Tingimento

Universidade Federal de Santa Catarina Centro Tecnolgico Departamento de Engenharia Qumica e Engenharia de Alimentos Programa de Ps-Graduao em Engenharia Qumica
Eliane Forgiarini
Degradao de Corantes e Efluentes Txteis Pela Enzima Horseradish Peroxidase (HRP)
Florianpolis Santa Catarina Fevereiro/ 2006
Eliane Forgiarini
Degradao de Corantes e Efluentes Txteis Pela Enzima Horseradish Peroxidase (HRP)
Dissertao de Mestrado Submetida ao Programa de Ps Graduao em Engenharia Qumica do Centro Tecnolgico, da Universidade Federal de Santa Catarina como parte dos requisitos exigidos para a obteno do ttulo de Mestre em Engenharia Qumica.
Orientadora: Profa. Dra. Selene M. A. Guelli Ulson de Souza Co-orientador: Prof. Dr. Antnio Augusto Ulson de Souza
Florianpolis Santa Catarina Fevereiro/ 2006
Houve um tempo em que se fazia cincia a partir de quatro elementos: gua, terra, fogo e ar. Naquele tempo no se sabia que era possvel fazer qualquer coisa com dois: vontade e imaginao... (Autor desconhecido).
AGRADECIMENTOS
A Deus, por ter sido minha rocha e fortaleza, nos bons e maus momentos da minha vida. A minha famlia, em especial aos meus pais e irmos, por apoiarem meus sonhos, acreditarem na minha capacidade, pelo suporte financeiro e por me amarem sempre. Ao Guilherme, pelos comentrios sempre oportunos, confortantes e incentivadores, e principalmente por seu amor e pelo seu apoio nas horas de desnimo. A Heloisa, por ter despertado em mim o interesse pela pesquisa, pela disponibilidade em me ajudar a resolver os problemas sempre com muita disposio e alegria. Aos Professores Selene M. A. Guelli Ulson de Souza e Antnio Augusto Ulson de Souza, pela Orientao e Confiana. Ao Professor Dr. Nelson Eduardo Durn Caballero, por ter sempre me atendido prontamente quando precisei de ajuda. A Professora Dra. Marta Cristina Teixeira Duarte, pelos ensinamentos e contribuio para a confeco deste trabalho. Aos amigos Ana Cludia, Fabiane, Ktya, Alexandre, Davi, Juclio, Lorena, Samir, Andr, pela troca de idias e pela agradvel convivncia. A CAPES, pelo auxlio financeiro atravs da bolsa de estudos. A FINEP/ Fundo Verde Amarelo/ Projeto PROTXTIL, pelo financiamento do projeto, juntamente com as empresas, MARISOL, KARSTEN e HERING. A todos vocs, muito obrigada.
SUMRIO
LISTA DE FIGURAS........................................................................................................vii LISTA DE TABELAS .......................................................................................................ix RESUMO............................................................................................................................x ABSTRACT .......................................................................................................................xi 1 INTRODUO ..............................................................................................................1 2 OBJETIVOS ...................................................................................................................5 2.1 Objetivo geral ............................................................................................................5 2.2 Objetivos especficos:................................................................................................5 3. REVISO BIBLIOGRFICA .....................................................................................6 3.1. Indstria Txtil .........................................................................................................6 3.1.1 O uso da gua na indstria txtil ........................................................................7 3.1.2 Processo Txtil ...................................................................................................8 3.1.3 Beneficiamento Txtil. .......................................................................................9 3.1.4 Produtos Qumicos Auxiliares Utilizados na Indstria Txtil............................14 3.1.5 Corantes Txteis .................................................................................................16 3.2 Gerao e Tratamento de Efluentes Txteis..............................................................21 3.4 Degradao de Corantes e Efluentes Txteis por Enzimas Lignolticas. ..................32 3.5 Enzimologia Aplicada Indstria Txtil...................................................................43 3.5.1 Nomenclatura e classificao das enzimas.........................................................43 3.5.2 Stio ativo de ligao/ especificidade .................................................................45 3.5.3 Cofatores.............................................................................................................46 3.5.4 Cinticas de reaes enzimticas........................................................................46 3.5.5 Fatores externos que influenciam na velocidade de uma reao enzimtica .....49 3.5.6 Atividade Enzimtica .........................................................................................50 3.5.7 Isoenzimas ..........................................................................................................51 3.5.8 Imobilizao de Enzimas....................................................................................51 3.6 Enzimas peroxidases .................................................................................................52 3.7 Toxicidade dos efluentes txteis................................................................................57 4 MATERIAL E MTODOS ...........................................................................................59 4.1 Local ..........................................................................................................................59 4.2 Material......................................................................................................................59 4.2.1 Corantes ..............................................................................................................59 4.2.2 Efluente Txtil ....................................................................................................60 4.2.3 Enzima ................................................................................................................61 4.3 Mtodos .....................................................................................................................61 4.3.1 Determinao da atividade enzimtica da Horseradish Peroxidase (HRPToyobo do Brasil)........................................................................................................61 3.3.3 Determinao da cor pelo mtodo espectrofotomtrico. ....................................64 4.4 Testes de Toxicidade .................................................................................................64 4.4.1 Teste de toxicidade aguda com Artemia salina..................................................64 4.4.2 Teste de toxicidade aguda com Daphnia magna................................................65 4.4.3 Teste de inibio do crescimento de raiz de cebola (Allium cepa) ........................65 4.5 Estudo cintico da degradao enzimtica de corantes isolados e do efluente txtil.................................................................................................................................66 5 RESULTADOS E DISCUSSO....................................................................................68 5.1 Tratamento enzimtico de corantes txteis................................................................68
5.1.1 Degradao Enzimtica do Corante Turqueza Remazol G 133%......................69 5.1.2 Avaliao da toxicidade aguda do corante Turqueza Remazol G 133%............75 5.1.3 Degradao Enzimtica do Corante Azul Lanaset 2R .......................................79 5.1.4 Avaliao da Toxicidade aguda do corante Azul Lanaset 2R............................82 5.1.5 Degradao Enzimtica do Corante Preto Remazol B .......................................85 5.2 Degradao enzimtica de efluentes txteis ..............................................................86 5.2.1 Avaliao da toxicidade aguda do efluente txtil...............................................91 6 CONCLUSES E SUGESTES ..................................................................................98 A seguir so apresentadas algumas sugestes para desenvolvimento de trabalhos futuros:.............................................................................................................................99 7 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS .........................................................................100
vii
LISTA DE FIGURAS Figura 1 Etapas caractersticas do processamento a mido de tecidos de algodo e mesclas de algodo (Fonte: EPA, 1997). ...................................................................10 Figura 2 : Estrutura qumica de um azo corante. ......................................................18 Figura 3: Interao do corante reativo com a fibra txtil .........................................19 Figura 4: Organograma das classes de tratamento de efluentes...............................25 Figura 5: Estrutura qumica do sulfofenil hidroperxido .........................................39 Figura 6 Modelo chave / fechadura. .........................................................................45 Figura 7 Modelo de Ajuste Induzido. .......................................................................46 Figura 8 Cintica enzimtica .....................................................................................48 Figura 9 : Ciclo cataltico da peroxidase .....................................................................52 Figura 10 Grupo prosttico das enzimas peroxidase denominado grupo heme. ..54 Figura 11 - Estrutura qumica dos corantes utilizados neste trabalho.....................60 Figura 12 - Espectrofotmetro Schimadzu UV mini -1240. ......................................62 Figura 13 Reao da Siringaldazina catalisada pela enzima..................................62 Figura 14 Medidor de pH Quimis. ............................................................................63 Figura 15 - Espectro de varredura do corante Turqueza, antes e aps o tratamento com a enzima HRP livre................................................................................................69 Figura 16 - Efeito da quantidade de perxido de hidrognio, na descolorao do corante Turqueza G 133%, pela enzima HRP............................................................70 Figura 17 - Influncia da temperatura na descolorao do corante Turqueza Remazol G 133%, pela enzima HRP livre...................................................................71 Figura 18 - Efeito do pH sobre a ao da HRP, na remoo de cor. ........................72 Figura 19 - Efeito da quantidade de enzima HRP livre, na remoo de corante. ...73 Figura 20 - Efeito da concentrao de corante na soluo catalisada pela HRP.....74 Figura 21 Descolorao do corante Turqueza G 133%, com diferentes quantidades de enzima. .................................................................................................75 Figura 22 - Teste de toxicidade aguda para o microcrustceo Artemia salina aps 24 horas de exposio em diferentes concentraes de corante no tratado. ..........77 Figura 23 - Teste de toxicidade aguda para o microcrustceo Artemia salina aps 24 horas de exposio em diferentes concentraes de corante tratado com a enzima HRP. ..................................................................................................................77 Figura 24 Descolorao do Corante Azul 2R, pela enzima HRP. ..........................80 Figura 25 - Porcentagem de corante removido com HRP livre em funo do tempo de contato. ......................................................................................................................81 Figura 26 - Cintica de descolorao do Corante Azul 2R, em funo do tempo e adio do substrato........................................................................................................82 Figura 27 Teste de toxicidade aguda para o microcrustceo Artemia Salina, aps 24 horas de exposio em diferentes concentraes do corante Azul 2R antes do tratamento. .....................................................................................................................83 Figura 28 Teste de toxicidade aguda para o microcrustceo Artemia Salina, aps 24 horas de exposio em diferentes concentraes do corante Azul 2R aps o tratamento enzimtico...................................................................................................84 Figura 29 - Espectro de varredura do corante Preto Remazol B, antes e aps 45 minutos de tratamento com a enzima HRP. ...............................................................86 Figura 30 - Espectro de absoro do tratamento de efluente txtil com H2O2, enzima e enzima + H2O2 (O efluente foi diludo 1:1) por 90 minutos.......................87
viii Figura 31 - Espectros de absoro do efluente txtil, aps tratamento enzimtico em diferentes temperaturas por 90 minutos. ..............................................................88 Figura 32 - Efeito da temperatura, na descolorao do efluente txtil.....................88 Figura 33: Espectros de absoro do efluente txtil, ilustrando a formao de um novo pico, e a reduo do mesmo em funo do tempo. ............................................90 Figura 34 - Descolorao do efluente txtil, temperatura 30C, pH 5,0. Com primeira adio e segunda adio de enzima..............................................................90 Figura 35 - Teste de toxicidade aguda com o microcrustceo Artemia salina, aps 24 horas de exposio, em diferentes concentraes de efluente no tratado..........92 Figura 36 - Teste de toxicidade aguda com o microcrustceo Artemia salina, aps 24 horas de exposio, em diferentes concentraes de efluente tratado com a enzima HRP. ..................................................................................................................93 Figura 37 - Teste de toxicidade aguda para o microcrustceo D. magna, aps 48 horas de exposio em diferentes concentraes de efluente no tratado com enzima. ............................................................................................................................94 Figura 38 - Teste de toxicidade aguda para o microcrustceo D.magna, aps 48 horas de exposio em diferentes concentraes de efluente tratado por processos enzimticos. ....................................................................................................................94 Figura 39 - Crescimento da raiz de cebola em diferentes concentraes de efluente tratado. ...........................................................................................................................96
ix LISTA DE TABELAS
Tabela 1: Auxiliares qumicos utilizados em tingimento. ..............................................16 Tabela 2: Valores mais provveis de alguns efluentes lquidos txteis.........................23 Tabela 3. Enzimas com potenciais aplicao em tratamento de Resduos...................34 Tabela 4 - Propriedades da enzima Horseradish peroxidase.........................................61 Tabela 5: Testes de Toxicidade aguda com o microcrustceo Artemia salina, aps 24 horas de incubao em diferentes concentraes de corante. ..................................76 Tabela 6 - Inibio do crescimento da raiz de cebola (Allium cepa), exposta a 8 dias em diferentes concentraes de corante bruto e aps tratamento enzimtico. ...........78 Tabela 7: Testes de Toxicidade aguda com o microcrustceo Artemia salina, aps 24 horas de incubao em diferentes concentraes de corante. ..................................83 Tabela 8 - Inibio do crescimento da raiz de cebola (Allium cepa), exposta a 8 dias em diferentes concentraes de corante bruto e aps tratamento enzimtico. ...........85 Tabela 9: Testes de Toxicidade aguda com o microcrustceo Artemia salina, aps 24 horas de incubao em diferentes concentraes de efluente...................................92 Tabela 10 - Resultado de Daphnia magna expostas no efluente txtil bruto e tratado (n=10 em duplicata). ............................................................................................93 Tabela 11: Inibio do crescimento da raiz de cebola (Allium cepa), expostas a 8 dias em diferentes concentraes de efluente bruto e aps tratamento. ......................96
x RESUMO Este trabalho apresenta uma avaliao do potencial da enzima vegetal Horseradish peroxidase (HRP), para a descolorao de corantes e efluentes txteis. As condies timas de atuao da HRP (29,85 U/mL), pH, quantidade de H2O2 e enzima, concentrao de corante e temperatura foram encontradas atravs de ensaios realizados com o corante Turqueza Remazol G 133%. Os ensaios de descolorao com os demais corantes estudados e com o efluente txtil foram realizados a partir desses resultados. As condies timas de atuao da enzima determinadas foram: pH na faixa de 4,0 a 5,0, quantidade de enzima de 5x10- mL de enzima/ mL de soluo (29,85 U/mL) e 2x10-3 mmol L-1de H2O2, concentrao de corante a ser tratado em 100mg/L e temperatura de 30C. Dentre os corantes testados, os resultados indicaram que a descolorao do corante Turqueza Remazol G133% foi de aproximadamente 59% em 45 minutos de contato com a enzima; para o Azul Lanaset 2R, a descolorao alcanou cerca de 94% em apenas 5 minutos, enquanto que, para o Preto Remazol B, no houve nenhuma descolorao superior a 10%. Nos ensaios de descolorao do efluente txtil obteve-se 52% de eficincia. Neste caso, foi observada a formao de um novo pico entre os comprimentos de onda 350 450 nm, que no interferiu no clculo da eficincia da descolorao, pois este foi realizado atravs da rea do espectro de varredura. Alm da descolorao foi feita a avaliao da toxicidade, antes e aps o tratamento enzimtico dos corantes e do efluente txtil, empregando-se os microcrustceos Artemia salina e Daphnia magna e inibio do crescimento da raiz de cebola (Allium cepa). A avaliao da toxicidade dos corantes txteis evidenciou uma toxicidade mais elevada aps o tratamento enzimtico, o que pode ser explicado pela formao de compostos intermedirios mais txicos que o composto de partida. A toxicidade do efluente txtil apresentou uma reduo aps o tratamento enzimtico, frente a todos os testes avaliados. Os resultados obtidos neste trabalho indicaram a viabilidade do emprego de enzimas para descolorao de corantes e efluentes txteis. Palavras chave: Enzima, Horseradish peroxidase (HRP), Corantes txteis, Efluentes txteis, Toxicidade
xi ABSTRACT This work presents an evaluation of the potential of the vegetal enzyme Horseradish peroxidase (HRP), for the decolorization of dyes and textile effluent. The excellent conditions of performance of the HRP (29.85 U/mL), pH, amount of H2O2 and enzyme, concentration of dyes and temperature have been found through experiments realized with the dye Turqueza Remazol G 133%. The decolorization experiments of other dyes and the textile effluent have been realized using these results. The optimal conditions of the best performance of the enzyme have been: pH between 4.0 the 5.0, amount of enzyme of 5x10- mL of enzyme/mL of solution (29.85 U/mL) and 2x10-3 mmol L-1 of H2O2 , initial dye concentration of 100 mg/L and temperature of 30C. For the tested dyes, the results have indicated that the decolorization of Turqueza Remazol G133% dye was of approximately 59% in 45 minutes of contact time with the enzyme; for the Blue Lanaset 2R, the decolorization reached about 94% in only 5 minutes, while that for the Black Remazol B did not have any decolorization superior to 10%. In the experiments realized for decolorization of the effluent textile, 52% of efficiency was gotten. In this case, it was observed the formation of new peak between the wave lengths 350 and 450, which did not alter the calculation of the decolorization efficiency, because this was carried through the specter area. Beyond the decolorization, the evaluation of the toxicity was made, before and after the enzymatic treatment of the dyes and the textile effluent, using the microcrustaceans Artemia salina and Daphnia magna and growth inhibition of onion root (Allium cepa). The toxicity evaluation of the textile dyes evidenced a higher toxicity after the enzymatic treatment, which can be explained by the formation of more toxic intermediate compound than the initial compound. The effluent textile toxicity presented a reduction after the enzymatic treatment, for all evaluated tests. The results have indicated the viability of the enzyme application for decolorization of dyes and textile effluents.
Keywords: Enzyme, Horseradish peroxidase (HRP), Textile dyes, Textile effluents, Toxicity.
1 INTRODUO As atividades industriais cresceram muito nos ltimos anos, gerando novos problemas devido eliminao de rejeitos txicos, provenientes de subprodutos gerados pela indstria. A eliminao desses produtos txicos atualmente um dos mais importantes assuntos em controle de poluio, o que tem levado os pesquisadores a buscar novas ferramentas mais poderosas para diminuir ou eliminar a toxicidade dos efluentes gasosos, lquidos e slidos formados em seus distintos processos, sempre levando em conta as regulamentaes e legislaes voltadas proteo ambiental. O problema da poluio ambiental tem carter mundial. Originou-se na revoluo industrial, intensificou-se com a exploso populacional humana e perpassa pelo mtodo scio-econmico-cultural do sculo. Em muitas regies Brasileiras que abrigam plos industriais e densa populao, o meio ambiente vem sofrendo uma degradao efetiva causada pelos esgotos domsticos e industriais, principalmente o ecossistema aqutico. Medidas preventivas e corretivas devem ser implantadas concomitantemente aos crescimentos regionais, conduzindo a populao a nveis aceitveis para a manuteno da qualidade de vida (BALAN, 1999). A poluio qumica do ar, solo e gua tem se tornado fonte de preocupao. O acmulo no ambiente de compostos xenobiticos, em conseqncia das aes humanas nos processos produtivos e de transformao, tornou-se o tema de numerosas pesquisas. Os tratamentos de resduos e efluentes com microrganismos que aceleram o processo e o rendimento da degradao apontam o potencial das tcnicas de bioestimulao e bioremediao que utilizam os microrganismos para degradar compostos perigosos a at substncias no txicas. O poluente funciona como fonte de carbono, sendo geralmente necessrio o fornecimento de nitrognio, fsforo e de um agente oxidante que funcione como receptor de eltrons. Os problemas causados ao meio ambiente em funo dos resduos decorrentes da industrializao deram origem a diversas tecnologias visando minimizao de impactos ambientais. A observao de como o meio ambiente reage a cada interveno antropognica mostra a atuao de microrganismos, existentes em todas as situaes, na busca da autopreservao, enfrentando agentes agressores, em alguns casos degradando tais agentes, geralmente contaminantes, constituindo-se numa poderosa arma de defesa ambiental, passvel de ser potencializada (PERALTA-ZAMORA et al., 2002).
2 Do ponto de vista ambiental, a indstria txtil apresenta grande potencial de poluio, dado ao elevado consumo de corantes durante a etapa de tingimento e ao consumo de aditivos (ligantes, fixadores, antiespumantes, espessantes, amaciantes, resinas, antiestticos, antichamas e antifungos) durante as etapas de pr-tingimento e armazenagem. Portanto, tal indstria responsvel pela gerao de efluentes com elevados nveis de colorao, demanda qumica de oxignio (DQO) e slidos suspensos. Dentre estes, o problema da colorao tem atrado a ateno de pesquisadores, ambientalistas e governos. A indstria txtil contribui significativamente para a poluio dos rios em algumas regies do Brasil ao transformar fibras naturais e sintticas em tecidos e outros produtos. Em algum ponto do processo de fabricao de tecidos, operaes de processamento qumico mido so necessrias para preparar, purificar, colorir ou acabar adequadamente o produto. Isso resulta na gerao de efluentes cuja carga de poluentes provm no somente da remoo de impurezas das prprias matrias-primas como tambm dos reagentes qumicos residuais usados no processamento (CAMMAROTA e COELHO, 2001). Os reagentes utilizados nos processos txteis apresentam uma composio muito variada, incluindo compostos orgnicos e inorgnicos (BRS et al., 2002). Os corantes txteis, responsveis pela colorao de guas residurias, so mistura de compostos com estrutura molecular complexa, o que faz dos mesmos produtos estveis e de difcil biodegradao (ROSALEN et al., 2004). Os corantes sintticos so extensivamente empregados pela indstria txtil, onde se estima que 10 a 15% so incorporados no efluente aps o processo de colorao. A grande diversidade e complexidade desses efluentes, aliados s imposies de legislao que exigem tratamentos eficientes, vm estimulando o desenvolvimento de novas tcnicas que buscam o melhor e o mais adequado tratamento. H diversas formas fsicas, qumicas e biolgicas de tratamento para os efluentes txteis. O sistema biolgico de lodo ativado reconhecido como o mais representativo dentre os utilizados por indstrias txteis. Em lagoas aeradas, o efluente submetido oxidao por microrganismos, reduzindo-se eficientemente a carga poluidora lanada no ambiente. Os estudos de degradao de compostos qumicos tm mostrado vrios microrganismos extremamente versteis em catabolizar molculas recalcitrantes. Os caminhos atuais da biotecnologia indicam os fungos basidiomicetos, degradadores da
3 lignina, como eficientes na degradao de uma grande variedade de compostos e corantes, com alto potencial de ao na recuperao de ambientes contaminados (BALAN, 1999). As alternativas mais promissoras para resoluo de inmeros problemas ambientais ocasionados pela atividade industrial derivam do estudo de novas tecnologias para o tratamento de efluentes industriais. Nesse contexto a utilizao de processos biolgicos baseados na utilizao de fungos e bactrias, ou diretamente na utilizao de enzimas, tem aparecido como umas das alternativas de grande potencial. Dentre os processos biotecnolgicos de tratamento de efluentes txteis, com o emprego de enzimas, pode-se citar as enzimas lignolticas como as lacases, lignina peroxidase e mangans peroxidase, estas enzimas tm demonstrado sua capacidade de descolorir os corantes txteis, mediante a polimerizao ou degradao desses corantes (GBITZ, 2003). A enzima peroxidase conhecida por sua capacidade de remoo de grupamentos fenlicos e aminas aromticas de solues aquosas e tambm a descolorao de efluentes da indstria txtil. O tratamento com peroxidase resulta na remoo de grupamentos fenlicos txicos dos efluentes industriais, usando perxido de hidrognio no processo. A enzima Horseradish peroxidase (HRP) tem sido com sucesso empregada para a decomposio e precipitao de corantes azo. As enzimas peroxidases so encontradas nas plantas (por exemplo, rabanetes) e em animais (plasma sanguneo, leite, leveduras, etc). As massas molares esto na regio de 38-43 kDa, e apresentam-se geralmente na forma de 3 ou 15 isoenzimas. Uma das motivaes pela opo de trabalhar com enzimas para descolorao de corantes e efluentes txteis o fato do Estado de Santa Catarina possuir um grande plo txtil. A indstria txtil apresenta um especial destaque, pois requer uma grande quantidade de gua e dela resulta um grande volume de efluentes, com alto grau de contaminao e altamente coloridos. Esses corantes se no forem corretamente tratados, podem causar srios problemas de contaminao ambiental. Neste trabalho so apresentados os resultados obtidos, atravs do emprego da enzima Horseradish peroxidase (HRP), na descolorao de corantes e efluentes txteis. Foram determinadas primeiramente as condies timas da ao da enzima sobre o corante Turqueza Remazol G 133%, e posteriormente foi feito o emprego em outros
4 dois corantes e no efluente txtil. Foi tambm avaliada a toxicidade dos corantes e do efluente, antes e aps o tratamento enzimtico. Esta dissertao est estruturada em seis captulos. No captulo 2 apresentado os objetivos do presente trabalho, no captulo 3 apresentada uma reviso bibliogrfica sobre indstria txtil, tcnicas de tratamento de efluentes e enzimas. No captulo 4, apresentada a metodologia empregada para a obteno dos dados experimentais. No capitulo 5 so apresentados os resultados das anlises e as discusses dos resultados. No captulo 6 so apresentadas as principais concluses obtidas neste trabalho, bem como as sugestes para futuros trabalhos.
CAPTULO 2 OBJETIVOS
2 OBJETIVOS
2.1 Objetivo geral
O objetivo geral deste trabalho avaliar o potencial da enzima Horseradish peroxidase (HRP), para descolorao de corantes e efluentes txteis.
2.2 Objetivos especficos:
Determinar as melhores condies para uma melhor atuao da enzima
no corante e no efluente, variando fatores fundamentais, tais como, pH, temperatura, quantidade de H2O2, concentrao de corante e concentrao de enzima. Estudar as diferentes taxas de descolorao dos corantes individualmente,
e depois avaliar a descolorao no efluente txtil, atravs de espectros UV-Visvel. Avaliao da toxicidade aguda, dos corantes e do efluente remediado e
no remediado, utilizando a Daphnia magna e Artemia salina e testes de inibio do crescimento da raiz da cebola (Allium cepa).
CAPTULO 3 REVISO BIBLIOGRFICA
3. REVISO BIBLIOGRFICA
Para que se possa avaliar o potencial da aplicao de enzimas para descolorao de corantes e efluentes txteis, faz-se necessrio avaliar as fontes e caractersticas dos efluentes txteis. Um outro item que ser analisado neste captulo o emprego de enzimas provenientes de diversas origens, e sua potencial aplicao para o tratamento deste resduo.
3.1. Indstria Txtil A indstria txtil tem papel de grande importncia na maioria dos pases, sendo um dos segmentos industriais de maior tradio. Dentre todos os segmentos, ela responsvel por grande parte da economia dos pases desenvolvidos, sendo o carrochefe nos pases emergentes . O complexo txtil do Estado de Santa Catarina est localizado no Vale do Itaja, mais especificamente em Blumenau e Brusque, e no norte e noroeste do estado, nos municpios de Joinville e Jaragu do Sul. As indstrias txteis respondem hoje por aproximadamente 25% do valor da transformao industrial catarinense. Em virtude do grande volume de produo, tambm significativo o volume de resduos (slidos, lquidos e gasosos) que so gerados por essas empresas. As operaes de limpeza, tingimento e acabamento so responsveis pela gerao de uma grande quantidade de efluentes que contm uma enorme variedade de produtos qumicos, que podem causar uma srie de problemas quando estes so descartados sem que os cuidados necessrios sejam tomados. O reciclo, mesmo parcial, de insumos e matriasprimas uma forma bastante significativa de reduzir o problema da poluio ambiental. A indstria txtil, especialmente o setor de beneficiamento, responsvel pela poluio, principalmente dos corpos de gua, das regies em que atua. Maiores exigncias impostas pela legislao e cobranas sociais vm criando a necessidade premente de mudar este quadro. Atualmente, as indstrias utilizam sistemas de gesto
