basado con estos antecedentes se realiz la investigacin tomando en cuenta los siguientes objetivos. GENERAL

Determinar los efectos de la inclusin de probiticos durante la etapa de crianza en pollos broilers (Lnea ROSS-308), para el mejoramiento de los parmetros sanitarios, productivos y econmicos. ESPECFICOS

Aislar e identificar las cepas nativas de Lactobacillus acidophilus y Bacillus subtilis. Formular el probitico a base de Lactobacillus acidophilus y Bacillus subtilis. Determinar la relacin de la inclusin de probiticos a travs del consumo de agua en la ganancia de peso para pollos Broiler Ross 308. Evaluar la adicin de probiticos en la dieta, en relacin con la Conversin Alimenticia en pollos Broiler Ross 308. Determinar la tasa de Mortalidad. Determinar el tratamiento ms econmico para incluir el uso de probiticos en la dieta utilizando la metodologa Perrin et al.

La hiptesis planteada para la investigacin es, la inclusin de probiticos durante la etapa de crianza mejorar los parmetros sanitarios, productivos y econmicos de los productores en pollos Broiler Ross-308

II.

REVISIN DE LITERATURA

2.1. SISTEMA DIGESTIVO DEL POLLO Segn Heinz (2000), el intestino es un rgano complejo que forma parte del tracto gastrointestinal y es el paso obligado de los nutrimentos que sirven de base para el metabolismo, el crecimiento y el mantenimiento. Jensen (2001) citado por Mroz (2004), observ que la fermentacin gstrica en el intestino delgado daba lugar a una gran cantidad de cido lctico, mientras que la fermentacin en el ciego y en el colon produca, predominantemente, cido actico, propinico y butrico. La cantidad total de cidos grasos de cadena corta existente en el tracto digestivo se halla correlacionada con la cantidad de sustrato (fibra) que tiene disponible la microflora intestinal. Lo cual es imprescindible realizar un ajuste a travs del agua de bebida.

Figura 1. pH en diferentes partes del sistema digestivo del ave. Fuente:http://www.engormix.com/MA-avicultura/nutricion/artculos/salud-intestinal-claveproductividad-t518/p0.htm

2.1.1.

Boca

Segn Marck (2002), el pollo no tiene labios, paladar blando, mejillas y dientes, pero tiene mandbulas corneas superior e inferior que circundan la boca; la superior se encuentra unida al crneo, mientras que la inferior es colgante.

2.1.2.

Lengua

Es de forma de cabeza de flecha, su funcin es de prehensin, seleccin y deglucin del alimento. En este rgano del aparato digestivo se encuentra la enzima amilasa (Marck, 2002). 2.1.3. Esfago

Ensminger (2000), sostiene que es simplemente un conducto o tubo que sirve para conducir los alimentos y el agua desde la boca hasta el buche, y de all hasta la molleja. 2.1.4. Buche

Segn vila (2005), el buche desarrolla la funcin de rgano de almacenamiento adems de dar paso al alimento hacia el aparato digestivo. En este rgano, el alimento se remoja con agua y saliva de la boca; de modo que el buche de las aves permite consumir grandes cantidades de alimento. El contenido del buche es siempre cido con un pH 5. 2.1.5. Proventrculo

Marck (2002) afirma que en el proventrculo es donde se produce el jugo gstrico. Las clulas glandulares secretan pepsina, una enzima que ayuda a la digestin de protenas, y acido clorhdrico. 2.1.6. Molleja

La molleja es de forma oval con dos aberturas, una comunica con el proventrculo y la otra hacia el duodeno. Su principal funcin es moler y aplastar los alimentos gruesos. La actividad motora de la molleja es de carcter rtmico, de modo que aparece una contraccin de los dos msculos. Presenta un pH de 4,06 por lo que tiene una reaccin cida (Ensminger 2000).

2.1.7.

Intestino Delgado

Segn vila (2005), comenta que el intestino delgado en las aves se divide en: duodeno, yeyuno e leon y se describe a continuacin: 2.1.7.1. Duodeno

La reaccin del contenido del duodeno es casi siempre cida, presentando un pH de 6,3 por lo que posiblemente el jugo gstrico ejerce aqu la mayor parte de su accin. 2.1.7.2. Yeyuno

El yeyuno consta de unas diez asas pequeas, dispuestas como una guirnalda y suspendidas de una parte del mesenterio. Presenta un pH de 7,04. 2.1.7.3. leon

El leon, cuya estructura es estirada y se encuentra en el centro de la cavidad abdominal. El pH es de 7,59. 2.1.8. Ciegos

Marck (2002) y Ensminger (2000) sostienen que no se conoce la funcin exacta de los sacos ciegos, pero es evidente que tiene que ver con la digestin. El pH del ciego derecho es de 7,08 mientras que el pH del ciego izquierdo es de 7,12. Se cree que la funcin de los ciegos es de absorcin y que estn relacionados con la digestin de celulosa. 2.1.9. Cloaca

Segn Ensminger (2000), la cloaca es un rgano comn a los tractos urinario, digestivo y reproductivo. Por lo tanto la orina y las heces se eliminan juntas.

2.1.10.

rganos Digestivos Complementarios Pncreas

2.1.10.1.

Esta dentro del asa duodenal del intestino delgado y secreta el jugo pancretico cuyas cinco poderosas enzimas ayudan a la digestin de almidones, grasa y protenas (Ensminger, 2000). 2.1.10.2. Hgado

Marck (2002), sostiene que est formado por dos grandes lbulos. Entre sus funciones esta la de secretar la bilis, que es un lquido ligeramente pegajoso, amarillo-verdoso, y que contiene cidos biliares, que ayudan a la digestin, de las grasas. Su principal funcin consiste en neutralizar la acidez del duodeno y digerir las grasas. 2.1.10.3. Vescula biliar

rgano muscular que almacena la bilis, presente en la mayora de los vertebrados. En cuanto a su estructura la vescula est formada por una cubierta peritoneal externa (tnica serosa), una capa media de tejido fibroso y msculo liso (tnica muscular) y una membrana mucosa interna (tnica mucosa).La bilis pasa del hgado al intestino por dos conductos biliares. El conducto derecho almacena la mayor parte de bilis. El conducto izquierdo no se ensancha, por lo que una pequea cantidad de bilis pasa directamente al intestino (Marck, 2002). 2.2. INTEGRIDAD INTESTINAL La Integridad Intestinal se define como el funcionamiento ptimo del tracto intestinal, el cual maximiza el desempeo productivo de las aves. Porque el tracto intestinal es uno de los factores principales del desempeo y rentabilidad de las aves, la Integridad Intestinal es fundamental para tener una produccin rentable. La

Enteritis Bacteriana (EB) y la Coccidiosis son las principales amenazas de la Integridad Intestinal (Hoerr, 2009). Para Palacios (2009), la salud intestinal del broiler o pollo de carne, conocida tambin como integridad intestinal es la funcin ptima del tracto digestivo, aspecto primordial en la crianza de pollos de carne que les permite alcanzar el peso y la conversin alimenticia esperada para la lnea gentica en cuestin. Los peligros contra la salud intestinal, presentes en todas las integraciones avcolas son la coccidia y la enteritis bacteriana. Segn Milian (2005), la microflora intestinal se compone en su mayora por bacterias cido lcticas; esta microflora es esencial para descomponer las sustancias alimenticias que no fueron digeridas previamente, manteniendo la integridad de la mucosa intestinal. Al desdoblar los alimentos producen vitaminas (sobre todo del complejo hidrosoluble) y cidos grasos que al mantener la estabilidad intestinal logran aumentar la respuesta inmune; se conoce que cuando estos mecanismos son agredidos por algn agente externo es el momento idneo para el accionar de las bacterias probiticas. Duchatel (2005), afirma que las vas digestivas de las aves as como las de los mamferos, albergan una flora microbiolgica fuerte. Este ecosistema digestivo est en equilibrio y permanece normalmente constante durante toda la vida de un animal adulto. Pero este equilibrio se puede perturbar, cuando el ave sufre agresiones: estrs, desequilibrios nutricionales, vacunaciones, suministro masivo de antibiticos y sustancias que perturban el valor del pH del intestino. Entonces, los factores que perturban el equilibrio de la flora intestinal, tienen una repercusin en la salud del animal. Segn Sansalone (2008), existen al menos 400 especies bacterianas en el GTI, de los cuales se conocen solamente el 15 % de ellas. Esta flora, participa activamente de todos los fenmenos digestivos, nutricionales y sanitarios de las aves. Debe existir permanentemente un equilibrio entre el tipo de flora que se genera, la integridad de la

mucosa intestinal y la dieta de los animales. Si se rompe este equilibrio, puede llevar a una lesin o enfermedad. 2.3. FACTORES QUE INFLUYEN EN LA SALUD INTESTINAL Segn Granados (2008), son: Barreras fsicas: La integridad intestinal se ve comprometida cuando la pared de la mucosa es daada, las clulas epiteliales afectadas o destruidas, el suministro vascular interrumpido o el sistema inmune comprometidos.

Factores estresantes: El equilibrio intestinal tambin se puede ver alterado por factores de estrs como manejo inadecuado o defectuoso y transportacin, sobrepoblacin, cambios bruscos del medio ambiente, vacunaciones, etc. Factores de la dieta: Deficiencias nutricionales debido a: desbalance de la frmula, mal manejo del grano, alta carga bacteriana en el alimento y micotoxinas, que afectan la salud intestinal. Toxinas del alimento: Las toxinas del alimento y txicos tambin afectan la integridad intestinal. Micro flora intestinal: El equilibrio en la microflora intestinal permite una ptima integridad intestinal. Las bacterias tiles (Lactobacillus acidophilus, L. bulgaris, Bifidobacterium bifidum, B. infantis, Bacillus sp) juegan un papel importante en el control de la flora y estimulan el desarrollo de la pared intestinal. Deformidad del pico: Una deformidad del pico evita un consumo adecuado de alimento y puede causar dao al desarrollo intestinal. Estado sanitario: Enfermedades como la coccidiosis y clera aviar afectan severamente la integridad intestinal. Los virus, hongos bacterias, parsitos y toxinas pueden ser la causa. Endo y Nakano (2000) citado por Milian (2005), estudiaron los efectos del

empleo de un probitico en pollos de ceba el cual inclua especies de Lactobacillus, Bacillus, Streptococcus y Saccharomyces en una dosis de 3 g/kg de concentrado. El probitico decreci el nmero de Enterobacteraceae (E.coli y Salmonella) en el

