CLONAGEM

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Clonagem e clulas-tronco
MAYANA ZATZ
O que clonagem?
mecanismo comum de propagao da espcie em plantas ou bactrias. De acordo com Webber (1903) um clone definido como uma populao de molculas, clulas ou organismos que se originaram de uma nica clula e que so idnticas clula original e entre elas. Em humanos, os clones naturais so os gmeos idnticos que se originam da diviso de um vulo fertilizado. A grande revoluo da Dolly, que abriu caminho para a possibilidade de clonagem humana, foi a demonstrao, pela primeira vez, de que era possvel clonar um mamfero, isto , produzir uma cpia geneticamente idntica, a partir de uma clula somtica diferenciada. Para entendermos porque esta experincia foi surpreendente, precisamos recordar um pouco de embriologia. Todos ns j fomos uma clula nica, resultante da fuso de um vulo e um espermatozide. Esta primeira clula j tem no seu ncleo o DNA com toda a informao gentica para gerar um novo ser. O DNA nas clulas fica extremamente condensado e organizado em cromossomos. Com exceo das nossas clulas sexuais, o vulo e o espermatozide que tm 23 cromossomos, todas as outras clulas do nosso corpo tm 46 cromossomos. Em cada clula, temos 22 pares que so iguais nos dois sexos, chamados autossomos e um par de cromossomos sexuais: XX no sexo feminino e XY no sexo masculino. Estas clulas, com 46 cromossomos, so chamadas clulas somticas.Voltemos agora nossa primeira clula resultante da fuso do vulo e do espermatozide. Logo aps a fecundao, ela comea a se dividir: uma clula em duas, duas em quatro, quatro em oito e assim por diante. Pelo menos at a fase de oito clulas, cada uma delas capaz de se desenvolver em um ser humano completo. So chamadas de totipotentes. Na fase de oito a dezesseis clulas, as clulas do embrio se diferenciam em dois grupos: um grupo de clulas externas que vo originar a placenta e os anexos embrionrios, e uma massa de clulas internas que vai originar o embrio propriamente dito. Aps 72 horas, este embrio, agora com cerca de cem clulas, chamado de blastocisto. nesta fase que ocorre a implantao do embrio na cavidade uterina. As clulas internas do blastocisto vo originar as centenas de tecidos que compem o corpo humano. So chamadas de clulas tronco embrionrias pluripotentes. A partir de um determinado momento, estas clulas somticas que ainda so todas iguais comeam a diferenciar-se nos vrios tecidos que vo compor o organismo: sangue, fgado, msculos, crebro, ossos etc. Os genes que controlam esta diferenciao e o processo pelo qual isto ocorre ainda so um mistrio. O que sabemos que uma vez diferenciadas, as clulas somticas per-

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dem a capacidade de originar qualquer tecido. As clulas descendentes de uma clula diferenciada vo manter as mesmas caractersticas daquela que as originou, isto , clulas de fgado vo originar clulas de fgado, clulas musculares vo originar clulas musculares e assim por diante. Apesar de o nmero de genes e de o DNA ser igual em todas as clulas do nosso corpo, os genes nas clulas somticas diferenciadas se expressam de maneiras diferentes em cada tecido, isto , a expresso gnica especfica para cada tecido. Com exceo dos genes responsveis pela manuteno do metabolismo celular (housekeeping genes) que se mantm ativos em todas as clulas do organismo, s iro funcionar em cada tecido ou rgo os genes importantes para a manuteno deste. Os outros se mantm silenciados ou inativos.

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O processo de clonagem reprodutiva

A grande notcia da Dolly foi justamente a descoberta de que uma clula somtica de mamfero, j diferenciada, poderia ser reprogramada ao estgio inicial e voltar a ser totipotente. Isto foi conseguido atravs da transferncia do ncleo de uma clula somtica da glndula mamria da ovelha que originou a Dolly para um vulo enucleado. Surpreendentemente, este comeou a comportar-se como um vulo recm-fecundado por um espermatozide. Isto provavelmente ocorreu porque o vulo, quando fecundado, tem mecanismos, para ns ainda desconhecidos, para reprogramar o DNA de modo a tornar todos os seus genes novamente ativos, o que ocorre no processo normal de fertilizao. Para a obteno de um clone, este vulo enucleado no qual foi transferido o ncleo da clula somtica foi inserido em um tero de uma outra ovelha. No caso da clonagem humana reprodutiva, a proposta seria retirar-se o ncleo de uma clula somtica, que teoricamente poderia ser de qualquer tecido de uma criana ou adulto, inserir este ncleo em um vulo e implant-lo em um tero (que funcionaria como uma barriga de aluguel). Se este vulo se desenvolver teremos um novo ser com as mesmas caractersticas fsicas da criana ou adulto de quem foi retirada a clula somtica. Seria como um gmeo idntico nascido posteriormente.