ambiental para aumentar a sua produtividade, seja na eficincia das mquinas, na reduo dos custos ou agregando alguma caracterstica ao produto final, que possa valoriz-lo no mercado, gerando a menor quantidade de resduos possveis .
3.1.1 O uso da gua na indstria txtil
Do total de gua disponvel para consumo mundial, cerca de 88% so utilizadas na agricultura. A indstria responsvel por apenas 7%, ficando os restantes 5% para uso domstico. Da parte da indstria, o setor txtil consome por volta de 15% da gua, devolvendo-a, depois dos processos, extremamente contaminada (PERES e ABRAHO,1998). A gua usada na indstria txtil, como meio de transporte para os produtos qumicos que entram no processo, bem como para remoo do excesso daqueles produtos considerados indesejveis para o fio ou tecido. Os problemas ambientais relacionados com a indstria txtil so numerosos e bem documentados. Alm dos problemas associados ao elevado volume de resduos e sua elevada carga orgnica, surgem os inconvenientes relacionados com a liberao de corantes no fixados e no-degradados nos processos convencionais de tratamento. A presena desses corantes representa um elevado potencial de impacto ambiental, no apenas em funo da toxicidade associada, mas tambm em relao interferncia em processos fotossintticos (PERALTA-ZAMORA et al., 2002). O consumo de gua nos processos da indstria txtil dependente do tipo de material ou produto final, medida que este dita a natureza do processo de transformao. Grandes volumes de gua so requeridos para o processamento mido, de modo que a indstria txtil gera grandes volumes de efluentes contendo quantidades variadas de contaminantes, dentre os quais se destacam os corantes (CAMMAROTA e COELHO, 2001). A maior parte da carga contaminante constituda por impurezas inerentes matria-prima, produtos adicionados para facilitar os processos de fiao e tecelagem, auxiliares e corantes eliminados durante as diferentes etapas de acabamento. A qualidade e a quantidade de carga contaminada se encontram intimamente relacionadas com as fibras utilizadas para elaborar os tecidos crus (PERES e ABRAHO, 1998).
CAPTULO 3 REVISO BIBLIOGRFICA 3.1.2 Processo Txtil
Segundo Arajo e Castro (1984), as fibras txteis so elementos filiformes caracterizados pela flexibilidade, finura e grande comprimento em relao dimenso transversal mxima, sendo aptas para aplicaes txteis. As fibras txteis podem ter vrias origens, sendo este o critrio usado para sua classificao. Assim as fibras podem ser: de origem natural se so produzidas pela natureza sob uma forma que as torna aptas para o processamento txtil, ou de origem no natural se so produzidas por processos industriais, a partir de polmeros naturais transformados por ao de reagentes qumicos, ou por polmeros obtidos por sntese qumica. O processo txtil de produo de tecidos dividido em fiao, tecelagem e acabamento. Na etapa de fiao a matria prima (algodo) processada nos abridores, batedores, cardas, passadores, penteadeiras, maaroqueiras, filatrios, retorcedeiras e conicaleiras. Nesta etapa no h gerao de efluentes lquidos, pois todas as etapas ocorrem a seco. Na etapa de tecelagem, os fios tingidos ou crus so transformados em tecidos nos teares. Essa etapa trata-se de um processo seco, portanto no ocorre a gerao de efluentes lquidos, muito embora a etapa posterior de desengomagem seja uma importante fonte geradora de efluentes lquidos poluidores (BRAILE e CAVALCANTI, 1993). Os estgios de formao do tecido pouco contribuem para a gerao de efluentes lquidos, quando comparados s operaes do estgio de processos molhados ou acabamento; essas operaes podem ser divididas em: - Tratamento prvio ou preparao: um conjunto de operaes necessrias para preparar o material txtil a ser tingido, estampado ou receber um dado acabamento, essas operaes so por vezes designadas apenas por alvejamento; - Tingimento: operao de colorao uniforme do material txtil; - Estamparia: Aplicao de um desenho colorido no material txtil; - Acabamento propriamente dito: efetuado sobre o tecido alvejado, tingido ou estampado, conforme o caso, de forma a torn-lo mais adequado para sua aplicao. Muitas dessas operaes podem ser efetuadas no s em fibras, em fios, mas tambm aps a confeco. Nas fases de acabamento txtil so utilizadas, alm do substrato txtil (fios, fibra, tecidos ou confeces), diversas substncias como a gua, resinas, corantes, tensoativos, etc (ABRAHO e SILVA, 2002).
3.1.3 Beneficiamento Txtil.
O beneficiamento txtil consiste em um conjunto de processos aplicados aos materiais txteis objetivando transform-los, a partir dos estados crus, em artigos brancos, tingidos, estampados e acabados. A Figura 1 apresenta um fluxograma simplificado das etapas do processo a mido para os tecidos de algodo e mesclas de algodo de uma indstria txtil.
3.1.3.1 Matria prima txtil
Segundo Guaratini e Zanoni (2000), as fibras txteis podem ser divididas em dois grandes grupos denominados fibras naturais e sintticas. As fibras naturais mais utilizadas so baseadas em celulose (cadeias polimricas lineares de glicose) e protena (polmero complexo composto de diferentes aminocidos), presentes na l, seda, algodo e linho. As fibras sintticas mais utilizadas comercialmente so a viscose, acetato de celulose, poliamida, polister e acrlico. No beneficiamento txtil, vrias etapas produzem efluentes lquidos como a desengomagem, o alvejamento, a lavagem de tecidos, a mercerizao, o tingimento, a estamparia e o acabamento de tecidos. Na Figura 1, esto apresentados as principais etapas que consome gua na etapa do beneficiamento txtil. As composies dos efluentes lquidos em cada processo variam muito em funo da diversidade de tcnicas, mquinas, matrias-primas, tecidos, etc, empregados nos diferentes processos do beneficiamento txtil.
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Figura 1 Etapas caractersticas do processamento a mido de tecidos de algodo e mesclas de algodo (Fonte: EPA, 1997). 3.1.3.2 Engomagem
um processo que tem como objetivo aumentar a resistncia mecnica dos fios crus, que chegam s unidades de engomagem em rolos de urdumes, passando por uma soluo de goma a quente e vo formar os urdumes engomados para a tecelagem. Os fios a serem aplicados no urdume podem ser engomados com amido, alfarroba, goma de carboximetilcelulose, lcool polivinlico, etc. Os fios so engomados
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a uma temperatura de aproximadamente 100C, atravs de processos contnuos ou por imerso.
3.1.3.3 Desengomagem
A desengomagem usada para remover a goma aplicada anteriormente para tecelagem. As fibras sintticas so geralmente engomadas com gomas solveis em gua, que so facilmente removidas por lavao com gua quente, ou no processo de cozimento. As fibras naturais, tais como algodo, so muitas vezes engomadas com gomas ou mistura de gomas e outros materiais. A remoo das gomas antes do cozimento necessria porque elas podem reagir e causar a mudana de cor quando exposto ao hidrxido de sdio no cozimento (EPA,1997). Os mtodos de desengomagem variam conforme a goma utilizada. Pode ser simplesmente uma lavagem com gua quente e detergente, para gomas sintticas, como pode ser mais complicada, como, por exemplo, uma degradao enzimtica para amidos (PERES e ABRAHO, 1998). A carga poluidora do efluente da desengomagem resulta de aditivos usados na receita da goma, surfactantes, enzimas, cidos, lcalis e a prpria goma.
3.1.3.4 Cozimento (Pr-alvejamento)
um processo de branqueamento que remove as impurezas das fibras, fios ou tecido atravs da lavagem. Normalmente so utilizadas solues alcalinas para o cozimento, porm em alguns casos solues solventes tambm podem ser usadas. O procedimento de cozimento especfico, adio de produtos qumicos, temperatura e tempo de processo variam com o tipo de fibra, fio e estrutura do tecido. As impurezas podem incluir lubrificantes, sujeira e outros materiais naturais, gomas solveis em gua, agentes antiestticos e tintas residuais usadas para identificao do fio (EPA,1997).
CAPTULO 3 REVISO BIBLIOGRFICA 3.1.3.5 Alvejamento
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O alvejamento remove a colorao amarelada natural das fibras do algodo aumentando a sua brancura. Essa operao necessria se o tecido acabado for branco ou tinto em cores claras. um processo de oxidao geralmente utilizado com perxido de hidrognio, hipoclorito de sdio ou clorito de sdio. Substncias auxiliares, tais como cido sulfrico, cido clordrico, soda caustica, bissulfito de sdio e surfactantes, so usados durante o processo e no enxge final, contribuindo com a carga poluidora. Os efluentes do alvejamento normalmente possuem um alto contedo de slidos com baixo ou moderado nvel de DBO (PERES e ABRAHO, 1998).
3.1.3.6 Mercerizao
A mercerizao um processo qumico que tem como objetivo conferir brilho e aumentar a absoro de corantes e a resistncia. A mercerizao realizada exclusivamente em tecidos de algodo, que so tratados por um banho de soda custica concentrado sob estiramento, seguido por uma lavagem cida para neutralizar o pH (CORREIA et al., 1994).
3.1.3.7 Tingimento
A etapa de tingimento executada para conferir cor aos fios ou tecidos e para aumentar o valor do produto. Os materiais txteis so tingidos usando uma ampla gama de corantes, tcnicas e equipamentos. Os corantes usados pela indstria txtil so em grande parte sintticos, tipicamente derivados do alcatro e derivados do petrleo (EPA, 1997). O tingimento pode ocorrer em processos contnuos ou em batelada. No tingimento em batelada, uma certa quantidade de substrato txtil, geralmente de 100 a 1000 Kg, carregado em uma mquina de tingimento e o substrato levado a atingir
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um equilbrio, ou prximo dele com a soluo do banho que contm o corante. Os auxiliares qumicos e as condies do banho so controladas (principalmente temperatura) para se obter as condies timas de tingimento. O corante fixado na fibra usando calor e produtos qumicos. O substrato tingido lavado para remover os corantes no fixados e os produtos qumicos. No processo contnuo, o material txtil alimentado continuamente em soluo de corante com velocidade geralmente entre 50 e 250 metros por minuto. O processo de tingimento contnuo consiste tipicamente na aplicao do corante, fixao do corante com produtos qumicos ou calor, e lavagem. A fixao do corante nas fibras ocorre mais rapidamente em tingimento contnuo que em batelada (EPA, 1997). A adsoro e reteno do corante na fibra pode ser qumica, fsica ou ambas, dependendo da fibra e do corante. O grau de adsoro funo de vrios fatores, tais como temperatura, pH, auxiliares qumicos e tempo (PERES e ABRAHO, 1998).
3.1.3.8 Estamparia
Os tecidos so muitas vezes estampados com cores e estampas usando uma variedade de tcnicas e tipos de equipamentos. O processo de estamparia pode ser o toque final para os produtos j confeccionados, que recebero estampas por quadros, ou seja, a estampagem feita em algum ponto de sua extenso fsica. E para os tecidos, que recebero estampas em toda sua extenso, so usados rolos gravados que alcanam toda a pea. Das numerosas tcnicas de estampar, a mais comum a tela rotativa (rolos). So usados pigmentos em cerca de 75 a 85% do total das operaes de estampagem e no so necessrias etapas de lavagem. Comparados com os corantes, os pigmentos so tipicamente insolveis e no tem afinidade pelas fibras. Resinas ligantes so usadas para aderir os pigmentos aos substratos. Solventes so usados como veculos para transportar a mistura pigmento e resina para o material txtil. Aps a evaporao dos solventes permanece a camada de resina e pigmento fixa (EPA,1997).
CAPTULO 3 REVISO BIBLIOGRFICA 3.1.3.9 Acabamento
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O acabamento realizado por tratamento mecnico ou qumico para melhorar no tecido algumas propriedades como aparncia, brilho, toque, caimento, resistncia, estabilidade, repelncia sujeira, gua e ao fogo. O acabamento mecnico pode envolver cardao, calandragem ou outros tratamentos fsicos usados para aumentar o brilho e toque aos txteis. O acabamento qumico pode conferir aos txteis uma variedade de propriedades, desde diminuio da eletricidade esttica ao aumento de resistncia chama (ARAJO e CASTRO, 1984).
3.1.4 Produtos Qumicos Auxiliares Utilizados na Indstria Txtil.
Os produtos qumicos auxiliares utilizados na indstria txtil so substncias constitudas por uma parte hidroflica (polar) e uma parte hidrofbica (apolar) que tem a propriedade de reduzir a tenso superficial dos lquidos. Conforme so combinados os diferentes tensoativos obtm-se uma determinada ao e, conseqentemente, uma diferente aplicao. A formulao normalmente se baseia em uma base (tensoativa ou no) e demais tensoativos auxiliares. Steinhart (2000), define a ao dos tensoativos nas diferentes aplicaes txteis, tais como: - Carriers: Possuem, como base de formulao, substncias no tensoativas, porm contm tensoativos em sua formulao. A substncia ativa tem afinidade pela fibra, mas no solvel em gua. Por isso so necessrios tensoativos a fim de se emulsionar o princpio ativo em ao. - Igualizantes: So produtos especficos para determinadas fibras ou corantes. Na escolha do igualizante, relevante determinar o tipo de fibra a ser tingida e o tipo de corante escolhido. Existem trs tipos de ao dos igualizantes: ter afinidade com a fibra, ter afinidade com o corante e, no ter afinidade com o corante ou fibra, tendo sua ao exclusivamente na alterao da tenso superficial. - Retardantes: So igualizantes constitudos por tensoativos catinicos.
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- Dispersantes: Ou colide protetor, tem como funo principal impedir reaglomerao dos slidos, ou seja, manter a melhor disperso. - Umectantes: Esses tensoativos tm como funo principal emulgar o ar presente no tecido em gua, mais especificamente substituir as superfcies de contato ar/tecido por uma superfcie de contato gua/tecido. - Detergentes: So tensoativos que possuem a propriedade de umectar os substratos txteis, permitindo que, pela quebra da tenso superficial da gua, a sujeira seja facilmente removida do material para a fase liquida. Mantm em suspenso as partculas removidas, no permitindo que se reaglomerem e se depositem na superfcie do substrato. Tm a propriedade de emulsionar as gorduras ou leos presentes nos substratos txteis. - Antiespumantes: Agem na estrutura da espuma fazendo com que a mesma perca elasticidade e se rompa. - Amaciantes: conferem a sensao de maciez e volume, que dada pela parte hidrfoba da base amaciante. Por esse motivo, a absoro de gua dos materiais txteis fica prejudicada quando da aplicao de um amaciante. Na Tabela1 so apresentados os produtos qumicos auxiliares mais utilizados no processo de tingimento.
CAPTULO 3 REVISO BIBLIOGRFICA Tabela 1: Auxiliares qumicos utilizados em tingimento. Descrio Sais cidos Bases Seqestrantes Dispersantes e Surfactantes Agentes Oxidantes Agentes Redutores Composio Cloreto de sdio Sulfato de sdio Actico e sulfrico Hidrxido de sdio Carbonato de sdio EDTA Aninicos, catinicos e no inicos Perxido de hidrognio Nitrito de sdio Hidrossulfito de sdio Sulfeto de sdio Carriers Fonte: PERES e ABRAHO, 1998. Organoclorados Seqestrante Controle de pH Controle de pH Funo Retardante
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Amaciante, dispersante de corantes Insolubilizante de corante Remoo de Corantes no reagidos Solubilizante Aumenta a Adsoro
Segundo Steinhart (2000), os tensoativos ainda podem ser considerados como auxiliares no sistema de tratamento biolgico de efluentes pois, quando em baixas concentraes, como o caso da indstria txtil, auxiliam na decomposio de substncias insolveis em gua. Isso se deve ao fato de solubilizarem o material (solubilizam as substncias de baixa solubilidade em gua) facilitando o acesso das bactrias s substncias a serem degradadas.
3.1.5 Corantes Txteis
Os corantes so substncias intensamente empregadas para a colorao de vrios substratos, tais como: alimentos, cosmticos, plsticos, substratos txteis, etc. So retidos por adsoro fsica, formao de solues, sais ou complexos com metais, reteno mecnica ou por constituio de pontes qumicas covalentes (ROSALEN, 2004). A importncia dos corantes para a civilizao humana evidente e bem documentada. Aproximadamente 10.000 diferentes corantes e pigmentos so usados
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industrialmente, representando um consumo anual de cerca de 7x105 tons no mundo, sendo 26.500 tons somente no Brasil (SPADARO et al. 1992; NIGAM et al. 1996; KUNZ et al. 2002). O tingimento de tecidos uma arte que comeou h milhares de anos e a disponibilidade comercial de corantes enorme. A tecnologia moderna utilizada no tingimento consiste de dzias de etapas que so escolhidas de acordo com a natureza da fibra txtil, caractersticas estruturais, classificao e disponibilidade do corante para aplicao, propriedades de fixao compatveis com o destino do material a ser tingido, consideraes econmicas , etc (GUARATINI e ZANONI, 2000). O processo de tingimento um dos fatores fundamentais no sucesso comercial dos produtos txteis. Alm da padronagem e beleza da cor, o consumidor normalmente exige algumas caractersticas bsicas do produto, tais como elevado grau de fixao em relao luz, lavagem e transpirao, tanto inicialmente quanto aps o uso prolongado. Para garantir essas propriedades, as substncias que conferem colorao fibra devem apresentar alta afinidade, uniformidade na colorao, resistncia a agentes desencadeadores do desbotamento e ainda apresentar-se vivel economicamente. Corantes compreendem dois componentes principais: o grupo cromforo, responsvel pela cor que absorve a luz solar, e o grupo funcional que permite a fixao nas fibras do tecido (DURN et al., 2000b). Existem vrios grupos cromforos utilizados atualmente nos corantes mais, sem dvida, os mais representativos e largamente utilizados so os da famlia dos azo corantes. Os azo corantes (Figura 2) representa atualmente cerca de 60% do mercado mundial de corantes, sendo amplamente utilizados no tingimento da fibra txtil (VANDEVIVERE et al., 1998).
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N N HO H 2N
N N
Figura 2 : Estrutura qumica de um azo corante. Fonte: KUNZ et al., 2002. Os corantes txteis, principalmente os azo corantes, representam um problema ambiental emergente. Uma grande quantidade de resduos de corantes descartada nos efluentes durante o processo de tingimento na indstria txtil. O problema surge no s devido cor no efluente, como tambm devido aos resduos dos azo corantes que podem passar a prejudicar potencialmente a jusante de um rio ou manancial. Segundo Guaratini e Zanoni (2000), no processo de tingimento txtil, utilizamse vrios corantes que so classificados de acordo com sua estrutura qumica (antraquinona, azo e etc) ou de acordo com o mtodo pelo qual ele fixado na fibra txtil. Os corantes so classificados como corantes: reativos, diretos ou substantivos, azicos, cidos, a cuba, de enxofre, dispersos, pr-metalizados ou branqueadores.
3.1.5.1 Corantes Reativos: Os corantes deste grupo possuem como caracterstica a alta solubilidade em gua e o estabelecimento de uma ligao covalente entre o corante e a fibra, cuja ligao confere maior estabilidade na cor do tecido tingido quando comparada a outros tipos de corantes em que o processo de colorao se opera atravs de ligaes de menor intensidade. A montagem se efetua pela adio de um eletrlito. A interao do corante com a fibra ilustrada na Figura 3.
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Figura 3: Interao de corantes reativos do tipo vinil sulfonato com a fibra txtil . Fonte: KUNZ, 2002.
3.1.5.2 Corantes diretos ou substantivos: So corantes solveis em gua. Tingem diretamente as fibras de celulose (algodo, viscose, etc), atravs das interaes de van der Waals. O banho aquoso deve ser acrescido de um eletrlito para aumentar a afinidade pela fibra. A grande vantagem desta classe de corantes o alto grau de exausto durante a aplicao e conseqente diminuio do contedo de corante nas guas de rejeito.
3.1.5.3 Corantes Azicos: So compostos coloridos insolveis em gua, que so realmente sintetizados sobre a fibra durante o processo de tingimento. Nesse processo a fibra impregnada com um composto solvel em gua, conhecido como agente de acoplamento, que apresenta alta afinidade por celulose. A adio de um sal de diaznio provoca uma reao com o agente de acoplamento j fixado na fibra e produz um corante insolvel em gua. O fato de usar um sistema de produo do corante diretamente sobre a fibra, atravs da combinao de um corante precursor sem grupos sulfnicos e a formao de um composto solvel, permite um mtodo de tingimento de fibras celulsicas com alto padro de fixao e alta resistncia contra luz e umidade.
3.1.5.4 Corantes cidos: O termo cido corresponde a um grupo de corantes aninicos, portadores de um a trs grupos sulfnicos. So solveis em gua, tm aplicao em
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fibras proticas e em fibras de poliamida sinttica. Esses corantes caracterizam-se por substncias com estrutura qumica baseada em composto azo, antraquinona, triarilmetano, azina, xanteno, ketonimina, nitro e nitroso, que fornecem uma ampla faixa de colorao e grau de fixao.
3.1.5.5 Corantes a cuba: So tambm chamados de corantes tina e de reduo e so insolveis em gua. Atravs de reduo com hidrossulfito de sdio em meio alcalino, transformam-se em leuco derivados solveis e tingem as matrias txteis celulsicas. A maior aplicao deste tipo de corante tem sido o tingimento de algodo embora, devido s excelentes propriedades de fixao, para que outros materiais tambm sejam utilizados. Como a produo qumica de hidrossulfito de sdio pode causar problemas ecolgicos, o custo operacional dessa classe de corante tem sido bastante alto.
3.1.5.6 Corantes de Enxofre: uma classe de corantes que aps aplicao se caracteriza por compostos macromoleculares com pontes de polissulfetos, os quais so altamente insolveis em gua. Em princpio so aplicados aps pr-reduo em banho de ditionito de sdio, que lhes confere a forma solvel; so reoxidados subseqentemente sobre a fibra pelo contato com ar. Este composto tem sido utilizado principalmente no tingimento de fibras celulsicas, conferindo cores pretas, verde oliva, azul marinho, marrom, apresentando boa fixao. Entretanto, estes corantes usualmente apresentam resduos txicos.
3.1.5.7 Corantes Dispersos: Constituem uma classe de corantes insolveis em gua aplicados em fibras de celulose e em outras fibras hidrofbicas atravs de suspenso. Durante o processo de tingimento, o corante sofre hidrlise e a forma originalmente insolvel lentamente precipitada na forma dispersa sobre o substrato txtil. Para sua aplicao so necessrios agentes dispersantes. Esta classe de corantes tem sido utilizada principalmente para o tingimento de fibras sintticas, tais como: acetato de celulose, nylon, polister, poliacrilonitrila.
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3.1.5.8 Corantes Pr-Metalizados: So teis principalmente para o tingimento de fibras proticas e poliamida. So caracterizados pela presena de um grupo hidroxila na posio orto em relao ao cromforo azo, permitindo a formao de complexos com ons metlicos. Nesse tipo de tingimento explora-se a capacidade de interao entre o metal e os grupamentos funcionais portadores de pares de eltrons livres, como aqueles presentes nas fibras proticas. A desvantagem ecolgica deste tipo de corante est associada ao alto contedo de metal presente nas guas de rejeito.
3.1.5.9 Corantes Branqueadores: As fibras txteis no estado bruto, por serem compostas primariamente de materiais orgnicos, apresentam como caracterstica uma aparncia amarelada por absorver a luz principalmente na faixa de baixo comprimento de onda. A diminuio dessa tonalidade tem sido efetuada na indstria ou lavanderia pela oxidao da fibra com alvejantes qumicos ou utilizando-se os corantes brancos tambm chamados branqueadores pticos ou mesmo branqueadores fluorescentes.
3.2 Gerao e Tratamento de Efluentes Txteis
Nas ultimas dcadas, os problemas ambientais tm se tornado cada vez mais crticos e freqentes, principalmente devido ao desmedido crescimento populacional e ao aumento da atividade industrial. Os problemas devido ao antrpica tm atingido dimenses catastrficas, podendo ser observados atravs de alteraes na qualidade do solo, ar e gua. A contaminao de guas naturais tem sido um dos grandes problemas da sociedade moderna (KUNZ et al., 2002). Um problema crescente para a indstria txtil a exigncia da legislao governamental com relao remoo da cor nos efluentes industriais. As exigncias de proteo ambiental de todo o mundo vem promovendo a preveno da transferncia de problemas de poluio de um ambiente para outro. Isso implica que a indstria deve desenvolver tratamento de seus efluentes in loco antes de despej-los. Para o atendimento de tais exigncias, tanto as indstrias como os cientistas tm direcionado suas pesquisas na busca de tratamentos e tecnologias visando descolorao de corantes nos efluentes (BANAT et al.1996).
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As indstrias txteis causam um considervel impacto na qualidade da gua, dado o grande volume de efluentes gerados e suas propriedades fsico-qumicas. Esse impacto devido a uma ao combinada de uma alta demanda qumica de oxignio (DQO), slidos em suspenso, substncias dissolvidas, pH, cor e toxicidade (ABRAHO e SILVA, 2002). As composies dos efluentes lquidos em cada processo variam muito em funo da diversidade de tcnicas, mquinas, matrias primas, tecidos, etc. Na Tabela 2 so mostrados os valores mais provveis de alguns efluentes lquidos txteis, dados esses que dependem tambm do corante utilizado, da fibra e do mtodo de tingimento (ABRAHO e SILVA, 2002). Segundo Guaratini e Zanoni (2000), devido a sua prpria natureza, os corantes so facilmente detectveis a olho nu, sendo visveis em alguns casos mesmo em concentraes to baixas quanto 1ppm (1mg/L). Este comportamento apresenta vantagens e desvantagens, pois uma pequena quantidade lanada de efluentes no ambiente aqutico pode causar acentuada mudana de colorao dos rios, mas pode tambm ser detectada pelo pblico e autoridades que controlam os assuntos ambientais.
CAPTULO 3 REVISO BIBLIOGRFICA Tabela 2: Valores mais provveis de alguns efluentes lquidos txteis. Fibra Processo pH DBO(mg/ L)
1700-5200 50-2900 90-1700 45-65 11-1800 1000-1500 300-400 500-800 500-27000 600-750 2500-3500 2500-3500
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ST(mg/L)
gua (L/K g)
3-9 26-43 3-124 232308 8-300 50-70 15-30 25-40 15-30 15-30 15-30 15-30
Desengomagem Algodo Purga Alvejamento Mercerizao Tingimento Poliamida Purga Tingimento Purga Tingimento Purga Final Purga Tingimento
6-8 10-13 8-10 5-9 5-10 9-11 6-9 6-9 6-9
16000-32000 7600-17400 2300-14400 600-1900 500-14000 1500-2000 500-700 3000-3500 3000-3500
Polister
Viscose
Fonte: ABRAHO e SILVA (2002) O desenvolvimento de tecnologia adequada para tratamento de efluentes tem sido objeto de grande interesse nos ltimos tempos devido ao aumento da rigidez da Legislao ambiental. As principais tcnicas disponveis na literatura para descolorao das guas de rejeito envolvem principalmente processos de adsoro, precipitao, degradao qumica, eletroqumica e fotoqumica, biodegradao, entre outros. O tratamento de efluentes txteis tem sido considerado uma das mais importantes categorias de controle da poluio da gua, devido alta intensidade de cor e grandes concentraes de contaminantes orgnicos (LEE et al., 1999). So caracterizados pelo grande volume e extrema variao na composio, podendo incluir corantes no biodegradveis e substncias txicas. O tratamento dos despejos industriais das fbricas de tecido pode ser auxiliado por prticas como: a) A reduo de despejos no processamento (reduzindo volume de gua e produtos); b) A realizao de modificaes no processo e boa manuteno;
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c) O lanamento de despejos na rede pblica de esgotos, para serem tratados nas estaes municipais; d) O tratamento dos despejos na prpria rea industrial, que dever ser cuidadosamente planejado, devido s variaes sbitas de vazo e de produtos qumicos empregados no processo. As solues pouco concentradas podero ser reutilizadas nas unidades de lavagem de tecidos com grande quantidade de sujeira, ou recirculadas antes do descarte (BALAN, 1999). Embora a maioria dos efluentes txteis seja tratada em sistemas de lodos ativados, grande parte dos corantes sintticos recalcitrante biodegradao, criando um problema antiesttico nas guas que o recebem devido colorao remanescente. Os efluentes txteis so considerados de alto poder txico para a biota aqutica, alm de causarem eutrofizao das guas, alteraes na DBO e no oxignio dissolvido, reduo da fotossntese, devido diminuio de entrada de luz na gua, diferentes graus de toxicidade, mutagnese e carcinognese. Quando esses efluentes sofrem reaes qumicas com outros compostos no meio, seja por carvo ativado, ou por tratamentos qumicos, ocorre a formao de aminas aromticas, as quais podem ser mais txicas do que o prprio corante inicial, contido no efluente (RODRIGUES, 2003). Os mtodos para remoo de DQO (Demanda Qumica de Oxignio), da maioria dos efluentes, esto bem estabelecidos. J os corantes so mais difceis de tratar devido a sua origem sinttica e principalmente pela estrutura aromtica complexa. Os corantes so to variados em suas estruturas que nenhum esquema simples pode ser desenvolvido para sua remoo de guas residurias. Alguns podero sofrer biodegradao e os metablitos formados podero ser ainda mais txicos do que aqueles que lhe deram origem. Se um tratamento tem que ser considerado, ento este tratamento pode incluir processos fsicos, qumicos, fsico-qumicos ou biolgicos (RODRIGUES, 2003). Um dos maiores problemas em guas residurias a recalcitrncia de certas substncias. O processo de tratamento pode ser dividido em quatro grupos: processos de separao (concentrao de orgnicos sem alterao qumica), processos de degradao (processos oxidativos que tem a inteno de mineralizar os orgnicos para a forma de CO2 e gua), processos que modificam quimicamente os constituintes do efluente, mas no levam a mineralizao (processos de reduo, como por exemplo, a desalogenao), e a preparao do efluente pela adio de certos compostos qumicos para tratamento