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ciego. Tambin estudios realizados por Maruta (1999) e informados por Bortolozo (2002) citados por Milian (2005), administraron un probitico a base de Bacillus subtilis a pollos de ceba, muestran un aumento de la musculatura y disminucin de la grasa abdominal, principalmente en machos. Adems observaron que el suministro de este probitico disminuy el porcentaje de bacterias patgenas, fundamentalmente, Salmonella desde un 60 a un 20 %. Rossi, et al. (2006); realizaron un estudio usando un probitico obtenido a partir del epitelio de la mucosa del ciego de pollos libres de patgenos de la Salmonella. El probitico utilizado fue destacado como una biota accin del controlador o inhibidor de microorganismos patgenos, las aves mostraron un mejor desempeo en comparacin con los tratamientos de control. En general, independientemente de los tratamientos empleados en este experimento, se produjo mejores tasas de crecimiento de las aves en relacin a la lnea estndar que se utiliza. Corts y vila (2000), evaluaron el efecto del probitico (Bacillus toyoi 1010 esporas/g) sobre el comportamiento productivo en pollos de engorde cuyos resultados indican que el probitico adicionado a la dieta para pollos de engorda permiten tener un efecto promotor del crecimiento y disminuy la mortalidad. Los resultados en 49 das para ganancia de peso fueron diferentes (P< 0,05); se encontr efecto a la adicin del probitico (2 409 vs 2 344 g). La mortalidad general y por sndrome asctico (SA) fue mayor (P< 0,05) en los animales que comieron ad libitum en comparacin con los que tuvieron restriccin alimentaria (9,55%, 2,45%, 4,52% y 1.45%, respectivamente). Hubo efecto (P< 0,05) a la adicin del probitico en SA (0,90% vs 5,07%), con menor mortalidad. Hoyos (2008) utiliz los microorganismos eficaces EM que contenan bacterias y levaduras (Lactobacillus cassei 10 ufc/ml, Saccharomyces cerevisiae 10 ufc/ml, Rodhopseudomona palustres 10 ufc/ml) a concentraciones mayores a 100 000 ufc/ml de solucin. Se evaluaron los parmetros productivos como ganancia de peso, conversin alimenticia, mortalidad acumulada y la utilidad de los EM en la reduccin de la carga de coliformes totales presentes en la cama de los pollos. Se encontr que los EM mejoraron los parmetros productivos de las aves como ganancia de peso,

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ndice de conversin y mortalidad. Los EM lograron reducir la carga de coliformes totales presentes en el ambiente de los pollos de engorde. En Ganancia de peso se observ una diferencia significativa (p< 0,05) en el peso de los machos tratados con EM de 120,4 g (5,4%) con una dosis de 1 ml de probitico por dos litros de agua. Araujo (2005), prob HYDROENZIME producto a base de probiticos y enzimas en cuanto a la absorcin de alimento, ganancia de peso y la disminucin de mortalidad en el pollo de engorde, observ diferencia significativa en la ganancia de pesos a los pollos tratados con HYDROENZIME a los 42 das de 2047,5 y 1706,34 g. una conversin alimenticia altamente significativa para los pollos con Hydroenzime de 1,82 y el control de 2,02. 2.4. FLORA BACTERIANA DEL TRACTO DIGESTIVO En el organismo existe una flora microbiana de tipo indgena y otra compuesta por microorganismos que potencialmente pueden comportarse como patgenos. En trminos fisiolgicos se realiza una simbiosis entre el organismo superior y la flora microbiana indgena, el primero se comporta como hospedador suministrando a los microorganismos el ambiente para su crecimiento y estos ltimos como simbiontes, ponen a disposicin del hospedador su capacidad de sntesis (protenas y vitaminas) y de ruptura celular (celulolisis). Sin embargo cualquier alteracin del ecosistema microbiano con prdidas de microorganismos de tipo indgena, implica que microorganismos transentes, potencialmente patgenos puedan tomar posesin de los nichos que dejaron vacos las bacterias indgenas (Rodrguez, 1994). Choque (2008), encontr que la interaccin entre los microorganismos y el TGI se refleja en distintos niveles: participando en procesos digestivos; evitando el establecimiento de microorganismos potencialmente patgenos; produciendo metabolitos txicos; incrementando la tasa de renovacin epitelial; degradando la capa de mucina e induciendo respuesta inmunitaria con la proliferacin de clulas de defensa.

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2.5. DESARROLLO DE LA MICROFLORA INTESTINAL Tissier, citado por Rodrguez (1994) comenta que el TGI del feto es estril, se encuentra en lo que se denomina estado axnico fisiolgico. Sin embargo, la colonizacin microbiana es extremadamente precoz y rpida, de modo que a las 2448 horas del nacimiento se alcanzan concentraciones de 109-101l microorganismos/g de heces, cifras cercanas a las observadas en el adulto, detectndose Lactobacillus, cocos gram-positivos, Clostridium perfringens y E. coli, apareciendo ms tarde cocos gram-negativos y Bacteroides. 2.6. MICROFLORA EN LOS DISTINTOS TRAMOS INTESTINALES Pareja, (2005) afirma que el buche interiormente est cubierto de una capa de epitelio escamoso estratificado. La poblacin bacteriana del buche est compuesta mayoritariamente por lactobacilos, con un pequeo nmero de coliformes y estreptococos. No se encuentran normalmente anaerobios estrictos. Las bacterias se hayan asociadas al epitelio con una capa de material extracelular, mantenindose a una distancia de unos 7nm, establecindose puentes de contacto entre las bacterias. Al parecer, estos lactobacilos colonizan el buche a las pocas horas del nacimiento y persisten a lo largo de la vida de las aves (Barragn, 2000). Tambin se puede distinguir Estreptococcus, Salmonella, Shigella, Lactobacillus, Escherichia y Clostridium. Segn Apajalahti (2002), El TGI de los pollos aloja numerosas especies bacterianas. Los recientes desarrollos en el anlisis de la comunidad microbiana por mtodos basados en ADN han dado nueva luz sobre la microbiologa del TGI de muchas especies animales. La figura 2 muestra los gneros de bacterias ms abundantes presentes globalmente en el TGI de pollos.

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Figura 2. Principales gneros de bacterias en el ciego de pollos (Basado en secuenciacin ADNr 16S) Fuente: Apajalahti (2002)

Segn Cervantes (2010), en el intestino delgado las especies dominantes son E. coli, Estreptococos, Enterococcus, Sthapylococcus y Lactobacillus, Tambin anaerobios obligados como Eubacterium, Propionibacterium, Clostridium, Gemmiger y Fusobacterium. Ciego: Cocos Gram + anaerobios, bacteroidaceae, Eubacterium sp., Bifidobacterium spp., Budding cocos, Clostridium sp. Gemmiger formicilis. De igual manera Choque, (2008), da a conocer una descripcin mas completa que se ilustra en el Cuadro 1. Cuadro 1. Tabla de diversidad bacteriana del tracto gastrointestinal de pollos, en funcin de la variacin del pH y el tiempo medio de retencin, en minutos (TMR) de la digesta en la fase solida.
Seccin intestinal Buche Proventrculo Molleja Yeyuno leon Contenido digestivo pH 4,5 4,4-4,8 2,6 5,8 6,3 TMR 31-41 39 33 71-84 90-97 Lactobacillus +, Estreptococcus+ E. coli-, Staphylococcus+, Estreptococcus+, coliformesLactobacillus + Clostridium + coliformes-, Eubacterium+, Bacteroides-, Staphylococcus+, Estreptococcus+ Lactobacillus + Clostridium + ,Bacteroides-, Eubacterium+, Fusobacterium -, Bofidobacteria Bacterias

Ciegos

5,7

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2.7. FUNCIONES Y EQUILIBRIO DE LA FLORA INTESTINAL Los autores aceptan que la flora intestinal influye directa e indirectamente en el estado de salud del hombre y los animales a travs de las siguientes funciones: Produccin de vitaminas y cidos grasos de cadena corta. Degradacin de sustancias alimenticias no digeridas. Integridad del epitelio intestinal, Estmulo de la respuesta inmunitaria. Proteccin frente a microorganismos enteropatgenos. La estabilidad de la flora microbiana intestinal es imprescindible para que estas funciones puedan desarrollarse, sin embargo el tracto digestivo no es un sistema biolgico cerrado. Diariamente con el alimento se envan y afluyen a la luz gastrointestinal grmenes y sustancias diversas no habituales, que resultan normalmente inofensivos debido a los mltiples mecanismos de defensa que las bacterias ponen en juego (Feuchter, 2005). 2.8. DESEQUILIBRIO MICROBIANO INTESTINAL Las enfermedades entricas como la coccidiosis, el sndrome de malabsorcin, colibacilosis y la enteritis necrtica, son causa de prdidas significativas en produccin y calidad del pollo broiler. En la actualidad, estas enfermedades entricas se controlan en la prctica mediante el uso de agentes anti-microbianos en el alimento y/o el agua de bebida. Los agentes anti-microbianos incluyen los coccidiostticos, los promotores de crecimiento antimicrobianos (PCAM) y medicamentos especficos. Sin embargo, la creciente preocupacin de los consumidores sobre el posible traslado de la resistencia antibitica a los patgenos causantes de enfermedades humanas, ha provocado la prohibicin de la mayora de los PCAM y el uso restringido de medicamentos en la Comunidad Europea. Si no se desarrolla ningn producto alternativo, este movimiento podra llevar a un aumento en la incidencia de enfermedades entricas con un efecto adverso en el bienestar animal y la produccin.

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Las perturbaciones del ecosistema bacteriano del husped pueden ser definidas como disbacteriosis. La disbacteriosis se refiere a los cambios en el nmero o composicin de las bacterias intestinales no patgenas del comensal que le pueden originar perturbaciones digestivas. La disbacteriosis no es tanto una infeccin sino un desequilibrio microbiano. Sin embargo, es probable que en muchos casos clnicos, la disbacteriosis y las infecciones entricas estn presentes simultneamente, existiendo una relacin causal. La disbacteriosis puede causar infecciones y las infecciones pueden causar disbacteriosis. Se ha descrito, por ejemplo, que pollos infectados con coccidiosis tenan un mayor nmero de colonias de Clostridium y menor nmero de colonias de Bifidus y de Lactobacillus (Smits, 2001). Feuchter (2005), encontr que en determinados momentos de la vida del animal factores exgenos diversos (cambios de alimentacin, infecciones y parasitismos, tratamientos con antibiticos, etc.) provocan la ruptura del equilibrio intestinal y todo el sistema digestivo se ve afectado en mayor o menor grado. El primer sntoma de esta ruptura es la diarrea, expresin de la debilidad de las defensas intestinales que posibilita a los grmenes patgenos implantarse, adherirse y proliferar en las clulas epiteliales del intestino. 2.9. EXCLUSIN COMPETITIVA Segn Cervantes (2010), los mecanismos de accin propuestos para el fenmeno de Exclusin Competitiva son los siguientes: a) Fsico: competencia por los lugares de unin al epitelio. La adherencia de la flora normal por medio de lectinas muy especficas es de importancia esencial, las bacterias anaerobias se adhieren firmemente a las superficies mucosas y poseen filamentos que parecen penetrar el epitelio de superficie. Esta capa homognea de diferentes anaerobios crea una barrera fsica de alta consistencia, que evita que las bacterias entero-patgenas se adhieran al revestimiento epitelial. b) Biolgico: el crecimiento anaerobio crea un hbitat con baja tensin de oxgeno y un microambiente de exclusin duradero que es desfavorable para el crecimiento de enterobacterias micro aeroflicas, como Salmonella sp.