J sabemos que no um processo fcil. Dolly s nasceu depois de 276 tentativas que fracassaram. Alm disso, dentre as 277 clulas da me de Dolly que foram inseridas em um vulo sem ncleo, 90% no alcanaram nem o estgio de blastocisto. A tentativa posterior de clonar outros mamferos tais como camundongos, porcos, bezerros, um cavalo e um veado tambm tem mostrado uma eficincia muito baixa e uma proporo muito grande de abortos e embries malformados. Penta, a primeira bezerra brasileira clonada a partir de uma clula

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somtica morreu adulta, em 2002, com um pouco mais de um ms. Ainda em 2002, foi anunciada a clonagem do copycat o primeiro gato de estimao clonado a partir de uma clula somtica adulta. Para isto foram utilizados 188 vulos que geraram 87 embries e apenas um animal vivo. Na realidade, experincias recentes, com diferentes tipos de animais, tm mostrado que esta reprogramao dos genes, para o estgio embrionrio, o qual originou Dolly, extremamente difcil. O grupo liderado por Ian Wilmut, o cientista escocs que se tornou famoso por esta experincia, afirma que praticamente todos os animais que foram clonados nos ltimos anos a partir de clulas no embrionrias esto com problemas (Rhind, 2003). Entre os diferentes defeitos observados nos pouqussimos animais que nasceram vivos aps inmeras tentativas, observam-se: placentas anormais, gigantismo em ovelhas e gado, defeitos cardacos em porcos, problemas pulmonares em vacas, ovelhas e porcos, problemas imunolgicos, falha na produo de leuccitos, defeitos musculares em carneiros. De acordo com Hochedlinger e Jaenisch (2003), os avanos recentes em clonagem reprodutiva permitem quatro concluses importantes: 1) a maioria dos clones morre no incio da gestao; 2) os animais clonados tm defeitos e anormalidades semelhantes, independentemente da clula doadora ou da espcie; 3) essas anormalidades provavelmente ocorrem por falhas na reprogramao do genoma; 4) a eficincia da clonagem depende do estgio de diferenciao da clula doadora. De fato, a clonagem reprodutiva a partir de clulas embrionrias tem mostrado uma eficincia de dez a vinte vezes maior, provavelmente porque os genes que so fundamentais no incio da embriognese esto ainda ativos no genoma da clula doadora (Hochedlinger e Jaenisch, 2003). interessante que, dentre todos os mamferos que j foram clonados, a eficincia um pouco maior em bezerros (cerca de 10% a 15%). Por outro lado, um fato intrigante que ainda no se tem notcias de macaco ou cachorro que tenha sido clonado. Talvez seja por isso que a cientista inglesa Ann McLaren tenha afirmado que as falhas na reprogramao do ncleo somtico possam se constituir em uma barreira intransponvel para a clonagem humana. Mesmo assim, pessoas como o mdico italiano Antinori ou a seita dos raelianos defendem a clonagem humana, um procedimento que tem sido proibido em todos os pases. De fato, um documento assinado em 2003 pelas academias de cincias de 63 pases, inclusive o Brasil, pedem o banimento da clonagem reprodutiva humana. O fato que a simples possibilidade de clonar humanos tem suscitado discusses ticas em todos os segmentos da sociedade, tais como: Por que clonar? Quem deveria ser clonado? Quem iria decidir? Quem ser o pai ou a me do clone? O que fazer com os clones que nascerem defeituosos? Na realidade, o maior problema tico atual o enorme risco biolgico associado clonagem reprodutiva. No meu entender, seria a mesma coisa que discutir os prs e os contras em relao liberao de uma medicao nova, cujos efeitos so devastadores e ainda totalmente incontrolveis.