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subseqente por degradao ou separao, quebra de emulses, floculao, precipitao ou ajuste de pH (RODRIGUES, 2003). Em recentes revises sobre tecnologias emergentes para o tratamento de resduos industriais, encontra-se descrita a grande parte das tecnologias avanadas para tratamento de efluentes txteis (VANDEVIVERE et al, 1998). Alguns processos, como o de ozonizao, apresentam custo muito elevado. Outros processos, como a eletrlise, permitem uma eficincia maior que os sistemas convencionais, com um baixo custo operacional. A fotocatlise com TiO2 mostrou-se promissora, mas devido limitada penetrao da luz UV na soluo de corante, os autores sugerem utilizar um prtratamento com oznio. Neste caso, a cor foi completamente removida e o carbono orgnico total (COT) foi reduzido em 90%. A Figura 4 apresenta um organograma das classes de tratamento de efluentes industriais.
Figura 4: Organograma das classes de tratamento de efluentes (POA=Processos Oxidativos Avanados). As tcnicas de tratamento fundamentadas em processos de coagulao, seguidos de separao por flotao ou sedimentao, apresentam uma elevada eficincia na remoo de material particulado. No entanto, a remoo de cor e compostos orgnicos dissolvidos mostrase deficientes. Os processos de adsoro em carvo ativado apresentam uma eficincia significativamente maior, contudo em funo da superfcie qumica do carvo ser positiva, a adsoro de corantes de carter catinico uma limitao bastante importante (KUNZ et al., 2002). Banat et al. (1996) citam numerosas tcnicas fsicas e qumicas que incluem floculao fsico-qumica combinada com flotao, eletroflotao, floculao com
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Fe(II)Ca(OH)2, filtrao por membrana, coagulao eletrocintica, destruio qumica, troca inica, irradiao, precipitao, ozonizao, adsoro e o mtodo de tratamento Katox (comercial), envolvendo o uso de carbono ativado e misturas de ar. O tratamento de guas residurias coloridas e sua descolorao parece ainda ser uma tarefa difcil. Outras reaes como hidrlise, fotlise, ionizao, vaporizao e adsoro fsico-qumica, podem ocorrer no meio ambiente, levando degradao de compostos. Por exemplo, o uso de mtodos de degradao baseados em reaes fotoqumicas tem se mostrado importante como etapa primria na degradao de alguns corantes, segundo Guaratini e Zanoni (2000), uma vez que os corantes sintticos apresentam a princpio alta estabilidade quando submetidos luz visvel ou ultravioleta. Segundo Banat et al. (1996), nenhum processo aplicado de forma individual parece ser capaz de efetivamente descolorir os resduos aquosos das indstrias txteis e geralmente preconiza-se a aplicao de mtodos combinados. Para o tratamento de efluentes txteis, a combinao de mtodos mostra-se mais adequada, devido presena de corantes que normalmente so resistentes degradao nos sistemas convencionais de tratamento. Em geral tem sido dado uma maior nfase aos mtodos que combinam os processos biolgicos com alternativas fsicas ou fsico-qumicas, tais como floculao, adsoro ou oxidao qumica (KUNZ et al., 2002). Dentre os processos fsicos mais utilizados no tratamento de efluentes e corantes txteis, a adsoro com carvo ativado vem sendo intensamente estudada. O estudo de alguns agentes alternativos utilizando-se de biomassa como adsorvente tambm tem despertado ateno. Alguns trabalhos foram publicados nos ltimos anos utilizando carvo ativado de coco, casca de eucalipto e quitosana como materiais adsorventes (KUNZ et al., 2002). A principal desvantagem da adsoro com carvo ativado granular sua forma lenta de adsoro. Algumas vezes necessrio pr-tratar antes da adsoro j que concentraes de slidos suspensos maiores que 50 mg/L podem se acumular nos leitos de carvo e reduzir a eficincia da descolorao. A adsoro sobre o carvo ativado granular aplicvel em processos descontnuos e com baixas concentraes de cor (BRAILE e CAVALCANTI, 1993).
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Richardson (1983), citado por Rodrigues (2003), destaca a ozonizao como um mtodo de transformao qumica. De qualquer forma, grandes quantidades de oznio so necessrias para uma degradao extensiva dos corantes. Os produtos da oxidao so ento removidos por floculao, ou sujeitos a processos de tratamento microbiano. A oxidao por oznio capaz de degradar hidrocarbonetos clorados, fenis, pesticidas e hidrocarbonetos aromticos. Este mtodo mostra melhores resultados na oxidao de molculas menores, resultando na reduo da colorao. Essas pequenas molculas podem ter propriedades txicas, e assim a ozonizao usada em conjunto com um processo fsico pode resolver o problema. Nos tratamentos com cloro, dixido de cloro ou cloramina, os quais embora mesmo sendo de menor custo, no so satisfatrios devido formao de resduos, a descolorao de corantes azicos com reduo pode ser reversvel e geralmente no envolve a degradao real da molcula de corante. Dentre os processos que so eficientes para descolorao de guas da indstria txtil incluem ultrafiltrao, adsoro em carvo ativado, ou precipitao com cal. Os processos de lodo ativado ou lagoas aeradas so ineficientes para a descolorao, embora eles consigam a reduo da demanda qumica de oxignio. Essa ineficincia para descolorao provavelmente devido ao baixo contedo de nutrientes (nitrognio e fsforo) nestas guas, e toxicidade causada pela presena de compostos fenlicos (RICHARDSON, 1983, citado por RODRIGUES, 2003). Os processos com membranas incluem vrias tcnicas, nas quais a presso utilizada para passar o efluente sobre uma membrana semipermevel. Essa membrana permite que a gua atravesse, mas impede a passagem das substncias solveis que esto contidas no efluente. Variando as membranas, pode-se eliminar da gua substncias de distintos pesos moleculares (SANIN, 1997). Atualmente muitos trabalhos esto sendo desenvolvidos utilizando as tcnicas com membranas para o tratamento dos efluentes gerados pela indstria txtil, que tem por objetivo clarificar, concentrar e o mais importante separar o corante do efluente. Este mtodo de filtrao adequado para a recirculao da gua dentro de uma planta industrial se o efluente contm baixas concentraes de corantes, mas incapaz de reduzir a quantidade de slido dissolvido, o que faz a reutilizao da gua uma tarefa difcil (NIGAM et al., 2001).
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Uma das direes ainda a ser exploradas o uso de microorganismos termotolerantes ou termoflicos nos sistemas de descolorao, devido s altas temperaturas dos processos txteis (BANAT et al., 1996).
3.3 Tratamento de Corantes e Efluentes Txteis por Processos Biolgicos
Tratamentos de efluentes utilizando processos biolgicos so freqentemente utilizados. Nesses processos ocorre a transformao de compostos orgnicos txicos em compostos mais simples como CO2, H2O e/ ou CH4, com custos relativamente baixos. Este tipo de tratamento fundamenta-se na utilizao dos compostos presentes no efluente, como substrato para crescimento e manuteno do microrganismo. Os processos biolgicos podem ser divididos em aerbios e anaerbios. Nos processos aerbios, o receptor de eltrons o oxignio molecular e os principais produtos finais so CO2 e H2O. Nos processos anaerbios, que degradam os compostos orgnicos txicos principalmente a CO2 e CH4, o oxignio est ausente, sendo que algumas formas de carbono, enxofre e nitrognio participam como receptores de eltrons. A aplicao deste processo est na remoo da matria orgnica presente nos efluentes industriais, usualmente medida pela demanda bioqumica de oxignio (DBO), demanda qumica de oxignio (DQO) e carbono orgnico total (COT). O acentuado desenvolvimento da biotecnologia tem propiciado muitas alternativas que viabilizam o tratamento biolgico de efluentes industriais. Trabalhos recentes destacam que diferentes efluentes so tratados por esses processos. Vrios so os processos biolgicos que vem sendo estudados para o tratamento dos resduos da indstria txtil visando descolorao destes. Ao longo dos anos inmeras culturas microbianas tm sido testadas e muitas vm sendo aplicadas na descolorao de corantes txteis (BANAT et al.,1996). A grande motivao dos pesquisadores envolvidos em estudos de biodegradao pode ser expressa pela busca contnua de microrganismos versteis, capazes de degradar de maneira eficiente um grande nmero de poluentes a um baixo custo operacional. Na prtica, sabe-se que isto muito difcil principalmente em funo
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da diversidade, concentrao e composio de espcies qumicas presentes em cada efluente (KUNZ et al., 2002). A aplicao de microrganismos, para a biodegradao de corantes sintticos, um atraente mtodo de simples operao. Porm os mecanismos biolgicos podem ser complexos. Um grande nmero de espcies foi testado por Forgacs et al. (2004), para descolorao e mineralizao de vrios corantes. Infelizmente a maioria destes compostos so quimicamente estveis e resistentes ao ataque microbiolgico. O isolamento de novas culturas, e a adaptao das existentes para a decomposio de corantes, provavelmente aumentar a eficcia de biorremediao de corantes em um futuro prximo. Chen et al. (2003) estudaram a descolorao de corantes txteis por bactrias isoladas. A eficincia do processo, depende da adaptao do microrganismo selecionado. Com o passar do tempo, surgiram muitos estudos com microrganismos capazes de degradar azo corantes, incluindo bactrias, fungos, actinomicetos e algas. Segundo Banat et al. (1996), dentre os microrganismos relacionados com a descolorao dos corantes txteis esto as bactrias, fungos, algas e mais recentemente os consrcios de bactrias. Muitas bactrias foram capazes de descolorir os corantes txteis. Os problemas encontrados relacionam-se ao isolamento desses microrganismos, ao perodo de adaptao desses ao meio contendo o poluente e a capacidade de descolorir vrios corantes. Atravs de processos microbiolgicos combinados, anaerbio e aerbio usando populaes de microrganismos adaptadas e misturadas, acredita-se aumentar ainda mais a degradao de corantes txteis (ABADULLA et al., 2000a). Diversas tecnologias foram sucessivamente desenvolvidas, para o tratamento anaerbio/aerbio de corantes de guas residurias. Foi observado que a remoo de corantes de gua residuria, em um sistema anaerbio/aerbio, ambos os processos envolveram a decomposio por bactria e adsoro no lodo (FORGACS et al., 2004). A eficcia de vrias aplicaes do tratamento anaerbio para a degradao de uma ampla variedade de corantes sintticos tem sido muitas vezes demonstrada (DELEE et al., 1998, citado por FORGACS et al., 2004). A descolorao de corantes reativos solveis em gua realizada sob condies anaerbias quando se usa glicose como fonte de carbono. Suplemento, como amido de mandioca, tambm melhorou a eficcia de
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remoo da cor de gua residuria sinttica azul (CHINKEWITVANICH et al., 2000, citado por FORGACS et al., 2004). Walker e Wetherley (2000), analisando o emprego de bactrias aerbias, tais como Bacillus gordonae, Bacillus benzeovorans e Pseudomonas putida, obtiveram bons resultados na descolorao do corante cido antraquinona Tectilon Blue, utilizado no tingimento de carpetes. A descolorao foi de 19% causada por biosoro. Porm os clculos mostraram que os Bacillus, alm de promoverem a biosoro, tambm degradam o corante mais rpido do que a bactria Pseudomonas. Conforme estudado por Banat et al. (1996) o emprego de conscios de bactrias para descolorir corantes txteis, essa condio pode ser melhorada uma vez que os resduos contm mais de um corante, alm de outros produtos qumicos, no entanto, nessa situao as condies do meio devem, frequentemente, ser alternadas por condies de anaerobiose e/ou aerobiose para alcanar-se completa degradao. Recentemente, uma mistura de bactrias, chamadas de PDW e PDC mostraram-se capazes alguns dos vrios corantes txteis testados (BANAT et al. 1996). Nigam et al. (1996) fizeram experimentos de descolorao de compostos azo com processos microbianos e verificaram crescimento rpido da cultura PDW de bactrias e descolorao eficiente sob condies anaerbias (100% da descolorao de 5 entre 9 compostos de corantes testados dentro de 48 horas). Este tratamento simples, rpido e econmico para a descolorao de corantes e pode ter aplicaes potenciais no tratamento de efluentes da indstria txtil. Chen et al. (2003) isolaram 6 linhagens de bactrias de amostras de lodo capazes de degradar corantes txteis, sendo identificada e selecionada Aeromonas hydrophila, que exibiu a capacidade de remoo de cor de vrios corantes. A remoo de cor por est bactria ocorreu melhor em condies anxicas ou anaerbias. Mais de 90% do corante RED RBN foi biodegradado com oito dias de incubao na concentrao de 3000mg/L. Fontes de nitrognio adicionadas ao meio como extrato de levedura e peptona aumentaram a eficincia de descolorao, em contraste; a presena de glicose parece inibir a atividade de descolorao, porque cidos orgnicos so produzidos atravs da sua converso provocando a diminuio do pH do meio de cultura, inibindo assim, o crescimento celular e, consequentemente, a atividade de descolorao.
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Beydilli et al. (1998) fizeram um estudo utilizando azo corantes reativos, preto5, vermelho-2, vermelho-120, amarelo-3, amarelo-15 e amarelo-17, usando uma cultura anaerbia, sob condies metanognicas enriquecidas de lodo de esgoto municipal; alguns ensaios foram realizados para avaliar o potencial de toxicidade dos corantes selecionados aos microrganismos anaerbios, bem como, para determinar a biodegradabilidade anaerbia destes corantes. A produo total de gs e de metano foram monitoradas. No foi observado efeito txico para a concentrao de 300 mg /L de corante, resultando numa remoo de cor entre 81,3 a 97,3%, exceto para o corante vermelho-2, o qual apresentou uma remoo de cor de 65%. A degradao de corantes azicos por bactrias anaerbias geralmente diminui a cor, mas finalizam em aminas aromticas, as quais so geralmente mais txicas que o corante inicial, enquanto que as bactrias aerbias so restritas a um nico corante por vez (SWAMY e RAMSAY, 1999). Podem-se citar as enzimas anaerbias, a azo redutase, cliva os azo corantes para formar aminas, onde existem muitas dessas que so carcinognicas e mutagnicas (BANAT et al., 1996; ABADULLA et al., 2000a; CHEN et al., 2003). Alm disso, a azo redutase uma enzima muito especfica, fazendo a clivagem apenas de azo corantes (ZIMMERMAN et al., 1982, citado por ABADULLA et al., 2000a). Um trabalho de Nigam et al. (1996), envolvendo bactrias e fungos para degradar azo corante e efluente txtil, mostrou que, para as bactrias uma extraordinria descolorao foi adquirida sob condies anaerbias, indicando que em sistemas anaerbias eles so capazes de quebrar as ligaes azo. Com os fungos, houve um crescimento de uma espessura micelial no meio do corante e no mostraram qualquer descolorao indicando que os fungos no so habilitados para quebrar as ligaes azo, mas hbeis em outras partes da molcula do corante. As tcnicas utilizadas para as anlises foram espectrofotometria UV-visvel e eletroforese capilar. Nigam et al. (1995), durante uma pesquisa em busca de microrganismos com capacidade de degradao de corantes txteis em efluentes industriais, isolaram um fungo filamentoso anaerbio facultativo. Este fungo tem a habilidade de crescimento, tendo o corante como nica fonte de carbono, sob ambas as condies (aerbia e anaerbia). Foi observado que os corantes no so descoloridos, mas mostraram alteraes nos seus espectros na regio UV-visvel, indicando mudanas de estrutura molecular dos seus centros cromforos.
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Um estudo de biodegradao de azo corantes pela levedura Cndida zeylanoides em culturas aeradas foi feita por Martins et al. (2003). O meio de cultura continha glicose como fonte de carbono e energia, e seu pH foi controlado entre 5,0-5,2. A extenso da remoo da cor ao meio de cultura foi avaliada atravs da diminuio da absorbncia do sobrenadante. O resultado obtido foi de uma remoo de cor entre 4490%, aps sete dias. Marcanti-Contato e Corso (1996) realizaram trabalhos sobre processos biosortivos em efluentes txteis com fungo filamentoso Aspergillus niger, sendo comprovado que o mesmo tem grande potencial adsortivo para corantes e substncias txicas, independente da temperatura, mas com melhor atuao em meio cido. importante salientar que os processos biolgicos no so destrutivos. Embora o volume dos resduos possa ser significantemente diminudo, a disposio final das fases slidas continua sendo um problema sem soluo.
3.4 Degradao de Corantes e Efluentes Txteis por Enzimas Lignolticas.
Em funo das desvantagens dos sistemas biolgicos tradicionais, muitos estudos tendem a verificar o potencial de novas propostas que esto sendo pesquisadas no momento. Dentre estas se podem destacar os estudos envolvendo enzimas ligninolticas, produzidas a partir de cultura de fungos de decomposio branca. Estimase que grande parte dos problemas apresentados pelos processos biolgicos convencionais poderiam ser contornados com a utilizao de reatores enzimticos (PERALTA-ZAMORA et al., 2002). A crescente utilizao de enzimas, nos tratamentos de poluentes especficos, e recentes avanos biotecnolgicos tm possibilitado a produo de enzimas mais baratas e facilmente disponveis atravs de melhores procedimentos de isolamento e purificao. As potenciais vantagens do tratamento enzimtico quando comparadas a tratamentos convencionais incluem: aplicao em materiais recalcitrantes, atuao em concentraes altas e baixas dos contaminantes, atuao num amplo espectro de pH, temperatura e salinidade, necessidade de aclimatizao de biomassa e o fcil processo de controle, entre outros (DURN e ESPOSITO, 2000).
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Um grande nmero de enzimas, provenientes de uma variedade de vegetais e microrganismos, vem sendo apresentadas como capaz de desempenhar importantes papis em diferentes aplicaes para tratamento geral dos resduos. As enzimas podem atuar em compostos recalcitrantes especficos para remov-los por precipitao ou transformao em outros produtos incuos (DURN e ESPOSITO, 2000). Podem tambm mudar as caractersticas de um determinado rejeito para torn-lo mais receptivo ao tratamento, ou auxiliar na bioconverso dos rejeitos em produtos de maior valor agregado (KARAM e NICELL, 1997). A Tabela 3 mostra exemplos de enzimas e suas aplicaes no tratamento de resduos.
CAPTULO 3 REVISO BIBLIOGRFICA Tabela 3. Enzimas com potenciais aplicao em tratamento de Resduos.
Enzima Alquilsulfatase Amilases: -amilase Glicoamilase Enzimas celulolticas Celulase Celobio-hidrolase Celobiase Exo-1,4--D-Glicosidase Quitinase Cloro - peroxidase Cianidase Cianeto hidratase Fonte Pseudomonas C12B Bactrias
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Aplicao Degradao de surfactantes Hidrlise do amido e produo de glicose Hidrlise de lodos celulsicos de papel e celulose para produzir acares e lcool, hidrlise de celulose em resduos slidos urbanos para produzir acar e outras fontes de energia Bioconverso de resduos de crustceos em N- acetil glicosamina Oxidao de compostos fenlicos Decomposio de cianetos Hidrlise de cianetos
Vrias fontes
Serratia marsences Caldaromyces fumago Isoladas de Alcaligenes denitrificans Fungos tais como: Gloeocercospora sorghi, Stemphylium loti sangue Candida norvegensis Diversos fungos: Rhizoctonia praticola Fomus annosus Trametes versicolor Bactrias
Heme-oxidase L-Galactono-lactona oxidase Lacase
Oxidao de fenis e aminas aromticas Converso de galactose da hidrlise do soro de leite em cido ascrbico Oxidao de fenis, descolorao de efluentes de branqueamento Kraft, ligao de fenis e aminas com hmus Processamento de resduos de laticnios e produo de produtos de maior valor agregado Oxidao de fenis e compostos aromticos, descolorao de efluentes de branqueamento Kraft Melhora o desaguamento do lodo Melhora o desaguamento do lodo Oxidao de fenis monoaromticos e corantes aromticos Hidrlise de pesticidas organofosfatados Degradao da pectina Degradao da pectina Oxidao de fenis, descolorao de efluentes de branqueamento Kraft, desaguamento de lodo Remoo de ons de metais pesados Solubilizao de restos de peixe e carne melhorando o desaguamento do lodo Oxidao de fenis|
Lactases
Lignina peroxidase
Phanerochaete chrysosporium
Lpase Lisozima Mangans peroxidase Paration hidrolase Pectina liase Pectina esterase Peroxidase
Vrias fontes Bactrias Phanerochaete chrysosporium Pseudomonas sp. Flavobacterium streptomices Clostridium beijerinckii Clostridium thermosulfurogenes Raiz forte, tomate, soja, rabanete, Coprinus macrorhizus Citrobacter sp. Bactrias, tais como: Bacillus subtilis, Pseudomonas marinoglutinosa Cogumelo
Fosfatase Proteases
Tirosinase
Fonte: KARAM e NICELL, 1997 Nas ltimas dcadas, a utilizao de enzimas no tratamento de efluentes vem sendo objeto de inmeros trabalhos. Como exemplo, tem-se a enzima tirosinase, tambm conhecida como polifenol oxidase ou monofenol oxigenase, que catalisa duas
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reaes distintas: a orto-hidroxilao de monofenis, gerando catecis e a desidrogenao de catecis, formando quinonas que, sendo instveis em solues aquosas, sofrem polimerizao no enzimtica atravs de reaes oxidativas e nucleoflicas (CAMMAROTA e COELHO, 2001). Alguns tratamentos enzimticos vm sendo estudados com o objetivo de remover grupamentos fenlicos do meio ambiente. A enzima peroxidase conhecida por sua capacidade de remoo de grupamentos fenlicos e aminas aromticas de solues aquosas e tambm de descolorao de efluentes da indstria txtil. A peroxidase necessita de perxido de hidrognio no processo, enquanto que a tirosinase precisa de oxignio molecular, tornando este processo menos oneroso que o primeiro. Ambos os tratamentos enzimticos (com peroxidase e tirosinase) resultam na remoo de grupamentos fenlicos txicos dos efluentes industriais, tendo-se em mente que muitos dos corantes empregados na indstria txtil possuem grupamentos fenlicos em sua estrutura qumica (DURN, 2003). Nos tratamentos biolgicos de efluentes txteis e de corantes tm-se utilizado enzimas produzidas por fungos. A lignina peroxidase (LiP) e mangans peroxidase (MnP) so heme (ferro-porfirina) enzimas, agindo na presena de perxido de hidrognio. A LiP oxida o composto dimetxi lcool veratrlico ao correspondente aldedo. lcool veratrlico usado no teste da LiP e tambm um metablito secundrio produzido por muitos fungos de decomposio branca. Este composto aromtico induz a produo da LiP e protege a enzima da inativao por perxido de hidrognio. A lacase uma enzima pertencente ao grupo das oxidases que complexam o cobre e ativada pelo oxignio. Com a lacase, tem-se tanto a polimerizao como a despolimerizao de lignina. Na descolorao de efluentes, substratos no fenlicos podem ser oxidados pela lacase na presena de um mediador redox como ABTS (cido 2,2-azino-bis-3-etilbenzotiazolina-6-sulfnico) (ANDER e MARZULLO,1997). Entre as enzimas utilizadas para a descolorao est a lacase. Em experimentos com Pyricularia oryzae, Chivukula e Renganathan (1995) demonstraram que a lacase proveniente deste fungo capaz de oxidar corantes azo fenlicos. A ligao azo susceptvel reduo, o que gera aminas aromticas potencialmente carcinognicas. A oxidao da lacase pode desintoxicar os corantes azicos porque sua reao libera as ligaes azo sob a forma de nitrognio molecular, o qual no permite a formao de aminas aromticas.
CAPTULO 3 REVISO BIBLIOGRFICA Foram realizados estudos com vrios fungos da podrido
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(ligninolticos), visando descolorao e degradao de efluentes txteis, conseguindo bons resultados. Esses fungos se tornaram cada vez mais interessantes devido a sua habilidade de degradar poluentes orgnicos recalcitrantes tais como: hidrocarbonetos, poliaromticos, clorofenis e bifenilas policlorados (SWAMY e RAMSAY, 1999). Qualquer forma de descolorao realiza somente a transformao do grupo cromforo de um corante e no sua completa degradao. No caso a degradao da lignina pode ser convencionalmente dividida em reaes de despolimerizao, as quais so extracelulares, e em metabolismo dos fragmentos liberados do polmero, o qual quase sempre intracelular. A evidncia apresentada indica que os corantes servem como substratos para os fungos lignocelulticos e tambm tem valor determinante no metabolismo secundrio deste organismo (GLENN e GOLD, 1983, citado por RODRIGUES, 2003). Os fungos da decomposio branca tm a habilidade nica para degradar/mineralizar um amplo espectro (estruturalmente diverso) de poluentes txicos para o meio ambiente. O potencial destes fungos para a biorremediao in situ tem sido atribudo sua habilidade em degradar uma variedade de compostos xenobiticos via um mecanismo de radical livre mediado pelas peroxidases extracelulares - LiP e MnP e lacase, que so componentes chave para o sistema enzimtico. Estas enzimas tm um potencial de oxidao-reduo muito elevado e podem oxidar potencialmente xenobiticos que no so atacados por outras peroxidases (DURN e ESPOSITO,1997). Nos estudos de descolorao e capacidade de mineralizao de corantes e efluentes txteis, tm sido utilizados diferentes fungos produtores de enzimas. Pesquisadores da rea de biotecnologia tm aumentado o interesse no verstil fungo da decomposio branca Phanerochaete chrysosporium. Este fungo capaz de mineralizar, alm da lignina, pelo menos parcialmente, e algumas vezes completamente, uma variedade de poluentes persistentes no ambiente (BALAN e MONTEIRO, 2001). A biodescolorao de resduos lquidos e da polpa de papel foi relatada no incio dos anos 80, empregando-se basidiomicetos da podrido branca P. chrysosporium e Tinctoria sp. Vrios estudos tm sido conduzidos na remoo de corantes (BANAT et al., 1996). O mecanismo de descolorao de corantes polimricos por fungos da podrido branca at ento parece envolver as enzimas lignina peroxidases, mangans peroxidases e lacases.
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Estudos realizados em fungos Phanerochaete chrysosporium, que possuem o processo de descolorao iniciado por peroxidases, revelaram que o fungo foi muito eficiente na degradao de azo-corantes. Dez diferentes tipos de corantes foram testados com o caldo enzimtico bruto. Muitos dos corantes perderam 100% de sua cor e a eficincia de descolorao destes corantes pelo fungo varia dependendo da estrutura e complexidade do corante (KUNZ et al., 2002). J o fungo Phanerochaete sajor-caju, que possui o processo de descolorao iniciado pela lacase, revelou uma alterao do grupo cromforo, ocorrendo perda de cor. Wang e Yu (1998) realizaram experimentos de adsoro e biodegradao de corantes pelo fungo Trametes versicolor. Em seus trabalhos, a adsoro se deu na primeira hora de contato entre os corantes e as hifas fngicas. A capacidade de adsoro e afinidade do fungo ao corante depende da estrutura de cada corante. O miclio saturado pode ser regenerado, ou por dessoro fsica, ou por degradao enzimtica, podendo o mesmo ser aproveitado para uma segunda adsoro. O acentuado desenvolvimento da microbiologia tem propiciado muitas alternativas que viabilizam o tratamento biolgico de efluentes industriais. Trabalhos recentes relataram que diferentes efluentes so tratveis por meio desses processos. Foi estudada a descolorao de vrios corantes e de um efluente industrial utilizando o fungo P. chrysosporium em culturas estticas e sob agitao. Tanto o efluente como os corantes foram descoloridos com porcentagens de remoo de cor que variam entre 20-100%. O grau de descolorao para todos os corantes em condies estticas foi menor que nas culturas que ficaram sob agitao e tambm dependeu da concentrao da biomassa. Os autores compararam os diferentes corantes, com as diferentes percentagens de descolorao, e chegaram a um consenso que pequenas diferenas estruturais podem afetar fortemente o grau de descolorao. Mais estudos de clulas homlogas de corantes com diferentes fungos so necessrios para estabelecer a relao entre estrutura e degradabilidade (SANI et al., 1998). Spadaro et al. (1992) demonstraram a capacidade de mineralizao deste fungo para uma variedade de azo corantes, sendo que a habilidade de descolorao e/ou degradao do fungo dependeu da natureza dos grupos substituintes dos anis aromticos dos corantes. Kirby et al. (1995) testaram a descolorao de nove corantes txteis sintticos, pelo fungo P. chrysosporium, que descoloriu seis desses nove corantes na presena de
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glicose, e trs corantes txteis foram descoloridos na ausncia de uma fonte de carbono primria. Aps sete dias a descolorao foi completa, porm o papel da lignina peroxidase foi obscuro; certos corantes podem ser metabolizados como nica fonte de carbono e energia pelo P. chrysosporium. A descolorao de corantes azo, trifenilmetano, heterocclico e polimrico, por isoenzimas da lignina peroxidase de P. chrysosporium, foi estudada por Ollikka et al. (1993) . Dez diferentes tipos de corantes foram testados com o caldo enzimtico bruto. Muitos desses corantes perderam 75% de sua cor inicial; somente os corantes vermelho de Congo, poly R-478 e poly T-128 foram menos descoloridos que os outros 54, 46 e 48%, respectivamente. A habilidade das isoenzimas em descolorir os corantes na presena do lcool veratrlico foi comparada quela da preparao do caldo enzimtico bruto, sugerindo que a lignina peroxidase tem um papel importante na descolorao e a mangans peroxidase no necessria para iniciar a degradao destes corantes. Na ausncia de lcool veratrlico, a atividade de descolorao das isoenzimas foi reduzida, sugerindo que o lcool veratrlico atua como mediador na reao cataltica. Rosalen et al. (2004) estudaram a degradao de nove corantes txteis dos grupos reativos e dispersos, atravs dos fungos Pleurotus osteatrus e Pleurotus sajor caju, produtores de enzimas lacases e peroxidases. Ambas as espcies apresentaram boa capacidade de degradao dos corantes, sendo que, na maioria dos casos, a degradao acompanhou a taxa de crescimento dos fungos. Por outro lado, alguns dos corantes testados apresentaram degradao somente aps o miclio crescer por toda a superfcie do meio. Chivukula et al. (1995) estudaram a oxidao catalisada de azo corantes sulfonados por LiP do fungo de decomposio branca P. chrysosporium, gerando novos sulfofenil hidroperxidos. Um mecanismo para degradao de azo corantes sulfonados proposto baseado na identificao dos produtos. As caractersticas relevantes desse mecanismo so a liberao de ligaes azo com o nitrognio e a gerao de um novo sulfofenil hidroperxido, que ainda no foi identificado em nenhum sistema qumico ou biolgico. A estrutura qumica do sulfofenil hidroperxido apresentada na Figura 5.

