Prctica No.

3 Tinciones: Bacterias del Yakult y hongos

OBJETIVO: Aprender a realizar tinciones de microorganismos en fresco y en seco. INTRODUCCIN: Una de las limitaciones de la microscopa de campo es el escaso contraste por lo que se pueden utilizar colorantes para teir las clulas y aumentar as su contraste facilitando su observacin. Los colorantes son compuestos orgnicos y cada tipo de colorante tiene afinidad por determinados componentes celulares. MATERIAL Y EQUIPO: - Microscopio - Portaobjetos - Cubreobjetos - Puentes de tincin - Mechero - Papel seda - Asa bacteriolgica - Cultivo de hongos - Cultivo bacteriano de yakult - Colorantes PROCEDIMIENTO: a) Tincin en fresco: 1. Colocar una gota del colorante azul de metileno diluido en el centro de un portaobjetos limpio y desengrasado. 2. Con el asa doblada en ngulo recto, tomar un poco del cultivo de hongos. 3. Depositarlo donde esta la gota del colorante 4. Colocar el cubreobjetos. 5. Observar con el objetivo de seco dbil y seco fuerte. 6. Hacer dibujos de lo observado.

b) Tincin en seco: Preparacin de un frotis: 1. Colocar una pequea gota de agua en un portaobjetos limpio y desengrasado. 2. Con el asa previamente esterilizada y enfriada, tomar una pequea muestra del cultivo bacteriano. Homogenizar la muestra con la gota formando una pelcula de 1.5 cm por lado. 3. Dejar secar al aire. 4. Fijar al calor. Tincin de Gram: 1. Colocar unas gotas de cristal violeta sobre el frotis y dejarlo actuar 1minuto. 2. Lavar con agua de la llave. 3. Adicionar lugol y dejarlo actuar 1minuto. 4. Lavar con agua de la llave. 5. Decolorar con alcohol acetona. 6. Lavar con agua de la llave. 7. Adicionar safranina y dejar actuar 30 segundos. 8. Lavar con agua de la llave. 9. Dejar secar y observar con el objetivo de inmersin. 10. Hacer dibujos de lo observado. Resultados: 1.- Hacer dibujos de sus observaciones. 2.- Consultar en libros e identificar las estructuras observada en la preparacin de hongos. Cuestionario: 1. 2. 3. 4. 5. Explique por que son importantes las tinciones. Explique qu es el grupo cromforo de un colorante. Diga qu es una tincin selectiva y qu es una tincin diferencial. Mencione qu importancia tiene la tcnica de Gram. Investigar que es el yakult y como se les llama a los microorganismos que contiene.