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c) Qumico: se conoce bien que la reduccin del pH debido a la produccin de cidos orgnicos (cidos grasos voltiles como el cido lctico y cido propinico) de determinados grupos bacterianos por ejemplo lactobacilos inhibe enteropatgenos como Salmonella sp. y E. coli. d) Bioqumico: Muchos microorganismos intestinales como Lactobacillus spp. y E. coli producen sustancias inhibidoras, denominadas, bacteriocinas, que son de naturaleza antimicrobiana. e) Nutricional: estudios con cultivos de exclusin in vitro se han demostrado que anaerobios y Salmonella sp. compiten por aminocidos esenciales y azcares. 2.10. INTERACCIN DEL SISTEMA INMUNOLGICO Y EL TRACTO GASTROINTESTINAL Aproximadamente el 75% de las clulas inmunitarias del ave (3% del peso vivo) estn localizadas en el intestino delgado, asociadas al tejido linfoide. En las aves la bolsa de Fabricio y el timo, son los rganos linfoides primarios; y el bazo, divertculo de Meckel, glndula de Harderian, placas de Peyer y amgdalas son los secundarios. A la eclosin, el sistema inmunitario es inmaduro y evoluciona ms lentamente que el sistema digestivo anteriormente descrito, por lo que durante la primera semana de vida el pollito depende en gran medida del ambiente en que se encuentra. La presin gentica sobre velocidad de crecimiento, tiene un impacto negativo sobre el sistema inmunitario (Ortiz, 2006). El sistema inmune digestivo se considera como uno de los ms grandes al ser el sitio que contiene mayor cantidad de clulas inmunolgicas organizadas en diferentes estructuras (Placas de Peyer, Tonsilas Cecales, Divertculo de Meckel, Tonsila Esofgica, Tejido Linfoide Asociado a Mucosas, Bolsa de Fabricio). Por ello, el estudio del sistema inmune digestivo en las aves representa una oportunidad para aplicar este conocimiento en granjas comerciales, hecho con el cual ser posible optimizar sus funciones y lograr una mejora productiva (Gmez, 2010).

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2.10.1 Propiedades del Mucus del Intestino y de la Barrera Mucosa El mucus constituye una barrera muy selectiva, esencial para proteger la mucosa de las secreciones digestivas, de los patgenos y de las agresiones fisicoqumicas. Los microorganismos del husped y las inmunoglobulinas se encuentran integrados en el mucus. Adems, la renovacin continua del mucus y de la barrera fsica creada por la capa de mucosidad, previene la fijacin de microorganismos patgenos a la superficie epitelial. As, los cambios de las propiedades fisicoqumicas del mucus, causadas por factores externos al lumen intestinal o por va de la mucosa per se pueden afectar a la resistencia a las infecciones y alterar la absorcin de nutrientes (Smits, 2001). 2.11. LOS PROBITICOS Un probitico se define como "un suplemento alimenticio microbiano vivo que afecta de forma benfica al animal husped mediante el mejoramiento de su equilibrio microbiano intestinal". Los probiticos se pueden usar para modular las bacterias del intestino. Las preparaciones comerciales de probiticos pueden ser de cepa nica o mltiple y tambin como una mezcla de varias especies (multiespecies) de bacterias. Los productos multiespecies pueden tener el beneficio de ser eficaces contra una gama ms amplia de condiciones del tubo digestivo (Yegani, 2010). Segn Lyons (1997) citado por Milian (2005), los probiticos son productos naturales que utilizados como promotores del crecimiento en los animales permiten obtener mayores rendimientos, ms elevada resistencia inmunolgica y reducida cantidad de patgenos en el tracto gastrointestinal (TGI). Estas bacterias representadas por Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus bulgaris, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium infantis y otros microorganismos beneficiosos, son la primera lnea de defensa del cuerpo contra los microorganismos potencialmente dainos que se inhalan o se ingieren.

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2.12. IMPORTANCIA DE LOS PROBITICOS El papel ms importante de las bacterias probiticas es actuar en resistencia en contra de la colonizacin de agentes exgenos, patgenos potenciales. Bifidobacterium y Lactobacillus son bacterias Gram positivas productoras de cido lctico, constituyentes de una gran parte de la microflora intestinal en animales. Por un microorganismo patgeno en accin acta un probitico, si este no es txico o causa enfermedad el probitico debe ser capaz de resistir los cidos y la bilis, as como el proceso de digestin del estomago del animal, el individuo que es capaz de establecerse y colonizar los intestinos; es cuando el probitico establece la habilidad de inhibir el crecimiento de los patgenos. Los probiticos son capaces de prevenir la proliferacin de enfermedades causadas por patgenos como lo son la Escherichia coli y Salmonella. Esto puede ocurrir de dos formas: Primero incrementando la resistencia a infecciones y enfermedades infecciosas por un antagonismo directo o por estimulacin de la inmunidad (incremento de la actividad fagoctica y elevada secrecin de Inmunoglobulina A (IgA). Los probiticos estn propuestos para el uso en animales y establecer la salud de la microflora de los intestinos y prevenir el establecimiento de bacterias patgenas, para restablecer la microflora benfica agotada por antibiticos y prevenir la reinfeccin por patgenos y reducir los efectos del estrs (Salvador y Cruz, 2009). Moreno (2003) citado por Milian (2005), plantea que son muchas las bacterias y levaduras que se pueden usar de forma beneficiosa para mantener una flora digestiva sana y en equilibrio. Los microorganismos ms usados son Lactobacillus sp., Sreptococcus faeccium, Bacillus subtilis, B. cereus, B. licheniformis, B. stearothermophyllus y Saccharomyces cerevisiae. Los Lactobacillus crecen rpidamente en el intestino son quizs los ms conocidos, se trata de bacterias que pueden transformar la lactosa en cido lctico. Este aumento de cido lctico disminuye el pH intestinal (Figura 1) a unos niveles tan bajos as como disminuye la supervivencia de microorganismos como E. coli, Salmonellas entre otros.

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El acido lctico que producen las bacterias del gnero Lactobacillus y Bifidobacterium ayudan a controlar las bacterias patgenas como Salmonellas, E. coli, enteritis, al establecer un pH bajo (Botero 2008). Los probiticos producen acido lctico y acido actico los cuales crean una alteracin del pH que funcionan como un antisptico del sistema digestivo y al mismo tiempo minimiza la proliferacin de microorganismos patgenos, al competir por nutrientes y alojamiento en las paredes intestinales (Lastras 2009). 2.12.1. Criterios para un Probitico Segn Nava (2008) un probitico debe reunir las siguientes caractersticas: La seguridad biolgica, no deben causar infecciones de rganos o de sistemas. La capacidad de ser toleradas por el sistema inmunitario del organismo husped, por lo tanto, deben ser preferiblemente de proveniencia intestinal. La capacidad de resistir la accin de los cidos gstricos y de las sales biliares para llegar vivas en grandes cantidades al intestino. La capacidad de adherirse a la superficie de la mucosa intestinal y de colonizar el segmento gastrointestinal. La sinergia con la microflora endgena normal del intestino El efecto barrera, este trmino define la capacidad de producir sustancias que tengan una accin trfica sobre el epitelio de la mucosa intestinal. La capacidad de potenciar las defensas inmunitarias del husped. 2.12.2. Mecanismos de Accin de los Probiticos Algunos cidos excretados por los microorganismos de los probiticos bajan el pH intestinal por debajo del nivel que toleran los patgenos. Efecto competitivo que puede ser mediado por la ocupacin de los lugares de colonizacin y mejora de los mecanismos barredores nutricionales.

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Capacidad de secrecin por parte de los lactobacilos y bacterias bfidas de bacteriocinas que tienen amplio espectro de actividad como lactocinas, helveticinas, lactacinas, curvacinas, nicinas y bifidocinas (Pinos, 2007). Segn Borin (2006), la forma de accin es: Disociacin del acido liberando H+ para el medio. Modulacin de la microflora intestinal. Incremento del nmero de microorganismos benficos:
Bifidobacterium, Lactobacillus, Entercoccus, Bacillus.

Reduccin del nmero de microorganismos indeseables:


Salmonella sp, E. coli, Clostridium, Staphylococcus

La microflora intestinal est involucrada en una amplia gama de sucesos fisiolgicos, nutricionales e inmunolgicos, que pueden afectar directa o indirectamente la salud y la productividad de las parvadas comerciales. La poblacin normal de microbios en el intestino protege al animal husped de los microorganismos patgenos. Tambin se informaron que las bacterias benficas (por ejemplo, Lactobacillus acidophilus) fueron capaces de suprimir los efectos patgenos del Clostridium perfringens en el intestino delgado de pollos de engorda mediante la inhibicin de la proliferacin de la produccin de toxinas de este microorganismo. En otro estudio, se observaron que el Lactobacillus sp. aislado del intestino del pollo presentaba efectos inhibitorios sobre el crecimiento de las bacterias patgenas, como la Salmonella y E. coli (Yegani, 2010). 2.12.3. Beneficios de los probiticos en produccin animal Los efectos potenciales de las bacterias probiticas son resumidos por Bengmark (1996) citado por Samaniego y Sosa (2002). Produccin de nutrientes de especial importancia para la mucosa intestinal, tales como cidos grasos, particularmente los de cadena corta y aminocidos como: arginina, glutamina y cistena.

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Produccin de micronutrientes, especialmente vitaminas (algunas vitaminas del complejo B), antioxidantes y aminas (histamina, 5-HT, piperidina, tiramina, cadaverina, pirrolidina, agmatina, espermidina y putrescina), muchos de los cuales son utilizadas por todo el organismo. Prevencin patgenos. del sobrecrecimiento de microorganismos potencialmente

Estimulacin del sistema de defensa inmunointestinal, referido como sistema de tejido linfoide asociado al tracto. Eliminacin de toxinas y sustancias innecesarias del lumen. Participacin en la regulacin de funciones intestinales, tales como: utilizacin de mucus, absorcin de nutrientes, motilidad gastrointestinal y flujo de sangre, lo cual ocurre a travs de la produccin de cidos grasos de cadenas cortas, hormonas, enzimas, poliaminas y citoquininas y xido nitroso. Importancia del mecanismo de exclusin competitiva. En el Cuadro 2. aparece un listado de las bacterias cidos lcticas usados como probiticos.
Cuadro 2. Tabla de bacterias cido lcticas usadas como probiticos Lactobacillus L. acidophilus L. casei L. delbrueckii subsp. bulgaricus L. brevis L. cellobiosus Streptococcus S. cremoris S. salivarius subsp. thermophilus S. faecium S. diacetylactis S. intermedius Bifidobacterium B. bifidum B. adolescentis B. animalis B. infantis B. longum

Fuente: Samaniego y Sosa (2002).

Segn Maruta et al. (1996) e informados por Milian (2005), estos mismos autores en otra investigacin estudiaron el uso de un probitico a base de Bacillus cereus (Toyocerin) en pollos de ceba. Suministraron 50 y 100 mg/kg en la dieta y comprobaron que el peso final era superior en 1,5% y 2,1%, en los animales tratados respecto al control. As mismo, mejor la conversin 1,2% y 2%. La mortalidad fue disminuida a 2,7% y 4,5% con respecto al grupo control.