O CH3 O3 S N N OH CH 3 O CH3 CH3
+
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COH
SO3
Figura 5: Estrutura qumica do sulfofenil hidroperxido Na degradao microbiana de compostos aromticos, a oxigenao do anel aromtico prepara o anel para posteriores degradaes. A incorporao de oxignio no anel aromtico em degradao peroxidativa de azo corantes sulfonados poderia auxiliar na subseqente degradao do anel aromtico (CHIVUKULA et al., 1995). Tipos diferentes de organismos podem ser utilizados para o tratamento de efluentes que apresentam colorao. Swamy e Ramsay (1999) comentam que muitas pesquisas sobre a degradao de corantes por fungos de decomposio branca tm utilizado P. chrysosporium (atravs das enzimas lacase, lignina peroxidase e mangans peroxidase). Embora existam poucos estudos de descolorao de corantes por Trametes versicolor, este organismo tem sido investigado por sua descolorao de efluentes Kraft fortemente coloridos. Estudos prvios se restringem a uma simples descolorao de um nico corante. Uma vez que o efluente txtil contm uma variedade de corantes, sucessivas descoloraes de um nico corante no indicam adequadamente a eficincia de um organismo para o processo de descolorao. Um sistema de biodescolorao deveria manter alta atividade sobre repetidas exposies dos vrios corantes. Na pesquisa desenvolvida por Swamy e Ramsay (1999), foi avaliada a capacidade de cinco fungos em descolorir diferentes corantes em condies onde os corantes encontravam-se isolados ou misturados, e ainda sob repeties desses corantes. Observaram que o fungo Trametes versicolor descoloriu rapidamente
repetidas adies de diferentes corantes e as misturas dos corantes, sem nenhuma adsoro visual dos corantes nos pellets do fungo, o que evidencia a ao de enzimas lignolticas. A adsoro e degradao de trs corantes com grupos cromforos comercialmente representativos (azo, antraquinona e ndigo) foram estudadas utilizando-se o miclio vivo e morto do fungo Trametes versicolor. A adsoro fsica e a degradao enzimtica da molcula do corante adsorvido tambm foram estudadas. Os autores encontraram uma atividade enzimtica para a peroxidase de 78UL-1 e para a lacase de 16.000UL-1. As enzimas intracelulares e extracelulares removeram e
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degradaram os corantes antraquinona e ndigo adsorvidos, enquanto que os azo corantes foram degradados apenas por enzimas extracelulares (WANG e YU,1998). Swamy e Ramsay (1999) estudaram os efeitos da concentrao de Mn2+ e NH4+ sob a produo de lacase, mangans peroxidase (MnP), e a descolorao de um corante azo por Trametes versicolor. Foram detectadas MnP e lacase, mas no LiP. Para baixas concentraes de Mn2+ e nitrognio, o fungo descoloriu sucessivamente oito adies do corante, sem nenhuma adsoro visvel na biomassa micelial. Em altas concentraes de Mn2+, a produo de MnP aumentou e da lacase diminuiu, mas as sucessivas descoloraes do corante no foram alteradas. Fatores indicaram que as enzimas isoladas no so suficientes para a descolorao. Foi avaliada a descolorao de corantes artificiais por peroxidase extracelular do fungo Pleurotus ostreatus. Tipos diferentes de corantes, incluindo trifenil metano, heterocclico, azo e polimricos foram descoloridos. O melhor resultado obtido foi com o corante azul do bromofenol (98%), da classe do trifenil metano. Corantes heterocclicos, como azul de metileno e azul de toluidina O, foram os que menos removeram cor (10%), mostrando certa resistncia oxidao enzimtica. Rodriguz et al. (1999) utilizaram enzimas produzidas por fungos da decomposio branca para descolorir 23 corantes industriais. Atividades da lacase, MnP, LiP e aril lcool oxidase foram determinadas nos extratos brutos das culturas de um fungo. O P. ostreatus foi capaz de descolorir 12 dos 23 corantes in vivo enquanto que o fungo P.chrysosporium descoloriu somente cinco. Utilizando o extrato bruto, P. ostreatus descoloriu apenas cinco corantes mostrando que outro mecanismo enzimtico poderia estar envolvido nos experimentos de descolorao in vivo. Este fungo apresentou uma atividade elevada para lacase e MnP. O fungo Trametes hispida apresentou tambm elevada atividade para lacase, o que consistente com a elevada atividade de descolorao dos corantes. Knapp e Newby (1999) utilizaram o fungo da decomposio branca Coriolus versicolor para descolorir um efluente contendo o grupo cromforo diazo acoplado; o resultado obtido aps o tratamento foi uma descolorao de 70-80%. Azmi et al. (1998) descreveram detalhadamente diferentes mtodos de tratamento para efluente contendo corantes da classe de trifenil metano e verificaram que tipos diferentes de organismos, tal como bactria, leveduras e fungos, tiveram desempenho anlogo em descolorir e degradar diferentes corantes trifenil metano.
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Recentemente, vrios trabalhos relacionados com a remediao de efluentes industriais e corantes foram publicados utilizando a lignina peroxidase (LiP), em sua forma livre e imobilizada (PERALTA-ZAMORA,1998). Ollikka et al. (1993) obtiveram 54% de descolorao do corante Congo Red, na presena de preparao crua de lignina peroxidase e perxido de hidrognio; esta enzima utiliza o Congo Red como substrato. Vyas e Molitoris (1995), citado por Selvan (2003), relatam que lignina peroxidase (LiP), mangans peroxidase (MnP) e lacase participam na descolorao de corantes. Robinson et al. (2001) estudaram quatro fungos da degradao branca, Bjerkandera adusta, Phlebia tremellosa, Pleurotus ostreatus e Cariolus versicolor; foram testados para produzir a lignina peroxidase (LiP), Mangans peroxidase (MnP), e lacase, com deficincia de nitrognio e outros componentes. Os fungos Bjerkandera adusta, Phlebia tremellosa, foram selecionados devido a sua atividade enzimtica elevada, na degradao de cinco tipos de corantes de efluente txtil. As experincias da degradao foram realizadas em alta concentrao de nitrognio (relao de C:N=1.6:1) e N-limitado (116:1) sendo que a concentrao do corante era 100mg/L. O fungo Bjerkandera adusta removeu 85% do corante em 7 dias; Phlebia tremellosa teve 79% de remoo em 9 dias, em meios com alta concentrao de nitrognio. Em meios com concentrao limitada de nitrognio, 86% do efluente foram degradados em 9 dias pela Bjerkandera adusta, e 74% pela Phlebia tremellosa, em 11 dias. A adio do nitrognio no teve nenhum efeito substancial na degradao do corante pelo Bjerkandera adusta, com um aumento na percentagem de remoo para Phlebia tremellosa. O Pleurotus ostreatus e Cariolus versicolor no produziram atividade enzimtica suficiente; sendo assim no foram utilizados nos experimentos para degradao de efluentes txteis. Abadulla et al. (2000b) estudaram preparaes de enzimas de Pleurotus ostreatus, Schizophyllum commune, Neurospora crassa, Polyporus sp., Trametes villosa, Myceliophtora thermophila que descoloram eficientemente uma variedade de corantes diferenciados estruturalmente. No entanto, a reao inicial depende da taxa individual de enzima (lacase, LiP e MnP), na preparao. Alguns auxiliares de tingimento diminuem a taxa de descolorao. Assim, o efeito dos auxiliares de
tingimento sobre a atividade da enzima precisa ser considerado quando se avaliar um novo processo.
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Phanerochaete chrysosporium mostrou biodegradar os corantes azo e heterocclicos, Orange II, Tropaeolin O, Congo Red e Azure B. A extenso da remoo da cor dependeu da complexidade do corante, disponibilidade de nitrognio no meio, atividade ligninoltica da cultura, e do metabolismo secundrio. No entanto, na presena de lignina peroxidase purificada, sofreram um processo de descolorao, em alguns casos, em menor extenso quando comparado com o obtido na presena do fungo e apresentaram outros metablitos secundrios. Conclu-se que embora as enzimas ligninas peroxidase estejam envolvidas na degradao desses corantes azo e heterocclicos, inmeras outras enzimas ou sistemas enzimticos tambm fazem parte do processo de quebra desses corantes (CRIPPS et al., 1990). Kirby et al. (1995) estudaram a descolorao de um efluente txtil artificial pelo fungo da podrido branca (Phanerochaete chrysosporium), que produz as enzimas lacase, mangans peroxidase e lignina peroxidase. Nos ensaios de descolorao, o papel da LiP no ficou claro, pois somente pouca atividade da enzima foi detectada no processo de descolorao dos vrios corantes sintticos estudados separadamente e misturados (efluente artificial). Nesse estudo, a concentrao dos corantes foi de 0,5g/L, na presena de glicose (10g/L). Seis corantes testados foram descoloridos, enquanto que na ausncia glicose apenas trs. Os resultados sugerem que uma fonte primria de carbono (glicose) essencial para uma descolorao extensiva do corante; no entanto, alguns corantes puderam ser metabolizados como nica fonte de carbono e energia pelo Phanerochaete chrysosporium. Culturas lignolticas de inmeros fungos da podrido branca tm sido documentadas por sua capacidade de degradar e descolorir vrios corantes. O envolvimento de MnP e LiP foi demonstrado na via de degradao de alguns dos corantes. Entretanto, espera-se que os fungos de degradao branca se diferenciam na sua habilidade e capacidade de degradar corantes com base nas suas diferenas qualitativas e quantitativas na produo dessas enzimas. Tais corantes tambm podem oferecer formas para diferenciao entre atividades enzimticas de peroxidases especficas lignilticas. Segundo Durn e Esposito (2000), a implementao do tratamento de guas base de enzima pode ter um custo muito alto. As enzimas que esto sendo investigadas at agora so caras devido ao alto custo envolvido em seu isolamento, purificao e produo.
CAPTULO 3 REVISO BIBLIOGRFICA 3.5 Enzimologia Aplicada Indstria Txtil
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Enzimas so protenas que apresentam atividade cataltica. A complexa estrutura molecular enzimtica majoritariamente constituda por uma parte protica, porm a ela podem estar integradas outras molculas como carboidratos e lipdeos. Para apresentar atividade cataltica, algumas enzimas requerem a participao de molculas menores (co-fatores) de natureza no protica. Os cofatores podem ser ons (Zn2+Ca2+ etc.) ou molculas orgnicas (coenzimas). Exemplos de coenzimas so os dinucleotdeos (NAD, NADP, FAD), e a coenzima A, entre outros. H uma grande variedade de enzimas, a maioria delas so encontradas em pequena quantidade. Algumas so produzidas em grandes quantidades por certos microrganismos que a excretam para o meio externo. As enzimas extracelulares so capazes de digerir materiais nutritivos insolveis, como celulose, protenas e amido. Algumas dessas enzimas so usadas em alimentos, bebidas, laticnios, nas indstrias farmacuticas, txtil e de detergentes. Sua utilizao feita em processos biotecnolgicos industriais, ajudando a reduzir a poluio, muitas vezes substituindo processos qumicos nefastos ao meio ambiente. Enzimas apresentam especificidade por seus substratos (reagentes) e produtos em escala bem maior do que os catalisadores qumicos, de forma que em uma reao catalisada por enzimas no h formao de produtos laterais. A atividade cataltica de muitas enzimas pode ser variada em resposta alterao de substncias chamadas de moduladores, que diferem em sua natureza dos substratos e produtos da reao.
3.5.1 Nomenclatura e classificao das enzimas. Um importante passo para estabelecer a nomenclatura cientfica das enzimas que foi estabelecido, pela Unio Internacional de Bioqumica (IUB), que atravs de uma comisso de especialistas-(EC), procurou sistematizar classes e nomes desses biocatalisadores (AQUARONE et al., 2001). Os nomes sistemticos incluem o substrato, a reao catalisada e a terminao ase. Alguns exemplos so apresentados a seguir:
CAPTULO 3 REVISO BIBLIOGRFICA Substrato - Tipo de reao catalisada (sufixo ase);
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Substrato A: Substrato B Tipo de reao catalisada (sufixo ase); Doador de eltrons: Aceitar eltron oxidoredutase Doador: Aceptor Grupo transferido transferase Substrato Grupo hidrolisado Hidrolase; O novo sistema de classificao divide as enzimas em seis classes principais, nas quais esto inclusas subclasses de acordo com o tipo de reao catalisada. De acordo com esta sistemtica, cada enzima designada por um Nome Recomendado, usualmente pequeno e apropriado para o uso dirio, um Nome Sistemtico, o qual identifica a reao catalisada, e um Nmero de Classificao, o qual usado quando uma identificao precisa necessria. As enzimas podem ser classificadas de acordo com vrios critrios. O mais importante foi estabelecido pela Unio Internacional de Bioqumica (IUB), e estabelece 6 classes. 1 Oxidorredutases: So enzimas que catalisam reaes de transferncia de eltrons, ou seja: reaes de oxi-reduo. So as desidrogenases, redutases e as oxidases. 2 Transferases: Enzimas que catalisam reaes de transferncia de grupamentos funcionais como grupos amina, fosfato, acil, carboxil, etc. Como exemplo tem-se as quinases e as transaminases. 3 Hidrolases: Catalisam reaes de hidrlise de ligao covalente. Exemplo: as peptidases. 4 Liases: Catalisam a quebra de ligaes covalentes e a remoo de molculas de gua, amnia e gs carbnico. As dehidratases e as descarboxilases so exemplos dessa classe. 5 Isomerases: Catalisam reaes de interconverso entre ismeros pticos ou geomtricos. As epimerases so exemplos dessa classe. 6 Ligases: Catalisam reaes de formao de novas molculas a partir da ligao entre duas j existentes, sempre s custas da energia (ATP). Como exemplo, tem-se as sintetases.
CAPTULO 3 REVISO BIBLIOGRFICA 3.5.2 Stio ativo de ligao/ especificidade
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As enzimas so muito especficas para seus substratos; esta especificidade pode ser relativa a apenas um substrato ou a vrios substratos ao mesmo tempo. Esta especificidade se deve existncia, na molcula da enzima, de um local denominado stio ativo de ligao. O stio ativo de ligao de uma enzima dado por um arranjo tridimensional especial dos aminocidos de uma determinada regio da cadeia polipeptdica, geralmente complementar molcula do substrato. O modelo Chave/Fechadura prev um encaixe perfeito do substrato no stio de ligao, que seria rgido como uma fechadura, conforme ilustrado na Figura 6.
Figura 6 Modelo chave / fechadura. O modelo do Ajuste Induzido prev um sitio de ligao no totalmente rgido na sua estereoqumica, mas sim moldvel molcula do substrato; a enzima se ajustaria molcula do substrato, e vice e versa, conforme ilustrado na Figura 7. Devido conformao complexa da enzima, singularidade do seu centro ativo e configurao de seu substrato, uma dada enzima seleciona apenas um substrato ou grupos de substratos para exercer a ao cataltica. Cada enzima catalisa somente uma reao ou, quando muito, um nmero limitado de reaes qumicas. O grau de especificidade varia de uma enzima para a outra.
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Figura 7 Modelo de Ajuste Induzido. Ao completar a reao cataltica, a enzima libera o produto e retorna forma original. O processo ocorre em duas etapas:
(1) S + E
ES*
(etapa reversvel)
(2)
ES
E+P
(etapa irreversvel)
3.5.3 Cofatores Os cofatores unem-se s enzimas para melhorar sua atividade. Coenzimas: So molculas pequenas, orgnicas no proticas, termoestveis, dialisveis, ligadas fracamente s enzimas. Podem ligar-se momentaneamente enzima no decurso da reao (NAD+ e NADP+) ou ligar-se permanentemente enzima, junto ao centro ativo ou constiturem o prprio centro ativo. Cofator metlico: So ctions e nions que agem como ativadores ligados fracamente ou firmemente enzima. Ex: Cl- (alfa amilase), Mg++ (fosfatases), Ca++ (lipases), Zn++ (LDH).
3.5.4 Cinticas de reaes enzimticas
A cintica enzimtica parte da Enzimologia que estuda a velocidade das reaes enzimticas bem, como os fatores que a influenciam. Seus objetivos so: Medir as velocidades das transformaes que se processam;
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Estudar a influncia de condies de trabalho (como por exemplo,
concentraes dos reagentes e das enzimas, temperatura, pH, concentraes de ativadores e inibidores) naquelas velocidades; Correlacionar (quer por meio de equaes empricas, quer por meio de
modelos matemticos) as velocidades das transformaes com alguns dos fatores que as afetam; Colaborar na otimizao do processo considerado; Estabelecer critrios para o controle do processo; Projetar o reator mais adequado;
Os princpios gerais da cintica das reaes qumicas aplicam-se s reaes catalisadas enzimaticamente, embora estas tambm mostrem um padro distinto que no usualmente encontrado nas reaes no enzimticas: saturao com o substrato. Na Figura 8 pode ser observado o efeito da concentrao de substrato na taxa de uma reao catalisada por uma enzima. Em concentraes de substrato muito baixas, a velocidade inicial de reao v0 quase proporcional concentrao do substrato e a reao de primeira ordem em relao ao substrato. Entretanto, proporo que a concentrao do substrato aumenta, a taxa inicial passa a crescer menos, significando que no mais linearmente proporcional concentrao do substrato. Nessa zona, as ordens das reaes esto misturadas. Com o posterior aumento da concentrao do substrato, a taxa de reao tornase essencialmente independente da concentrao do substrato e aproxima-se assintoticamente de uma taxa constante. Nesses valores de concentraes de substrato, a reao de ordem zero em relao ao substrato e a enzima tida como estando saturada com o substrato.
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Figura 8 Cintica enzimtica Em 1913, a teoria da ao e cintica enzimtica foi desenvolvida por dois cientistas chamados L. Michaelis e M. L. Menten, na qual uma reao enzimtica pode ser expressa pela seguinte equao, considerando-se apenas um substrato: Enzima + Substrato [EnzimaSsubstrato] Enzima + Produto
As molculas de substrato passam por uma srie de formas geomtricas e so eletricamente alteradas antes de formarem produtos da reao. A energia livre destes intermedirios, especialmente aqueles que se encontram em estado de transio mais instveis, um fator determinante da taxa de reao. As enzimas tm muito maior afinidade por estes estados de transio do substrato do que tm por formas mais estveis. Como esta interao abaixa a energia destes estados de transio crticos, as enzimas podem acelerar uma determinada reao. A partir do modelo proposto por estes pesquisadores, desenvolveu-se uma equao que nos permite demonstrar como a velocidade de reao varia em funo da concentrao do substrato, a qual est a seguir descrita:
V0 = Km + [ S ] Vmax [ S ]
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Esta equao relaciona a velocidade (V0), a velocidade mxima (Vmax) e a concentrao inicial de substrato com a constante de Michaelis Menten (Km). O Km de um substrato a concentrao do substrato na qual a velocidade inicial de reao equivale metade da velocidade mxima. Para reaes que envolvem um substrato o Km expresso em moles por litro e independente da concentrao da enzima. A constante de MichaelisMenten de uma enzima , portanto, uma caracterstica muito importante e fundamental, no apenas matematicamente na determinao da velocidade da reao catalisada, como tambm na avaliao da atividade e na purificao das enzimas nos tecidos.
3.5.5 Fatores externos que influenciam na velocidade de uma reao enzimtica
3.5.5.1 Influncia do pH
Geralmente as enzimas so ativas numa faixa restrita de pH e, na maioria dos casos, h um pH timo definido. O efeito do pH sobre a afinidade pode ser eliminado utilizando-se altas concentraes de substrato, de modo a se saturar a enzima em todos os valores de pH. O efeito do pH sobre a enzima deve-se s variaes no estado de ionizao dos componentes do sistema medida que o pH varia. Como as enzimas so protenas que contm muitos grupos ionizveis, elas existem em diferentes estados de ionizao; por isso, a atividade cataltica restrita a uma pequena faixa de pH. A atividade da enzima deve ser ento medida no pH timo. A estabilidade de uma enzima depende de muitos fatores como: temperatura, fora inica, natureza qumica do tampo, concentrao de vrios preservativos, concentrao de ons metlicos contaminantes, concentrao de substratos ou cofatores de enzima e concentrao da enzima.
CAPTULO 3 REVISO BIBLIOGRFICA 3.5.5.2 Efeito da temperatura
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A atividade cataltica das enzimas altamente dependente da temperatura, como no caso dos catalisadores convencionais, porm; medida que se eleva a temperatura, dois efeitos ocorrem simultaneamente: a taxa de reao aumenta, como se observa na maioria das reaes qumicas, e a estabilidade da protena decresce devido desativao trmica. A influncia da temperatura sobre a atividade da enzima , geralmente, representada pela alterao em termos de atividade ou velocidade de reao, ou seja, a maioria das reaes qumicas se processa a uma velocidade maior medida que a temperatura aumenta. O efeito da temperatura sobre a atividade de uma enzima depende de vrios fatores que incluem o pH e a fora inica do meio, alm da presena ou ausncia de ligantes. Os substratos frequentemente protegem as enzimas da desnaturao pelo calor. No processo de desnaturao trmica, ocorre a perda da atividade biolgica da enzima. Toda enzima tem uma temperatura tima para que atinja sua atividade mxima, ou seja, a temperatura mxima na qual a enzima possui uma atividade constante por um perodo de tempo.
3.5.6 Atividade Enzimtica A atividade enzimtica a quantidade de substrato que em uma reao enzimtica particular convertida em produto por unidade de tempo em condies determinadas. O ensaio quantitativo da atividade enzimtica efetuado de maneira mais rpida e conveniente quando o substrato ou produto so compostos coloridos ou que absorvem a luz na regio do UV, pois a velocidade de aparecimento ou desaparecimento de um produto ou substrato que absorva luz pode ser acompanhada com um espectrofotmetro, dando um registro contnuo do processo. U Unidade internacional de atividade enzimtica
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1 U = 1 gmol/min quantidade de enzima que converte 1mol de substrato por minuto em condies padronizadas.
3.5.7 Isoenzimas So formas mltiplas de uma determinada enzima que ocorrem em uma espcie do organismo ou mesmo em uma nica clula. Essas formas mltiplas podem ser detectadas ou separadas por eletroforese em gel dos extratos celulares, uma vez que elas so codificadas por genes diferentes, diferem na composio de aminocidos e, em conseqncia, em seus valores de pH isoeltricos.
3.5.8 Imobilizao de Enzimas
Em geral universalmente aceito que, para aumentar a potencialidade dos sistemas enzimticos no tratamento de resduos industriais, a utilizao de formas enzimticas imobilizadas de fundamental importncia. Conseqentemente, muitos suportes tem sido utilizados para a imobilizao de enzimas de interesse. De maneira geral, a utilizao de enzimas suportadas tem-se mostrado bastante conveniente, principalmente em funo do aumento da sua estabilidade qumica e trmica. Muitas enzimas no so suficientemente estveis dentro das condies operacionais, e elas podem perder a atividade cataltica devido as altas temperaturas, autooxidao, auto-digesto e/ou desnaturao pelo solvente, e solutos ou devido a danos fsicos. As enzimas so molculas solveis em gua, seu uso repetido, o qual importante para viabilizar um processo econmico, problemtico devido ao fato que elas so difceis de serem recuperadas deste meio alm da separao dos substratos e produtos. A produtividade de processos industriais, medidas de rendimento em funo do tempo, frequentemente baixa devido ao limite tolerado pela enzima para altas concentraes de substrato(s) e produto(s).
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Estes problemas podem ser solucionados pela imobilizao de enzimas e biocatalizadores (CASTILO et al, 1997). Deve-se sempre considerar que a atividade da enzima seja mantida aps a imobilizao, ou seja, no devero ocorrer alteraes estruturais que levam a mudanas em seu stio ativo.
3.6 Enzimas peroxidases
Esta famlia de enzimas assim chamada porque depende do perxido de hidrognio para se tornar ativa. A Figura 9 apresenta o ciclo cataltico de uma peroxidase. Em um ciclo normal, a forma frrica da enzima oxidada por perxido de hidrognio ao radical oxi-ferril, conhecido como composto I. Este composto ento reduzido pela transferncia de um eltron do substrato (ex: lignina) para a forma conhecida como composto II. Uma subseqente transferncia de eltron de uma molcula de substrato para enzima faz com que esta retorne a sua forma inicial. O composto III refere-se forma inativa da enzima.
Figura 9 : Ciclo cataltico da peroxidase (Fonte: DEURZEN et al.,1997, TIMOFEEVSKI et al.,1998).
A remoo cataltica de fenis e outros compostos aromticos, incluindo substncias cromognicas, de efluentes industriais utilizando enzima peroxidase e perxido de hidrognio, vem sendo foco de pesquisas extensivas. A tcnica pode ser uma alternativa quando os mtodos convencionais de tratamento, como o tratamento
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biolgico, o uso de carvo ativado e tcnicas de oxidao avanada, no forem eficientes devido natureza do efluente (NICELL et al., 1993). Esta tcnica apresenta especial vantagem para o tratamento de solues fortemente concentradas, pois a reao pode ser procedida sem diluio da corrente poluda, e em um curto tempo de reteno. Para uma planta de tratamento de efluentes baseada na oxidao biolgica, onde no h disponibilidade de espao fsico, esta caracterstica muito desejvel. Muitas enzimas, como o caso das peroxidases, ocorrem em mais de uma forma molecular em uma mesma espcie, em um mesmo tecido, ou at mesmo, em uma mesma clula. Nestes casos porm, as diferentes formas da enzima, ou isoenzimas, catalisam a mesma reao, diferem em suas propriedades cinticas, composio e seqncia de aminocidos. A presena de mltiplas isoenzimas torna difcil a atribuio de funes biolgicas especficas s isoformas individualmente. Portanto, a funo fisiolgica de cada isoenzima encontra-se apenas parcialmente compreendida, devido em parte, a complexidade das isoenzimas presentes em um dado tecido (GILLIKIN e GRAHAM, 1991, citado por WILBERG, 2003). Conhecida tambm como peroxidase da raiz forte (HRP- Horseradish peroxidase) estruturalmente o arqutipo das protenas heme. Ela uma glicoprotena globular com massa molecular de 42000 g mol-1, que possuem uma parte protica (apoenzima) de aproximadamente 34 000 g mol-1 e o restante composto pelo grupo prosttico (tipo heme) que contm o cofator ligado fortemente ao stio ativo da enzima. Nos vegetais superiores, o cofator ferro no seu estado de oxidao +3 encontra-se ligado a uma molcula de porfirina, compondo o grupo heme (Figura 10), que promove a doao de eltrons na reao de oxidao dos seus substratos aromticos.