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Apesar de todos estes argumentos contra a clonagem humana reprodutiva, experincias com animais clonados tm nos ensinado muito acerca do funcionamento celular. Por outro lado, a tecnologia de transferncia de ncleo para fins teraputicos, a chamada clonagem teraputica, poder ser extremamente til para obteno de clulas-tronco.

A tcnica de clonagem teraputica para obteno de clulas-tronco

Se em vez de inserirmos em um tero o vulo cujo ncleo foi substitudo por um de uma clula somtica deixarmos que ele se divida no laboratrio teremos a possibilidade de usar estas clulas que na fase de blastocisto so pluripotentes para fabricar diferentes tecidos. Isto abrir perspectivas fantsticas para futuros tratamentos, porque hoje s se consegue cultivar em laboratrio clulas com as mesmas caractersticas do tecido do qual foram retiradas. importante que as pessoas entendam que, na clonagem para fins teraputicos, sero gerados s tecidos, em laboratrio, sem implantao no tero. No se trata de clonar um feto at alguns meses dentro do tero para depois lhe retirar os rgos como alguns acreditam. Tambm no h porque chamar esse vulo de embrio aps a transferncia de ncleo porque ele nunca ter esse destino.

Uma pesquisa publicada na revista Sciences por um grupo de cientistas coreanos (Hwang e col., 2004) confirma a possibilidade de obter-se clulas-tronco pluripotentes a partir da tcnica de clonagem teraputica ou transferncia de ncleos (TN). O trabalho foi feito graas a participao de dezesseis mulheres voluntrias que doaram, ao todo, 242 vulos e clulas cumulus (clulas que ficam ao redor dos vulos) para contribuir com pesquisas visando clonagem

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teraputica. As clulas cumulus, que j so clulas diferenciadas, foram transferidas para os vulos dos quais haviam sido retirados os prprios ncleos. Dentre esses, 25% conseguiram se dividir e chegar ao estgio de blastocisto, portanto, capazes de produzir linhagens de clulas-tronco pluripotentes.

A clonagem teraputica teria a vantagem de evitar rejeio se o doador fosse a prpria pessoa. Seria o caso, por exemplo, de reconstituir a medula em algum que se tornou paraplgico aps um acidente ou para substituir o tecido cardaco em uma pessoa que sofreu um infarto. Entretanto, esta tcnica tem suas limitaes. O doador no poderia ser a prpria pessoa quando se tratasse de algum afetado por doena gentica, pois a mutao patognica causadora da doena estaria presente em todas as clulas. No caso de usar-se linhagens de clulas-tronco embrionrias de outra pessoa, ter-se-ia tambm o problema da compatibilidade entre o doador e o receptor. Seria o caso, por exemplo, de algum afetado por distrofia muscular progressiva, pois haveria necessidade de se substituir seu tecido muscular. Ele no poderia utilizar-se de suas prprias clulas-tronco, mas de um doador compatvel que poderia, eventualmente, ser um parente prximo. Alm disso, no sabemos se, no caso de clulas obtidas de uma pessoa idosa afetada pelo mal de Alzheimer, por exemplo, se as clulas clonadas teriam a mesma idade do doador ou se seriam clulas jovens. Uma outra questo em aberto diz respeito reprogramao dos genes que poderiam inviabilizar o processo dependendo do tecido ou do rgo a ser substitudo. Em resumo, por mais que sejamos favorveis clonagem teraputica, trata-se de uma tecnologia que necessita de muita pesquisa antes de ser aplicada no tratamento clnico. Por este motivo, a grande esperana, a curto prazo, para terapia celular, vem da utilizao de clulas-tronco de outras fontes