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Colin et al. (1994) citado por Milian (2005), estudiaron el efecto del empleo de dos probiticos (esporas de Bacillus sp. a razn de 100 ppm con 1010 ufc/g y una mezcla de microorganismos lcticos, levaduras y enzimas digestivas a razn de 100 ppm en dietas de pollos de engorde, adems del antibitico licomicina un control positivo. Encontraron una mejora en la ganancia de peso. La accin de los dos probiticos no difiri entre si, pero si con el antibitico y el grupo control. 2.13. BACTERIAS CIDO LCTICAS Nava (2008), menciona que la capacidad de las bacterias lcticas para inhibir el crecimiento de otros organismos en cultivos mixtos ha sido observada durante ms de 70 aos, lo que comnmente se ha llamado antagonismo lctico. La reduccin de pH y la utilizacin de los carbohidratos disponibles parecen constituir el principal mecanismo de antagonismo microbiano. No obstante, tambin se conoce que las bacterias lcticas producen adems de cidos orgnicos, perxido de hidrogeno, radicales libres, diacetilo, acetaldehdo, ismeros D de los aminocidos, antibiticos y bacteriocinas 2.13.1. Bacterias Productoras de cido Lctico Segn Jaramillo (2010), los probiticos ms empleados son las bacterias capaces de producir cido lctico, como Lactobacillus acidophilus, L. casei, L. bulgaricus, L. reuterii, L. rhamnosus, Bifidobacterium breve, B. longum, B. infantis, B. animalis, Streptococcus salivarius subespecie thermophilus y Saccharomyces boulardii. 2.14. CARACTERISTICAS DE LAS BACTERIAS CIDO LCTICAS 2.14.1. Caractersticas de Lactobacillus acidophilus El gnero Lactobacillus (lactis-leche; bacillus-pequeos bacilos) se caracteriza por presentar clulas en forma de bacilos largos y extendidos, aunque con frecuencia pueden observarse bacilos cortos o coco-bacilos coryneformes. Las colonias de

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Lactobacillus en medios slidos son pequeas (2-5 mm), convexas, suaves, con mrgenes enteros, opacas y sin pigmentos. Slo en algunos casos presentan coloracin amarillenta o rojiza. Algunas especies forman colonias rugosas. Normalmente no reducen los nitratos, pero esta reaccin puede ocurrir en algunos casos, cuando el pH est por encima de 6,0. Los lactobacilos no lican la gelatina ni digieren la casena, aunque muchas cepas producen pequeas cantidades de nitrgeno soluble. Tampoco producen indol ni sulfdrico (H2S). Son catalasa negativos, pero algunas cepas producen la enzima pseudocatalasa que descompone el perxido de hidrgeno. Son citocromo negativos, por la ausencia de porfirinas. Los lactobacilos crecen bien en medios ligeramente cidos, con pH inicial de 6,4 - 4,5. La mayora de las cepas de Lactobacillus son principalmente aerotolerantes; su crecimiento ptimo se alcanza bajo condiciones microaeroflicas o anaerbicas. La mayor parte de los lactobacilos son mesfilos (30 - 40C), con un lmite superior de 40C. Aunque su rango de temperaturas para el crecimiento oscila entre 2 y 53C. Los miembros de este gnero transforman la glucosa y las hexosas aldehdicas similares, los carbohidratos que producen estos azcares simples y los alcoholes polihidroxlicos en cido lctico por homofermentacin o bien, en cido lctico y otros productos finales adicionales como cido actico, etanol, dixido de carbono, cido frmico y cido succnico (Samaniego y Sosa, 2002). Segn Lastras (2009), Lactobacillus acidophilus es una bacteria gram positiva dominante en el intestino delgado, donde se produce la mayor parte de la digestin, mientras que Bifidobacterium bifidum reside en el intestino grueso donde se procesan los desechos para ser evacuados. El L. acidophilus absorbe la lactosa y la metaboliza formando cido lctico. Durante la digestin, tambin ayuda en la produccin de niacina, cido flico y vitamina B6 (piridoxina). La produccin de cido lctico hace que su ambiente sea cido, lo cual inhibe el crecimiento de bacterias patgenas. Algunas especies de Lactobacillus son usadas industrialmente en la produccin de yogurt (Gonzales, 1997).

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2.14.2. Clasificacin taxonmica de Lactobacillus Segn Samaniego y Sosa (2002), en el transcurso de los aos y con el desarrollo de la Biologa Molecular se han empleado varios criterios taxonmicos para perfeccionar la posicin taxonmica del gnero Lactobacillus en particular y de las bacterias cido lcticas en general. Entre estos criterios pudieran citarse los siguientes:

Determinacin de oligonucletidos del coeficiente de sedimentacin (16S) del rRNA (RNA ribosomal). Estudios serolgicos que involucran antisueros contra enzimas mlicas, del tipo de la fructosa-1,6-difosfato aldolasa y de la gliceraldehido-3-fosfato deshidrogenasa de varias bacterias cido lcticas y de algunas bacterias aerbicas y anaerbicas. Porcentaje molar de Guanina+Citocina del ADN. Nivel de homologa ADN/ADN, poco significativo entre la mayora de las especies. Hibridizacin ARN/ ADN. 2.14.3. Caractersticas de Bacillus subtilis Bacillus subtilis es una bacteria Gram positiva, aerobio facultativo

comnmente encontrada en el suelo. Miembro del gnero Bacillus, B. subtilis tiene la habilidad para formar una resistente endospora protectora, permitiendo al organismo tolerar condiciones ambientalmente extremas (Lastras 2009). Segn Milian (2005), otros de los elementos que caracteriza a los Bacillus sp. es la produccin de enzimas hidrolticas que ayudan a mejorar la utilizacin de los alimentos. Dentro de estas se encuentran las proteasas, amilasas y las glicosidasas que descomponen las complejas molculas de los alimentos y las transforman en nutrientes ms simples. Estos compuestos son absorbidos ms rpidamente por el animal o pueden ser empleados por otras bacterias beneficiosas para el establecimiento de una microflora intestinal balanceada. El empleo de las bacterias

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del gnero Bacillus y sus endosporas tambin viene dado por su capacidad de produccin de enzimas, estas adems de mejorar la digestin en el hospedero, son capaces de inhibir el crecimiento microbiano de bacterias dainas. 2.14.4. Clasificacin Taxonmica de Gnero Bacillus
Cuadro 3. Tabla sobre la clasificacin taxonmica del gnero Bacillus

Reino Filum Clase Orden Familia Genero Especie N. cientfico


Fuente: Galn (2007).

Firmicutae Endosporobacteria Bacilli Bacilliales Bacilliaceae Bacillus subtilis Bacillus subtilis

2.14.5. Caractersticas de Bifidobacterium Hartemink et al. (1997) citado por Jaramillo (2010), las bifidobacterias son bacterias anaerbicas Gram positivas, que habitan principalmente en el intestino delgado, habitantes normales del TGI tanto del hombre, como de los animales. Son bacilos o cocos no mtiles, anaerobios estrictos, con formas que dependen de la especie a la que pertenezcan. Representan uno de los mayores grupos de bacterias intestinales y se utilizan principalmente como flora probitica en productos lcteos. 2.15. BACTERIOCINAS Las bacteriocinas se definen como protenas y pptidos biolgicamente activos, que tienen propiedades bactericidas contra otras especies estrechamente relacionadas, miembros de la misma especie o especies muy relacionadas con la cepa productora. Sin embargo, recientemente este concepto se ha modificado, ya que se ha encontrado

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tambin acciones bactericidas contra cepas distanciadas filogenticamente de la cepa productora (Dolz, 2000). Las bacteriocinas, son derivados del metabolismo principalmente de algunas bacterias cido lcticas (BAL), con funcin antimicrobiana, de naturaleza peptdica, sintetizadas ribosomalmente y que afectan a bacterias relacionadas con las que las producen. Se ha comprobado que pueden actuar sobre bacterias patgenas, especialmente en Gram positivas y en algunas Gram negativas. Las bacteriocinas han sido encontradas en casi todas las especies bacterianas acido lcticas examinadas hasta la fecha, y an dentro de una especie podran ser producidas diferentes tipos de bacteriocinas (Jaramillo, 2010). 2.15.1. Produccin de Bacteriocinas Adicionalmente, muchos de los microorganismos productores de bacteriocinas son, a su vez, probiticos. La nocin de probiosis alude, en general, al conjunto de efectos fisiolgicos que, vinculados a los balances microbianos del tracto intestinal, resultan favorables para la entidad biolgica hospedante. Se trata de un concepto relativamente difuso, que se ha relacionado sobre todo con la mejora de la resistencia a las enfermedades por estimulacin de las defensas naturales, y que puede implicar mecanismos de naturaleza bastante heterognea. Entre ellos se citan con frecuencia sin detalles concretos la competencia con microorganismos patgenos por nutrientes limitantes o por puntos de adherencia a las mucosas, la produccin de sustancias inhibidoras de estas especies y la activacin de la respuesta inmunitaria. Las bacteriocinas ms conocidas son sin duda las nicinas (lantibiticos de Lactococcus lactis), pero en estrecha relacin con ellas se encuentran otros lantibiticos como subtilina, estafilococcina, (Pastrana, 2004). Samaniego y Sosa (2002), afirman que entre la variedad de sustancias antimicrobianas producidas por las bacterias cido-lcticas se encuentran las bacteriocinas, protenas bactericidas que inhiben especies estrechamente relacionadas con el cultivo productor. Como ejemplo de estas sustancias pueden citarse las que se han identificado y caracterizado:

27

Lactacin B y F Helveticin V-1829 Fermenticin Sakacin A, M y P Lacticinas A y B Lactocin S Lactocin LP27 Plantaricin BN Bavaricin MN Plantacin B 2.15.2. Mecanismos de Accin de las Bacteriocinas Jaramillo (2010), menciona el mecanismo de accin propuesto para las

bacteriocinas es una unin inicial a la membrana bacteriana por atraccin electrosttica entre los lpidos cargados negativamente y las bacteriocinas con su carga neta positiva localizada fundamentalmente en uno de los extremos. Luego se produce la insercin de la bacteriocina en la bicapa lipdica, en el caso de la nicina esta insercin se realiza por su extremo N-terminal. As se forman poros en la membrana, la cual queda permeabilizada, la clula empieza a perder iones y metabolitos fundamentales para su supervivencia y eventualmente se produce la muerte de la bacteria. 2.16. INTERACCIN DE LOS PROBITICOS CON LA MATERIA ORGNICA Y ELIMINACIN DE MALOS OLORES El EM (microorganismos eficaces) ha sido ampliamente utilizado en el sector agropecuario tanto en suelos y cultivos como en produccin animal, tratamiento de residuos orgnicos y aguas residuales, reduccin drstica de plagas (moscas), eliminacin de olores molestos producidos por la descomposicin de excretas y orina. Los altos volmenes de desechos animales (excretas y orina) que se manejan en las instalaciones avcolas, ha trado como consecuencia un incremento de gases amoniacales y sulfurosos dentro y fuera de las instalaciones que afectan tanto a los

28

operarios como a los mismos animales; creando un ambiente altamente contaminado, generador de olores ofensivos y una alta poblacin de moscas que afectan adems a las comunidades vecinas. Las aspersiones de EM a la cama e instalaciones buscan establecer las poblaciones de microorganismos benficos en las excretas, impidiendo la proliferacin de otros microorganismos que pudren la materia orgnica. De esta manera el EM por fermentacin del material reduce la generacin de malos olores y la presencia de insectos plaga. Bacterias Fotosintticas o fototrficas (Rhodopseudomonas spp): Es un grupo de microorganismos auttrofos e independientes y autosuficientes, los cuales sintetizan sustancias tiles a partir de las secreciones de las races, materia orgnica y/o gases nocivos (Ej. Amonaco, sulfuro de hidrgeno, metano), usando la luz solar y el calor del suelo como fuentes de energa. Las sustancias sintetizadas comprenden aminocidos, cidos nuclecos, sustancias bioactivas y azcares. Estos metabolitos son absorbidos directamente por ellas, y actan tambin como sustrato para incrementar la poblacin de otros microorganismos benficos (Salgado, 2010).

29

III.

MATERIALES Y MTODOS

3.1. CARACTERSTICAS DEL CAMPO EXPERIMENTAL 3.1.1. Ubicacin Poltica El ensayo de investigacin se realiz en la Granja Avcola la Tolita, Integrado de la Empresa Pronaca, Parroquia Luz de Amrica, Provincia Santo Domingo de los Tschilas, km 7 de la Va Santo Domingo-Quevedo margen izquierdo, cinco kilmetros va a la Reforma. 3.1.2. Ubicacin Geogrfica Coordenadas UTM: 00 20 854' Sur 79 13 512' Oeste

Figura 3. Croquis de ubicacin del rea experimental.