H2C CH CH3
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H3C
CH N Fe N N CH3 N
CH2
H3C
CH2 OOC CH2
CH2 CH2 COO
Figura 10 Grupo prosttico das enzimas peroxidase denominado grupo heme. Fonte: WILBERG, 2003.
Mais de 40 isoenzimas de HRP foram detectadas e classificadas em trs grupos como enzimas cidas, neutras ou bsicas. Pouco se sabe sobre suas atividades relativas e, apesar de catalisarem as mesmas reaes, diferem entre si profundamente quanto s propriedades cinticas e fsico-qumicas. Considera-se que as enzimas utilizadas comercialmente so constitudas por apenas uma isoenzima, ou que as atividades das principais isoenzimas presentes so basicamente as mesmas, e que as demais no interferem na atividade total. O uso da HRP tem sido aplicado na polimerizao de fenlicos, despolimerizao da lignina, S-oxidao de dibenzotiofeno, polimerizao do radical acrilamida e branqueamento de corante (DURN et al., 2001). O papel das peroxidases de origem microbiolgica na polimerizao de cidos fenlicos reconhecidamente o de transformao de substncias aleloqumicas em substncias hmicas estveis e no txicas. Na superfcie das razes de diversas plantas, inclusive da raiz forte, as enzimas atuam como primeira linha de defesa contra o ataque por organismos e aleloqumicos secretados por outras plantas vizinhas. O mecanismo proposto foi o de minimizao da absoro de compostos txicos (como fenis e aminas aromticas) para o interior da planta, atravs da sua precipitao na interface das razes com o solo (ADLER et al., 1994). Na indstria de papel e celulose a peroxidase empregada na etapa de branqueamento da polpa e no tratamento de seus efluentes. Na indstria txtil utilizada para melhorar o branqueamento em lavanderias e inibir a transferncia de cor durante a
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lavagem. Tambm na indstria txtil, empregada para a remoo do excesso de corante da gua de lavagem de tecidos tingidos. Este procedimento diminui o risco de redeposio do corante no tecido, mesmo utilizando menor volume de gua de lavagem. As vantagens associadas so a diminuio do tempo de processo, de energia requerida e principalmente do volume de gua, o que reflete tambm em menor volume de colorao dos efluentes lquidos do processo. Pokora e Johnson (1993), citado por Wilberg (2003), apresentaram um mtodo para o tratamento de efluentes, lodos e solos poludos por compostos orgnicos e/ou metais pesados utilizando peroxidase. Descreveram a ao desta enzima como sendo basicamente a gerao de radicais livres e oxidao, atuando sobre a remediao dos efeitos danosos provocados por estes compostos ou misturas entre eles. Os compostos halogenados (AOX) so oxidados produzindo haletos; fenis e aminas so polimerizados; metais pesados (Hg, TI, Sb, Te, Pb, As, Se, Bi) so oxidados a sua forma inica; substncias cromforas so degradadas ou precipitadas. O tratamento resulta na converso dos poluentes em materiais insolveis e no prejudiciais ao meio ambiente, que podem ser deixados na corrente tratada ou removidos em uma etapa posterior, por resina trocadora de ons, quelao, filtrao, sedimentao ou outros mtodos apropriados para cada caso. Diversos estudos foram realizados com o objetivo de identificar as variveis do processo que afetam a eficincia da HRP e que so importantes para o desenvolvimento de um sistema de tratamento de efluentes, procurando torn-la vivel tcnica e economicamente. Dentre outras variveis importantes, a dosagem tima de H2O2 , dosagem tima de peroxidase, pH, temperatura da reao, tempo de contato, repetida aplicao de enzima imobilizada, e concentrao de corante tem sidos investigados para otimizar as condies do sistema (MOHAN et al., 2005). A HRP conhecida por ser eficaz na quebra de compostos azo aromticos na presena de H2O2 e por degradar e precipitar importantes corantes azo industriais (MOHAN et al. 2005; KIM et al. 2005). Estudos prvios mostraram que vrios compostos fenlicos e compostos azo foram degradados pelo sistema HRP- H2O2. Tambm foi demonstrado que a imobilizao da HRP melhora as condies e a eficincia de remoo comparativamente forma livre. Alguns autores mostram que a destruio oxidativa de compostos coloridos estimulada significativamente atravs da utilizao de enzimas oxidativas (BHUNIA et
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al., 2002; REGALADO et al., 2004). Enzimas como a lignina peroxidase (LiP) e mangans peroxidase (MnP), ambas associadas com a degradao da lignina, esto envolvidas na descolorao de corantes sintticos azo, como o Orange II, entre outros (CHIVUKULA et al., 1995; REGALADO et al., 2004) Recentemente Bhunia et al. (2002) mostraram que a HRP pode ser efetiva degradando e precipitando importantes azo corantes industriais, tais como Remazol. Este corante usado industrialmente contm pelo menos um grupo cromforo em sua estrutura, sendo assim um possvel substrato da HRP. Ferrer et al. (1991), estudaram a imobilizao da HRP e sua aplicao na descontaminao de efluentes. A remoo de cor de efluentes Kraft por HRP na forma livre foi de 20%, mas a enzima imobilizada, em CNBr-Sepharose 4B, aumentou a descolorao por um fator de 2,7 vezes em 48 horas (54%). Foi avaliada tambm a habilidade de ligao da HRP em trs diferentes matrizes de reatores: filtro de papel e celulose, bolas de nylon e tubos de nylon, para remover 4-clorofenol de solues aquosas. Os resultados indicaram que 80% da eficincia de remoo podem ser obtidos se a atividade enzimtica no for fator limitante no reator. Segundo Durn e Esposito (2000), a imobilizao da HRP em vrios suportes e sua utilizao para descontaminao de efluentes de indstrias de papel e txteis tem sido avaliada. Dentre os suportes, a resina de troca inica Amberlite IRA 400 apresentou os melhores resultados. Obteve-se acima de 50% de descolorao do efluente Kraft, aps 4 horas de tratamento enzimtico, sem nenhuma adsoro significativa de espcies coloridas pelo suporte (PERALTA-ZAMORA et al., 1998). A imobilizao de HRP, sobre vitro-cermica de fosfato duplo de titnio e ltio poroso, e sua utilizao na remediao de efluentes de papel foi estudada por PeraltaZamora et al. (1998). Foi obtido aproximadamente 50% de imobilizao em 3 horas, usando solues aquosas de HRP (2000 U.L-1). A enzima imobilizada reduziu 30% da cor, e depois de 3 horas, 25% da concentrao total de fenol no efluente.
CAPTULO 3 REVISO BIBLIOGRFICA 3.7 Toxicidade dos efluentes txteis
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As fontes de toxicidade aqutica dos efluentes txteis podem ser difceis de serem identificadas devido falta de informaes referentes exata composio ou da toxicidade de muitos corantes e auxiliares qumicos conhecidos como contribuintes para a toxicidade aqutica dos efluentes txteis. Dentre alguns agentes pode-se citar: sais, tensoativos, metais, substncias orgnicas txicas, biocidas e nions txicos (ABRAHO e SILVA, 2002). Os efeitos dos azo corantes no organismo humano est sendo estudado h muito tempo. De todas as classes de compostos orgnicos, essa substncia foi a mais pesquisada (BROWN e DEVITO, 1993). Muitos dos compostos corantes no
apresentam carter txico, mas sua biotransformao responsvel pela formao de compostos com potencialidade carcinognica e mutagnica (GONALVES et al., 1999; VANDEVIVERE et al., 1998). Segundo Ledakowicz e Gonera (1998), o efluente txtil pode ocasionar reduo de aproximadamente 50% no crescimento microbiano dos lodos ativados, reduzindo consequentemente a degradao dos demais compostos presentes. Apesar dos corantes no apresentarem toxicidade aguda elevada, a associao desses compostos aos agentes redutores e fixadores, durante o processo de tingimento, faz com que o efluente bruto apresente toxicidade significativa frente aos organismos teste. Dentre os organismos teste do ensaio de toxicidade aguda, pode-se citar a Daphnia, tambm conhecida como pulga dgua, que um microcrustceo facilmente encontrado em lagos, represas e lagoas de guas continentais. Mede cerca de 0,5 a 5,0 mm de comprimento (BUIKEMA e SHERBERGER, 1997, citado por ABRAHO e SILVA, 2002). A Daphnia um organismo filtrador, alimenta-se de algas, bactrias e detritos orgnicos presentes na gua. Seu sistema enzimtico complexo, permitindo portanto a assimilao e a digesto da matria orgnica sob diferentes formas. A mdia do ciclo de vida da Daphnia magna de 40 dias a 20C. No que diz respeito ao teor de oxignio dissolvido na gua, a Daphnia pouco exigente em comparao a outros organismos aquticos, pois pode viver em meio contendo concentraes mnimas de 15 a 25% de saturao.
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Um outro organismo amplamente utilizado para avaliar a toxicidade de efluentes a Artemia salina (Crustcea, Anostraca) que um microcrustceo de gua salgada, o qual utilizado como alimento vivo para peixes, sendo seus cistos encontrados facilmente em lojas de aquaristas. O ciclo de vida da Artemia se inicia pela ecloso de cistos dormentes, os quais so embries encapsulados metabolicamente inativos. Esses cistos podem permanecer no estado dormente por muitos anos, desde que mantidos em lugar sem umidade. Quando esses cistos entram em contato com gua salgada, eles se tornam hidratados e reassumem o seu desenvolvimento (ABRAHO e SILVA, 2002). Nos ltimos tempos a Artemia salina, tem sido empregada para muitos testes de toxicidade, avaliando-se uma grande variedade de compostos. Da mesma forma, o uso de plantas superiores em sistemas de testes para monitorar a presena de compostos txicos no ambiente aqutico est sendo empregado satisfatoriamente. Plantas do gnero Allium tm sido utilizadas na avaliao da toxicidade de efluentes e muitos compostos txicos e o parmetro empregado mais comumente para estabelecer a relao entre a concentrao e a toxicidade do efluente a inibio do crescimento de raiz (ARAMBASIC et al., 1995). No prximo captulo sero apresentados os equipamentos, reagentes e metodologias utilizados no presente trabalho.
CAPTULO 4 MATERIAL E MTODOS
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4 MATERIAL E MTODOS
Neste captulo sero apresentados os reagentes e equipamentos que foram utilizados, e as metodologias empregadas, para se avaliar o potencial da enzima, para descolorao de corantes e efluentes txteis, como tambm os organismos utilizados como indicadores de toxicidade.
4.1 Local O presente trabalho foi desenvolvido no Laboratrio de Transferncia de Massa LABMASSA - no Departamento de Engenharia Qumica e Engenharia de Alimentos da Universidade Federal de Santa Catarina.
4.2 Material
4.2.1 Corantes Para desenvolvimento do trabalho, foram utilizados os corantes reativos Turqueza Remazol G 133%, Preto Remazol B, e o corante cido Azul Lanaset 2R, cedidos por uma indstria txtil da regio. grande a importncia de se estudar os corantes individualmente devido ao fato dos mesmos estarem presentes no efluente. Os corantes foram utilizados sem nenhum tratamento prvio de purificao. Na Figura 11 ser apresentada a estrutura qumica dos corantes utilizados para a realizao do presente trabalho.

