Prctica No.

7 Extraccin de ADN

Objetivo: Obtener el ADN de diferentes tipos de clulas eucariotas. Introduccin: En 1869 Friedrich Miesher, aisl del ncleo de clulas de pus, una nueva clase de compuesto qumico al denomin nuclena y que posteriormente se le llam cido desoxirribonuclico presente en el ncleo y el cido ribonuclico presente en el ncleo y citoplasma. En 1953, James Watson y Francis Crick propusieron un modelo de molcula de ADN que explicaba como poda transferir informacin y duplicarse. La molcula de ADN consta de dos cadenas complementarias de polinucletidos enrollados entre s en una espiral regular y unidas por enlaces de hidrgeno entre pares epecficos de bases purina y pirimidina. La molcula de ADN se duplica cuando las dos tiras de la espural se separan y cada una acta como un modelo para la formacin de una nueva tira complementaria. Cada par de tiras (una antigua y una nueva), se enrollan formando las espirales hijas. Material y Equipo: Cebolla fresca Probeta Cuchillo Tubos de ensaye de 16 X150 Varilla de vidrio NaCl al 3% Ablandador de carne Detergente al 10% Agua destilada Etanol enfriado en hielo Vaso de precipitados Gradilla Colorante de cidos nuclicos

PROCEDIMIENTO: Extraccin de ADN de mucosa bucal: 1. Con un poco de agua enjuagarse la boca enrgicamente durante al menos medio minuto para arrastrar el mayor nmero posible de clulas de descamacin de la mucosa bucal (antes de hacerlo conviene haber tragado saliva para eliminar la accin de los enzimas contenidos en ella).

2. En un vaso colocar 20ml de agua destilada, y aadir dos pizcas de sal comn y un par de gotas de detergente lavavajillas. 3. Agitar suavemente para disolver estos componentes evitando la formacin de espuma. 4. Expulsar el agua en el vaso de precipitados sobre la solucin anterior y revolver con la cucharilla suavemente durante varios minutos para que acten la sal y el detergente, evitando la formacin de espuma. 5. A continuacin, aadir la solucin a un tubo de ensayo con 6 mL de alcohol fro, dejndola resbalar suavemente por la pared del tubo. El filtrado, ms denso que el alcohol y algo turbio se deposita en el fondo del tubo. Dejar reposar durante 2 3 minutos sin moverlo en absoluto. El alcohol formar un sobrenadante por encima de la fase acuosa en la que se encuentra el ADN en disolucin provocando que ste precipite. 6. Esperar unos minutos mientras el ADN precipita en la interfase alcoholagua formando una masa blanquecina que asciende lentamente formando un grumo de aspecto algodonoso. 7.- Recoger el ADN utilizando una pipeta y colocarlo en un vidrio de reloj. 8. Teir con Bromuro de etidio dejar unos 2- 3 minutos 9. Observar bajo luz ultravioleta. Extraccin de ADN de clulas de cebolla: 1. Cortar en cuadros de 2.5 cm el centro de tres cebollas frescas. 2. Agregar 100 mL de la solucin salina detergente 3. Licuar en alta velocidad de 30 seg a 1 min. 4. Filtrar en embudo utilizando un filtro para caf. 5. Agregar de 20 a 30 mL de ablandador de carne y agitar para mezclar. 6. Colocar 6 mL del filtrado en un tubo de ensayo. 7. Adicionar lentamente, escurriendo por la pared dell tubo, 6 mL de etanol enfriado en hielo, para formar una capa. 8. Dejar reposar la mezcla 2-3 min hasta que termine el burbujeo 9. El ADN flotar en la capa de alcohol. 10. Girar la varilla de vidrio en la interfase de las 2 capas para poder ver las pequeas hebras de ADN. Informe: 1. Mencionar cuales son las bases pricas y pirimdicas del ADN. 2. Indicar como esta formado un nucletido. 3. En que se diferencian el ADN del ARN.