3.1.3. Ubicacin Ecolgica Segn el diagrama de Zonas de Vida de L. Holdridge la zona de estudio corresponde a Bosque Hmedo Tropical (bh T) (Caadas, L. 1983) Altitud Temperatura : 665 msnm. : 18 - 28 oC

30

Precipitacin MATERIALES 3.2.1. Insumos

: 1600 mm/ao

3.2.

5985 Pollos Ross 308 65 litros de probitico nativo 1 kilo de probitico comercial 28022 kilos de alimento balanceado PRONACA Vacunas (6000 dosis de Newcastle - Clone 30, 6000 dosis de Bronquitis IBH 120 y 6000 dosis (Gumboro Bursine) 6 kilos de Vitamina (vitalizador avcola) 11 litros de cloro 4 litros de neutralizante de agua 1 kilo de leche en polvo 1 kit de reactivo para pH y cloro 1 galn de CID-20 8 litros de yodo 5 litros de virukill 60 kilos de cal viva 3.2.2. Equipos

42 comederos tubulares de 12 kg 21 comederos inciales BEB 21 bebederos manuales de galn 21 bebederos automticos 6 criadoras a gas 20 tanques de gas industrial de 15 kg 1 rollo de cortinas (2.8m x 50m) 1 rollo de cortina (1m x 50m) 1 termmetro 1 cmara fotogrfica

31

Balanza electrnica 3.2.3. Instrumentos

3 Registros de campo 1 Libreta de campo 2 Esferos 3.2.4. Herramientas

1 machete 1 Pala redonda 28 estacas 3 rollos de alambre #18 1 rollo de malla plstica de 1.8 m x 50 m 3 baldes plsticos de capacidad 20 litros 3.2.5. Materiales y equipos de laboratorio
Cuadro 4. Tabla de equipos utilizados en laboratorio Equipo Estufa bacteriolgica Incubadora Microscopio compuesto Cmara flujo laminar Balanza analtica Cocineta Refrigeradora Unidad U U U U U U U Cantidad 1 1 1 1 1 1 1

Cuadro 5. Tabla de materiales y reactivos utilizados en laboratorio Equipo Cajas petri Test enzimtico Porta objetos Tubos de ensayo Pipeta Vasos de precipitacin (500 ml) Elenmeyer (50 ml) Agua destilada Unidad U U U U U U U L Cantidad 80 1 10 20 2 4 4 40

32

Agar MRS Caldo MRS Alcohol industrial Alcohol antisptico Suero fisiolgico Mascarillas Guantes quirrgicos Placas Petrifilm3 M Piceta Mecheros

Gr Gr L L L U U U U U

500 500 1 3 1 4 3 1 1 3

3.3. METODOLOGA 3.3.1. FASE DE LABORATORIO 3.3.1.1. Recoleccin de muestra

Se seleccion al azar un pollo de engorde Ross 308, para obtener los microorganismos con los cuales se elabor el probitico nativo. De esta ave se seleccion el sistema digestivo que conform la parte media del leon y ciegos (Anexo 6). 3.3.1.2. Siembra en los medios de cultivo

Se tom un raspado de la mucosa del leon y de los ciegos respectivamente, para ser colocado en 5 ml de suero fisiolgico y se procedi a la siembra en cajas petri conteniendo medios especficos para el desarrollo de Bacterias Acidolcticas, Agar y Caldo MRS (Anexo 10). Luego se colocaron en la incubadora a 28 oC por 48 horas para Lactobacillus y 72 horas para Bacillus. 3.3.1.3. Purificacin de colonias

Se procedi a purificar las cepas sembradas que presentaban caractersticas del gnero Lactobacillus (Borde uniforme y liso, Colonias grandes y densas) y Bacillus (Bordes irregulares, Color blanco a crema, Rugosas, Colonias grandes)

33

3.3.1.4.

Identificacin de cepas nativas

Para la identificacin se utilizaron caractersticas Morfolgicas, Pruebas Bioqumicas y Moleculares. 3.3.1.5. Concentracin de bacterias

Para medir la concentracin de las bacterias se utiliz el mtodo para Crecimiento de Bacterias cido lcticas en Placas Petrifilm 3M y paralelamente se enviaron muestras a un laboratorio especializado para determinar la concentracin. 3.3.1.6. Formulacin del probitico

Se seleccion una caja petri purificada de cada bacteria. Se tom una muestra de cada caja petri y se inocul en el medio de cultivo Caldo MRS, para obtener una solucin madre del probitico nativo (SMPN) y se coloc en la incubadora a 280C por 48 horas. Para la activacin del probitico nativo se tom una muestra de 10 ml de la solucin madre con una pipeta para ser inoculada en una solucin de agua ms melaza. De la misma manera se activo el probitico comercial. 3.3.2. DISEO EXPERIMENTAL 3.3.2.1. Factores a probar a) Tipo y Dosis de probiticos T0: 0 ml/l agua T1: Probitico nativo: 1,5; 3,0; 4,5 ml T2: Probitico comercial: 1,5; 3,0; 4,5 ml b) Lote

34

3.3.2.2.

Tratamientos a comparar

Para evaluar el efecto de un probitico nativo elaborado en base a Lactobacillus acidophilus y Bacillus subtilis en pollos Broiler Ross-308 en Santo Domingo de los Tschilas se prob los siguientes tratamientos.
TRATAMIENTO T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 CDIGO Pn1 Pn2 Pn3 Pc1 Pc2 Pc3 Sp DESCRIPCIN 1,5 ml probitico nativo/l agua 3,0 ml probitico nativo/l agua 4,5 ml probitico nativo/l agua 1,5 ml probitico comercial/l agua 3,0 ml probitico comercial/l agua 4,5 ml probitico comercial/l agua Testigo

3.3.2.3.

Tipo de diseo

Se aplic un Diseo de Bloques Completos al Azar (DBCA). Adicionalmente se realiz un anlisis de varianza (ADEVA) para medir los cambios a travs del tiempo. 3.3.2.4. Observaciones

La investigacin const de tres bloques. Cada bloque fue un ciclo productivo. 3.3.2.5. Caractersticas de la UE : 21 : 297 m2 : 231 m2 : Rectangular : 11 m :3m : 5985 : 1995 : 285

Nmero de UE rea Total rea til Forma Largo Ancho Nmero total de aves Nmero de aves por bloque Nmero de aves por tratamiento

35

Nmero de aves por repeticin 3.3.3. Anlisis estadstico 3.3.3.1.

: 95

Esquema del anlisis de varianza

Se utiliz un DBCA, con siete tratamientos, tres bloques en diferentes pocas.


Cuadro 6. Esquema del anlisis de varianza para los factores en estudio Fuente de Variacin Tratamiento Testigo vs resto P nativo vs P comercial P nativo lineal P nativo cuadratica P comercial lineal P comercial cuadratica Lote Tratamiento*lote Error experimental Error de muestreo Total Gl 6 1 1 1 1 1 1 2 12 14 42 62

3.3.3.2.

Anlisis funcional

Prueba de significancia Tukey al 5% para comparar medias de tratamientos significativos. 3.3.4. Datos tomados y mtodos de evaluacin 3.3.4.1. Peso

Al final de cada ciclo productivo se peso el total de pollos por tratamiento y por repeticin y se calcul el peso promedio con el uso de la siguiente frmula:

36

3.3.4.2.

Conversin Alimenticia

Se llev un control diario del consumo de alimento de cada tratamiento y al final se calcul mediante la siguiente frmula:

3.3.4.3

Mortalidad

Se contabiliz la mortalidad diaria y al final de cada lote productivo se calcul en porcentaje para sus respectivas comparaciones.

3.3.4.4.

Anlisis bacteriolgico

Se enviaron muestras a un laboratorio especializado para la identificacin y determinacin de bacterias patgenas en las aves. 3.3.5. MTODOS ESPECFICOS DE MANEJO DEL EXPERIMENTO 3.3.5.1. Limpieza y desinfeccin del galpn

Se procedi a lavar el galpn utilizando detergente industrial (tipol). Para el control de insectos y caros presentes en la cama se fumig con cipermetrina. La desinfeccin del galpn y de equipos se realiz con formol y CID-20 (formaldehido 20%).

37

3.3.5.2.

Preparacin del galpn antes de la recepcin de los pollitos

Se utilizaron cortinas de lona para hermetizar completamente el galpn. Se colocaron tanques de agua y mangueras para cada tratamiento. Tambin se realizaron corrales para recibir a los pollitos bb, utilizando una densidad de 40 pollos/m2. Colocacin de las criadoras uniformemente al centro del corral (criadora Gasolec 2500 Kcal con una capacidad para 1000 pollitos) Se distribuy uniformemente todo el equipo para el ensayo. 3.3.5.3. Recepcin de los pollitos

Se procedi a colocar la racin alimenticia para cada tratamiento, de igual manera el agua de bebida. Para lograr mantener una temperatura ideal las criadoras se prendieron seis horas antes de la llegada de los pollitos. Los pollitos se colocaron debajo de la criadora. 3.3.5.4.
7 DIAS:

Programa de Vacunacin

14 litros de agua por cada 1000 pollos 3 gramos de leche en polvo por litro de agua 1 dosis de vacuna por ave. ND CLONE 30 (Newcastle), H 120 (Bronquitis), BURSINE (Gumboro). Laboratorio Aventis. 16 DIAS: 22 litros de agua por cada 1000 pollos 3 gramos de leche en polvo por litro de agua 1 dosis de vacuna por ave, Avinew (Newcastle), BURSINE (Gumboro). Laboratorio Aventis.

38

3.3.5.5.

Manejo

Todos los das se suministr el alimento a las aves y se lavaron los bebederos. Se registr diariamente la mortalidad. La temperatura interior del galpn fue manejada mediante una tabla de referencia. Las ampliaciones y espacios para las aves fueron peridicas. Los pesos se tomaron cada siete das. 3.3.5.6. Protocolo del probitico

La inclusin en el agua de bebida fue durante el ciclo productivo. La aplicacin del probitico fue suspendida un da antes y un da despus en procesos de vacunacin y medicaciones. Para realizar la mezcla del probitico en el agua de bebida se utiliz un neutralizante de cloro. Se prepararon soluciones frescas diariamente.

39

IV.

