UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA INSTITUTO DE CINCIAS DA SADE BIOQUMICA- ICS A13 TURMA PRTICA P 09 DOSCENTE: PAULO RIBEIRO DISCENTES:

EDSON DOS SANTOS; HELENA MARIANA PITANGUEIRA TEIXEIRA.

PCR Resumo: Extrao de DNA de plantas

Uma essencial etapa na anlise da estrutura e organizao do genoma de plantas o isolamento desse material gentico vegetal. Preparaes de DNA vegetal so, muito utilizadas como substratos em reaes de PCR para estudos filogenticos ou no desenvolvimento de marcadores moleculares como os microssatlites e os gerados por RAPD. J que as preparaes de DNA vo passar por tratamentos enzimticos e migrao em gel de eletroforese, necessrio que elas produzam amostras puras suficientes para no inibir esses processos, independente do estudo molecular. Independente do mtodo utilizado para obteno do DNA existe algumas importantes consideraes. As paredes celulares devem ser rompidas para que os componentes celulares sejam liberados. Geralmente isso feito com o congelamento do tecido em nitrognio lquido e posterior quebra mecnica, essa quebra vria de acordo com o tamanho da extrao que se deseja (larga ou pequena escala). Quando pequena, ela freqentemente se destina reaes de PCR e s podem ser realizadas na presena de tampo de extrao, sem nitrognio lquido. Tambm se faz necessrio o rompimento das membranas celulares para que haja a liberao do DNA. Isso feito com a adio de detergentes como SDS ou CTAB. Para a proteo contra as DNAses utiliza-se os tampes de extrao em um Ph diferente do timo pra as DNAses, outro mtodo de proteo contra as DNAses a utilizao de EDTA, que uma substncia quelante de ctions utilizados normalmente como cofatores dessas DNAses. O DNA tambm deve ser protegido de compostos fenlicos j que eles podem oxidar o DNA irreversivelmente, para isso acrescentado soluo tampo de extrao agente antioxidantes, como o polivinilpirrolidona (PVC), albumina de soro bovino (BSA). Os cidos nuclicos devem ser separados de polissacardeos pois, esses inibem a ao das protenas de restrio, alm de tornarem a amostra muito viscosa, interferindo na eletroforese. J comprovado que a extrao, isolamento, e purificao do material gentico de vegetais muito difcil, principalmente pelo co-isolamento de outras substncias, sendo que o mtodo mais eficiente para varias espcies e a utilizao do detergente CTAB, mas se fez necessrio a criao de outros protocolos com pequenas alteraes, mas, importante para a melhor extrao e resoluo de problemas mais especifico. Dentre os principais protocolos esto o com a adio de CTAB, tratamento com acetato de amnio, e por gradiente de cloreto de csio.