O O S O O S NaO O O N N S N2 H N
N NaO 3 S
60
HC 3
N
N
N Cu N N N
+ -
Cl N N
NaSO 3
NH2
NH SO 2
N HC 3 C3 H
NaSO 3
Preto Remazol B
Turqueza Remazol G 133%
NH2
O 2S
O H3C Cl O H N CH3 CH3
Azul Lanaset 2R
Figura 11 - Estrutura qumica dos corantes utilizados neste trabalho.
4.2.2 Efluente Txtil
As amostras de efluente txtil utilizada neste trabalho foram coletadas em uma indstria txtil, localizada na cidade de Blumenau. A amostra foi mantida em temperatura ambiente, sendo que o pH original era em torno de 4,0. O efluente foi coletado na sada da caixa de neutralizao.
CAPTULO 4 MATERIAL E MTODOS 4.2.3 Enzima
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Foi empregada a enzima Horseradish peroxidase (HRP), doada pela TOYOBO DO BRASIL (2005), cujas propriedades so apresentadas na Tabela 4. Tabela 4 - Propriedades da enzima Horseradish peroxidase. Estabilidade Massa Molecular pH timo Temperatura tima Estabilidade em pH Fonte: TOYOBO DO BRASIL, 2005. Estvel a -20C, por um ano Aproximadamente 40,0000 kDa 6-7 45 C 5,0 -10,0 (25C, 20 horas)
A enzima peroxidase (HRP III) foi usada em soluo aquosa (tampo citratofosfato, pH 5,0); antes de cada experimento era centrifugada e o sobrenadante era utilizado. Aps a preparao a soluo foi armazenada na geladeira temperatura mdia de 5C.
4.3 Mtodos
4.3.1 Determinao da atividade enzimtica da Horseradish Peroxidase (HRPToyobo do Brasil) A siringaldazina substrato para a HRP e normalmente utilizada para avaliar a atividade enzimtica. O produto resultante da reao catalisada pela enzima (peroxidase) absorve na regio do visvel. Assim a cintica da reao, dada na Figura 13, pode ser acompanhada pela medida do aumento da absoro do sistema em 525 nm, em um espectrofotmetro Schimadzu UV mini 1240, conforme mostrado na Figura 12.
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Figura 12 - Espectrofotmetro Schimadzu UV mini -1240.
OCH3 HO
CH3O OH
C N N C OCH3 OCH3 Enzima HRP OCH3 CH3O N N C OCH3
C OCH3
Figura 13 Reao da Siringaldazina catalisada pela enzima. A determinao da atividade da peroxidase foi feita atravs do mtodo modificado de Szklarz et al. (1989), empregando siringaldazina como substrato enzimtico. A mistura da reao foi composta de 0,6 mL de soluo enzimtica, 0,2 mL de tampo citrato-fosfato 0,05 M (pH 5,0), 0,1 mL de H2O2 (2,0 mmol L-1) e 0,1 mL de siringaldazina ( 0,1% em etanol). A oxidao da siringaldazina at quinona foi acompanhada durante 5 minutos a 525 nm, sendo a atividade expressa em UI/L. Uma unidade de atividade da Horseradish peroxidase, foi definida como a quantidade de enzima necessria para oxidar 1mol de substrato por minuto e por litro da soluo de enzima preparada. O clculo da atividade enzimtica segue a equao:
CAPTULO 4 MATERIAL E MTODOS Abs *106 * R *T
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EnzimaUI / L = Onde:
Abs = Absorbncia final Absorbncia inicial. = Coeficiente de extino da enzima, dependente do comprimento de onda em que lida (460 nm = 29400 L/M.cm, 525 nm = 65000 L/M.cm, 610 nm = 4460L/M.cm). R = Volume em mL, da soluo enzimtica utilizado, na reao. T = Tempo de reao.
4.3.2 Determinao do pH
As medidas de pH foram feitas por potenciometria, utilizando um pHmetro Digimed, calibrado com solues padres de pH 4,0 e 7,0.
Figura 14 Medidor de pH Quimis.
CAPTULO 4 MATERIAL E MTODOS 3.3.3 Determinao da cor pelo mtodo espectrofotomtrico.
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A anlise da cor de uma amostra permite quantificar a presena de compostos que atribuem a esta uma colorao caracterstica, a qual responsvel pelo desvio das caractersticas de transparncia da amostra padro (neste caso, a gua). As anlises de cor, foram realizadas pelas leituras das absorbncias nos comprimentos de onda 624 nm (Turqueza), 590 nm (Azul 2R) e 596 nm (Preto B), empregando um espectrofotmetro Schimadzu UV mini -1240 (Figura 12). Em algumas ocasies foram realizados espectro de varredura, na faixa de comprimento de onda de 200 800 nm. Quando necessrio foi feita diluio das amostras. A partir de solues com diferentes concentraes de corantes, foi construda uma curva padro Absorbncia x Concentrao, para determinar a concentrao de corantes nas amostras coletadas durante o tratamento enzimtico, atravs dos valores de absorbncia lidos em espectrofotmetro.
4.4 Testes de Toxicidade
4.4.1 Teste de toxicidade aguda com Artemia salina Os ensaios de toxicidade aguda foram realizados conforme mtodo modificado de Matthews (1995). Cistos de Artemia salina foram incubados durante 48 horas em soluo de sal marinho sinttico (30g L-1), com aerao e iluminao constantes (1000 lux) e a uma temperatura de 30C. Aps a ecloso, dez larvas do microcrustceo foram incubadas, em placas de "multiwell", durante 24 horas 25C, na ausncia de luz, em 2 mL de amostras de corantes e do efluente txtil bruto e aps tratamento enzimtico, diludas em soluo de sal marinho sinttico (30 g L-1). Os efluentes foram testados em concentraes seriadas (100, 95, 90, 85, 80, 75, 50, 45, 40, 35, 30 25, 10%) para melhor obteno da CL50. Controles negativos foram conduzidos paralelamente usando apenas soluo de sal marinho sinttico. Aps 24 de incubao, foi feita a contagem do nmero de larvas mortas e a CL50 foi calculada atravs do mtodo matemtico Trimmed Spearman-Karber, usando o software da Burlington Research-INC (HAMILTON et al., 1977, citado por BENASSI, 2004). Para cada concentrao testada foram realizadas 4
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replicatas com 10 larvas em cada. As larvas eram consideradas mortas se no exibissem nenhum movimento interno ou externo durante 20 segundos de observao.
4.4.2 Teste de toxicidade aguda com Daphnia magna Os ensaios de toxicidade aguda com Daphnia magna foram realizados de acordo com as normas da ABNT (NBR 12713: 1993). Antes de analisar a toxicidade do efluente txtil, antes e posterior ao tratamento enzimtico, os microcrustceos passaram por um teste de sensibilidade usando dicromato de potssio (K2Cr2O7) que tem por objetivo avaliar a qualidade do lote das matrizes. Os testes foram feitos em bqueres de 25 mL, em duplicata para cada concentrao, alm dos controles com gua de diluio. Em cada bquer foram colocados 10 dafndeos jovens (6-24h de vida). Os efluentes no remediados e remediados com tratamento enzimtico foram avaliados em diferentes concentraes. O ensaio foi mantido a uma temperatura de 20 2C por 48 horas, em ambiente escuro e sem alimentao. Aps 24 e 48h de incubao, os organismos imveis foram contados e determinado o fator de toxicidade.
4.4.3 Teste de inibio do crescimento de raiz de cebola (Allium cepa)
O teste de inibio do crescimento de raiz foi conduzido de acordo com o mtodo de Arambasic et al. (1995), com modificaes. Bulbos de cebola (18-26g) foram adquiridos comercialmente de supermercados e mantidos em local livre de umidade e ao abrigo da luz. Anteriormente ao teste de toxicidade, os bulbos foram selecionados atravs de um pr-teste. As razes velhas foram cuidadosamente removidas e a base dos bulbos foi colocada em copos plsticos (30 mL) contendo gua mineral. Aps 3 dias de exposio temperatura de 25C e na ausncia de luz, o crescimento da raiz foi observado. Apenas os bulbos que apresentaram o mesmo padro de crescimento durante os 3 dias foram selecionados para os testes usando os efluentes. As razes crescidas durante o pr-teste foram removidas e os bulbos foram reutilizados. Nos testes de inibio de raiz, a base dos bulbos foi colocada em copos plsticos (30 mL) contendo os efluentes no remediados e remediados com a enzima Horseradish peroxidase diludos, em gua mineral. Para cada concentrao de efluentes (100, 75, 50, 25 e 10%)
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foram incubadas 3 cebolas durante 8 dias. A cada 3 dias os efluentes eram trocados e as maiores razes eram medidas usando um paqumetro. Os ensaios foram realizados em temperatura ambiente e no escuro, usando como controle negativo cebolas expostas apenas em gua mineral, e como controle positivo cebolas expostas em uma soluo de sulfato de cobre (1 mg/L).
4.5 Estudo cintico da degradao enzimtica de corantes isolados e do efluente txtil. Os experimentos para avaliar a degradao de corantes em fase aquosa, pela enzima Horseradish peroxidase na forma livre, foram conduzidos temperatura ambiente (25C), e foram variados parmetros como pH, concentrao de enzima (HRP), concentrao de corante, quantidade de H2O2 e temperatura, a fim de determinar as condies timas para remoo do corante e tempo de contato, conforme procedimento descrito por Mohan et al. (2005). Inicialmente foram feitos experimentos com o corante Turqueza Remazol G 133%, isoladamente para determinar as condies timas para a descolorao. Foi realizada uma srie de experimentos, variando o pH (29), concentrao de corantes (10100 mg/L), quantidade de perxido (de 1x10-3 mmol L-1 1,2x10-2 mmol L-1), quantidade de enzima (2,98529,85 U/mL) e temperatura (20, 30, 40C). Para a correo do pH, foi utilizado cido ctrico, o mesmo empregado para a preparao do tampo citrato fosfato. Todos os experimentos foram realizados em triplicata. Para o acompanhamento da cintica de descolorao, foi utilizado um espectrofotmetro Schimadzu UV mini -1240. As leituras de absorbncia foram feitas para o corante no comprimento de onda 624 nm para o Turqueza Remazol G 133%, 590 nm para o Azul Lanaset 2R e 596 nm para o Preto Remazol B. O clculo para determinar a porcentagem de remoo de cor para os corantes foi feito de acordo com a equao: Absinicial Abs final Absinicial *100
Para avaliar a descolorao do efluente txtil, em um erlenmeyer, contendo 100 mL de efluente txtil filtrado, a pH 4,0, foram adicionados 0,5mL de enzima (29,85 U/mL) e 2x10-3 mmol L-1de perxido de hidrognio (100 L). Para o efluente txtil, a descolorao foi avaliada em temperaturas de 20, 30 e 40C. A cada 10 minutos, uma
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alquota era retirada, e feita a leitura da absorbncia no espectrofotmetro Schimadzu UV mini -1240. A quantificao da cor do efluente txtil foi realizada a partir do valor da rea abaixo da curva, obtida mediante uma varredura espectral na faixa 300700 nm. A avaliao da descolorao foi feita atravs da diferena entre a rea inicial e a rea final.
CAPTULO 5 RESULTADOS E DISCUSSO
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5 RESULTADOS E DISCUSSO
Neste captulo, apresentam-se os resultados obtidos no estudo de descolorao de corantes e efluentes txteis, utilizando a enzima Horseradish peroxidase na forma livre. Em um primeiro momento, com o objetivo de determinar as melhores condies de atuao da enzima, foi feito um estudo detalhado do corante Turqueza Remazol G 133%, onde os parmetros como pH, quantidade de enzima e H2O2, concentrao de corante e temperatura foram avaliados. Os resultados desse estudo foram utilizados, para avaliar a descolorao do corante Preto Remazol B, Azul Lanaset 2R e do efluente txtil. Foi tambm avaliada a toxicidade aguda dos corantes e do efluente txtil, utilizando como bioindicadores os microcrustceos, Artemia salina, Daphnia magna e inibio do crescimento da raiz da cebola (Allium cepa).
5.1 Tratamento enzimtico de corantes txteis.
Os corantes comerciais apresentam uma grande variedade de cores e estruturas, contendo substituintes nitro, grupos sulfnico, grupamentos N=N, etc. Esta diferena estrutural faz com que a enzima atue de forma diferente, tanto com relao capacidade de remoo, quanto com relao s velocidades de degradao. Na reao enzimtica com corantes, a porcentagem de descolorao e a taxa de degradao procederamse com cinticas diferentes, variando com o corante em estudo. Neste trabalho foi avaliada a especificidade da HRP para os diferentes corantes: Turqueza Remazol G 133%, Azul Lanaset 2R e Preto Remazol B. Foi obtido o pH timo para degradao de corantes, determinados os fatores que inibiam a atividade da enzima, as constantes cinticas da degradao dos corantes selecionados e a inativao da HRP na presena de corante e H2O2, conforme estudado por Bhunia et al. (2002). A degradao dos corantes foi avaliada atravs dos espectros de absorbncia UV-Vis, que mostram a eficincia do processo utilizado para o tratamento dos corantes.
CAPTULO 5 RESULTADOS E DISCUSSO 5.1.1 Degradao Enzimtica do Corante Turqueza Remazol G 133%
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O corante Turqueza Remazol G 133% muito utilizado pelas indstrias txteis. pertencente classe de corantes reativos, apresenta um grupo monofuncional e como grupo reativo a vinilsulfona. Inicialmente foi realizada uma avaliao deste corante nas seguintes condies: concentrao de corante de 100 mg/L, 5x10- mL de enzima/ mL de soluo (29,85 U/mL), pH entre 4,0 e 5,0, temperatura 30C, e como, a peroxidase dependente de perxido de hidrognio foi utilizado 2x10-3 mmol L-1 (100L) do mesmo. Na Figura 15 so apresentados os espectros do corante Turqueza, antes e depois do tratamento enzimtico (29,85 U/mL), podendo verificar que os picos da absorbncia se encontram na regio do visvel, considerando que os picos na faixa de 300 400 nm ficam prximos regio UV. Foi considerado para avaliar a remoo de corante os picos na regio entre 550 700 nm.
2 1,8 1,6 1,4
Absorbncia
1,2 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0 200
300
400
500
600
700
800
Comprimento de Onda (nm) Corante inicial Aps 45 minutos
Figura 15 - Espectro de varredura do corante Turqueza, antes e aps o tratamento com a enzima HRP livre. Resultados iniciais, obtidos com o corante Turqueza Remazol G 133%, mostram que houve uma descolorao de 59%, como pode ser observado atravs da reduo das absorbncia no comprimentos de onda, 624 nm.
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Uma vez que a peroxidase totalmente dependente do H2O2, a dosagem do mesmo um dos parmetros que deve ser otimizado para garantir a eficincia da tcnica, uma vez que em excesso inibe a atividade da peroxidase e quando em pequena quantidade limita a taxa de reao. Para verificar este efeito, foi feito um estudo variando-se a quantidade de perxido adicionada (1x10-3 mmol L-1 1,2x10-2 mmol L-1), a concentrao de corante utilizada foi 100 mg/L, temperatura 30C, 5x10- mL de enzima/ mL de soluo corante em estudo (29,85 U/mL). Os ensaios foram realizados em triplicata, a cada 10 minutos uma alquota era retirada e feita leitura no espectrofotmetro no comprimento de onda 624 nm. Os resultados so apresentados na Figura 16.
100 90 80 1.10-3 mmol L-1 2.10-3 mmol L-1 4.10-3 mmol L-1 8.10-3 mmol L-1 1,2.10-2 mmol L-1 Sem H2O2
Descolorao (%)
70 60 50 40 30 20 10 0 0 10 20 30 40 50 60
Tempo (minutos)
Figura 16 - Efeito da quantidade de perxido de hidrognio, na descolorao do corante Turqueza G 133%, pela enzima HRP. Conforme ilustrado na Figura 16, pode-se avaliar o efeito da quantidade de H2O2 na descolorao do corante txtil. Em um primeiro momento verifica-se que na ausncia de H2O2 no existiu descolorao do corante, uma vez que a atividade da HRP absolutamente dependente da presena de H2O2. Quando foi adicionado 2x10-3 mmol L-1, obteve-se uma descolorao de 59%, sendo este o melhor resultado obtido quando comparado s outras quantidades utilizadas. O aumento na quantidade de perxido passou a ter um efeito inibitrio, diminuindo a eficincia na remoo de cor, confirmando as observaes de Peralta-Zamora (1998). No entanto, se fosse observado
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qualquer ndice de descolorao na ausncia desse coadjuvante, seria responsabilidade de processos no enzimticos, possivelmente adsoro dos substratos. A atividade da enzima depende da temperatura; conforme esta elevada, a taxa de reao se torna maior. No entanto, a temperaturas elevadas, ocorre a desnaturao da protena, evidenciada pela perda de atividade da enzima no meio. No Figura 17 ilustra o efeito da temperatura na descolorao do corante Turqueza Remazol G 133%, pela enzima Horseradish peroxidase na forma livre. No ensaio foi avaliado a atuao da enzima na soluo do corante Turqueza Remazol g 133%, em 20, 30 e 40C, concentrao de corante de 100 mg/L, 5x10- mL de enzima/ mL de soluo corante em estudo (29,85 U/mL) e 2x10-3 mmol L-1 de perxido de hidrognio e pH na faixa de 4,05,0.
100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 0 10 20 30 40 50 60 70
Descolorao (%)
Tempo (minutos) 20C 30C 40C
Figura 17 - Influncia da temperatura na descolorao do corante Turqueza Remazol G 133%, pela enzima HRP livre.
A temperatura na qual foi obtida a maior descolorao foi de 30C (59%), seguida pela de 20C, com 52%. Para a temperatura de 40C, houve apenas 28% de descolorao, confirmando que para altas temperaturas ocorre uma diminuio de sua atividade e eficincia. Este estudo mostrou o comportamento da enzima HRP em diferentes temperaturas, frente aos corantes estudados.
72
Para se melhorar a eficincia do processo, importante analisar o efeito do pH da soluo em estudo, pois a enzima passa a ter uma melhor atuao no seu pH timo. Foram realizados estudos de otimizao com o corante Turqueza G 133% variando o pH da fase aquosa da mistura de reao entre 2,0 e 9,0, concentrao de corante de 100 mg/L, 5x10- mL de enzima/ mL de soluo corante em estudo (29,85 U/mL) e 2x10-3 mmol L-1 de perxido de hidrognio. A variao da remoo de corante em diferentes valores de pH pode ser observada na Figura 18.
100 90 80
Corante Removido (%)
70 60 50 43 40 30 20 12 10 3 0 2 3 4 5 7 9 59 58 53
pH
Figura 18 - Efeito do pH sobre a ao da HRP, na remoo de cor. A partir dos resultados obtidos, possvel avaliar o efeito do pH na atuao da enzima para a descolorao do corante txtil. Pode-se observar que a melhor atuao da mesma foi em pH igual a 4,0. No entanto, mesmo que tenha se alcanado 59% de descolorao do corante no pH 4,0, esse resultado no foi muito alterado entre pH 4,0 a 5,0, apresentando assim a faixa de melhor atuao da enzima. Para os valores de pH 2,0 e 9,0, os resultados foram muito baixos quando comparado aos demais. Segundo o estudo de Mohan et al. (2005), em pH 2,0, foi obtido 68% de remoo do corante cido Black 10 BX, catalisado pela enzima HRP na forma livre. Com aumento do pH, acima de 2,0, a remoo do corante encontrada teve uma queda significante at 7,0, permanecendo igual at pH 9,0. Bhunia et al. (2002) avaliaram a degradao enzimtica do corante Azul Remazol e Vermelho Cibacron em diferentes
73
pH. Em pH 6,0, as taxas de degradao enzimtica foram muito baixas, mas aumentaram com a reduo do pH. Estes estudos mostraram que o pH ideal pode variar para a mesma enzima, justificando assim a necessidade da avaliao do pH a ser utilizado. Normalmente a remoo do composto aromtico dependente da quantidade de enzima adicionada, considerando que o catalisador e tambm a converso sejam dependentes do tempo de contato. Uma relao tima entre a quantidade de enzima e de substrato pode alcanar uma mxima atividade. Desta maneira foi estudada a quantidade tima de enzima a ser utilizada, que ir influenciar significativamente na velocidade de reao e na quantidade de corante removido. Na Figura 19 apresentada concentrao de corante removido (mg/L), em funo da quantidade de enzima utilizada. Foram estudadas diversas unidade de atividade de enzima, variando de 2,985 U/mL at 29,85 U/mL. A concentrao do corante foi de 100 mg/L, pH 5,0 e temperatura 30 C e quantidade de H2O2 de 2x10-3 mmol L-1. Para se calcular a concentrao de corante removida e de remanescente, foi utilizada a equao da reta obtida pela curva de calibrao do corante.
100 90 80
Corante Removido (mg L-1)
70 60 50 40 30 20 10 0 2,985 5,97 7,4625 14,925 29,85
Quantidade de Enzima (U) Corante Removido Corante Remascente
Figura 19 - Efeito da quantidade de enzima HRP livre, na remoo de corante.
74
A concentrao de corante removido foi dependente da unidade de enzima utilizada. Para a quantidade de enzima igual a 14,985 U, houve uma remoo de 58%, dobrando essa quantidade a remoo foi de 62% (29,85U). Conclui-se ento, que mesmo saturando a soluo de corante com a enzima, a quantidade de corante removido no influenciada significativamente. A quantidade de substrato influncia tambm na atividade da enzima, e na eficincia do processo. Foi avaliada a atuao da enzima em diferentes concentraes de corante (10 a 100mg/L), conforme apresentado na Figura 20. Os ensaios foram conduzidos a temperatura de 30C, 5x10- mL de enzima/ mL de soluo de corante (29,85 U/mL), 2x10-3 mmol L-1 de perxido de hidrognio e pH 4,0.
100 90 80 70
Descolorao (%)
60 50 43 40 30 20 10 0 10 25 50 49 50
59 55
75
100
Concentrao de Corante mg L-1
Figura 20 - Efeito da concentrao de corante na soluo catalisada pela HRP. Foi observada uma maior descolorao foi obtida em uma concentrao de corante (100 mg/L). No foram realizados ensaios para este corante com uma concentrao acima de 100 mg/L. Tal comportamento apresentado por Mohan et al. (2005), que demonstraram que a concentrao de substrato presente na fase aquosa influencia significativamente a reao mediada pela enzima. Se a concentrao de enzima mantida constante, e a concentrao de substrato aumentada gradualmente, a velocidade de reao aumentar, at chegar ao valor mximo. Depois de alcanar o equilbrio qualquer adio de substrato no vai mudar a taxa de reao.
75
Em muitos casos a quantidade de catalisador adicionada pode no ser suficiente para completar a reao. Na Figura 21 so apresentados os resultados de dois experimentos de degradao enzimtica. Na primeira adio foi utilizado 5x10- mL de enzima/ mL de soluo corante em estudo (29,85 U/mL); na segunda adio esse, valor foi dobrado. Os outros parmetros foram mantidos constantes (concentrao de corante 100 mg/L, pH 4,0, 2x10-3 mmol L-1 de perxido de hidrognio e temperatura de 30C).
2 1,8 1,6 1,4
Absorbncia
1,2 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0 200
300
400
500
600
700
800
Comprimento de Onda (nm) Corante inicial Final - Primeira Adio Final - Segunda Adio
Figura 21 Descolorao do corante Turqueza G 133%, com diferentes quantidades de enzima. Mesmo trabalhando com condies de saturao, o aumento da quantidade de enzima adicionada no apresentou influencia significativa na velocidade de reao, e tambm na descolorao do corante. Adicionando 5x10- mL de enzima/ mL de soluo corante em estudo, obteve-se 59% de descolorao; dobrando essa quantidade de enzima adicionada, o valor obtido foi de 62%, em um mesmo tempo de reao.
5.1.2 Avaliao da toxicidade aguda do corante Turqueza Remazol G 133%. A toxicidade uma propriedade inerente ao agente qumico que produz efeitos danosos a um organismo quando este exposto, por um perodo de tempo, a determinadas concentraes daquele agente. Os testes de toxicidade avaliam o efeito do
76
corante como um todo, ou atravs de substncias especficas que o compe; estas abordagens permitem avaliar os efeitos aditivos, antagnicos e sinergsticos dos agentes txicos. No somente os corantes, mas muitos outros produtos auxiliares do processo txtil, podem ser responsveis por efeitos txicos. O contedo de metais pesados em corantes tem merecido muitos estudos, contudo a prtica de se evitar o uso desse tipo de corante eminente, atravs da substituio de tais produtos. Desta forma, foi avaliada a toxicidade aguda do corante Turqueza Remazol G 133% bruto e aps o tratamento enzimtico, cujos resultados so apresentados Tabela 5 e nas Figuras 22 e 23. Os testes foram realizados em quadruplicata e os resultados so apresentados como mdia EPM (n=10). Inicialmente havia 10 larvas, conforme descrito no item 3.4.1, do captulo 3 deste trabalho.
Tabela 5: Testes de Toxicidade aguda com o microcrustceo Artemia salina, aps 24 horas de incubao em diferentes concentraes de corante. Concentrao (%) Corante no tratado Mortalidade (%) 100 95 90 85 75 50 25 1000 800,577 701,1547 301,732 00 00 00 Corante Tratado Mortalidade (%) 1000 1000 1000 1000 900,577 100 00
77
120
Mortalidade (%)
100 80 60 40 20 0 0 20 40 60 80 100 120 Concentrao de Corante (% )
Figura 22 - Teste de toxicidade aguda para o microcrustceo Artemia salina aps 24 horas de exposio em diferentes concentraes de corante no tratado.
120
Mortalidade (%)
100 80 60 40 20 0 20 40 60 80 100 120 Concentrao de Corante (% )
Figura 23 - Teste de toxicidade aguda para o microcrustceo Artemia salina aps 24 horas de exposio em diferentes concentraes de corante tratado com a enzima HRP. A partir dos resultados obtidos da toxicidade aguda do corante Turqueza, utilizando o microcrustceo Artemia salina, aps 24 horas de exposio, foi calculada a CL50 utilizando o mtodo matemtico Trimmed Spearman-Karber. O corante Turqueza bruto apresentou uma baixa toxicidade (CL50= 87,5%); no entanto aps o tratamento enzimtico, a toxicidade foi mais elevada (CL50= 60,70%), causando expressiva mortalidade dos microcrustceos. Em estudo realizado por Gottlieb et al. (2003), foi verificado o aumento da toxicidade quando houve descolorao do corante preto reativo hidrolisado em condies anaerbias, utilizando a bactria bioluminescente Vibrio fisheri como
78
indicador, sendo que o mesmo efeito no foi observado quando foi utilizado biorreator aerbio. No caso do corante reativo R-21, quando submetido a tratamento com oznio, sua toxicidade aumentou sensivelmente. Suspeitouse ento que esta toxicidade fosse devido molcula de cobre que estaria sendo liberada da estrutura do corante com a oxidao deste (KUNZ, 1999). O metal inicialmente complexado ao corante no estaria biodisponvel, ou seja, no estaria presente num estado livre em condies a ser assimilado pela bactria Vibrio fisheri, ao passo que aps a ozonizao sua biodisponibilidade seria aumentada, contribuindo para o aumento da toxicidade. Tais trabalhos confirmam a possibilidade de um aumento na toxicidade do efluente aps um determinado tratamento, independente da sua natureza (biolgico ou qumico). Na Tabela 6 esto apresentados os resultados do teste de inibio do crescimento da raiz da cebola, nas concentraes (100, 50, 25, 10%), de corante bruto e aps o tratamento enzimtico. Foi utilizado como controle negativo gua mineral e como positivo sulfato de cobre (0,1 g/L). O tempo de exposio foi de 8 dias em local escuro.