RESULTADOS Y DISCUCIN

4.1. FASE DE LABORATORIO 4.1.1. Identificacin de los aislamientos bacterianos

En las pruebas bioqumicas y caracterizacin morfolgica realizadas en el Laboratorio de Control Biolgico de la Carrera de Ingeniera en Ciencias Agropecuarias Santo Domingo, se obtuvieron los siguientes resultados:
Cuadro 7. Pruebas morfolgicas de los gneros Lactobacillus y Bacillus
Gnero Lactobacillu s Bacillus Forma Bacilos Bacilos Tamao 2-5 mm 1,2-10 m Color Crema Amarillo Superficie Cncava Cncava Tincin Positivo Positivo Agrupacin Cadena Cadena

Cuadro 8. Pruebas Bioqumicas de los gneros Lactobacillus y Bacillus Gnero Lactobacillu s Bacillus Catalasa Negativo Positivo Oxidasa Negativo Negativo Gelatinasa Negativo Positivo Ureasa Negativo Positivo

Luego de una primera caracterizacin las cepas: Lactobacillus y Bacillus se enviaron al Laboratorio de Microbiolgica y Control de Calidad Concepto Azul para complementar la caracterizacin a nivel de especie por medio de la identificacin molecular. 4.1.2. Identificacin Molecular de las Cepas Nativas por bacteria

Para la identificacin molecular se envi una muestra

precaracterizada por pruebas morfolgicas y bioqumicas. Este proceso realizado por

40

el laboratorio Concepto azul dio como resultado las secuencias de ADN Ribosomal 16S para cada cepa. Los resultados de la secuenciacin de la cepa bacteriana (Bacillus) permiti analizar una secuencia de 1508 pares de bases, la cual mostr tener 100% de homologa con cepas de Bacillus subtilis (Anexo 2). La cepa bacteriana (Lactobacillus) permiti analizar una secuencia de 1352 pares de bases, la cual mostr tener 100% de homologa con cepas de Lactobacillus acidophilus. A partir de estas cepas se obtuvo el probitico nativo. (Anexo 2) 4.1.3. Control de colonias viables de las cepas para la formulacin del probitico La concentracin de las bacterias obtenidas en el anlisis de laboratorio fue bastante alta, por lo cual se pudo asegurar que el protocolo establecido para producir el probitico a suministrar a las aves contena bacterias viables en una cantidad de 107 ufc de Lactobacillus acidophilus a 28 C por 48 horas y 106 ufc a 28 C por 72 horas respectivamente. (Anexo 1) 4.1.4. Recuento de Aerobios

Como Mtodo rpido para determinar el Crecimiento y numero de Bacterias cido-lcticas se usaron Placas Petrifilm Las Placas Petrifilm para Recuento de Aerobios en combinacin con el caldo MRS y una incubacin anaerobia favoreci el crecimiento de la bacteria cido-lctica. Las colonias heterofermentativas son de un color rojo a caf-rojizo, se estim un recuento aproximado de 106 colonias viables por cm2. (Anexo 7). 4.2. FASE DE CAMPO 4.2.1. GANANCIA DE PESO

41

Para esta variable, el ADEVA establece que existen diferencias significativas, para los tratamientos y error experimental. Mientras que para los contrastes existe diferencia estadstica significativa. Al realizar la tendencia polinmica se observa que en el probitico nativo existe diferencia no significativa para la lineal y cuadratica y en el probitico comercial existe diferencia significativa para la lineal y no significativa para la cuadratica. Los lotes evaluados en diferentes pocas muestran una diferencia estadstica significativa al igual que la interaccin tratamiento x lote.
Cuadro 9. ADEVA para medir el efecto de diferentes dosis y probiticos sobre el peso en pollos broiler en Santo Domingo, 2010. Fuente de Variacin Tratamiento Testigo vs resto P nativo vs P comercial P nativo lineal P nativo cuadratica P comercial lineal P comercial cuadratica Lote Tratamiento*lote Error experimental Error de muestreo Total CV (%)
** Altamente significativo, * significativo, ns no significativo

SC 76872,4 1 59664,0 2 8189,35 72,00 18,96 8888,88 39,18 4666,95 5192,82 9859,78 8294,67 95026,8 6

Gl 6 1 1 1 1 1 1 2 1 2 14 42 62

CM 12812,0 7 59664,0 2 8189,35 72,00 18,96 8888,88 39,18 2333,47 432,73 704,27 197,49

F 29,61

F tab <,0001*

302,1 <,0001* 1 41,47 <,0001* 0,36 0,5492 ns 0,10 0,7582 ns 45,01 <,0001 * 0,20 0,6583 ns 5,39 2,19 3,57 0,0213 * 0,0305 * 1,94 *

0,53

En el Cuadro 10, se observa el ADEVA para los diferentes lotes a travs del tiempo, en el cual se calcula el error para compararlo en el Cuadro 9.
Cuadro 10. ADEVA para medir el efecto de diferentes dosis, probiticos y pocas sobre el peso en pollos broiler en Santo Domingo, 2010. Fuente de Variacin Tratamiento Lote SC 76872,41 4666,95 Gl 6 2 CM 12812,06 2333,47 F 29,61 5,39 F tab <,0001 0,0213

42

Al realizar la prueba de significacin de Tukey al 5 % de probabilidad, se detectaron cuatro rangos de significacin, en el primer rango se muestra el T4 con un promedio de 2710 g, en el ltimo rango se encuentra el testigo que present un promedio de 2586,67 g que es un peso muy inferior a los dems. El coeficiente de variacin (0,53%), refleja el grado de precisin y exactitud con que se ha manejado esta investigacin.
Cuadro 11. Prueba de Tukey al 5% para los promedios de peso. Tratamiento T4 T5 T6 T1 T2 T3 T7 Medias 2710,00 2685,22 2665,56 2664,89 2661,11 2660,89 2586,67 n 9 9 9 9 9 9 9 E.E. 4,68 4,68 4,68 4,68 4,68 4,68 4,68

A A

B B B B B C

En la Figura 4, se analizan los resultados del efecto de los probiticos en la ganancia de peso, el tratamiento que present la mayor ganancia de peso final fue la dosis 1,5 ml de probitico comercial T4, con un valor de 2710 g y dentro del probitico nativo se encuentra el T1 con un valor de 2664,89 g, a diferencia del T 7, el cual present el peso ms bajo 2586,67 g. Los probiticos reportaron mejor ganancia de peso promedio, incrementando 87 g ms al final en relacin al testigo. Esto concuerda con Hoyos (2008), que en ganancia de peso observ que los machos tratados con EM (microorganismos eficaces) incrementaron 120,4 g en la ganancia de peso final. Los resultados se deben a que las bacterias usadas como probitico ayudan al mejoramiento de la flora bacteriana intestinal mejora las caractersticas nutricionales del alimento y por ende mejora la digestibilidad del mismo, aumenta la energa metabolizable lo cual incide en la ganancia de peso de las aves. Lo que demuestra que los probiticos mejoran la absorcin del alimento y el rendimiento de las aves. Y se constata con Cortes y vila (2000) y Araujo (2005)

43

quienes observaron una diferencia significativa en los pollos tratados con probiticos.

Figura4. Efecto de diferentes dosis de probitico nativo y comercial sobre el peso en pollos broiler a los 42 das, en Santo Domingo, 2010.

En la Figura 5, se observa el anlisis de correlacin y se deduce que a medida que incrementamos la dosis del probitico nativo la ganancia de peso final tiende a disminuir en un promedio de tres gramos al final del lote.

44

Figura 5. Anlisis de correlacin del probitico nativo para la variable peso en pollos broiler a los 42 das, en Santo Domingo, 2010.

En la Figura 6, se observa el anlisis de correlacin y se deduce que a medida que incrementamos la dosis del probitico comercial la ganancia de peso final tiende a disminuir.

Figura 6. Anlisis de correlacin del probitico comercial para la variable peso en pollos broiler a los 42 das, en Santo Domingo, 2010.

4.2.2.

CONVERSIN ALIMENTICIA (CA)

Para esta variable, el ADEVA establece que existen diferencias significativas, para los tratamientos y error experimental. Mientras que para los contrastes existe diferencia estadstica significativa. Al realizar la tendencia polinmica se observa que en el probitico nativo existe diferencia significativa para la lineal y no significativo para la cuadratica y en el probitico comercial existe diferencia significativa para la lineal y cuadratica. Los lotes evaluados en diferentes pocas muestran una diferencia estadstica significativa y para la interaccin tratamiento x lote existe una diferencia no significativa. El coeficiente de variacin (1,11%), obtenidos en la investigacin. es bajo y da confianza a los resultados

45

Cuadro 12. ADEVA para medir el efecto de diferentes dosis y probiticos sobre la conversin alimenticia en pollos broiler en Santo Domingo, 2010. Fuente de Variacin Tratamiento Testigo vs resto P nativo vs P comercial P nativo lineal P nativo cuadratica P comercial lineal P comercial cuadratica Lote Tratamiento*lote Error experimental Error de muestreo Total CV (%) SC 0,1 0,0715 0,0163 0,0018 0,0000 0,0098 0,0004 0,0113 0,0029 0,01 0,02 0,13 14 42 62 Gl 6 1 1 1 1 1 1 2 12 CM 0,02 0,0715 0,0163 0,0018 0,0000 0,0098 0,0004 0,0056 0,0002 0,001 0,0004 1,11 F 39,76 170,71 39,05 4,30 0,00 23,39 1,13 13,55 0,58 2,44 F tab <,0001 s <,0001 s <,0001 s 0,0444 s 1,0000 ns <,0001s 0,2936 s <,0001 s 0,8430 ns 1,94 s

** Altamente significativo, * significativo, ns no significativo

En el Cuadro 13, se observa el ADEVA para los diferentes lotes a travs del tiempo, en el cual se calcula el error para compararlo en el Cuadro 12.
Cuadro 13. ADEVA para medir el efecto de diferentes dosis, probitico y pocas sobre la conversin en pollos broiler en Santo Domingo, 2010. Fuente de Variacin Tratamiento Lote SC 0,0999 0,0113 Gl 6 2 CM 0,01666190 0,00567778 F 39,76 13,55 F tab <,0001 0,0213

En el Cuadro 14, se observan que dentro del rango de significacin A, se encuentra los tratamientos que se aplicaron el probitico T4, T5, T6 y T1, con mejores conversiones alimenticias.
Cuadro 14. Prueba de Tukey al 5% para los promedios de CA

Tratamiento Medias 4 1,78 5 1,82

n 9 9

E.E. 0,01 0,01

A A

46

6 1 2 3 7

1,83 1,83 1,84 1,85 1,92

9 9 9 9 9

0,01 0,01 0,01 0,01 0,01

A A

B B B B C

En la Figura 7, se observa que el tratamiento que present la mayor eficiencia fue la dosis 1,5 ml de probitico comercial (T4), con un valor de 1,78 a diferencia del T7, el cual present un valor ms alto 1,92. Se deduce que la conversin es baja por que presenta menor nmero de aves muertas con respecto a los dems tratamientos. El uso de probiticos, tanto nativos como comerciales, mejor la Conversin Alimenticia, los microorganismos ayudaron a mejorar la digestin y asimilacin de los nutrimentos, lo cual se afirma con Hoyos (2008) que observ una diferencia en el ndice de conversin alimenticia a favor de los machos tratados con EM de 0,11. Tambin se puede constatar con Araujo (2005) quien prob un producto a base de bacterias y enzimas y comprob una eficiencia en el consumo de alimento. Ramrez et al. (2005), demostraron que al incluir probitico a base de Lactobacillus sp, y Bacillus sp la conversin alimenticia mejor, puesto que se registraron datos de pollitas que al adicionar probitico en su dieta tuvieron una conversin alimenticia de 2,35 mientras que el tratamiento control tuvo una conversin de 2,68. En un estudio realizado por Hansen (2004), citado por Milian (2005) obtuvo un probitico compuesto por esporas de Bacillus licheniformis y subtilis. Demostrando que las enzimas que producen estas cepas como: amilasas, proteasas, lipasas contribuyen a mejorar la digestin de los ingredientes del pienso, hecho que se refleja en claras mejoras en los parmetros productivos como la ganancia de peso, conversin, mortalidad e ingresos econmicos. Palacios (2009), corrobora diciendo que la salud intestinal del broiler es la funcin optima del tracto digestivo aspecto primordial que le permite alcanzar el peso y la conversin alimenticia para la lnea gentica en cuestin.