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Terapia celular com outras fontes de clulas-tronco

a) Indivduos adultos
Existem clulas-tronco em vrios tecidos (como medula ssea, sangue, fgado) de crianas e adultos. Entretanto, a quantidade pequena e no sabemos ainda em que tecidos so capazes de se diferenciar. Pesquisas recentes mostraram que clulas-tronco retiradas da medula de indivduos com problemas cardacos foram capazes de reconstituir o msculo do seu corao, o que abre perspectivas fantsticas de tratamento para pessoas com problemas cardacos. Mas a maior limitao da tcnica, do autotransplante que ela no serviria para portadores de doenas genticas. importante lembrar que as doenas genticas afetam 3-4% das crianas que nascem. Ou seja, mais de cinco milhes de brasileiros para uma populao atual de 170 milhes de pessoas. verdade que nem todas as doenas genticas poderiam ser tratadas com clulas-tronco, mas se pensarmos somente nas doenas neuromusculares degenerativas, que afetam uma em cada mil pessoas, estamos falando de quase duzentas mil pessoas.

b) Cordo umbilical e placenta

Pesquisas recentes vm mostrando que o sangue do cordo umbilical e da placenta so ricos em clulas-tronco. Entretanto, tambm no sabemos ainda qual o potencial de diferenciao dessas clulas em diferentes tecidos. Se as pesquisas com clulas-tronco de cordo umbilical proporcionarem os resultados esperados, isto , se forem realmente capazes de regenerar tecidos ou rgos, esta ser certamente uma notcia fantstica, porque no envolveria questes ticas. Teramos que resolver ento o problema de compatibilidade entre as clulastronco do cordo doador e do receptor. Para isto ser necessrio criar, com a maior urgncia, bancos de cordo pblicos, semelhana dos bancos de sangue. Isto porque sabe-se que, quanto maior o nmero de amostras de cordo em um banco, maior a chance de se encontrar um compatvel. Experincias recentes j demonstraram que o sangue do cordo umbilical o melhor material para substituir a medula em casos de leucemia. Por isso, a criao de bancos de cordo uma prioridade que j se justifica somente para o tratamento de doenas sangneas, mesmo antes de confirmarmos o resultado de outras pesquisas.

c) Clulas embrionrias
Se as clulas-tronco de cordo tiverem a potencialidade desejada, a alternativa ser o uso de clulas-tronco embrionrias obtidas de embries no utilizados que so descartados em clnicas de fertilizao. Os opositores ao uso de clulas embrionrias para fins teraputicos argumentam que isto poderia gerar um comrcio de vulos ou que haveria destruio de embries humanos e no tico destruir uma vida para salvar outra.

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Aspectos ticos
Apesar de todos esses argumentos, o uso de clulas-tronco embrionrias para fins teraputicos, obtidas tanto pela transferncia de ncleo como de embries descartados em clnicas de fertilizao, defendido pelas inmeras pessoas que podero se beneficiar por esta tcnica e pela maioria dos cientistas. As 63 academias de cincia do mundo que se posicionaram contra a clonagem reprodutiva defendem as pesquisas com clulas embrionrias para fins teraputicos. Em relao aos que acham que a clonagem teraputica pode abrir caminho para clonagem reprodutiva devemos lembrar que existe uma diferena intransponvel entre os dois procedimentos: a implantao ou no em um tero humano. Basta proibir a implantao no tero! Se pensarmos que qualquer clula humana pode ser teoricamente clonada e gerar um novo ser, poderemos chegar ao exagero de achar que toda vez que tiramos a cutcula ou arrancamos um fio de cabelo, estamos destruindo uma vida humana em potencial. Afinal, o ncleo de uma clula da cutcula poderia ser colocada em um vulo enucleado, inserido em um tero e gerar uma nova vida!

Por outro lado, a cultura de tecidos uma prtica comum em laboratrio, apoiada por todos. A nica diferena, no caso, seria o uso de vulos (que quando no fecundados so apenas clulas) que permitiriam a produo de qualquer tecido no laboratrio. Ou seja, em vez de poder produzir-se apenas um tipo de tecido, j especializado, o uso de vulos permitiria fabricar qualquer tipo de tecido. O que h de anti-tico nisso? Quanto ao comrcio de vulos, no seria a mesma coisa que ocorre hoje com transplante de rgos? No mais fcil doar um vulo do que um rim? Cada uma de ns pode se perguntar: voc doaria um vulo para ajudar algum? Para salvar uma vida?