Tabela 6 - Inibio do crescimento da raiz de cebola (Allium cepa), exposta a 8 dias em diferentes concentraes de corante bruto e aps tratamento enzimtico. Amostra Crescimento mdio (cm) Inibio do crescimento (%) Controle negativo Controle positivo Corante no tratado 100% Corante no tratado 50% Corante no tratado 25% Corante no tratado 10% Corante tratado 100% Corante tratado 50% Corante tratado 25% Corante tratado 10% 9,50,5 0 2,51,5 3,252,25 3,52,0 5,00,5 1,00 1,51,0 1,751,75 3,850,15 0,00% 100% 73,68 65,78 63,15 47,36 89,48 84,21 81,57 59,47
79
Analisando-se os resultados apresentados na Tabela 6 pode-se afirmar que houve uma inibio de crescimento 12% maior do corante aps o tratamento com a enzima HRP, comparativamente ao corante sem tratamento, levando em considerao a menor concentrao estudada. Mesmo os resultados obtidos para o bulbo da cebola indicando um aumento da toxicidade do corante aps o tratamento enzimtico, seriam necessrios ensaios mais especficos como fragmentao do DNA, microncleos e ensaios bioqumicos para confirmar ou no estes dados. Os resultados obtidos nos experimentos iniciais, para a determinao das condies timas de atuao da enzima, foram concentrao de corante 100 mg/L, pH entre 4,0 e 5,0, quantidade de enzima 5x103 mL/mL soluo (29,85 U/mL), quantidade de perxido 0,1 mL (2mM)/ 100mL de soluo de corante em estudo, e temperatura de 30C. Os demais resultados apresentados neste trabalho com o corante Azul Lanaset 2R, Preto Remazol B e tambm para o efluente txtil, foram realizados utilizando estes parmetros experimentais timos.
5.1.3 Degradao Enzimtica do Corante Azul Lanaset 2R Na Figura 24, apresentado o espectro obtido para o corante Azul Lanaset 2R (antraquinona), para os primeiros 5 minutos de descolorao com a enzima HRP. Os ensaios foram conduzidos a temperatura de 30C, 5x10- mL de enzima/ mL de soluo corante em estudo (29,85 U/mL), concentrao de corante de 100 mg/L, 2x10-3 mmolL-1 de perxido de hidrognio e pH 4,0.
80
1 0,9 0,8 0,7
Absorbncia
0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 200
Corante inicial 1 minuto 2 minuto 3 minuto 4 minuto 5 minuto
300
400
500
600
700
800
Comprimento de Onda (nm)
Figura 24 Descolorao do Corante Azul 2R, pela enzima HRP. Conforme pode ser observado na Figura 24 o corante Azul 2R apresentou uma rpida cintica de degradao. Ao iniciar a degradao enzimtica para o corante txtil, observou-se logo nos primeiros minutos da reao uma mudana na cor da soluo. Inicialmente o corante tinha cor azul e logo aps os primeiros minutos de reao passou para uma colorao rosa clara, permanecendo desta maneira, sem formao de um novo pico, at o fim da corrida. O mesmo aconteceu em todas as repeties. Observou-se uma descolorao de 94%, quando medida a absorbncia em 590 nm. Na Figura 25 so apresentados os resultados de descolorao do corante Azul Lanaset 2R em funo do tempo de reao, o ensaio foi conduzido nas mesmas condies apresentados na Figura 24. Alquotas foram retiradas a cada 1 minuto, centrifugadas e lidas em espectrofotmetro no comprimento de onda 590 nm.
81
100
90
80
Corante Removido (%)
70
60
50
40
30
20
10
0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Tempo de Reao (minutos)
Figura 25 - Porcentagem de descolorao, em funo do tempo de contato com a enzima (HRP). Para o corante Azul Lanaset 2R, observou-se que foi obtido 94% de descolorao em 5 minutos; entretanto em 10 minutos no houve nenhuma mudana nos valores de absorbncia. O corante Azul 2R apresentou uma cintica de descolorao rpida, quando comparado com o Turqueza Remazol G 133%. Com o intuito de avaliar se a enzima permanecia ativa na soluo, foram feitas adies de substrato, conforme apresentado na Figura 26, os resultados indicam uma diminuio da eficincia da enzima na segunda adio. Porm, aps a terceira adio, verificou-se um aumento exagerado na turbidez da soluo, inviabilizando as leituras espectrofomtricas.
82
1 0,9 0,8 0,7 0,6
C/C0
0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 0 2 4 6 8 10 12 14
Tempo (minutos) Primeira Adio Segunda Adio Terceira Adio
Figura 26 - Cintica de descolorao do Corante Azul 2R, em funo do tempo e adio do substrato. 5.1.4 Avaliao da Toxicidade aguda do corante Azul Lanaset 2R.
Foi avaliada a toxicidade aguda do corante cido Azul Lanaset 2R, antes e aps o tratamento enzimtico, usando o microcrustceo Artemia salina, conforme descrito no item 3.4.1, do captulo 3 deste trabalho, com o objetivo de verificar se o processo utilizado para degradar os corantes estava produzindo espcies intermedirias mais txicas que o composto de partida. Nas Figuras 27 e 28 e na Tabela 7 apresentado o nmero de organismos mortos aps 24 horas de incubao, com o corante Azul 2R antes e aps o tratamento enzimtico, respectivamente.
83
Tabela 7: Testes de Toxicidade aguda com o microcrustceo Artemia salina, aps 24 horas de incubao em diferentes concentraes de corante. Concentrao do corante (%) Corante no tratado Mortalidade (%) 100 95 85 75 50 25 10000 400,8819 100,3333 00 00 00 Corante tratado Mortalidade (%) 1000 1000 1000 900,5773 200,25 00
120
Mortalidade (%)
100 80 60 40 20 0 20 40 60 80 100
Concentrao do Corante (% )
Figura 27 Teste de toxicidade aguda para o microcrustceo Artemia Salina, aps 24 horas de exposio em diferentes concentraes do corante Azul 2R antes do tratamento.
84
120
Mortalidade (%)
100 80 60 40 20 0 20 40 60 80 100
Concentrao do Corante (% )
Figura 28 Teste de toxicidade aguda para o microcrustceo Artemia Salina, aps 24 horas de exposio em diferentes concentraes do corante Azul 2R aps o tratamento enzimtico. Os resultados da concentrao letal mdia (CL50%), capaz de matar 50% das larvas expostas em 24 horas, para o corante Azul Lanaset 2R antes do tratamento foi 95,86% e, aps o tratamento enzimtico, foi de 60,71%. Pode-se concluir que a toxicidade aguda apresentou-se mais elevada para o corante aps ter sido submetido ao tratamento enzimtico. Na Tabela 8 esto apresentados os resultados do teste de inibio do crescimento da raiz de cebola para o corante Azul Lanaset 2R. Para o controle positivo foi utilizada gua mineral e para o negativo, sulfato de cobre (0,1g/L).
85
Tabela 8 - Inibio do crescimento da raiz de cebola (Allium cepa), exposta a 8 dias em diferentes concentraes de corante bruto e aps tratamento enzimtico. Amostra Crescimento mdio (cm) Inibio do crescimento (%) Controle negativo Controle positivo Corante no tratado 100% Corante no tratado 50% Corante no tratado 25% Corante no tratado 10% Corante tratado 100% Corante tratado 50% Corante tratado 25% Corante tratado 10% 9,50,5 0 0 0 1,00 2,30,7 0 0 0,50 1,00 0,00% 100% 100 100 89,48 75,78 100 100 94,73 89,48
Os resultados dos testes de inibio do crescimento da raiz de cebola confirmaram os resultados anteriormente obtidos com a Artemia salina, onde a toxicidade foi mais elevada no corante aps o tratamento enzimtico. Mesmo na concentrao de corante estudada (10%), a inibio do crescimento da raiz de cebola foi 14% maior aps o tratamento com a enzima HRP, comparativamente ao corante no tratado.
5.1.5 Degradao Enzimtica do Corante Preto Remazol B O corante Preto Remazol B, pertencente classe de corantes reativos, possui como grupo funcional bi(poli)funcional, e como grupo reativo a Vinilsulfona. Diferente dos outros dois corantes estudados, este no apresentou uma descolorao superior a 10%, devido ao fato de ele possuir recalcitrncia maior que os demais, conforme demonstrado na Figura 29. Os ensaios com o corante preto remazol B, foram realizados nas mesmas condies dos dois corantes estudados anteriormente.
86
0,5 0,45 0,4 0,35
Absorbncia
0,3 0,25 0,2 0,15 0,1 0,05 0 200
300
400
500
600
700
800
Comprimento de Onda (nm) Corante Inicial Corante aps 45 minutos
Figura 29 - Espectro de varredura do corante Preto Remazol B, antes e aps 45 minutos de tratamento com a enzima HRP. 5.2 Degradao enzimtica de efluentes txteis As guas residurias txteis caracterizam-se por possuir uma cor bastante acentuada, uma vez que cerca de 40% do corante inicial no fixado a fibra durante o processo de tingimento, sendo por isso liberado para os efluentes. Estes, quando lanados ao meio ambiente sem nenhum tratamento, podem causar srios problemas de contaminao ambiental, diminuindo a transparncia da gua e, consequentemente, impedem a penetrao da radiao solar, diminuindo a fotossntese. Foi estudado o efeito da enzima, H2O2 e enzima + H2O2 na degradao do efluente txtil, conforme resultados apresentados na Figura 30. O perxido de hidrognio considerado um agente oxidante e tambm aplicado ao tratamento de efluentes txteis. Mesmo sabendo que a enzima peroxidase dependente do perxido, para exercer sua funo, foi feito avaliao para poder verificar o quanto ela pode atuar na ausncia do mesmo. Nesse ensaio o efluente foi diludo 1:1.
87
1 0,9 0,8 0,7
Absorbncia
0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 200
300
400
500
600
700
800
Comprimento de Onda (nm) Efluente inicial H2O2 Enzima Enzima + H2O2
Figura 30 - Espectro de absoro do tratamento de efluente txtil com H2O2, enzima e enzima + H2O2 por 90 minutos. A atuao da enzima peroxidase na ausncia de H2O2 muito inferior quando na presena do mesmo. O perxido de hidrognio age como um co-substrato que ativa a ao enzimtica do radical de peroxidase, contribuindo no ciclo cataltico da peroxidase, para oxidar a enzima nativa em um intermedirio enzimtico que aceita o composto aromtico para realizar sua oxidao para a forma de um radical livre. Para a enzima na ausncia de perxido obteve-se 16% de descolorao, sendo que na presena do mesmo o resultado obtido foi de 52%. O perxido sendo conhecido como agente oxidante e bastante aplicado no tratamento de efluentes txteis no apresentou nenhuma descolorao. A taxa de qualquer reao qumica aumenta com a elevao da temperatura, desde que esta elevao de temperatura no produza alteraes no reagente ou no catalisador. As reaes biolgicas apresentam tambm a mesma tendncia de acrscimo com a temperatura. No entanto, para estas ltimas, existe uma temperatura tima, acima da qual h um decrscimo da taxa, possivelmente devido destruio das enzimas nas temperaturas mais elevadas. Foi feita a avaliao da descolorao do efluente txtil, pela enzima HRP, na forma livre, para as temperaturas de 20, 30 e 40C, conforme apresentado nas Figuras 31 e 32. Foi utilizado 5x10-3 mL de soluo enzimtica (29,85 U/mL)/ mL de efluente em estudo e 2x10-3 mmol L-1 H2O2, o pH do efluente foi 5,0.
88
2 1,8 1,6 1,4
Absorbncia
1,2 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0 200
300
400
500
600
700
800
Comprimento de Onda (nm) Efluente Inicial Efluente 20C Efluente 30C Efluente 40C
Figura 31 - Espectros de absoro do efluente txtil, aps tratamento enzimtico em diferentes temperaturas por 90 minutos.
70 60 50
Descolorao (%)
40 30 20 10 0
0 10 20 30 Tempo (minutos) 40 50 60
40 C
30 C
20 C
Figura 32 - Efeito da temperatura, na descolorao do efluente txtil. A temperatura foi um fator que influenciou significativamente na descolorao do efluente txtil. Foi a 30C que a enzima teve uma melhor atuao e maior descolorao (52%). Em 20C a descolorao foi de 45% e, em 40C foi de apenas 22%. Isso deve se ao fato de que houve uma diminuio da eficincia, devido s condies
89
da soluo em estudo no ser adequada para a atuao da enzima em temperaturas mais elevadas. Uma forma usual de estimar a variao da taxa de reao em funo da temperatura atravs da formulao baseada na teoria de Vont HoffArrhenius. Foi levado em considerao que a atuao da enzima para descolorao do efluente txtil seguia uma cintica de primeira ordem, havendo um decaimento na concentrao logo no primeiro minuto, permanecendo constante at o fim do ensaio. Para a temperatura de 30C, foi obtida uma constante de reao de kT30C= 0,068 e para 20C foi de kT20C= 0,052. O coeficiente de Arrhenius, que expressa o quanto a reao influenciada pela temperatura, foi determinado utilizando-se as constantes de reao previamente citadas para 20C e 30C, sendo seu valor de = 1,026 (constante). Este valor permite calcular a constante de reao para um efluente na faixa de temperatura entre 20C e 30C, mantidas as condies experimentais utilizadas. Pode-se observar o surgimento de um pico na regio de entre os comprimentos de onda 350 nm a 450 nm (Figuras 30 e 31). Uma explicao seria a formao de compostos intermedirios, devido a uma degradao incompleta do efluente. Porm, estes compostos passam a ser degradados com o tempo, conforme se observa na Figura 33. A formao deste novo pico de absoro no interferiu no resultado da descolorao, devido quantificao ser feita mediante a diferena do valor da rea abaixo da curva.
90
2 1,8 1,6 1,4
Absorbncia
1,2 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0 200
Pico formado durante o tratamento enzimtico
300
400
500
600
700
800
Comprimento de Onda (nm) Efluente Inicial 20 minutos 40 minutos 60 minutos
Figura 33: Espectros de absoro do efluente txtil, ilustrando a formao de um novo pico, e a reduo do mesmo em funo do tempo. Com o intuito de analisar se a quantidade de enzima adicionada teria sido suficiente para se obter uma mxima descolorao, foram feitas duas adies de enzima, dobrando sua quantidade, como est apresentado na Figura 34.
100 90 80 70
Primeira Adio
Segunda Adio
Descolorao (%)
60 50 40 30 20 10 0 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tempo (minutos)
Figura 34 - Descolorao do efluente txtil, temperatura 30C, pH 5,0. Com primeira adio e segunda adio de enzima.
91
Utilizando 5x10-3 mL de soluo enzimtica (29,85 U/mL)/ mL de efluente em estudo, foi obtido 52% de descolorao, quando essa quantidade foi dobrada a eficincia do processo foi de 59%. Como o acrscimo no percentual de descolorao foi de apenas 7%, conclui-se que no economicamente vivel a utilizao de uma segunda adio de enzima. Analisando a eficincia de descolorao da enzima, observouse uma boa eficincia de remoo de cor do efluente. No entanto, a maioria dos trabalhos sobre tratamento de efluentes txteis so realizados com o caldo bruto dos fungos, que geralmente possuem enzimas como lacase, mangans peroxidase e lignina peroxidase. Dessa forma, so vrias as enzimas lignolticas liberadas pelos fungos, que atuam de formas distintas sobre cada tipo de substrato.
5.2.1 Avaliao da toxicidade aguda do efluente txtil. A resposta estabelecida para o teste de toxicidade aguda com Artemia salina foi concentrao letal mdia (CL50) capaz de matar 50% das larvas expostas durante 24h de exposio. O critrio utilizado para o teste de toxicidade aguda com Daphnia. magna foi a Fator de diluio (FD), que estabelece a concentrao do efluente que pode ocasionar a mortalidade ou imobilidade superior a 10% dos organismos expostos durante 48h nos diferentes concentraes efluentes. Nas Figuras 35 e 36 e na Tabela 9, so apresentados os testes de avaliao de toxicidade aguda com o microcrustceo Artemia salina no efluente txtil no tratado e aps o tratamento com a enzima HRP, respectivamente. Os Testes foram realizados em quadruplicata e os valores foram expressos como mdia EPM (erro padro mdio), n=10.
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Tabela 9: Testes de Toxicidade aguda com o microcrustceo Artemia salina, aps 24 horas de incubao em diferentes concentraes de efluente. Concentrao do Efluente (%) Efluente no Tratado Mortalidade (%) 100 75 50 25 10 1000 900,7071 400,4082 00 00 Efluente Tratado Mortalidade (%) 1000 900,5773 301,0 00 00
Na Tabela 9, est representado a mortalidade do microcrustceo Artemia salina, aps 24 horas de incubao com o efluente txtil bruto e aps o tratamento enzimtico, em diferentes concentraes. Foram consideradas mortas, quando no apresentavam nenhuma mobilidade durante 20 segundos de observao.
120
Mortalidade (%)
100 80 60 40 20 0 0 20 40 60 80 100 120
Concentrao do Efluente (% )
Figura 35 - Teste de toxicidade aguda com o microcrustceo Artemia salina, aps 24 horas de exposio, em diferentes concentraes de efluente no tratado.
93
120
Mortalidade (%)
100 80 60 40 20 0 0 20 40 60 80 100 120
Figura 36 - Teste de toxicidade aguda com o microcrustceo Artemia salina, aps 24 horas de exposio, em diferentes concentraes de efluente tratado com a enzima HRP. Para o efluente no tratado, o CL50% foi de 55% e aps o tratamento foi de 58,33%. Os resultados mostraram que no houve nenhuma mudana significativa, na toxicidade aguda, frente ao organismo teste, com relao ao efluente no tratado e aps o tratamento enzimtico. Nas Figuras 37 e 38, so apresentados os resultados dos testes de toxicidade aguda com o microcrustceo Daphnia magna, do efluente no tratado e aps tratamento enzimtico, respectivamente. Os testes foram realizados em duplicata e os valores foram apresentados como mdia EPM, n=10 e esto dispostos na Tabela 10.
Tabela 10 - Resultado de Daphnia magna expostas no efluente txtil bruto e tratado (n=10 em duplicata). Efluente no tratado Efluente tratado Diluio 3 6 12 24 48 Mortalidade (%) 1000 6020 500 1010 00 Diluio 1 2 3 4 6 8 Fator de diluio = 24 Mortalidade (%) 1000 1000 4010 300 55 00
Fator de diluio = 6
94
Nas Figuras 37 e 38, est apresentado o nmero de organismos mortos (%), em funo da diluio do efluente. Podemos verificar que o efluente no tratado apresentou um fator de diluio mais elevado do que o tratado, mostrando que houve reduo da toxicidade aps o tratamento enzimtico.
120
Mortalidade (%)
100 80 60 40 20 0 0 10 20 30 40 50 60
Diluio do efluente
Figura 37 - Teste de toxicidade aguda para o microcrustceo D. magna, aps 48 horas de exposio em diferentes concentraes de efluente no tratado com enzima.
120
Mortalidade (%)
100 80 60 40 20 0 0 1 2 3 4 5 6 7 8
Diluio do efluente
Figura 38 - Teste de toxicidade aguda para o microcrustceo D.magna, aps 48 horas de exposio em diferentes concentraes de efluente tratado por processos enzimticos. A portaria 17, criada em 24 de abril de 2002, pela Fundao do Meio Ambiente (FATMA), estabeleceu os limites do fator de diluio (FD) de diferentes efluentes para a Daphnia magna. Para os efluentes txteis, o fator de diluio deve ser 2 para que
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possam ser eliminados, sem nenhum tratamento prvio. Isso quer dizer que, nesta concentrao, no deve ser evidenciado nenhum efeito txico (imobilidade), nos organismos expostos. Para os resultados obtidos no presente trabalho, o fator de toxicidade representado pela diluio em que no ocorra mais do que 10% de mortalidade nos organismos aps 48 horas de exposio. Para o efluente no tratado, o fator de toxicidade foi de 24 (FD), pois nesta diluio a mdia de mortalidade obtida foi de 10%. Desta forma o efluente analisado neste trabalho no pode ser eliminado nos corpos hdricos sem o devido tratamento. Para o efluente tratado, o fator de toxicidade foi menor que 6 (FD), pois nesta diluio a mdia de mortalidade obtida foi de 5%. A partir destes resultados podem-se concluir que o fator de toxicidade do efluente aps o tratamento enzimtico pelo menos 4 vezes menor do que o fator de toxicidade do efluente no tratado. Nesse sentido a remediao do efluente txtil com a enzima HRP conseguiu reduzir significativamente a toxicidade do efluente em estudo, diminuindo fortemente a mortalidade dos dafndeos expostos s amostras tratadas. Villegas-Navarro et al. (1999) avaliaram a eficincia dos processos de tratamento de efluentes txteis de 5 indstrias do Mxico. Para tanto, os autores usaram Daphnia. magna para monitorar a toxicidade dos efluentes, antes e aps o tratamento das empresas. Os resultados apresentados nesse estudo mostraram que, apesar de ter havido uma reduo na toxicidade dos efluentes, os sistemas de tratamento adotados pelas empresas eram deficientes, uma vez que a CL50 dos efluentes tratados variou de 66 a 14%. As plantas superiores tm sido empregadas para detectar compostos mutagnicos. Atualmente tem sido realizados ensaios com milho, tomate, soja, tabaco, cevada e ervilha. Alguns bioensaios usam raiz de cebola e feijo. Os efeitos mutagnicos sobre as protenas podem ser detectados por alteraes visveis como: mudana de cor das ptalas, perda de clorofila, alteraes de germinao e crescimento. Uma forma rpida de avaliar a toxicidade de um efluente o teste de inibio do crescimento da raiz de cebola. Foi avaliado o efeito da inibio do crescimento da raiz de cebola quando exposta ao efluente txtil bruto e aps o tratamento, durante exposio de 8 dias. Para o controle negativo foi utilizada gua mineral, e para o positivo foi sulfato de cobre (0,1g/L de CuSO4*5H2O). Os valores da Tabela 11 foram expressos como mdia EPM (erro padro mdio), n=3.
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Tabela 11: Inibio do crescimento da raiz de cebola (Allium cepa), expostas a 8 dias em diferentes concentraes de efluente bruto e aps tratamento. Amostra Crescimento mdio (cm) Inibio do crescimento (%) Controle negativo Controle positivo Efluente no tratado10% Efluente tratado 100% Efluente tratado 75% Efluente tratado 50% Efluente tratado 25% Efluente tratado 10% 9,50,5 0 4,750,25 0,750,75 1,401,100 1,851,65 5,150,650 5,250,250 0,00% 100% 50% 92,875% 85,27% 80,53% 45,79% 44,74%
Na Figura 39, apresentada a percentagem de crescimento da raiz de cebola, nas diferentes concentraes de efluente tratado. O pH do ensaio ficou entre 4 e 6, a temperatura foi a ambiente, e o ensaio foi realizado em local abrigado da luz durante os 8 dias de exposio.
100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 0 20 40 60 80 100
Crescimento (%)
Figura 39 - Crescimento da raiz de cebola em diferentes concentraes de efluente tratado. A maior inibio do crescimento da raiz ocorreu em cebolas expostas a 100% do efluente tratado (inibio de 92,875%), e a menor inibio foi observada na
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concentrao de 10% (inibio de 44,74%), quando comparado ao controle (gua mineral). A partir desses resultados foi calculado o CL50%=29%. As cebolas que ficaram expostas ao efluente no tratado apresentaram crescimento da raiz apenas na concentrao de 10%, onde foi obtido 50% de inibio. Sendo assim, no foi possvel estabelecer o CL50%, uma vez que houve crescimento apenas em uma nica concentrao. Os resultados dos testes de toxicidade aguda para o efluente txtil, com os bioindicadores Artemia salina, Daphnia magna e inibio do crescimento da raiz de cebola (Allium cepa) mostraram que houve uma reduo da toxicidade do efluente txtil, aps o tratamento com a enzima Horseradish peroxidase (HRP). Cada bioindicador utilizado respondeu de forma diferente quando em contato com o efluente em estudo, porm isto est relacionado sensibilidade do organismo aos compostos txicos. A seguir sero apresentadas as principais concluses obtidas neste trabalho, bem como sugestes para trabalhos futuros.
CAPTULO 6 CONCLUSES E SUGESTES
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6 CONCLUSES E SUGESTES
Os ensaios de descolorao com o corante Turqueza Remazol G 133% mostraram que as condies timas de atuao da enzima, nas quais se obteve descolorao foram: pH na faixa de 4,0 e 5,0, quantidade de H2O2 (2mmol L-1) de 0,1 mL/100 mL soluo de corante em estudo, e de enzima 5x10 mL de enzima/ mL de soluo (29,85 U/mL), concentrao de corante de 100mg/L e temperatura de 30C. Os experimentos de descolorao utilizando a enzima peroxidase (HRP) mostraram diferentes resultados para cada corante estudado. Para os corantes Azul Lanaset 2R e Turqueza Remazol G 133%, foi obtida uma descolorao 94 e 59%, respectivamente. Para o Preto Remazol B no houve descolorao; isto se deve ao fato de este corante ser mais recalcitrante para a enzima do que os demais. A velocidade de descolorao foi varivel para cada corante devido s diferenas estruturais. Nos resultados de toxicidade dos corantes, utilizando Artemia salina como organismo teste, pode-se observar que a toxicidade do corante aps o tratamento enzimtico foi maior do que antes do tratamento. O mesmo tambm foi obtido no ensaio com a inibio do crescimento de raiz de cebola. Estes resultados devem ter sido encontrados devido possvel formao de espcies intermedirias mais txicas que o composto de partida. No tratamento do efluente txtil, a temperatura em que a enzima teve uma melhor atuao foi a 30C, com 52% de descolorao. Foi observada tambm a formao de um novo pico de absoro entre os comprimentos de onda 350-450 nm. A toxicidade do efluente aps o tratamento foi reduzida em comparao ao efluente bruto, frente aos trs organismos estudados, sendo que cada um respondeu de maneira diferente, devido sensibilidade dos organismos aos compostos txicos.
CAPTULO 6 CONCLUSES E SUGESTES A seguir so apresentadas algumas sugestes para desenvolvimento de trabalhos futuros: Trabalhar com a enzima imobilizada; Estudar a atuao da enzima em diferentes classes de corantes;
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Estudar os possveis intermedirios formados a partir da degradao dos
corantes txteis; Estudar outras enzimas, que podem atuar na descolorao de corantes e
efluentes txteis.
100
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Universidade Federal de Santa Catarina Centro Tecnolgico Departamento de Engenharia Qumica e Engenharia de Alimentos Programa de Ps-Graduao em Engenharia Qumica