47

Figura 7. Efecto de diferentes dosis de probitico nativo y comercial sobre la conversin alimenticia en pollos broiler en Santo Domingo, 2010.

En la Figura 8, se observa el anlisis de correlacin y se deduce que a medida que incrementamos la dosis del probitico nativo la conversin alimenticia tiende a incrementarse.

Figura 8. Anlisis de correlacin del probitico nativo para la variable conversin alimenticia en pollos broiler a los 42 das, en Santo Domingo, 2010.

48

En la Figura 9, se observa el anlisis de correlacin y se deduce que a medida que incrementamos la dosis del probitico comercial la conversin alimenticia tiende a incrementarse en un promedio de cinco milsimas.

Figura 9. Anlisis de correlacin del probitico comercial para la variable conversin alimenticia en pollos broiler a los 42 das, en Santo Domingo, 2010.

4.2.3.

MORTALIDAD

Para esta variable, el ADEVA establece que existen diferencias significativas, para los tratamientos y error experimental. Mientras que para los contrastes existe diferencia estadstica significativa. Al realizar la tendencia polinmica se observa que en el probitico nativo existe diferencia significativa para la lineal y no significativo para la cuadratica y en el probitico comercial existe diferencia significativa para la lineal y cuadratica. Los lotes evaluados en diferentes pocas muestran una diferencia estadstica significativa y para la interaccin tratamiento x lote existe una diferencia no significativa. El coeficiente de variacin (11,57%), es bajo y da confianza a los resultados obtenidos.

49

Cuadro 15. ADEVA para medir el efecto de diferentes dosis de probitico nativo y comercial, sobre la mortalidad en pollos broiler en Santo Domingo, 2 010. Fuente de Variacin Tratamiento Testigo vs resto P nativo vs P comercial P nativo lineal P nativo cuadratica P comercial lineal P comercial cuadratica Lote Tratamiento*lote Error experimental Error de muestreo Total 0,5 4 2,0 9 5,2 8 SC 2,6 5 1,392 0,799 0,236 0,000 2 0,321 0 0,042 7 0,011 3 0,002 9 14 42 62 Gl 6 1 1 1 1 1 1 2 1 2 CM 0,44 1,39 0,79 F F tab 11,3 2,85s 7 26.6 <.0001 s 3 15.2 0.0003 s 9 4.53 0.0393 s 0.00 0.9495 ns 0.0173 s 0.3711 s <,0001 s

0,23 0,0002 1 0,321 6.14 0,042 0.82 0,0056 0,0002 0,04 0,05

13,5 5

0,58 0,8430 ns 2,44 1,94 s

CV (%) 11,57 ** Altamente significativo, * significativo, ns no significativo

En el Cuadro 16, se observa el ADEVA para los diferentes lotes a travs del tiempo, en el cual se calcula el error para compararlo en el Cuadro 15.
Cuadro 16. ADEVA para medir el efecto de diferentes pocas de dosis y probiticos sobre la mortalidad en pollos broiler en Santo Domingo, 2010. Fuente de Variacin Tratamiento Lote SC 2,79192293 0,17997195 Gl 6 2 CM 0,46532049 0,08998597 F 8,90 1,72 F tab <,0001 0,1911

Se ha transformado los datos de mortalidad que vienen de un conteo de eventos raros, obtenindose un coeficiente de variacin ms real.
Cuadro 17. Prueba de Tukey al 5% para los promedios de Raz de mortalidad.

50

Tratamiento 7 3 2 1 6 5 4

Medias 2,28 2,1 1,99 1,87 1,85 1,8 1,59

n 9 9 9 9 9 9 9

E.E. 0,07 0,07 0,07 0,07 0,07 0,07 0,07

A A

B B B B

C C C C

D D D D

Al realizar la prueba de significacin de Tukey al 5 % de probabilidad, se detectaron cuatro rangos de significacin, en el primer rango se muestra el tratamiento T4 1,5 ml de probitico comercial, es el que tiene la mortalidad ms baja. La Figura 10, ilustra al T4 con menor mortalidad y por ende tiene mayor nmero de aves y se ve reflejado en una baja conversin alimenticia.

Figura 10. Efecto de diferentes dosis de probitico nativo y comercial sobre la raz de mortalidad en pollos broiler en Santo Domingo, 2010.

En la Figura 11, el tratamiento que present menor porcentaje de mortalidad fue la dosis 1,5 ml del T4 con un valor de 2,69% y dentro del probitico nativo T3 con un valor de 3,74 % a diferencia del T7, el cual present el ms alto 5,5%, y se deduce que las bacterias benficas tienen la capacidad de multiplicarse, adherirse y

51

colonizar el segmento gastrointestinal y esto permite mantener un buen estado sanitario lo cual coincide con Corts y vila (2000) e indican que el uso de probiticos para pollos de engorde permiten la reduccin de la mortalidad y de igual manera se afirma con Maruta (1996) mediante estudio determin que la mortalidad fue disminuida a 2,7% y 4,5%, con respecto al grupo control. Hansen (2004), el cual es citado por Milian (2005), Adems inhibe el crecimiento de agentes patgenos (Clostridium perfringens, Staphylococcus, bacterias coniformes, Eimeria) y estimulan la respuesta inmunitaria dotando al animal completamente sano. Los probiticos mantuvieron un equilibrio de la flora saprofita logrando mantener la salubridad de las aves y se afirma con Granados (2008) que las bacterias tiles como Lactobacillus, Bifidobacterium y Bacillus juegan un papel importante en el control de la flora y estimula el desarrollo de la pared intestinal. Nava (2008) corrobora diciendo que los mecanismos de accin de los probiticos juegan un papel muy importante en el sistema digestivo, bajando el pH, un efecto competitivo, estimulacin de defensa inmunointestinal y produccin de bacteriocinas.

Figura 11. Efecto de diferentes dosis de probitico nativo y comercial sobre la mortalidad expresado en porcentaje en pollos en broiler en Santo Domingo, 2010.

52

En la Figura 12, se observa el anlisis de correlacin y se deduce que a medida que incrementamos la dosis del probitico nativo la mortalidad tiende a subir en un promedio final del uno porciento ms.

Figura 12. Anlisis de correlacin del probitico comercial para la variable conversin alimenticia en pollos broiler a los 42 das en Santo Domingo, 2010.

En la Figura 13, se observa el anlisis de correlacin y se deduce que a medida que incrementamos la dosis del probitico comercial la mortalidad tiende a incrementarse.

Figura 13. Anlisis de correlacin del probitico comercial para la variable conversin alimenticia en pollos broiler a los 42 das, en Santo Domingo, 2010.

53

4.2.4.

ANLISIS BACTERIOLGICO

Para los tres factores evaluados no se encontr infeccin por Salmonella en pollos de engorde (Anexo 4-5). Mediante reporte del anlisis para parsitos gastrointestinales el tratamiento testigo tuvo gran cantidad de infeccin por Coccidias (Eimeria tenella, mxima y acervulina) y huevos de scaris, mientras de en los tratamientos con probiticos no se encontr. Y se afirma con un estudio realizado por Hoerr (2009), que la enteritis y la coccidiosis son las principales amenazas de la integridad intestinal. De igual manera se concuerda con Milian (2005) y Rossi et al. (2006), el probitico utilizado fue destacado como una biota accin del controlador o inhibidor de microorganismos patgenos, las aves mostraron un mejor desempeo en comparacin con el tratamiento control. La prueba microtest HI/Newcastle fue mas baja en el testigo 1:0, 1:40 y la ms alta fue en los probiticos con 1:80, 1:40, los valores ms altos determinan una excelente cantidad de anticuerpos y estimulacin al sistema inmunolgico. En el testigo existe un desafo que debe ser evaluado a cabalidad. Esto tambin concuerda con Ortiz (2006), a la eclosin el sistema inmunitario es inmaduro, y el pollito depende en gran medida del ambiente en que se encuentra. La capacidad de producir anticuerpos es menor en el transcurso de generaciones sucesivas. La inclusin de probiticos ayud a estimular el sistema inmunolgico digestivo y se afirma con lo descrito por Gmez (2010), que el sistema inmune digestivo se considera como uno de los ms grandes al ser el sitio que contiene mayor cantidad de clulas inmunolgicas organizadas en diferentes estructuras. Los mejores reportes de la inclusin de probiticos fueron para el comercial, se deduce por que contiene varios gneros de bacterias y enzimas benficas y es un producto

54

liofilizado y esto concuerda con

Yegani (2010), quien menciona que las

preparaciones comerciales de probiticos pueden ser de cepa nica o mltiple y tambin como una mezcla de varias especies (multiespecies) de bacterias. Los productos multiespecies pueden tener el beneficio de ser eficaces contra una gama ms amplia de condiciones del tubo digestivo. 4.2.5. ANLISIS ECONMICO

Siguiendo la metodologa del presupuesto parcial, segn Perrin et al. (1976), se procedi a obtener el beneficio bruto que correspondi al rendimiento en kilogramos de las aves procesadas en cada tratamiento. Este peso se multiplic por el valor del kilo de carne de pollo en el mercado nacional. Por otro lado se obtuvieron los costos variables para cada uno de los tratamientos, de la diferencia entre el beneficio bruto y los costos variables se obtuvo el beneficio neto.
Cuadro 18. Costos variables y beneficios para los tratamientos con la adicin de probiticos a base de L. acidophilus y B. subtilis
Trat. Dosis Prob. (ml) Total de Costos que varan ($/Trat) Beneficios Bruto ($/Trat) Beneficios Netos ($/Trat) Dom.

7 1 2 4 3 5 6

0 1,5 4,5 3 3 1,5 4,5

0 4 8 9 12 18 28

2884,2391 3026,6321 3007,618 2992,7623 3111,5205 3057,10618 3031,06328

2884,2391 3022,6321 2999,618 2983,7623 3099,5205 3039,10618 3003,06328

nd nd d d nd d d

Ordenando los costos que varan de manera creciente, acompaados de los beneficios netos, se procedi a realizar el anlisis de dominancia, donde el tratamiento dominado es aquel que a igual o menor beneficio neto, present un mayor costo variable.

55

De este anlisis se determin que los tratamientos no dominados son el 7,1,3. Al realizar el anlisis de la tasa de retorno marginal el tratamiento numero 4 se constituy en la alternativa econmica recomendable.

Cuadro 19. Anlisis marginal de tratamientos no dominados


Trat. Dosis Prob. Total de Costos que varan Beneficios netos CV marg BN marg TRM%

7 1 3

0 1,5 3

0 4 12

2884,2391 3022,6321 3099,5205

4 8

138,393 76,8884

2,8903196 10,4046904

Los beneficios netos aumentan conforme la cantidad invertida crece, la tasa de retorno marginal para gastos por encima de los USD $ 12 es de 10,4% . El costo marginal del primer incremento es de $4, el beneficio neto marginal es de $138,29, y la tasa de retorno marginal es por lo tanto 2,89 %. El costo marginal del segundo incremento es de $8, el beneficio marginal es de $76,8 y la tasa de retorno marginal 10,4%
T T3 1 T 7

Figura 14. Curva de beneficios netos

56

En la Figura 14, se observa la relacin entre los costos variables de las alternativas y los beneficios netos obtenidos, se muestra claramente que el tratamiento T3 tiene un beneficio neto mximo. Aparentemente no existe una diferencia muy marcada para estos dos ndices desde el punto de vista econmico, pero teniendo en cuenta que se trata de un producto competitivo y sensible econmicamente en el mercado por el alto volumen en el que se produce se consideran algunos aspectos positivos en el lote experimental con el probitico nativo como el menor costo de produccin por unidad en pie (kg), una mayor utilidad neta siendo esta mayor que en el lote control sin probitico.