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Em relao destruio de embries humanos, novamente devemos lembrar que estamos falando de cultivar tecidos ou, futuramente, rgos a partir de embries que so normalmente descartados, que nunca sero inseridos em um tero. Sabemos que 90% dos embries gerados em clnicas de fertilizao e que so inseridos em um tero, nas melhores condies, no geram vida. Alm disso, um trabalho recente (Mitalipova et al., 2003) mostrou que clulas obtidas de embries de m qualidade, que no teriam potencial para gerar uma vida, mantm a capacidade de gerar linhagens de clulas-tronco embrionrias e portanto, de gerar tecidos.Em resumo, justo deixar morrer uma criana ou um jovem afetado por uma doena neuromuscular letal para preservar um embrio cujo destino o lixo? Um embrio que, mesmo que fosse implantado em um tero, teria um potencial baixssimo de gerar um indivduo? Ao usar clulastronco embrionrias para regenerar tecidos em uma pessoa condenada por uma doena letal, no estamos, na realidade, criando vida? Isso no comparvel ao que se faz hoje em transplante quando se retiram os rgos de uma pessoa com morte cerebral (mas que poderia permanecer em vida vegetativa) extremamente importante que as pessoas entendam a diferena entre clonagem humana, clonagem teraputica e terapia celular com clulas-tronco embrionrias ou no. A maioria dos pases da comunidade Europia, o Canad, a Austrlia, o Japo, a China, a Coria e Israel aprovaram pesquisas com clulas embrionrias de embries h pouco tempo. Essa tambm a posio das academias de cincia de 63 pases, inclusive o Brasil. fundamental que a nossa legislao tambm aprove estas pesquisas porque elas podero salvar inmeras vidas!

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Bibliografia
HOCHEDLINGER, K. e JAENISH, R. Nuclear Transplantation, Embryonic Stem Cells and the Potential for Cell Therapy. N. Engl. Journal of Medicine, 349:275212, 2003. MITALIPOVA, M.; CALHOUN, J.; SHIN, S.; WININGER, D. et al. Human Embryonic Stem Cells Lines Derived from Discarded Embryos. Stem Cells, 21:521526, 2003. RHIND, S. M.; TAYLOR, J. E.; DE SOUSA, P. A.; KiNg, T. U. I.; MCGARRY, M. e WILMUT, I. Human Cloning: Can it be Made Safe? Nature Reviews, 4:855-864, 2003. HWANG, S. W.; RYU, Y. J.; PARK, J. H.; PARK, E. S.; LEE, E. G.; KOO, J. M. et al. Evidence of a Plurpotent Embryonic Stem Cell Line Derived from a Cloned Blastocyst. Scienceexpress, 12 fev. 2004.

APESAR do muito que se tem discutido, ainda existe muita confuso em relao aos conceitos de clonagem (reprodutiva e teraputica) , clulas-tronco ( embrionrias e no embrionrias) e terapia celular bem como isso pode afetar as nossas vidas. Portanto a proposta desse artigo o de tentar definir esses conceitos e expressar a minha posio sobre aspectos ticos no s como cientista mas tambm como representante de inmeras famlias que vem nessa nova tecnologia uma esperana futura de cura para inmeras doenas neurodegenerativas , muitas vezes letais ou gravemente incapacitantes.
RESUMO ABSTRACT ALTHOUGH

concepts such as human cloning (reproductive and therapeutic), stem cells (embryonic and non-embryonic) , and stem cell therapy and how these issues may affect our lives have been extensively discussed, there is still a lot of misunderstanding. Therefore the aim of this article is to try to better explain these definitions and express my personal opinion on ethical aspects not only as a scientist but also as a representative of inumerous families who hope that this technology might represent in the future a treatment for many neurodegenerative disorders often lethal or severely disabling.

Mayana Zatz professora-titular de Gentica Humana e Mdica do Departamento de Biologia do Instituto de Biocincias (IB) da USP, coordenadora do Centro de Estudos do Genoma Humano do IB-USP, presidente da Associao Brasileira de Distrofia Muscular e membro da Academia Brasileira de Cincias. Conferncia feita pela autora no Instituto de Estudos Avanados da USP no dia 19 de maio de 2004. Parte deste texto foi publicado em: Zatz, Mayana. Clonagem e clulas-tronco. Cienc. Cult., jun. 2004, vol. 56, n 3, pp. 23-27, ISSN 0009-6725. Texto recebido e aceito para publicao em 23 de junho de 2004.

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