Degradao de Corantes e Efluentes Txteis Pela Enzima Horseradish Peroxidase (HRP)

Florianpolis Santa Catarina Fevereiro/ 2006

Degradao de Corantes e Efluentes Txteis Pela Enzima Horseradish Peroxidase (HRP)

Florianpolis Santa Catarina Fevereiro/ 2006

2.1 Objetivo geral

2.2 Objetivos especficos:

Determinar as melhores condies para uma melhor atuao da enzima

CAPTULO 3 REVISO BIBLIOGRFICA

CAPTULO 3 REVISO BIBLIOGRFICA

3.1.1 O uso da gua na indstria txtil

CAPTULO 3 REVISO BIBLIOGRFICA 3.1.2 Processo Txtil

CAPTULO 3 REVISO BIBLIOGRFICA

3.1.3 Beneficiamento Txtil.

3.1.3.1 Matria prima txtil

CAPTULO 3 REVISO BIBLIOGRFICA

CAPTULO 3 REVISO BIBLIOGRFICA

a uma temperatura de aproximadamente 100C, atravs de processos contnuos ou por imerso.

3.1.3.4 Cozimento (Pr-alvejamento)

CAPTULO 3 REVISO BIBLIOGRFICA 3.1.3.5 Alvejamento

CAPTULO 3 REVISO BIBLIOGRFICA

CAPTULO 3 REVISO BIBLIOGRFICA 3.1.3.9 Acabamento

3.1.4 Produtos Qumicos Auxiliares Utilizados na Indstria Txtil.

CAPTULO 3 REVISO BIBLIOGRFICA

3.1.5 Corantes Txteis

CAPTULO 3 REVISO BIBLIOGRFICA

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3.2 Gerao e Tratamento de Efluentes Txteis

CAPTULO 3 REVISO BIBLIOGRFICA

6-8 10-13 8-10 5-9 5-10 9-11 6-9 6-9 6-9

16000-32000 7600-17400 2300-14400 600-1900 500-14000 1500-2000 500-700 3000-3500 3000-3500

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3.3 Tratamento de Corantes e Efluentes Txteis por Processos Biolgicos

CAPTULO 3 REVISO BIBLIOGRFICA

CAPTULO 3 REVISO BIBLIOGRFICA

CAPTULO 3 REVISO BIBLIOGRFICA

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3.4 Degradao de Corantes e Efluentes Txteis por Enzimas Lignolticas.

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Heme-oxidase L-Galactono-lactona oxidase Lacase

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CAPTULO 3 REVISO BIBLIOGRFICA

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CAPTULO 3 REVISO BIBLIOGRFICA 3.5 Enzimologia Aplicada Indstria Txtil

CAPTULO 3 REVISO BIBLIOGRFICA Substrato - Tipo de reao catalisada (sufixo ase);

CAPTULO 3 REVISO BIBLIOGRFICA 3.5.2 Stio ativo de ligao/ especificidade

CAPTULO 3 REVISO BIBLIOGRFICA

3.5.4 Cinticas de reaes enzimticas

CAPTULO 3 REVISO BIBLIOGRFICA

Estudar a influncia de condies de trabalho (como por exemplo,

CAPTULO 3 REVISO BIBLIOGRFICA

CAPTULO 3 REVISO BIBLIOGRFICA

CAPTULO 4 MATERIAL E MTODOS Abs 106 R *T