57

V.

CONCLUSIONES

Los probiticos no son antibiticos, pero si se usan correctamente junto con medidas nutricionales, de manejo y de bioseguridad, pueden ser una herramienta poderosa para mantener la salud del tracto gastrointestinal de las aves, mejorando as su rendimiento zootcnico. Las bacterias benficas pueden inhibir el crecimiento de las bacterias patgenas mediante diversos mecanismos, adems de estimular al aparato inmunocompetente, sintetizan vitaminas, que ayudan a mantener sano al animal. En cuanto a las variables de peso, conversin alimenticia y mortalidad los mejores resultados se obtuvieron con la dosis de 1,5 ml tanto el probitico nativo y comercial/l agua. Est demostrado que las bacterias probiticas ayudan a mejorar los parmetros productivos en pollos de engorde. La aplicacin de bacterias probiticas hace ms eficiente el uso y consumo de alimento balanceado, ya que con el mismo consumo de alimento permite tener una mejor ganancia de peso final y esta constatado con una conversin de 1,78 que corresponde al T4. Los microorganismos benficos ayudaron a mantener una flora saprofita equilibrada en el sistema digestivo y se obtuvo una mejora en la digestin de los nutrimentos ya que se observ heces consistentes y libres de alimento balanceado (Anexo. 9).

58

La inclusin de bacterias probiticas contribuy a mejorar el estado sanitario de las aves, siendo ms efectivas en el tratamiento uno y cuatro con la dosis de 1,5 ml fue la que alcanz mayor ganancia de peso. Las bacterias cido lcticas son microorganismos que se pueden encontrar en la leche, algunos derivados lcteos y en el sistema digestivo de los animales, son capaces de fermentar monosacridos o polisacridos para transformarlos en cidos como lctico, ctrico, propinico, exopolisacridos, bacteriocinas, perxido de hidrogeno, endulzantes no calricos, vitaminas, bebidas lcteas, ensilados, formacin de sabores y aromas deseables, entre otros que ayudan a mantener un equilibrio de la flora intestinal. Considerando la alternativa mas recomendable econmicamente, los tratamientos que presentaron una mejor relacin beneficio costo fueron el T1 y T3; ambos pertenecientes al probitico nativo. Las ganancias obtenidas al incrementar la dosis a 4,5 ml son mayores que las dosis de los tratamientos T7 y T1 pero con un incremento de los costos que varan.

59

VI.

RECOMENDACIONES

Se recomienda la inclusin de probiticos a travs del consumo de agua, puesto que mejora la ganancia de peso, mejor conversin alimenticia y sanidad de las aves. Los avicultores tiene varias alternativas de implementar aditivos alimenticos en sus parvadas y pueden combinar los probiticos con los prebiticos, cidos orgnicos y enzimas, obteniendo resultados mucho ms eficientes. Se recomienda utilizar neutralizante de cloro antes de realizar la inoculacin en el agua de bebida, ya que las bacterias mueren en presencia de cloro y otros productos desinfectantes. Realizar nuevos estudios empleando levaduras u otros microorganismos con caractersticas probiticas. El manejo y preparacin de las bacterias debe ser lo mas estril posible a fin de evitar posibles contaminaciones, alterando la microbiota de la solucin. Se trata de microorganismos vivos y no debemos abusar de ellos. Probar un probitico nativo con muchas ms especies de bacterias benficas.

60

VII.

RESUMEN

La Industria avcola ha experimentado un importante crecimiento en el Ecuador durante estos ltimos aos, convirtindose en un producto con creciente representatividad a diferencia de otros tipos de carne. En el Ecuador, ha sido poco estudiada la inclusin y accin de los probiticos sobre el sistema gastro intestinal, ya que existen gran cantidad de bacterias patgenas que causan un desequilibrio microbiano en el sistema intestinal de las aves, sometidos al uso excesivo de antibiticos los cuales han incrementando los costos de produccin. Existe por lo tanto la necesidad de implementar biotecnologas adecuadas al manejo de los broilers, una de ellas es la aplicacin de bacterias benficas o microorganismos eficientes a travs del agua de bebida, siendo el objetivo del presente estudio determinar los efectos de la inclusin de probiticos durante la etapa de crianza en pollos broilers (Lnea ROSS-308), para el mejoramiento de los parmetros sanitarios, productivos y econmicos. Se us un Diseo de Bloque Completamente al Azar (DBCA) en diferentes pocas, utilizndose 3 dosis de probitico nativo y comercial que fue de 1,5; 3,0 y 4,5 ml/ l agua. Se identificaron en la parte media del leon y ciegos del tracto gastrointestinal en pollos Broiler Ross-308 de seis semanas en produccin, microorganismos benficos principalmente del gnero Lactobacillus acidophilus y Bacillus subtilis. La multiplicacin del inculo nativo inicial result ser efectiva al mantener la concentracin de 106 ufc/ml para Bacillus subtilis y 107 ufc/ml para Lactobacillus acidophilus. En cuanto a las variables evaluadas, la aplicacin de probiticos influy positivamente sobre la ganancia de peso, conversin alimenticia y disminuyo la tasa de mortalidad. El porcentaje de

61

colonizacin de las bacterias benficas fue elevada ya que no se reportaron parsitos gastrointestinales mediante anlisis en laboratorio y contribuy a mejorar el estado sanitario de las aves, evidencindose pollos libres de E. coli, Eimeria y Salmonella. Los tratamientos con una mayor relacin beneficio costo fue el T1 y T3 (1,5 y 4,5 ml probitico nativo/l agua). Siendo el mejor el T3.

VIII. SUMARY The poultry industry has experienced significant growth in Ecuador in recent years, becoming a product with growing representation in contrast to other types of meat. In Ecuador, has been little studied inclusion and action of probiotics on the gastro intestinal system, as there are many pathogenic bacteria that cause microbial imbalance in the intestinal system of birds subjected to excessive use of antibiotics which have increased production costs. There is therefore a need to implement appropriate biotechnology to the management of broilers, one of which is the application of beneficial bacteria or microorganisms efficient through drinking water, with the objective of this study to determine the effects of the inclusion of probiotics in stage of aging in broiler chickens (Line ROSS-308) for the improvement of health parameters, productive and economical. Design We used a randomized complete block (RCBD) at different times, using 3 doses of native and commercial probiotic was 1.5, 3.0 and 4.5 ml / l water. Were identified in the middle part of the ileum and blind the gastrointestinal tract in Ross-308 Broiler chickens six weeks into production, beneficial microorganisms Lactobacillus acidophilus mainly and Bacillus subtilis. The multiplication of the initial native inoculum was effective in maintaining the concentration of 106 cfu / ml for Bacillus subtilis and 107 cfu / ml for Lactobacillus acidophilus. As for the variables evaluated, the application of probiotics had a positive effect on weight gain, feed conversion and decreased mortality. The percentage of colonization of beneficial bacteria was high since there were no reported gastrointestinal parasites through laboratory analysis and helped improve the health status of birds, showing chickens free of E. coli, Eimeria and

62

Salmonella. Treatments with higher benefit cost ratio was the T1 and T3 (1.5 and 4.5 ml probiotic native / l water). Being the best T3.

IX.

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69

X.

ANEXOS

Anexo 1. Conteo de bacterias acidolcticas

70

Continuacin Anexo 1. Conteo de bacterias acido lcticas

71

Anexo 2. Resultados moleculares

72

Continuacin Anexo 2. Resultados moleculares

73

Continuacin Anexo 2. Resultados moleculares

74

Continuacin Anexo 2. Resultados moleculares

75

Continuacin Anexo 2. Resultados moleculares

76

77

ANEXO 3. RESULTADOS MICROBIOLOGICOS PARA EL TRATAMIENTO TESTIGO

78

Continuacin Anexo 3. Resultados microbiolgicos para el tratamiento testigo

79

Anexo 4. RESULTADOS MICROBIOLOGICOS PARA EL TRATAMIENTO PROBITICO NATIVO

80

Continuacin Anexo 4. Resultados microbiolgicos para el tratamiento probitico nativo

81

Anexo 5. RESULTADOS MICROBIOLOGICOS PARA EL TRATAMIENTO PROBITICO COMERCIAL

82

Continuacin Anexo 5. Resultados microbiolgicos para el tratamiento probitico comercial

83

Anexo 6. AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS Y FORMULACIN DEL PROBITICO NATIVO

a. Muestreo del contenido intestinal

b. Inoculacin en suero fisiolgico

c. Elaboracin del medio de cultivo Agar MRS

d. Siembra de Lactobacillus acidophilus y Bacillus subtilis

84

e. Cultivo de Lactobacillus acidophilus en anaerobiosis, cultivadas a 28C por 48 horas f.

Placas de Bacillus subtilis cultivadas a 28C por 72 horas

g. Identificacin y caracterizacin por pruebas morfolgicas

85

h. Aislamiento y purificacin de Bacillus subtilis

i. Identificacin por pruebas bioqumicas

j. Elaboracin de la cepa madre del probitico nativo

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k. Mezcla de melaza mas agua

l. Control de la acidez de la solucin

m. Inclusin de la cepa probitica

n. Producto final

Anexo 7. CONTEO DE BACTERIAS ANAEROBIAS

87

a. Colocacin del difusor 3M a.

b. Interpretacin de lectura de la concentracin ufc/ml

Anexo 8. FASE DE CAMPO i.

Instalacin de tanques de agua para bebida

88

b. Instalacin de red de tuberas

c. Colocacin de bridas

d. Instalacin de tuberas de gas divisiones

e. Malla divisoria para tratamientos

f. Sistema de filtro para una agua de calidad

89

g. Colocacin de las aves en el recipiente

h. Lectura del peso

i. Conformacin del lote durante el ensayo

Anexo 9. MUESTREO DE HECES

a. Probitico comercial (heces consistentes)

b. Probitico nativo

90

c. Tratamiento testigo (heces blandas)

Anexo 10. Composicin qumica del Agar MRS. (Formula en gramos por litro) Composicin Proteasa peptona N 3 Extracto de carne Extracto de levadura Glucosa Monoleato de sorbitn Fosfato dipotsico Acetato de sodio Citrato de amonio Sulfato de magnesio Sulfato de manganeso Agar pH final: 6.4 0.2 Instrucciones Suspender 64 g del

10,0 8,0 4,0 20,0 1 ml 2,0 5,0 2,0 0,2 0,05 13,0

1.

medio en un litro de agua destilada. 2. Reposar 5 minutos y mezclar calentando a ebullicin durante 1 2 minutos. 3. Esterilizar en

autoclave durante 15 minutos a 121 C.

91

Anexo 11. Composicin qumica del Caldo M.R.S. (Formula en gramos por litro) Composicin Proteasa peptona N 3 Extracto de carne Extracto de levadura Glucosa Monoleato de sorbitn fosfato dipotsico Acetato de sodio Citrato de amonio Sulfato de magnesio Sulfato de manganeso Agar Instrucciones Suspender 51 g

10,0 8,0 4,0 20,0 1 ml 2,0 5,0 2,0 0,2 0,05 13,0

1.

del medio en un litro de agua destilada. 2. Reposar y 5 mezclar

minutos

calentando a ebullicin durante 1 2 minutos. 3. Esterilizar durante en 15

pH final: 6,4 0,2

autoclave

min a 121 C

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